Determina la patogenicidad de una cepa de Yersinia ruckeri proveniente de un brote en la localidad de Puno, para esto se registraron los signos clínicos, morbilidad, mortalidad, lesiones macroscópicas (internas y externas) y caracterización de las lesiones histopatológicas de truchas infectadas experimentalmente con este patógeno. Se utilizaron 100 alevinos de truchas arcoíris (Oncorhynchus mykiss) de peso promedio de 7,5 g y longitud promedio de 8,6 cm distribuidos en 5 grupos experimentales de 20 peces cada uno (un grupo control y cuatro desafiados), mantenidos en acuarios individuales con capacidad de 70 l. Se inocularon vía intraperitoneal (IP), con 0,1 ml de cepa de Yersinia ruckeri a concentraciones sucesivas de 1x105 UFC/ml (T1), 1x106 UFC/ml (T2), 1x107 UFC/ml (T3), 1x108 UFC/ml (T4) y el grupo control fue inyectado con PBS. Posteriormente se observaron signos clínicos, lesiones macroscópicas (internas y externas) y mortalidad durante 20 días. Los peces con mortandad reciente y sobrevivientes del estudio fueron necropsiados según la técnica recomendada por Espinosa de los Monteros y Labarta (1988), previa sedación con eugenol y eutanasia con sección medular. Posteriormente se aisló la bacteria a partir de riñón y bazo en agar tripticasa de soya incubada a 24 ° C por 48 horas, evidenciando colonias características de Yersinia ruckeri confirmadas mediante tinción Gram, pruebas bioquímicas y PCR convencional. También se colectaron muestras de riñón anterior, bazo, hígado, branquias, músculo e intestino posterior para el estudio histopatológico. Los grupos desafiados presentaron signos y lesiones característicos de yersiniosis; registrándose melanosis (73.5 %) y letargia (60 %) en mayor frecuencia, además de otros. Los signos clínicos se evidenciaron al 3° día post-infección en el grupo T4, y al 6°, 8°, 11° día post-infección para los grupos T3,T2 y TI respectivamente. Las lesiones macroscópicas (internas y externas) más evidentes fueron hemorragia en la base de las aletas (78.75%), esplenomegalia (75%), hemorragia en intestino posterior (48,75%) y hemorragia en la cavidad oral (26,25%). Además, se registró mortalidad del 100% solo para el grupo T4 al 10° día, y 30%, 20%, 10% para los grupos T3, T2 y T1 respectivamente. Histopatológicamente, se evidencio mayor afección en bazo con presencia de melanomacrófagos, congestión e hiperplasia leucocitaria, riñón anterior con gotas hialinas en epitelio tubular, aumento de tejido linfoide, hígado con degeneración grasa, necrosis, separación de hepatocitos, intestino posterior con hiperplasia de células caliciformes, necrosis y epitelio disgregado. Se concluyó que la cepa de Y. ruckeri procedente de Puno, incluso en concentraciones bajas, tiene un nivel de patogenicidad elevada causando mortalidad y lesiones características de yersiniosis. / Tesis

Determina la patogenicidad de una cepa motil de Y. ruckeri procedente de Huaraz y caracterizar histológicamente las lesiones halladas en diversos órganos de alevines de trucha arcoíris. Para ello, se utilizó 100 alevines con un peso promedio de 7.25 g, divididos en 5 grupos de 20 individuos (cuatro experimentales y un control), mantenidos en estanques de 30 litros. Los peces fueron inoculados por vía intramuscular 0,1 ml de la cepa de Y. ruckeri a diversas concentraciones: 1x104 /ml para el grupo 1 (G1), 4x104 /ml para el grupo 2 (G2), 1x108 /ml para el grupo 3 (G3), 4x108 /ml para el grupo 4 (G4) y el grupo control con PBS. Se realizó un monitoreo diario por 12 días, registrándose signos clínicos, lesiones externas e internas (en muertos), morbilidad y mortalidad. Los peces moribundos se anestesiaron con eugenol (3 ml/l), luego se les realizó corte medular y posterior necropsia según Meyers (2009). Para comprobar que los peces sólo eran afectados por Y. ruckeri inoculada, se realizó el aislamiento bacteriano de muestras de bazo y riñón, los cuales fueron cultivados en agar tripticasa de soya por 24-48 horas a 25°C, observándose crecimiento de colonias bacterianas con