O sangue total passa por processo de centrifugação a fim de que o paciente receba apenas o componente sanguíneo do qual necessita. O controle de qualidade, inicia com inspeção visual, onde são avaliados: coloração, lipemia, presença de coágulos e vazamentos. No Hemocentro Coordenador do Paraná, a principal causa de descarte de plasma fresco (PF) é a lipemia. Os PF turvos são descartados e os respectivos concentrados de hemácias (CH) permanecem em estoque. Durante o armazenamento, os CH passam por processo de alterações bioquímicas e morfológicas conhecido como lesão de armazenamento, cuja última etapa é a hemólise. É comprometida a função terapêutica e segurança transfusional. Alguns autores relatam a relação entre lipemia e hemólise. Lipemia é o aspecto turvo do plasma, devido à presença de lipoproteínas e tem relação principalmente com a dieta do doador. O objetivo deste estudo foi comparar os parâmetros de qualidade dos CH que tiveram os plasmas descartados por lipemia com os CH de plasmas límpidos. Os PF lipêmicos foram separados e foi realizado registro por fotografia e dosagem dos triglicerídeos. Conforme o grau de turbidez os plasmas foram classificados como: ligeiramente turvos, moderadamente turvos, intensamente turvos ou leitosos. Conforme a concentração de triglicerídeos foram classificados como normal (<175 mg/dl), limítrofe (175 a 199 mg/dl), elevado (200 a 499 mg/dl) ou muito elevado (>500 mg/dl). Os respectivos CH foram avaliados durante o período de validade. Os experimentos nos CH foram realizados entre 1º e 10º, entre 11º e 22º, entre 23º e 34º e entre 35º e 42º dias de armazenamento. Foram avaliados: esterilidade, índices hematimétricos, ERO, TBARS, metemoglobina. Nos sobrenadantes dos CH foram avaliados: Na+, K+, Cl-, lactato, glicose, pH e grau de hemólise. Os experimentos também foram realizados com controles, CH de plasmas límpidos do mesmo dia de doação do grupo teste. Houve aumento da hemólise mais expressivo nos CH teste, demonstrando que a lipemia impacta negativamente na qualidade do CH durante o armazenamento. A partir dos resultados do estudo foram elaboradas estratégias para processamento, controle de qualidade, modificação e distribuição dos CH de doações com lipemia, garantindo a distribuição de um hemocomponente seguro e eficaz, minimizando descarte por hemólise e efeitos adversos à transfusão. / The blood processing allows the patient receives only the blood component that he needs. The quality control starts with visual inspection and are evaluated: coloration, lipemia, clots and leaks. At the HEMEPAR, the main loss of fresh plasma (FP) is caused by lipemia. The lipemic F are discarded and the related red blood cell (RBC) remain in stock. During storage, RBCs go through the process of biochemical and morphological changes known as storage lesions, and the last one hemolysis. Therapeutic function and transfusion safety are compromised. Some authors report the relationship between lipemia and hemolysis. Lipemia is the turbid aspect of plasma, due to the presence of lipoproteins and is mainly related to the diet of the donor. The objective of this study was to compare the quality parameters of the RBCs from lipemic donations with RBC from clear donations. Lipemic FP were photographed and quantificated to triglycerides. According to the degree of turbidity the plasmas were classified as: slightly cloudy, moderately cloudy, intensely turbid or milky. Triglyceride concentrations were classified as normal (<175 mg / dl), borderline (175 to 199 mg / dl), high (200 to 499 mg / dl) or very high (> 500 mg / dl). The respective RBCs were evaluated during the period of validity. The CH experiments were performed between 1 and 10º, 11º and 22º, 23º and 34º and 35º and 42º days of storage. The following: sterility, hematimetric indexes, ROS, TBARS and methemoglobin were evaluated. In the supernatants Na +, K +, Cl-, lactate, glucose, pH and degree of hemolysis were evaluated. The experiments were also carried out with controls, RBC from clear donations of the same day of donation of the test group. There was an increase in hemolysis in the RBC test. It shows that lipemia negatively impacts the quality of RBC during storage. From the results of the study, were established strategies for processing, quality control, modification and distribution of RBC of donations with lipemic plasma to ensure the use of safe and effective blood product for transfusion.

