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Células-tronco pluripotentes induzidas para o estudo e tratamento da anemia falciforme / Induced pluripotent stem cell for study and treatment of sickle cell anemia

Reis, Luiza Cunha Junqueira 25 April 2017 (has links)
A anemia falciforme (AF) é uma doença monogênica de elevada mortalidade e morbidade, que afeta milhões de pessoas em todo o mundo. Não há tratamento definitivo que seja amplo, eficaz e seguro para a AF, de forma que os tratamentos paliativos são os mais utilizados. O tratamento definitivo disponível é transplante alogênico de células-tronco hematopoiéticas, porém com várias complicações envolvidas. O estabelecimento de um modelo in vitro permite uma melhor compreensão de como a doença ocorre, além de permitir o desenvolvimento de novos testes e tratamentos mais eficazes contra a doença. Neste contexto, a tecnologia das células-tronco pluripotentes induzidas (iPSC), que surgiu em 2006, é uma ferramenta poderosa na pesquisa básica, na pesquisa da diferenciação de tecidos e no modelamento de doenças, e uma promessa para futuras aplicações clínicas, na descoberta e triagem de novas drogas mais eficazes e seguras, além da possibilidade de utilização na medicina regenerativa, na produção de células paciente-específicas para terapia celular. Este trabalho teve como objetivo obter um modelo de estudo e tratamento da AF utilizando iPSC. Para isso, vetores epissomais foram utilizados para a reprogramação de células mononucleares de sangue periférico para obter iPSC livres de integração. Estas células foram coletadas de pacientes tratados com o medicamento hidroxiureia e sem tratamento, para avaliação do impacto da droga na reprogramação. As linhagens de iPSC PBscd geradas foram caracterizadas quanto ao potencial pluripotente e de diferenciação. Todas as linhagens geradas se mostraram pluripotentes com potencial de auto renovação e potencial de formar células e tecidos dos 3 folhetos germinativos. O rastreamento dos vetores utilizados na reprogramação mostrou que as células estão livres após cerca de 10 passagens em média, e que eles não se integram espontaneamente nas células. As linhagens de iPSC foram diferenciadas em progenitores hematopoiéticos através da agregação forçada associada à indução com citocinas específicas e um cultivo em suspensão. Dessa forma, nós obtivemos um protocolo dinâmico e eficiente de produção de células CD34+CD45+ com poucos dias de indução. Foram realizados experimentos iniciais de padronização da metodologia de CRISPR, para que essa metodologia possa ser utilizada no futuro para a correção da mutação da AF no gene da ?- globin. Além disso, a reação padronizada para o rastreamento da mutação no gene da ?-globin poderá ser usado em experimentos futuros de edição gênica para avaliar a correção da mutação. Em resumo, oferecemos uma ferramenta valiosa para uma melhor compreensão de como a AF ocorre, além de tornar possível o desenvolvimento de drogas e tratamentos mais eficazes e de fornecer um melhor entendimento dos tratamentos amplamente utilizados, como a hidroxiurea / Sickle cell anemia (SCA) is a monogenic disease of high mortality and morbidity, that affects millions of people worldwide. There is no definitive treatment that is broad, effective and safe for SCA, so the palliative treatments are the most used. The definitive treatment available is the allogeneic transplantation of hematopoietic stem cells, but with several complications involved. The establishment of an in vitro model allows better understanding of how the disease occurs, besides allowing the development of more effective new tests and treatments against the disease. In this context, the induced pluripotent stem cell (iPSC) technology, that emerged in 2006, is a powerful tool for basic research, tissue differentiation research and disease modeling, and a promise for future clinical applications, to find and screen new, more effective and safe drugs, besides the possibility of use in regenerative medicine, in the production of patient-specific cells for cell therapy. This work aimed to obtain a model for study and treatment of SCA using iPSC. For this, episomal vectors were used for reprogramming peripheral blood mononuclear cells to obtain integration-free iPSC. This cells were collected from patients treated with hydroxyurea and without treatment, for evaluation of the impact of the drug in reprogramming. The generated iPSC PBscd lines were characterized for pluripotent and differentiation potential. All the generated lines were shown to be pluripotent with potential for self-renewal and to form cells and tissues of the 3 germ layers. Screening of the vectors used for reprogramming showed that they are absent after about 10 passages, and that they do not integrate spontaneously into the cells. The iPSC lines were differentiated into hematopoietic progenitors through forced aggregation associated with induction with specific cytokines and culture in cell suspension. Thus, we obtained a dynamic and efficient protocol of CD34+CD45+ cells production with a few days of induction. Initial standardization experiments of CRISPR methodology was performed, so that this methodology can be used in the future to correct the ?