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In vitro genetic toxicity tests using cultured bacterial or mammalian cells provide a cost- and time-effective alternative to animal tests. Unfortunately, existing in vitro assays are not always reliable. This is in part due to the limited metabolic capacity of the cells used, which is often critical to accurately assess chemical genotoxicity. This limited metabolic capacity necessitates the use of exogenous sources of mammalian metabolic enzymes that can simulate in vivo mammalian metabolic activation reactions. In response to this, and other limitations, alongside the worldwide trend to reduce animal testing, there is an acute need to consider various strategies to improve in vitro mutagenicity assessment. This thesis first examined the utility of exogenous metabolic activation systems based on human hepatic S9, relative to conventional induced rat liver S9, for routine genetic toxicity assessment. This was accomplished by critically evaluating existing literature, as well as new experimental data. The results revealed the limitations of human liver S9 for assessment of chemical mutagenicity. More specifically, the analyses concluded that, due to the increased risk of false negative results, human liver S9 should not be used as a replacement for induced rat liver S9. To address the limitations of conventional mammalian cell genetic toxicity assays that require exogenous hepatic S9, the thesis next evaluated the utility of an in vitro mutagenicity assay based on metabolically-competent primary hepatocytes (PHs) derived from the transgenic MutaMouse. Cultured MutaMouse PHs were thoroughly characterized, and found to temporarily retain the phenotypic attributes of hepatocytes in vivo; they express hepatocyte-specific proteins, exhibit the karyotype of typical hepatocytes, and maintain metabolic activity for at least the first 24 hours after isolation. Preliminary validation of the in vitro MutaMouse PH gene mutation assay, using a panel of thirteen mutagenic and non-mutagenic chemicals, demonstrated excellent sensitivity and specificity. Moreover, inclusion of substances requiring a diverse array of metabolic activation pathways revealed comprehensive metabolic competence. Finally, the thesis further investigated the applicability domain of the in vitro MutaMouse PH assay by challenging the assay with selected azo compounds. Comparison of these results with those obtained using the in vivo MutaMouse TGR (transgenic rodent) assay revealed that MutaMouse PHs can carry out some forms of reductive metabolism. Overall, this thesis demonstrated that a gene mutation assay based on MutaMouse PHs holds great promise for routine assessments of chemical mutagenicity.

Está bem estabelecido que o diabetes melito está associado a uma série de distúrbios clínicos que envolvem a alteração no metabolismo de carboidratos, proteínas e lipídios. Tem-se observado aumento importante da morbidade e mortalidade associadas a esta doença, sendo que dentre as causas, em ambos os tipos de diabetes (1 e 2), têm-se o aumento de fatores de risco, como o sobrepeso ou obesidade e o estilo de vida sedentário. A erva-mate (Ilex paraguariensis) tem apresentado grande potencialidade para utilização preventiva e terapêutica no diabetes graças à atividade biotiva dos seus compostos (metilxantinas, polifenóis e saponinas), capazes de alterar o metabolismo tecidual energético tanto em protocolos experimentais com animais de laboratório quanto humanos. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi elucidar o efeito da administração do chá de mate em ratos Wistar diabéticos, tendo como foco o metabolismo tecidual muscular e hepático. Para tanto, ratos Wistar machos foram submetidos a indução do diabetes experimental com injeção de estreptozotocina (65 mg/kg, i.p.) e posteriormente tratados com o extrato aquoso de erva-mate através da água de beber por 30 dias. Ao final do tratamento, os animais foram eutanasiados e os tecidos (soro, músculo, fígado e tecido adiposo retroperitoneal e epididimal) foram coletados para análise. / There is a well known relationship between metabolic disturbances and clinical events related to diabetes and a dangerous prevalence increase worldwide for both types of this disease (diabetes type 1 and 2). This enhancement is caused by overweight, sedentary lifestyle and other risk factors associated to occidental habits. Yerba-mate (Ilex paraguariensis) has been presented a potential use to preventive and therapeutical aspects of diabetes due to its bioactive fractions (methylxanthines, saponins and polyphenols), which have a capability to improve energetic metabolism in murine models and human. The aim of this study was to elucidate the effect of yerba-mate on hepatic and muscle energetic metabolism of diabetic rats. To perform the diabetes inducing protocol Wistar rats received streptozotocin (65mg/kg i.p.), then the mate treatment protocol was performed daily and offered as a drink tea. After a 30-day treatment, the animals were weighed and euthanized to evaluate metabolic parameters on liver, adipose tissue, muscle and serum.

