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O L-glutamato (L-Glu) é o principal neurotransmissor excitatório em vertebrados e é fundamental para funções primordiais do sistema nervoso central (SNC), tais como aprendizagem e memória. Entretanto, quando este neurotransmissor está em excesso na fenda sináptica, pode provocar uma série de eventos excitotóxicos, que por sua vez, estão associados a muitas neuropatologias. A terapia da maioria dessas doenças é ineficiente e provoca sérios efeitos colaterais. Portanto, é necessário desenvolver fármacos mais efetivos e com menos efeitos colaterais. Assim, peçonhas de artrópodes como a da aranha P. bistriata, se apresentam como fontes alternativas de compostos neuroativos, pois já demonstraram efeitos neuroprotetores in vitro e in vivo, bem como anticonvulsivos. Destarte, o objetivo deste estudo foi investigar um possível efeito neuroprotetor da fração RT10, isolada da peçonha de P.bistriata, em cultura primária de neurônios e glia (CPNGs), do tecido nervoso de ratos recém-nascidos, expostos a concentrações tóxicas de L-Glu (5 mM). As CPNGs foram tratadas durante 3 horas, previamente à lesão, que foi feita por um período de 12h. Ambas as exposições (tratamento e lesão) foram conduzidas no 7.º dia in vitro (DIV). Para analisar quantitativamente e qualitativamente os efeitos dos tratamentos, bem como demonstrar a composição das CPNGs foram realizados ensaios de viabilidade celular, com o sal sódico de resazurina (SSR) e, imunomarcações com anticorpos primários para MAP2, NeuN e GFAP. A fração RT10 foi neuroprotetora, pois diminuiu a perda celular nos testes com o SSR em 10%, nas CPNGs, expostas ao L-Glu, além de apresentarem efeito maior (5%), que o do fármaco Riluzol (RIL). A neuroproteção da RT10 também foi observada nos ensaios de imunocitoquimica. Os neurônios tratados com RT10 e RIL, que foram marcados com anti-MAP2 tiveram maior prolongamentos dos dendritos em relação aos neurônios não tratados. Portanto, a intensidade da fluorescência de anti-MAP2 para os neurônios tratados com esta fração foi 38% maior em relação aos não tratados; e 21% maior quando comparados ao grupo RIL. Deste modo, podemos considerar a RT10, como uma ferramenta para a prospecção de novos fármacos contra neurodegenerações, in vitro e principalmente estudos de mecanismo de ação, cujas variáveis podem ser mais bem controladas. / L-Glutamate (L-Glu), the major excitatory neurotransmitter in the central nervous system of vertebrates, is essential to the occurrence of cognitive functions. However, when L-Glu is over-accumulated in a synaptic cleft it can provoke excitotoxicity (EXT), which has been implicated in many neurological disorders (NDs). The current therapies against NDs are undereffective and can provoke side effects, so it is necessary to develop new treatments. In this regard, neuroactive compounds obtained from Parawixia bistriata spider venom are an alternative source of neuroactive compounds, because they showed neuroprotective effects in vitro and in vivo. Thus, the main aim of this work was to evaluate a possible neuroprotective effect of RT10 fraction obtained from P. bistriata venom in primary culture of neuron and glial cells (PCNGCs) from cerebral tissue of newborn Wistar rats, after the exposition to L-glu toxic concentration (5mM). The PCNGCs were submitted to the neuroprotection treatments for 3 hours and previously to the neurotoxic treatment, which the L-glu stayed for 12h in the PNGCs. The both expositions were conducted on the 7th day in vitro (DIV). The Resazurin sodium salt (RSS) and immunocytochemistry (MAP2, NeuN e GFAP primary antibodies) trials were utilized to measure quantitatively and qualitatively the treatments, as well as to prove the culture composition. In the RSS trial, the RT10 was neuroprotector, since avoided the cell death in 10%, under the PCNGCs which were exposed to L-Glu. in addition, RT10 demonstrated higher effect than rilozole (5%). RT10 attenuated the toxic effects of L-Glu under the neuromorphology, consequently the fluorescence intensity of MAP2 at PCNGC treated with RT10 was 38% higher than untreated group and it was 21% higher than riluzole group. Thus, we can consider that RT10 compounds are valuable tools to the prospection of new drugs against NDs.