O sangue total passa por processo de centrifugação a fim de que o paciente receba apenas o componente sanguíneo do qual necessita. O controle de qualidade, inicia com inspeção visual, onde são avaliados: coloração, lipemia, presença de coágulos e vazamentos. No Hemocentro Coordenador do Paraná, a principal causa de descarte de plasma fresco (PF) é a lipemia. Os PF turvos são descartados e os respectivos concentrados de hemácias (CH) permanecem em estoque. Durante o armazenamento, os CH passam por processo de alterações bioquímicas e morfológicas conhecido como lesão de armazenamento, cuja última etapa é a hemólise. É comprometida a função terapêutica e segurança transfusional. Alguns autores relatam a relação entre lipemia e hemólise. Lipemia é o aspecto turvo do plasma, devido à presença de lipoproteínas e tem relação principalmente com a dieta do doador. O objetivo deste estudo foi comparar os parâmetros de qualidade dos CH que tiveram os plasmas descartados por lipemia com os CH de plasmas límpidos. Os PF lipêmicos foram separados e foi realizado registro por fotografia e dosagem dos triglicerídeos. Conforme o grau de turbidez os plasmas foram classificados como: ligeiramente turvos, moderadamente turvos, intensamente turvos ou leitosos. Conforme a concentração de triglicerídeos foram classificados como normal (<175 mg/dl), limítrofe (175 a 199 mg/dl), elevado (200 a 499 mg/dl) ou muito elevado (>500 mg/dl). Os respectivos CH foram avaliados durante o período de validade. Os experimentos nos CH foram realizados entre 1º e 10º, entre 11º e 22º, entre 23º e 34º e entre 35º e 42º dias de armazenamento. Foram avaliados: esterilidade, índices hematimétricos, ERO, TBARS, metemoglobina. Nos sobrenadantes dos CH foram avaliados: Na+, K+, Cl-, lactato, glicose, pH e grau de hemólise. Os experimentos também foram realizados com controles, CH de plasmas límpidos do mesmo dia de doação do grupo teste. Houve aumento da hemólise mais expressivo nos CH teste, demonstrando que a lipemia impacta negativamente na qualidade do CH durante o armazenamento. A partir dos resultados do estudo foram elaboradas estratégias para processamento, controle de qualidade, modificação e distribuição dos CH de doações com lipemia, garantindo a distribuição de um hemocomponente seguro e eficaz, minimizando descarte por hemólise e efeitos adversos à transfusão. / The blood processing allows the patient receives only the blood component that he needs. The quality control starts with visual inspection and are evaluated: coloration, lipemia, clots and leaks. At the HEMEPAR, the main loss of fresh plasma (FP) is caused by lipemia. The lipemic F are discarded and the related red blood cell (RBC) remain in stock. During storage, RBCs go through the process of biochemical and morphological changes known as storage lesions, and the last one hemolysis. Therapeutic function and transfusion safety are compromised. Some authors report the relationship between lipemia and hemolysis. Lipemia is the turbid aspect of plasma, due to the presence of lipoproteins and is mainly related to the diet of the donor. The objective of this study was to compare the quality parameters of the RBCs from lipemic donations with RBC from clear donations. Lipemic FP were photographed and quantificated to triglycerides. According to the degree of turbidity the plasmas were classified as: slightly cloudy, moderately cloudy, intensely turbid or milky. Triglyceride concentrations were classified as normal (<175 mg / dl), borderline (175 to 199 mg / dl), high (200 to 499 mg / dl) or very high (> 500 mg / dl). The respective RBCs were evaluated during the period of validity. The CH experiments were performed between 1 and 10º, 11º and 22º, 23º and 34º and 35º and 42º days of storage. The following: sterility, hematimetric indexes, ROS, TBARS and methemoglobin were evaluated. In the supernatants Na +, K +, Cl-, lactate, glucose, pH and degree of hemolysis were evaluated. The experiments were also carried out with controls, RBC from clear donations of the same day of donation of the test group. There was an increase in hemolysis in the RBC test. It shows that lipemia negatively impacts the quality of RBC during storage. From the results of the study, were established strategies for processing, quality control, modification and distribution of RBC of donations with lipemic plasma to ensure the use of safe and effective blood product for transfusion.