-globin chain mutation of SCA. Also, the standardized reaction for the screening of ?-globin chain mutation can be used in future gene-editing experiments to evaluate the mutation correction. In summary, we offer a valuable tool for a better understanding of how SCA occurs, in addition to make possible the development of more effective drugs and treatments and providing better understanding of widely used treatments, such hydroxyrea
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ANÁLISE DA MOBILIZAÇÃO, COLETA E INFUSÃO DE CÉLULAS-TRONCO HEMATOPOIÉTICAS DO SANGUE PERIFÉRICO PARA TRANSPLANTE AUTOGÊNICO NO HOSPITAL UNIVERSITÁRIO DE SANTA MARIA / ANALYSIS OF THE MOBILIZATION, COLLECTION AND INFUSION OF PERIPHERAL BLOOD STEM CELLS (PBSC) FOR AUTOLOGOUS TRANSPLANTATION IN THE UNIVERSITY HOSPITAL OF SANTA MARIA

Scapin, Valúsia 23 January 2013 (has links)
The transplantation of hematopoietic peripheral blood stem cells is one of the therapeutic choices for the treatment of various hematological and oncological diseases, extending disease-free survival and, in some cases, providing the cure of the patient. This is a retrospective study in which the medical records of patients who underwent mobilization, collection and infusion of peripheral hematopoietic stem cells for autologous transplantation were analyzed with the objective of evaluating these procedures, identifying the characteristics of the population assisted and verifying the transplant-related mortality and overall survival of transplanted patients. The study analyzes 176 patients (78F/98M) of the Hematology-Oncology Service of the University Hospital of Santa Maria (HUSM) in the period between December 1996 and December 2011. The diagnoses included: Multiple Myeloma (54), Hodgkin Lymphoma (47), Non Hodgkin Lymphoma (35), Acute Myeloid Leukemia (16) and other neoplasias (24) such as Breast Cancer, Wilms Tumor, Ewing s Sarcoma, Neuroblastoma, Amyloidosis, Testicular Tumor, Medulloblastoma, Macroglobulinemia, CNS Tumor. The median age of the patients was 42 years (1 to 69 years). Before the stem cells mobilization, all the patients had already been submitted to some kind of treatment related to the disease and 31% had received previous radiotherapy. The mobilization schema included hematopoietic growth factor (G-CSF) associated our not whit different chemotherapies. The number of mobilization and leukapheresis carried out were 203 and 474 respectively. The desired number of CD34+ cells in the collection was 2,0x106/kg, considering that the majority of patients achieved the quantity expected. The median of total nucleated cells collected was 7,01x108/kg and of CD34+ cells it was of 2,63x106/kg, with a median of two leukapheresis per patient (1 to 6). Of the 176 patients in this study 120 patients were submitted to autologous transplantation, three received two infusions each. The median of total nucleated cells infused was 6,46x108/kg and of CD34+ cells was 3,17x106/kg. After the infusion of hematopoietic stem cells, the recovery of neutrophils occurred between 7 and 28 days (median 10 days), while the platelets between 8 and 79 (median 12 days), considering that three patients did not have platelet recovery. The correlation between the quantity of CD34+ cells infused and the recovery of neutrophils and platelets was verified. Transplantrelated mortality was 5%. The probability of overall survival of the group in a year was of 79,8% and 55,1% in five years. In conclusion, this study demonstrated that the majority of the patients achieved the desired number of CD34+ cells through mobilization and collection and the results obtained with autologous transplantation were similar to those described in the literature. / O transplante de células-tronco hematopoiéticas periféricas constitui-se uma das opções terapêuticas para o tratamento de várias doenças hematológicas-oncológicas, podendo prolongar a sobrevida livre da doença e, às vezes, pode representar a cura para o paciente. Este é um estudo retrospectivo através da revisão de prontuários dos pacientes submetidos à mobilização, coleta e infusão de células-tronco hematopoiéticas periféricas para transplante autogênico, com o objetivo de avaliar estes procedimentos, identificar as características da população atendida e verificar a mortalidade relacionada ao transplante e sobrevida global dos pacientes transplantados. Foram incluídos 176 pacientes (78F/98M) do Serviço de