características bioquímicas a Y. ruckeri, siendo confirmadas posteriormente por PCR convencional. Así mismo, se colectaron muestras de intestino, bazo, riñón, hígado, músculo y branquias para el análisis histopatológico. Todos los peces inoculados con Y. ruckeri presentaron signos y lesiones compatibles con yersiniosis; registrándose inapetencia (95%) y melanosis (76%) como los signos más frecuentes, los cuales aparecieron a las 12 horas post inoculación en los grupos G3 y G4, y al 3° día post inoculación (dpi) para los grupos G1 y G2. Entre las lesiones más importantes se observó esplenomegalia (84%), contenido mucoso en intestino (80%) y congestión intestinal (60%). Adicionalmente se determinó una mortalidad de 100% para los grupos G3 y G4, la cual empezó al 2° dpi para ambos; y mortalidades de 65 y 60% para los grupos G1 y G2, respectivamente, las cuales iniciaron al 7° dpi para ambos. A nivel histopatológico, los órganos más afectados fueron intestino con: evidente necrosis, hiperplasia de enterocitos y células mucosas, y presencia de bacterias; el bazo presentaba: congestión, presencia de melanomacrófagos y bacterias, extravasación de glóbulos rojos y disminución linfoide; y el músculo con: necrosis, y presencia de bacterias y melanomacrófagos. En conclusión, la cepa mótil de Yersinia ruckeri procedente de Huaraz es patógena, produciendo mortalidad y diversas lesiones en tejidos de truchas arcoíris según su concentración en condiciones experimentales. Las concentraciones de 1x108 y 4x108 de Y. ruckeri produjeron los más altos índices de patogenicidad; sin embrago, concentraciones tan bajas, como 1x104 y 4x104 de Y. ruckeri, confirman la patogenicidad de esta cepa bacteriana; ya que ocasionaron mortalidades y lesiones anátomo-patológicas significativas en truchas arcoíris, tal como se describen en infecciones naturales. / Tesis

La anaplasmosis es una enfermedad zoonótica emergente que es transmitida por la mordedura de garrapatas del género Ixodes. En nuestro país aún no existen reportes del agente Anaplasma phagocytophilum, más si hay evidencias de la garrapata vector, haciendo posible su presencia en el territorio. Por tanto, el objetivo del estudio fue detectar Anaplasma phagocytophilum en caballos de la provincia de Chiclayo (Departamento de Lambayeque, Perú) utilizando técnicas hematológicas. Para ello se colectaron 100 muestras de sangre de caballos procedentes de 4 haras en el año 2015, los cuales se encontraban aparentemente sanos y tenían antecedentes de exposición a garrapatas. El estudio hematológico evidenció que el 9% de caballos presentaron estructuras compatibles con cuerpos de inclusión o mórulas de Anaplasma phagocytophilum en frotices de sangre periférica teñidos con Wright y Naranja de acridina, a los que denóminamos “positivos”; además, este grupo de animales evidenciaron leves alteraciones en la serie leucocítica y trombocítica como lo reportaron otros estudios. A su vez, hubo 48% de animales sospechosos que presentaron trombocitopenia sin evidencia de cuerpos de inclusión o mórulas. Los hallazgos sugieren la exposición a A. phagocytophilum, constituyendo el primer reporte hematológico del agente en caballos en el Perú. / Tesis

Abstrakt: Sepsis (blodförgiftning) är ett livshotande tillstånd som innebär att bakterier eller svampar tar sig in i blodbanan. Det sker ofta genom njurarna, lungorna eller sår i skadad hud. Symptom innefattar feber och allmän sjukdomskänsla. Positiva blododlingar prepareras och analyseras med Matrix assisted laser desorption ionisation time-of-flight (MALDI-TOF MS) där blandas preparerade prov med matrix och bestrålas sedan med en laser. Bestrålningen medför att proteinerna i provet joniseras och rör sig mot en detektor. Proteinerna detekteras som ett spektrum som i sin tur jämförs med ett referensspektrum av en känd bakterie/svamp som finns lagrat i en databas. Dessutom erhålls ett score-värde över hur väl provet liknar ett referensprov. Arbetets syfte var att se vilken provberedningsmetod som gav ett