Made available in DSpace on 2017-07-21T20:42:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Conclusao.pdf: 46180 bytes, checksum: 47dccc8736224bc604a0ca46bd517b13 (MD5) Previous issue date: 2008-04-25 / Hydroxyapatite (HAP) samples were prepared by the chemical precipitation method and were added niobium phosphate (NbOPO4) through wet grinding, up to 1%, 5% and 10% in mass of NbOPO4. The samples were thermally treated under 1100°C and 1300°C. Analysis through X-ray powder diffractometry using the Rietveld method identified the phases in each sample. In vitro tests were conducted with HAP powders activated and non activated with NbOPO4. Analysis by scanning electron microscopy (SEM) allowed the observation of erythrocyte cell’s morphology after incubation of the samples with HAP and spectrometry on the visible region was used to measure the hemolytic index (H.I.) in these cells as well as the functionality of the intra cellular hemoglobin after exposition to the samples. In the samples thermally treated under 1300°C, calcium phosphate phases (a-TCP and b-TCP) were observed and for the thermal treatment up to 1100°C, non stequiometric hydroxyapatite, tricalcium phosphate (b-TCP), CaNb2O6 and Ca2Nb2O7 phases were detected. Increasing the NbOPO4 percentage produced enhancement in the quantities of tricalcium phosphate phases as well as in the unit cell volume of these samples. That result was observed at both temperatures of thermal treatment. There were no observable isolated peaks referring to the phases with Nb in the samples thermally treated under 1300°C; at 1100°C, the increase in the cell volume of the phase b-TCP was followed by um decrease of the cell volume of the phase Ca2Nb2O7. These effects suggest that the deformation observed in the cell parameters of the mentioned phases were caused by the entrance of the Nb ion in to the unit cell of these phases, under substitutional or interstitial conditions. The photomicrographs revealed changes of the erythrocytes morphology of cells incubated with the HAP samples. The results show that these samples do not have a significant hemolytic index (H.I.<2), getting slightly hemolytic to the percentage of 10% of NbOPO4 (10>H.I.>20) in a 0.8% hematocrit. There were no alteration in the functionality of the intra cellular hemoglobin (O2 transport), according to the reoxigenation tests under a controlled atmosphere, for hematocrit 0.8% and 40%. / Amostras de hidroxiapatita (HAP) foram obtidas pelo método da precipitação química e receberam adição de oxifosfato de nióbio (NbOPO4) por moagem úmida. As amostras aditivadas com 1%, 5% e 10% em massa de NbOPO4 foram tratadas termicamente a 1100°C e 1300°C. Análises de difratometria de raios X do pó utilizando o método de Rietveld identificaram as fases presentes em cada amostra. Foram conduzidos testes in vitro dos pós de HAP não aditivada e aditivada com NbOPO4. Análises por microscopia eletrônica de varredura (MEV) permitiram observar a morfologia eritrocitária pós-incubação com as amostras de HAP e a espectrometria na região do visível permitiu medir o índice hemolítico (I.H.) dessas amostras e a funcionalidade da hemoglobina intracelular face à exposição à droga. Com o tratamento térmico a 1300°C foram observadas fases de fosfato tricálcico (a- TCP e b-TCP) e com o tratamento a 1100°C fases de hidroxiapatita não estequiométrica, fosfatos de cálcio (b-TCP), CaNb2O6 e Ca2Nb2O7. Uma quantidade maior de NbOPO4 produziu aumento da quantidade das fases de fosfato tricálcico bem como no volume da cela unitária destas amostras. Esse resultado foi observado para ambas as temperaturas de tratamento térmico. Não foram observados picos isolados referentes a fases com Nb nas amostras tratadas termicamente a 1300°C; já a 1100°C o aumento do volume de cela da fase b-TCP foi acompanhado por decréscimo do volume de cela da fase Ca2Nb2O7. Esses efeitos sugerem que a deformação observada nos parâmetros da cela unitária das fases citadas foi causada pela entrada do íon Nb na cela unitária destas fases, em condição substitucional ou intersticial. As fotomicrografias mostraram alteração da morfologia eritrocitária para as células incubadas com as amostras de HAP. Os resultados mostraram que essas amostras não têm índice hemolítico significativo (I.H.<2), chegando a moderadamente hemolítico para a porcentagem de 10% de NbOPO4 (10>I.H.>20) em hematócrito de 0,8%. Não houve alteração na funcionalidade da hemoglobina intracelular quanto ao transporte de O2, conforme verificado nos testes de reoxigenação em atmosfera controlada para hematócritos de 0,8% e 40%.