Submitted by Ana Damasceno (ana.damasceno@unipampa.edu.br) on 2016-09-13T20:01:43Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Investigação bioquímica e eletrofisiológica da atividade neurotóxica da urease de Canavalia Ensiformis sobre o sistema nervoso de mamíferos.pdf: 4036702 bytes, checksum: 7c0fc1ca67b3af15c724790f838de2ed (MD5) / Made available in DSpace on 2016-09-13T20:01:43Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) Investigação bioquímica e eletrofisiológica da atividade neurotóxica da urease de Canavalia Ensiformis sobre o sistema nervoso de mamíferos.pdf: 4036702 bytes, checksum: 7c0fc1ca67b3af15c724790f838de2ed (MD5) Previous issue date: 2016 / A urease de Canavalia ensiformis (Jack Bean Urease, JBU) possui uma cadeia polipeptídica de 90.770 kDa, com 840 resíduos de aminoácidos. Do ponto de vista biotecnológico, já foram caracterizadas suas ações fungicida e inseticida. Quando administrada na corrente sanguínea de mamíferos, esta, induz convulsões que culminam em morte dos animais, um efeito cujo mecanismo de ação ainda carece de investigação. O objetivo desse trabalho foi investigar os padrões eletrofisiológicos da JBU no sistema nervoso central e periférico de roedores in vivo e in vitro, e as correlações bioquímicas em termos de viabilidade celular e exocitose do L-glutamato. Nos ensaios bioquímicos, verificou-se aumento na liberação de L-glutamato em sinaptossomas corticais de ratos na concentração de 100 nM. Os ensaios de viabilidade celular por MTT em fatias de hipocampo de camundongos não demonstraram alterações. Nos ensaios eletrofisiológicos, verificou-se redução significativa na amplitude do potencial de ação composto (CAP) de nervo ciático de camundongo, nas doses de 1 e 10 nM. Nos ensaios eletroencefalográficos em ratos a injeção da urease (10nM) no hipocampo induziu um traçado de espícula-onda. A redução na amplitude do CAP provavelmente está relacionada a uma inibição dos canais de sódio voltagem-dependentes, já que a administração posterior de tetrodotoxina, não aumentou o nível de bloqueio da condução. Nossos resultados demonstram um efeito excitatório da JBU do tipo crise de ausência sobre o sistema nervoso central de mamíferos. Este resultado sugere o envolvimento dos canais de Ca2+ do tipo T nos efeitos excitatórios da JBU. O bloqueio da condução do nervo ciático de camundongos sugere o envolvimento de canais de Na+ voltagem dependentes, o qual corroboraria a atividade excitatória da urease sobre o sistema nervoso central de mamíferos. / The Canavalia ensiformis urease (Jack Bean Urease) has a 90,770 kDa, polypeptide containing 840 aminoacid residues. JBU is known to exhibit insecticidal and fungicidal activities. When administered endovenously in mammalians, it induces tonic clonic convulsions culminating in the death of the animals. This mechanisms involved in the excitatory activity of JBU has not been elucidated so far. In this work, we sought to investigate the central and peripheral electrophysiological patterns of Jack Bean Urease in rodents, in vivo and in vitro, as well as the biochemical correlation of cell viability and glutamate release. In the biochemical assays, JBU induced increase in L-Glutamate release in rat cortical sinaptossomes, with no alteration of mice hippocampal cell viability. The electrophysiological assays, showed that JBU induce a significant decrease on mice sciatic nerve compound action potentials (CAP), and spike-wave discharges (SWD) similar to “petit mal” seizures when injected directly in the hippocampus (10 nM). The decrease in CAP amplitude is related to a blockage of voltage-gated sodium channels, since it was not affected by the concomitant application of tetrodotoxin. Our results show that JBU exerts an effect of spike wave discharges-like activity over the mammalian central nervous system. This later result suggests an involvement of T-type voltage gated calcium channels in the excitatory activity of JBU. The blockade of mouse sciatic nerve compound action potential conduction corroborates the excitatory activity of the urease upon the mammalian central nervous system.