Hematologia-Oncologia do Hospital Universitário de Santa Maria, no período de dezembro de 1996 a dezembro de 2011. Os diagnósticos incluíram: Mieloma Múltiplo (54), Linfoma de Hodgkin (47), Linfoma não Hodgkin (35), Leucemia Mielóide Aguda (16) e outras neoplasias (24), como Câncer de Mama, Tumor de Wilms, Sarcoma de Ewing, Neuroblastoma, Amiloidose, Tumor de Testículo, Meduloblastoma, Macroglobulinemia, Tumor de SNC. A mediana de idade dos pacientes foi de 42 anos (1 a 69 anos). Antes da mobilização de célulastronco, todos os pacientes já haviam sido submetidos a algum tratamento relacionado a doença de base e 31% haviam recebido radioterapia prévia. Os esquemas de mobilização incluíram fator de crescimento hematopoiético (G-CSF) associado ou não a diferentes quimioterapias. Foram realizadas 203 mobilizações e 474 leucoaféreses. O número desejado de células CD34+ na coleta foi de 2,0x106/kg, sendo que a maioria dos pacientes (89,8%) alcançou a quantidade esperada. A mediana de células nucleadas totais coletadas foi de 7,01x108/kg e de células CD34+ foi de 2,63x106/kg, com mediana de duas leucoaféreses por paciente (1 a 6). Dos 176 pacientes do estudo, 120 foram submetidos a transplante autogênico de células-tronco hematopoiéticas do sangue periférico, sendo que três pacientes receberam duas infusões cada. A mediana de células nucleadas totais infundidas foi de 6,46x108/kg e de células CD34+ foi de 3,17x106/kg. Após a infusão das células-tronco hematopoiéticas, a recuperação dos neutrófilos ocorreu entre 7 e 28 dias (mediana 10 dias), enquanto as plaquetas entre os dias 8 e 79 (mediana 12 dias), sendo que em três pacientes não houve recuperação plaquetária. Foi encontrada correlação entre a quantidade de células CD34+ infundidas e recuperação de neutrófilos e plaquetas. A taxa de mortalidade relacionada ao transplante foi de 5%. A probabilidade de sobrevida global do grupo em um ano foi de 79,8% e em cinco anos de 55,1%. Em conclusão, este estudo demonstrou que a maioria dos pacientes atingiu a quantidade desejada de células CD34+ através das mobilizações e coletas e os resultados obtidos com os transplantes autogênicos foram semelhantes aos descritos na literatura.
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Lesões sugestivas de infecção hipodermal e necrose hematopoiética em camarão marinho, relacionadas com variáveis de cultivo

BEZERRA, Suely Santos 23 February 2007 (has links)
Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2017-02-22T12:37:59Z No. of bitstreams: 1 Suely Santos Bezerra.pdf: 418523 bytes, checksum: 6cbf43e2cf1c398824dd661f7ea8c038 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-02-22T12:37:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Suely Santos Bezerra.pdf: 418523 bytes, checksum: 6cbf43e2cf1c398824dd661f7ea8c038 (MD5) Previous issue date: 2007-02-23 / It can be observed nowadays that the increase in the commercial shrimp produc-tion occurs concomitantly with an enhancement of the incidence of diseases. These last ones can cause innumerable damages to the shrimp farmers in the whole world. Amongst these diseases, it can be distinguished the Infectious Hypodermal and Hema-topoietic Necrosis (IHHN), with viral etiology, that can be characterized by not causing great mortality, but body deformities. In addition to this, it frequently leads shrimp to heterogenic growth. For viruses diagnosis histology is an efficient tool, allowing the verification of the health of these crustaceans. This study aimed the observation of the occurrence of IHHN characteristic histopatologic injuries in Litopenaeus vannamei, and its relation with parameters of culture of marine shrimp farms in the state of Per-nambuco. After multiple regression statistic analysis it could be concluded that the tem-perature of the water of the pound and its oxygen availability are narrowly related with the occurrence of those histopatologic injuries. / Ao mesmo tempo em que crescem os cultivos comerciais de camarão, observa-se o aumento da incidência de enfermidades que podem causar inúmeros prejuízos aos carcinicultores em todo o mundo. Dentre essas enfermidades, destaca-se a Infecção Hi-podermal e Necrose Hematopoiética (IHHN), de etiologia viral que, embora não cause grandes taxas de mortalidade, produz retardo no desenvolvimento e deformidades nos camarões. Para o diagnóstico dessa virose a histologia tem sido uma ferramenta bastante eficiente e que permite maior monitoramento da sanidade desses crustáceos. Desta for-ma, objetivou-se estudar a IHHN em Litopenaeus vannamei relacionando lesões histo-patológicas características e sua relação com variáveis de cultivo. Com base em regres-sões múltiplas conclui-se que existe uma alta relação entre as variáveis de cultivo tem-peratura e oxigênio e a ocorrência destas lesões.

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