tillförlitligt resultat i MALDI-TOF och ett bra score-värde för identifiering av bakterier till art-nivå på kortast tid. Preparationsmetoderna innefattar rening av blod från röda blodkroppar och andra partiklar som stör MALDI TOF-instrument. Metoderna jämfördes med nuvarande Saponinmetod. Två av metoderna (Ferroni och Huang) gav dåliga resultat och jämförelsen avbröts efter två försök. Ett kommersiellt kit Sepsityper extraktion gav bra resultat där 79 % av analyserna gav identifiering till art-nivå. Motsvarande resultat med saponin-metoden var 33 %. Slutsatsen är att Sepsityper-extraktion-metoden gav betydligt bättre resultat än nuvarande Saponin-metod. Metoden var robust, användarvänlig, snabb och gav bra resultat både för gramnegativa och grampositiva bakterier. / Abstract: Sepsis (blood poisoning) is a life-threatening condition caused by bacteria or fungi entering the bloodstream. Pathogens often again access through the kidneys, lungs or wounds in damaged skin. Symptoms include fever, chills and general feeling of illness. Positive blood cultures are prepared and analyzed with Matrix assisted laser desorption ionization time-of-flight (MALDI-TOF MS) prepared samples are mixed with matrix and then irradiated with laser beam. The laser beam will be directed to each position in the MALDI plate that causes the proteins in the sample to ionize and move towards a detector. The protein pattern is presented in a spectrum that is compared with a reference spectrum of known bacteria / fungi, stored in a database. In addition, a score value was obtained on how well the sample is aligned to the reference sample. The aim of this study was to compare three methods in order to achieve the best score value for identification to species level. The time factor was also important. The preparation methods include purification of blood removing red blood cells and other particles that interfere with MALDI analysis. The methods were compared with the current Saponinmethod. The results of two methods (Ferroni and Huang) were not satisfactory and further comparison was interrupted after two experiments. A commercial kit Sepsityper with extraction gave good results with 79 % identification to species level. Corresponding results for the current Saponin-method was 33 %. In conclusion, the Sepsityper-extraction-method was superior to the current Saponin-method. The method was robust, user-friendly, rapid and gave good results from both gramnegative and grampositive bacteria.

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Aedes aegypti es un vector de enfermedades de importancia en salud pública que es controlado con insecticidas químicos, sin embargo la naturaleza de estos insecticidas generan daños al ambiente y al hombre, además de generar resistencia entre las poblaciones de mosquitos. El objetivo de la presente investigación fue aislar y caracterizar cepas nativas de Bacillus thuringiensis con actividad larvicida frente a Aedes aegypti que puedan ser utilizadas como controladores biológicos de éste mosquito vector, y ser una alternativa más ecológica frente al uso de los insecticidas químicos. Las cepas fueron aisladas de tres ecorregiones costeras del Perú, las que fueron caracterizadas a través de pruebas bioquímicas diferenciales, observación de cristales parasporales y caracterizadas molecularmente a través de la detección de genes cry4Aa, cry11Aa y cyt1Aa. La actividad larvicida de las cepas nativas fue determinada siguiendo la metodología descrita por la OMS (2005), y utilizando la cepa B. thuringiensis HD500 como patrón. De las ecorregiones de Piura, Chiclayo y Lima se aislaron 9 cepas nativas de Bacillus thuringiensis, de las cuales 3 mostraron alta toxicidad para larvas del tercer estadío de Aedes aegypti. Estas cepas mostraron cristales parasporales circulares, pruebas bioquímicas características de Bacillus thuringiensis y la posesión genes cry11Aa y cyt1Aa para dos de las cepas nativas y la presencia de todos los genes evaluados para una cepa nativa. / Tesis