O L-glutamato (L-Glu) é o principal neurotransmissor excitatório em vertebrados e é fundamental para funções primordiais do sistema nervoso central (SNC), tais como aprendizagem e memória. Entretanto, quando este neurotransmissor está em excesso na fenda sináptica, pode provocar uma série de eventos excitotóxicos, que por sua vez, estão associados a muitas neuropatologias. A terapia da maioria dessas doenças é ineficiente e provoca sérios efeitos colaterais. Portanto, é necessário desenvolver fármacos mais efetivos e com menos efeitos colaterais. Assim, peçonhas de artrópodes como a da aranha P. bistriata, se apresentam como fontes alternativas de compostos neuroativos, pois já demonstraram efeitos neuroprotetores in vitro e in vivo, bem como anticonvulsivos. Destarte, o objetivo deste estudo foi investigar um possível efeito neuroprotetor da fração RT10, isolada da peçonha de P.bistriata, em cultura primária de neurônios e glia (CPNGs), do tecido nervoso de ratos recém-nascidos, expostos a concentrações tóxicas de L-Glu (5 mM). As CPNGs foram tratadas durante 3 horas, previamente à lesão, que foi feita por um período de 12h. Ambas as exposições (tratamento e lesão) foram conduzidas no 7.º dia in vitro (DIV). Para analisar quantitativamente e qualitativamente os efeitos dos tratamentos, bem como demonstrar a composição das CPNGs foram realizados ensaios de viabilidade celular, com o sal sódico de resazurina (SSR) e, imunomarcações com anticorpos primários para MAP2, NeuN e GFAP. A fração RT10 foi neuroprotetora, pois diminuiu a perda celular nos testes com o SSR em 10%, nas CPNGs, expostas ao L-Glu, além de apresentarem efeito maior (5%), que o do fármaco Riluzol (RIL). A neuroproteção da RT10 também foi observada nos ensaios de imunocitoquimica. Os neurônios tratados com RT10 e RIL, que foram marcados com anti-MAP2 tiveram maior prolongamentos dos dendritos em relação aos neurônios não tratados. Portanto, a intensidade da fluorescência de anti-MAP2 para os neurônios tratados com esta fração foi 38% maior em relação aos não tratados; e 21% maior quando comparados ao grupo RIL. Deste modo, podemos considerar a RT10, como uma ferramenta para a prospecção de novos fármacos contra neurodegenerações, in vitro e principalmente estudos de mecanismo de ação, cujas variáveis podem ser mais bem controladas. / L-Glutamate (L-Glu), the major excitatory neurotransmitter in the central nervous system of vertebrates, is essential to the occurrence of cognitive functions. However, when L-Glu is over-accumulated in a synaptic cleft it can provoke excitotoxicity (EXT), which has been implicated in many neurological disorders (NDs). The current therapies against NDs are undereffective and can provoke side effects, so it is necessary to develop new treatments. In this regard, neuroactive compounds obtained from Parawixia bistriata spider venom are an alternative source of neuroactive compounds, because they showed neuroprotective effects in vitro and in vivo. Thus, the main aim of this work was to evaluate a possible neuroprotective effect of RT10 fraction obtained from P. bistriata venom in primary culture of neuron and glial cells (PCNGCs) from cerebral tissue of newborn Wistar rats, after the exposition to L-glu toxic concentration (5mM). The PCNGCs were submitted to the neuroprotection treatments for 3 hours and previously to the neurotoxic treatment, which the L-glu stayed for 12h in the PNGCs. The both expositions were conducted on the 7th day in vitro (DIV). The Resazurin sodium salt (RSS) and immunocytochemistry (MAP2, NeuN e GFAP primary antibodies) trials were utilized to measure quantitatively and qualitatively the treatments, as well as to prove the culture composition. In the RSS trial, the RT10 was neuroprotector, since avoided the cell death in 10%, under the PCNGCs which were exposed to L-Glu. in addition, RT10 demonstrated higher effect than rilozole (5%). RT10 attenuated the toxic effects of L-Glu under the neuromorphology, consequently the fluorescence intensity of MAP2 at PCNGC treated with RT10 was 38% higher than untreated group and it was 21% higher than riluzole group. Thus, we can consider that RT10 compounds are valuable tools to the prospection of new drugs against NDs.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

A utilização da madeira laminada colada (MLC) é uma alternativa viável para o aproveitamento de todo o potencial da madeira, apresentando uma série de vantagens. A ligação entre as lâminas, no entanto, tem papel fundamental para a boa qualidade de peças de MLC. Portanto, para um bom desempenho de estruturas de MLC, é fundamental a escolha de um adesivo com boa resistência mecânica e resistência à ação do intemperismo. Os adesivos comumente utilizados, além de terem alto custo, que chega a 60% do custo total da MLC, contêm solventes que são nocivos à saúde, além de terem coloração escura, o que mancha a madeira. O custo baixo é primordial no sentido de tornar esse material mais viável e competitivo quando comparado com outros materiais. Assim, esse trabalho teve como objetivo verificar a capacidade de carga ao cisalhamento no plano de cola de corpos de prova preparados com um adesivo sem solvente e contribuir para a melhoria de eficiência de vigas laminadas coladas. Foram verificados os efeitos da pressão de colagem (1,25; 2,50 e 5,00 MPa), da temperatura (27, 60 e 90°C) e do tempo de cura do adesivo (7 e 10 dias) na tensão no limite de resistência ao cisalhamento. A dose de adesivo utilizada foi de 200 g/m2. Numa segunda etapa foram obtidas a massa específica e a umidade das amostras já ensaiadas ao cisalhamento a fim de explicar a variabilidade dos resultados encontrados. A madeira utilizada para a confecção das peças foi o Eucalyptus grandis por ser uma espécie