O envenenamento por aranhas Loxosceles pode resultar dois tipos de manifestações clínicas: o loxoscelismo cutâneo e o sistêmico. Hemólise, agregação plaquetária, inflamação persistente, falência renal e morte podem ser observados em pacientes com manifestações sistêmicas. Apesar da pouca incidência de vítimas com falência renal, esta é a principal causa de óbito, ocorrendo principalmente em crianças. O principal fator do veneno da aranha Loxosceles, responsável pelas manifestações locais e sistêmicas, é a esfingomielinase D. O presente estudo teve como objetivo investigar a ação tóxica do veneno de L. intermedia e das SMases D sobre células renais humanas, o possível envolvimento de metaloproteases endógenas e do sistema complemento neste processo. Os resultados obtidos mostram que tanto o veneno, como a SMase D, foram capazes de provocar morte celular, a qual foi relacionada a ativação de metaloproteases de matriz extracelular, MMP-2 e MMP-9 e, ainda, por ação lítica do complemento, após clivagem do MCP, por ação de metaloproteases da família das adamlisinas. A remoção de MCP permitiu ativação do Complemento, como determinado pelo aumento da deposição de C3 e C4 e da morte celular. Também foi observado um aumento na deposição do fator H e da properdina, mas não de C4bp após a tratamento das células com veneno/ SMase D. Diminuição na expressão das moléculas de superfície MHC-I, <font face=\"Symbol\">b2 microglobulina, EPCR e EGFR foi observada e está relacionada com a ativação de metaloproteases da família das adamlisinas. A expressão de outros reguladores do complemento, como DAF e CD59, não foi afetada pelo tratamento. Em conjunto, tais resultados mostram que o veneno e a SMase D induzem aumento na expressão/ativação de metaloproteases endógenas, operantes nos eventos de morte celular por apoptose e necrose, os quais podem ter um papel relevante para os danos renais presentes no loxoscelismo sistêmico humano. / Envenomation by Loxosceles spider can result two forms of clinical manifestations: cutaneous and systemic loxoscelism. Haemolysis, platelet aggregation, inflammation persistent, renal failure and death can be observed in patients with systemic manifestations. Despite the low incidence of renal failure victims, this is the main cause of death, occurring mainly in children. The sphingomyelinase D is the main factor in Loxosceles spider venom responsible for local and systemic manifestations This study aimed to investigate the toxicity of the L. intermedia venom and SMase D on human kidney cells and the possible involvement of endogenous metalloproteinases and complement this process. Results showed that venom and SMase D were able to cause cell death, which was related to activation of extracellular matrix metalloproteases, MMP-2 and MMP-9 and also by lytic action of complement, after MCP cleavage by the action of the family of metalloproteases adamlisins. The removal of MCP, by action of the venom/ SMase D, allowes activation of complement, as determined by increases deposition of C3 and C4 and cell death. There was also an increases in deposition of properdin and factor H, but not C4bp, after treatment of cells with venom/ SMase D. decreased expression of surface molecules MHC-I, <font face=\"Symbol\">b2 microglobulin, EPCR and EGFR was observed after incubation of the renal cells with venom or SMase D and is related to activation of metalloproteinases family adamlisins. The expression of others complement regulators such as DAF and CD59 was not affected by treatment. Together, theses results show that the venom and SMase D induce increased expression/ activation of endogenous metalloproteases, operating in the event of cell death by apoptosis and necrosis, which may have an important role for the kidney injury loxoscelism in the human system.

Orientadores: Antonio Celso Fonseca de Arruda, Aron José Pazin de Andrade / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia Mecânica / Made available in DSpace on 2018-08-17T22:34:18Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Bock_EduardoGuyPerpetuo_D.pdf: 13813984 bytes, checksum: 77d56e60875323b49182504cf741b892 (MD5) Previous issue date: 2011 / Resumo: Uma Bomba de Sangue Centrífuga Implantável (BSCI) foi projetada e construída para assistência ventricular de longa duração no tratamento de pacientes portadores de doenças cardiovasculares. A proposta do projeto foi desenvolver um Dispositivo de Assistência Ventricular (DAV) com custos reduzidos, originalidade de desenho e tecnologia nacional. A geometria do rotor da bomba, aliando um cone em espiral com aletas centrífugas, deu origem ao pedido de Patente de Invenção (PI 0706163-3). O desenvolvimento de seus sistemas propulsores se inclui no Projeto Temático FAPESP nº 2006/58773-1. A metodologia baseou-se em testes individuais dos mancais, atuador e rotor, seguidos de testes do conjunto da BSCI em bancada, com sangue humano e em animais. Foram realizadas simulações numéricas por computador que resultaram no dimensionamento da bomba e definição da sua geometria. Foi testado o atrito nos mancais e os resultados que apresentaram maior durabilidade foram do par alumina-polietileno. Testes em dinamômetro resultaram na caracterização do propulsor eletromagnético, um motor sem escovas trifásico de corrente contínua, e seu controlador eletrônico baseado na técnica de controle sem sensores. Foram realizados testes de hemólise de acordo com as Normas ASTM F1830 e ASTM F1841 para quantificar os danos causados ao sangue pela BSCI e seu índice de hemólise foi de 0,0054 mg/100L, considerado excelente. Testes prospectivos em animais para avaliação do implante resultaram na possibilidade de posicionamento da