de grande potencial para usos múltiplos e porque suas propriedades físicomecânicas o tornam adequado também para fim estrutural. Concluiu-se que a temperatura de 90°C possibilitou os melhores valores de tensão de cisalhamento. A pressão de colagem e o tempo de cura do adesivo não influenciaram nessa importante propriedade mecânica. / The use of glu-lam is a viable alternative for exploitation of all wood potential presenting a series of advantages. The linking between layers however has a basic paper in glu-lam good quality. Therefore for a good performance of glu-lam structures it is fundamental the choice of an adhesive which has a great mechanics resistance and also resistance to the weather action. The adhesives usually used having high cost, that arrives 60% of glu-lam total cost beyond contain solvent that are harmful to health, having dark coloration what changes the wood natural color. Low cost is primordial to become this material more viable and competitive if compared with another materials. Thus, this search had as objective to verify the load capacity applied in the samples in shear strength test right in the glued surface and also contributing for efficiency improvement of beam-glu-lam. The glue used to prepare the samples was free of solvent. It were verified the effect of gluing pressure (1,25; 2,50 e 5,00 MPa), temperature (27, 60 e 90°C) and the adhesive time of cure (7 and 10 days)in the shear strength. The adhesive dose applied in the layers was 200g/cm2.In a second research step it were obtained the specific gravity and moisture content from the samples which were already tested to explain the variability that was observed. It was utilized Eucalyptus grandis wood for being a specie of enormous potential for multi purpose and because its physical and mechanical properties make it. Highest values of shear strength were obtained at the temperature of 90°C. The glue pressure and the adhesive curing time have no relevant influence on this important mechanical properties.

A utilização da madeira laminada colada (MLC) é uma alternativa viável para o aproveitamento de todo o potencial da madeira, apresentando uma série de vantagens. A ligação entre as lâminas, no entanto, tem papel fundamental para a boa qualidade de peças de MLC. Portanto, para um bom desempenho de estruturas de MLC, é fundamental a escolha de um adesivo com boa resistência mecânica e resistência à ação do intemperismo. Os adesivos comumente utilizados, além de terem alto custo, que chega a 60% do custo total da MLC, contêm solventes que são nocivos à saúde, além de terem coloração escura, o que mancha a madeira. O custo baixo é primordial no sentido de tornar esse material mais viável e competitivo quando comparado com outros materiais. Assim, esse trabalho teve como objetivo verificar a capacidade de carga ao cisalhamento no plano de cola de corpos de prova preparados com um adesivo sem solvente e contribuir para a melhoria de eficiência de vigas laminadas coladas. Foram verificados os efeitos da pressão de colagem (1,25; 2,50 e 5,00 MPa), da temperatura (27, 60 e 90°C) e do tempo de cura do adesivo (7 e 10 dias) na tensão no limite de resistência ao cisalhamento. A dose de adesivo utilizada foi de 200 g/m2. Numa segunda etapa foram obtidas a massa específica e a umidade das amostras já ensaiadas ao cisalhamento a fim de explicar a variabilidade dos resultados encontrados. A madeira utilizada para a confecção das peças foi o Eucalyptus grandis por ser uma espécie de grande potencial para usos múltiplos e porque suas propriedades físicomecânicas o tornam adequado também para fim estrutural. Concluiu-se que a temperatura de 90°C possibilitou os melhores valores de tensão de cisalhamento. A pressão de colagem e o tempo de cura do adesivo não influenciaram nessa importante propriedade mecânica. / The use of glu-lam is a viable alternative for exploitation of all wood potential presenting a series of advantages. The linking between layers however has a basic paper in glu-lam good quality. Therefore for a good performance of glu-lam structures it is fundamental the choice of an adhesive which has a great mechanics resistance and also resistance to the weather action. The adhesives usually used having high cost, that arrives 60% of glu-lam total cost beyond contain solvent that are harmful to health, having dark coloration what changes the wood natural color. Low cost is primordial to become this material more viable and competitive if compared with another materials. Thus, this search had as objective to verify the load capacity applied in the samples in shear strength test right in the glued surface and also contributing for efficiency improvement of beam-glu-lam. The glue used to prepare the samples was free of solvent. It were verified the effect of gluing pressure (1,25; 2,50 e 5,00 MPa), temperature (27, 60 e 90°C) and the adhesive time of cure (7 and 10 days)in the shear strength. The adhesive dose applied in the layers was 200g/cm2.In a second research step it were obtained the specific gravity and moisture content from the samples which were already tested to explain the variability that was observed. It was utilized Eucalyptus grandis wood for being a specie of enormous potential for multi purpose and because its physical and mechanical properties make it. Highest values of shear strength were obtained at the temperature of 90°C. The glue pressure and the adhesive curing time have no relevant influence on this important mechanical properties.

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

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Thesis (Ph.D.)--University of Alabama at Birmingham, 2007. / Title from PDF title page (viewed on Sept. 16, 2009). Includes bibliographical references.