bomba no tórax ou abdome. Após os testes realizados, a BSCI projetada e construída foi considerada uma opção segura para o tratamento das doenças cardiovasculares. Como trabalhos futuros, serão realizados mais testes em animais para avaliação do funcionamento da BSCI antes dos testes em pacientes / Abstract: An Implantable Centrifugal Blood Pump was developed for long-term ventricular assistance in cardiac patients. In vitro tests were performed, as wear evaluation, performance tests and hemolysis tests in human blood. Preliminary tests were performed with a non-implantable pump in order to properly locate the inlet port. Numerical computational simulations were performed in order to predict its best geometry. Wear evaluations helped to select the best materials for double pivot bearing system proposed to achieve longer durability. Performance tests pointed the best impeller geometry. The Implantable Centrifugal Blood Pump was compared with other two blood pumps. One is a centrifugal blood pump for cardiopulmonary bypass and the other is a similar implantable device called Gyro - Nedo Pump. The proposed implantable centrifugal blood pump showed the best performance. But, its results showed a strong descendant curve in high flow. Other prototype was manufactured with a different inlet port angle to overcome this problem. According to ASTM, the normalized index of hemolysis (NIH) tests were performed "In Vitro" with human blood in closed circuit (mock loop) in normalized conditions, as flow of 5 L/min and total pressure ahead of 100 mm Hg. After six hours, NIH measured 0.0054 mg/100L that can be considered excellent since it is close to the minimum found in literature (between 0.004 g/ 100L e 0.02 g/ 100L). Prior to evaluate performance during "In Vivo" animal studies, anatomical studies were necessary to achieve best configuration and cannulation for Left Ventricular Assistance. Results were considered satisfactory and "In Vivo" tests will be performed looking forward to implant it in patients / Doutorado / Materiais e Processos de Fabricação / Doutor em Engenharia Mecânica

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / This study aimed to evaluate the influence of lipid peroxidation on decrease of erythrocyte viability in total blood of cats stored in plastic bags containing CPDA-1 (citrate phosphate dextrose adenine) and CPD / SAG-M (citrate, phosphate, dextrose, saline, adenine, glucose, mannitol) for 28 days. It was also analyzed the biochemical and hematological parameters of feline blood throughout the storage period. To this end, were used 12 cats, adult, healthy, male and female, mixed breed, weighing on average 3.5 ± 0.6 kg. The animals were randomly divided into two experimental groups, designated G1 and G2, which was collected on average 15 mL/kg of blood, and stored in bags for shipment of blood products. For the preservation of blood it was used to G1 and G2 CPDA-1 and CPD / SAG-M, respectively. The blood was kept under refrigeration (1-6 ° C) for 28 days and samples were taken for analysis weekly. These rates were evaluated for lipid peroxidation measured by TBARS (thiobarbituric acid reactive substances), erythrocytes peroxidation in vitro, concentrations of potassium (K +) , lactate, glucose and extracellular hemoglobin, erythrocyte count, hematocrit (Ht), hemoglobin (Hb) and total plasma protein (TPP) Through these evaluations it was found that the lactate, potassium and extracellular hemoglobin are effective parameters to evaluate the quality of stored blood to felines and the analysis of TBARS applies to prove the association of lipid peroxidation decreased the viability of blood, also for the felines. Moreover, CPD/SAG-M was more efficient than CPDA-1 in maintaining the viability of the feline blood after 14 days in a storage period of 28 days. / Esse estudo teve por objetivo avaliar a influência da peroxidação lipídica sobre a diminuição da viabilidade eritrocitária no sangue total de gatos, armazenado em bolsas plásticas contendo CPDA-1 (citrato, fosfato, dextrose, adenina) e CPD/SAG-M (citrato, fosfato, dextrose, salina, adenina glicose, manitol) durante de 28 dias. Também se buscou analisar os parâmetros bioquímicos e hematológicos do sangue felino durante todo o período de armazenamento. Para tal, foram utilizados 12 gatos, adultos, hígidos, de ambos os sexos, sem raça definida (s.r.d.), pesando em média 3,5±0,6 kg. Os animais foram distribuídos aleatoriamente em dois grupos experimentais, denominados G1 e G2, dos quais se coletou em média 15 mL/kg de sangue, e armazenou-se em bolsas para transferência de hemoderivados. Para a conservação do sangue do G1 foi utilizado CPDA-1 e, para o G2, utilizou-se CPD/SAG-M. O sangue foi mantido sob refrigeração (1 a 6ºC) durante 28 dias e foram retiradas amostras para análise semanalmente. Essas alíquotas foram avaliadas quanto à peroxidação lipídica, medida através de TBARS (substâncias que reagem ao ácido tiobarbitúrico), peroxidação de eritrócitos in vitro concentrações de potássio (K+), lactato, glicose e hemoglobina extracelular, contagem total de eritrócitos, hematócrito (Ht), hemoglobina (Hb), e proteínas plasmáticas totais (PPT) Por meio dessas avaliações constatou-se que os níveis de lactato, potássio e hemoglobina extracelular são eficientes parâmetros para avaliação da qualidade do sangue estocado para e espécie felina e que a análise de TBARS é válida para comprovar a associação da peroxidação lipídica à diminuição da viabilidade sanguínea, também para a espécie felina. Além disso, CPD/SAG-M mostrou-se mais eficiente que CPDA-1 na manutenção da viabilidade do sangue felino a partir do 14o dia, em um período de estocagem de 28 dias.

O envenenamento por aranhas Loxosceles pode resultar dois tipos de manifestações clínicas: o loxoscelismo cutâneo e o sistêmico. Hemólise, agregação plaquetária, inflamação persistente, falência renal e morte podem ser observados em pacientes com manifestações sistêmicas. Apesar da pouca incidência de vítimas com falência renal, esta é a principal causa de óbito, ocorrendo principalmente em crianças. O principal fator do veneno da aranha Loxosceles, responsável pelas manifestações locais e sistêmicas, é a esfingomielinase D. O presente estudo teve como objetivo investigar a ação tóxica do veneno de L. intermedia e das SMases D sobre células renais humanas, o possível envolvimento de metaloproteases endógenas e do sistema complemento neste processo. Os resultados obtidos mostram que tanto o veneno, como a SMase D, foram capazes de provocar morte celular, a qual foi relacionada a ativação de metaloproteases de matriz extracelular, MMP-2 e MMP-9 e, ainda, por ação lítica do complemento, após clivagem do MCP, por ação de metaloproteases da família das adamlisinas. A remoção de MCP permitiu ativação do Complemento, como determinado pelo aumento da deposição de C3 e C4 e da morte celular. Também foi observado um aumento na deposição do fator H e da properdina, mas não de C4bp após a tratamento das células com veneno/ SMase D. Diminuição na expressão das moléculas de superfície MHC-I, <font face=\"Symbol\">b2 microglobulina, EPCR e EGFR foi observada e está relacionada com a ativação de metaloproteases da família das adamlisinas. A expressão de outros reguladores do complemento, como DAF e CD59, não foi afetada pelo tratamento. Em conjunto, tais resultados mostram que o veneno e a SMase D induzem aumento na expressão/ativação de metaloproteases endógenas, operantes nos eventos de morte celular por apoptose e necrose, os quais podem ter um papel relevante para os danos renais presentes no loxoscelismo sistêmico humano. / Envenomation by Loxosceles spider can result two forms of clinical manifestations: cutaneous and systemic loxoscelism. Haemolysis, platelet aggregation, inflammation persistent, renal failure and death can be observed in patients with systemic manifestations. Despite the low incidence of renal failure victims, this is the main cause of death, occurring mainly in children. The sphingomyelinase D is the main factor in Loxosceles spider venom responsible for local and systemic manifestations This study aimed to investigate the toxicity of the L. intermedia venom and SMase D on human kidney cells and the possible involvement of endogenous metalloproteinases and complement this process. Results showed that venom and SMase D were able to cause cell death, which was related to activation of extracellular matrix metalloproteases, MMP-2 and MMP-9 and also by lytic action of complement, after MCP cleavage by the action of the family of metalloproteases adamlisins. The removal of MCP, by action of the venom/ SMase D, allowes activation of complement, as determined by increases deposition of C3 and C4 and cell death. There was also an increases in deposition of properdin and factor H, but not C4bp, after treatment of cells with venom/ SMase D. decreased expression of surface molecules MHC-I, <font face=\"Symbol\">b2 microglobulin, EPCR and EGFR was observed after incubation of the renal cells with venom or SMase D and is related to activation of metalloproteinases family adamlisins. The expression of others complement regulators such as DAF and CD59 was not affected by treatment. Together, theses results show that the venom and SMase D induce increased expression/ activation of endogenous metalloproteases, operating in the event of cell death by apoptosis and necrosis, which may have an important role for the kidney injury loxoscelism in the human system.

O presente estudo apresenta o desenvolvimento de uma Bomba de Sangue Ápico Aórtica (BSAA) para uso como dispositivo de assistência ventricular esquerda. A BSAA é um dispositivo que já se encontrava em desenvolvimento antes do início deste trabalho e o ponto de partida deste estudo foi a realização de ensaios In Vivo. Os ensaios In Vivo foram realizados em porcos (Landrace, sem gênero definido e massa de 45 a 90 Kg) o tempo de pós-operatório programado foi de 6 horas. Ao total foram realizados 7 experimentos, sendo que um dos experimentos não foi incluso na análise dos resultados devido a complicações na cirurgia. Em três experimentos, as 6 horas de pós-operatório foram cumpridas, em 1 experimento, o animal veio a óbito após 5h30 e em dois experimentos o animal veio a óbito antes da BSAA entrar em uso. Através dos ensaios In Vivo, foi possível implementar diversas melhorias no dispositivo, principalmente no sistema de conexão das cânulas. Foi realizado um ensaio para determinar a geometria de topo da cânula de entrada, mostrando que o modelo com cânula tubular simples é o mais adequado. Em um ensaio de durabilidade foram observadas duas falhas: o desacoplamento do rotor por desgaste do pivô inferior do mancal e uma fratura no eixo do mancal. A fratura no eixo foi analisada por uma simulação computacional. Foi proposta uma modificação no eixo do mancal para eliminar uma região com acúmulo de tensões. Para solucionar o degaste do pivô inferior foi proposta uma modificação na topologia do estator que, deixando de ser axial e se tornando radial. Para verificar o efeito do estator radial na redução do desgaste no mancal foi realizado um ensaio de desgaste, este ensaio mostrou a influência da carga no mancal em relação ao desgaste e serviu para fundamentar a implementação do estator radial. O protótipo da BSAA com estator radial foi construído. Neste modelo, foi possível reduzir o tamanho do dispositivo. Os resultados do ensaio para determinar o Índice Normalizado de Hemólise (INH) do modelo com estator radial mostraram que um INH clinicamente satisfatório. O estudo do desempenho hidrodinâmico do modelo com estator radial mostrou que o dispositivo é capaz de gerar pressão e fluxo para seu uso na assistência ventricular esquerda. Os resultados deste trabalho permitiram aprofundar o conhecimento sobre o desempenho da BSAA em condições reais de uso, possibilitando a melhoria do dispositivo e redução do desgaste visando seu uso em terapias de longo prazo. / This study presents the development of an Apico-Aortic Blood Pump (AABP) a left ventricle assist device. AABP is a device that was already in development before the beginning of this research and the starting point were Acute In Vivo experiments. The In Vivo experiments were performed in pigs (Landrace, gender not defined and weight 45 to 90 Kg), post operatory time was 6 hours. 7 experiments were performed and one of them was not included in the data analysis due to complications in the surgical procedure that lead to animal\'s early death and thus its exclusion. In 3 experiments, the 6 hours of post operatory were achieved, in one experiment the animal died after 5h30 minutes and in two experiments, the animal died before AAPB implantation. These In Vivo experiments allowed AAPB improvement mainly in the connection system. A study to select the edge geometry of the inlet cannulae was performed, the results appointed that a tube shape cannulae model would be more appropriated for the device ease implantation. In the durability test two failures occurred: rotor decoupling due to wear in the lower pivot of the bearing system and a fracture in the bearing axis. The fracture in the bearing axis was further studied by computer simulation, which results lead to a modification in the axis geometry to eliminate a region with accumulated tension. To solve wear problem in the lower pivot, a stator topology modification was explored, AABP\'s stator would became radial instead of axial as it was in the original model. In order to verify the effect of the radial stator in reducing wear on the lower pivot, a wear test was performed. In this test, the influence of load on the wear production rate was observed and the results appointed that reducing the load would reduce the wear. These results were the basis for stator change to the radial topology. An AAPB prototype with the radial stator was constructed and this model had lower dimensions than the original model with axial stator. Normalized Index of Hemolysis (NIH) obtained with the prototype with the radial stator was in the clinically satisfactory limit. Hydrodynamic performance of the model with the radial stator indicated that this device could provide pressure and flow for its use as a left ventricle assist device. Results from this thesis allowed a deeper knowledge from AABP performance in real use conditions, which lead to the improvement of the device and through this study was possible to know and implement features aiming to enhance AAPB\'s durability for its use in long-term therapies.

Hemólise intravascular, causada pelo envenenamento por aranhas Loxosceles, é dependente da ação da esfingomielinase D, toxina do veneno que se liga à membrana dos eritrócitos e ativa proteases responsáveis pela clivagem de glicoforinas, tornando as células sensíveis à ação lítica do Sistema Complemento autólogo. O objetivo do estudo foi identificar possíveis proteases envolvidas nesse processo. A toxina foi expressa, purificada e apresentou suas funções biológicas ativas. O tratamento de eritrócitos humanos com a toxina removeu glicoforinas da membrana, não teve ação sobre Kell, CD59, DAF e CR1 e induziu a deposição de C1q, C3, C4, C5b-9, fator B e properdina. O pré-tratamento das células com os inibidores galardina, bestatina e fenantrolina reduziu a hemólise dependente de complemento autólogo. A ativação de proteases das membranas sobre o substrato fluorescente Abz-FRSSR-EDDnp, induzida pela toxina, foi prevenida por PMSF, simvastatina e fenantrolina, sugerindo o envolvimento de metalo- e serinoproteases no modelo de hemólise dependente de complemento estudado. / Intravascular hemolysis caused by poisoning by spiders Loxosceles, is dependent on the sphingomyelinase D action, a toxin that binds to the erythrocytes membrane and activates proteases responsible for the glycophorins cleavage, rendering the cells sensitive to the lytic action of the autologous complement system. This study aimed to identify possible membrane proteases involved in this process. The toxin was expressed, purified and showed to be functionally active. Treatment of human erythrocytes with the toxin caused the removal of the membrane glycophorins, but did not act on Kell, CD59, DAF and CR1 and induced deposition of C1q, C3, C4, C5b-9, factor B and properdin. Pretreatment of cells with inhibitors galardin, phenanthroline and bestatin reduced the complement-dependent hemolysis. The action of membrane proteases upon the fluorescent substrate Abz-FRSSR-EDDnp, induced by the toxin, was prevented by PMSF, simvastatin, and phenanthroline, suggesting the involvement of metallo- and serine proteases in this complement-dependent hemolysis model.

Um modelo de bomba centrífuga de sangue, denominado Dispositivo de Suporte Circulatório Temporário (DSCT), foi desenvolvido para utilização como ponte para decisão e/ou ponte para recuperação. Durante o seu desenvolvimento, foi utilizada a proporção áurea para cálculos das medidas dos componentes. Baseando-se nas condições de uso, foi desenvolvido um modelo de DSCT com cone externo, base externa, sistema de mancal e rotor. Com o uso da espiral áurea, foi possível desenvolver três diferentes modelos de aletas para o rotor, denominadas como aleta reta (rotor 1), aleta curvada (rotor 2) e aleta mais curvada (rotor 3). Foram realizados testes In Vitro de desempenho hidrodinâmico e de hemólise. Para avaliar o desempenho hidrodinâmico, foi utilizado um circuito de teste fechado e os dados de pressão, fluxo e rotação foram registrados. Curvas foram geradas mostrando pressão e fluxo (?P x F) para diferentes rotações, comparando os três protótipos. Os três modelos de rotores apresentaram desempenho hidrodinâmicos semelhantes em baixas rotações e os rotores 1 e 3 apresentaram um melhor desempenho para todas as outras rotações. Para avaliar a hemólise foi utilizado um circuito fechado padronizado pelas normas ASTM F1830 e F1841, com sangue bovino, fluxo de 5 L/min e pressão de 100 mmHg e, posteriormente, calculados os valores do Índice Normalizado de Hemólise (INH). Os resultados obtidos de INH mostraram que o DSCT com rotor 3, aletas com curvas mais acentuadas, obteve o menor valor de hemólise, INH = 0,00332 ± 0,00136 g/100L, considerado excelente para esta aplicação, contra os valores de INH = 0,03951 ± 0,03031 g/100L para o rotor 1 e INH = 0,05115 ± 0,03147 g/100L para o rotor 2. Considerando os resultados de hemólise obtidos, pode-se concluir que o modelo de dispositivo de suporte circulatório utilizando o rotor tipo 3, com aletas mais curvadas, apresentou resultado mais favorável e sendo o mais indicado. As próximas etapas do desenvolvimento estão sendo preparadas, como visualização do comportamento do fluxo e ensaios In Vivo. / A new model of centrifugal blood pump, a temporary circulatory support device (TCSD), has been developed and tested to be used as bridge to decision or bridge to recovery. During TCSD development, golden ration was utilized to calculate mechanical component dimensions. Based on conditions of use, a TCSD has been developed with external housing, bearing system and impeller. Three impellers with different blade curvatures were created: straight blades (rotor 1), low curvature blades (rotor 2) and high curvature blades (rotor 3). Two comparative In Vitro tests were conducted: hydrodynamic performance and hemolysis test. A mock loop system was used for hydrodynamic performance test and pressure, flow and rotational speed were recorded. Curves showing total pressure head versus flow (?PxF) were obtained at different rotational speeds, comparing all three rotors. Results showed similar hydrodynamic performance for low speeds. However, rotor 1 and rotor 3 showed better hydrodynamic performance for high speeds. Standardized closed circuitry (ASTM F1830 and F1841) was used to evaluate hemolysis, filled with bovine blood. Flow was 5 l/min against total pressure head of 100 mmHg. Normalized Index Hemolysis (NIH) was calculated. Hemolysis tests showed better NIH for rotor 3, NIH = 0.00332±0.00136 g/100L (lower than excellent result found in literature) against values of NIH = 0.03951±0.03031 g/100L for rotor 1 and NIH = 0.05115±0.03147 g/100L for rotor 2. With those results, we conclude that, for this model TCSD, the rotor 3 with high curvature blades is indicated. Thereby, future stages of development such as flow visualization and In Vivo trials are being prepared.