Très peu de données sont aujourd’hui disponibles sur le rôle des nutriments et de leurs interactions in vivo dans la régulation de l’autophagie. L'objectif principal de cette thèse était donc d’étudier l’effet de la qualité nutritionnelle de l’aliment sur le contrôle de cette fonction cellulaire. Une première étude a permis de montrer que les différents ratios en protéines et en glucides influencent significativement les mécanismes de contrôle de l’autophagie dans le muscle de truite arc-en-ciel (Oncorhynchus mykiss). Ces résultats ont été renforcés par une étude sur culture primaire de myoblaste de truite montrant que l’addition d’acides aminés dans le milieu de culture inhibe l’autophagie alors que le glucose à un effet inverse (article 1). Une seconde étude a porté sur la fraction protéique de l’aliment et notamment sur la teneur en méthionine, dont le niveau est trop faible dans les aliments pour poissons à base de végétaux. Les résultats obtenus indiquent que la machinerie autophagosomale mais également les principaux facteurs du renouvellement des protéines musculaires sont sensible aux variations de la teneur en méthionine de l’aliment et que la réponse qui en résulte peut fortement affecter la croissance (article 2). L’ensemble des données obtenues dans les deux premières études reposaient sur la mesure du taux d’un marqueur de l’autophagie (LC3-II) qui est à la fois produite et dégradée au cours du processus (flux) autophagique. Ainsi, dans l’optique de préciser les résultats obtenus dans les deux premiers articles, une troisième étude a été effectuée afin de déterminer s’il est possible de bloquer le flux autophagique dans le muscle de truite par l’emploi de différents agents pharmacologiques (inhibiteurs du flux autophagique). Il s’agissait également de déterminer les limites de l’utilisation de tels inhibiteurs chez cette espèce. Les essais effectués n’ont pas permis de mesurer le flux autophagique dans le muscle. En revanche, l’injection intrapéritonéale de colchicine a bien bloqué le flux autophagique dans le foie, ouvrant ainsi un nouveau champ d’investigations sur le rôle de l’autophagie dans le métabolisme intermédiaire. En conclusion, l’ensemble de ces travaux montre que l’autophagie n’est pas uniquement sensible à l’état nutritionnel (jeûne/nourris) mais également à la nature des aliments consommés. Outre leurs intérêts agronomique et thérapeutique, ces résultats ouvrent de nouvelles perspectives pour une meilleure compréhension des mécanismes d’action de l’autophagie au niveau cellulaire et métabolique mais également de son rôle dans l’adaptation des espèces au cours l’évolution. / Few data has been published on the role of nutrients and their interactions in vivo in the regulation of autophagy. The main objective of this thesis was therefore to characterize the response of the autophagic/lysosomal pathway to the macronutrients composition of the diets. The first study showed that different ratio of proteins and carbohydrates in the diet significantly affect the controls of autophagy in the muscle of rainbow trout (Oncorhynchus mykiss). These results were strengthened by study on primary culture of trout myoblasts showing that the addition of amino acids in cell culture medium inhibited the formation of autophagosomes, whereas the addition of glucose had an opposite effect (paper 1). A second study focused on the protein fraction of the diet and specifically on the content of methionine, whose the levels are low in fish feed plant-based diets. The obtained results showed that both autophagy machinery and the main factors of muscle protein turnover are significantly sensitive to change in dietary methionine levels and the resulting response may strongly affect growth and feed utilization (paper 2). The data obtained in these two first studies were based on measuring the level of autophagy marker (LC3-II), which is both produced and degraded during autophagic (flux) process. Thus, in view to clarify the results obtained in the two first studies, we conducted a third study to determine whether it is possible to block the autophagic flux in trout muscle by using different lysosomotropic agents (autophagic flux inhibitors). The objective was also to determine the limits of autophagic flux inhibitors utilisation in vivo. Different tests failed to measure autophagic flux in the muscle of rainbow trout. In contrast, intraperitoneal injection of colchicine blocked the autophagic flux in the liver. This study allowed us to investigate the function of autophagy in the intermediary metabolism. In conclusion, these studies show that autophagy is not only sensitive to the nutritional status (fasting/fed) but also to the nature of the consumed diets. In addition to their therapeutic and agricultural interests, these results open new perspectives to better understand the mechanisms of autophagy at metabolic and cellular level but also its role in the adaptation of species during evolution.

Está bem estabelecido que o diabetes melito está associado a uma série de distúrbios clínicos que envolvem a alteração no metabolismo de carboidratos, proteínas e lipídios. Tem-se observado aumento importante da morbidade e mortalidade associadas a esta doença, sendo que dentre as causas, em ambos os tipos de diabetes (1 e 2), têm-se o aumento de fatores de risco, como o sobrepeso ou obesidade e o estilo de vida sedentário. A erva-mate (Ilex paraguariensis) tem apresentado grande potencialidade para utilização preventiva e terapêutica no diabetes graças à atividade biotiva dos seus compostos (metilxantinas, polifenóis e saponinas), capazes de alterar o metabolismo tecidual energético tanto em protocolos experimentais com animais de laboratório quanto humanos. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi elucidar o efeito da administração do chá de mate em ratos Wistar diabéticos, tendo como foco o metabolismo tecidual muscular e hepático. Para tanto, ratos Wistar machos foram submetidos a indução do diabetes experimental com injeção de estreptozotocina (65 mg/kg, i.p.) e posteriormente tratados com o extrato aquoso de erva-mate através da água de beber por 30 dias. Ao final do tratamento, os animais foram eutanasiados e os tecidos (soro, músculo, fígado e tecido adiposo retroperitoneal e epididimal) foram coletados para análise. / There is a well known relationship between metabolic disturbances and clinical events related to diabetes and a dangerous prevalence increase worldwide for both types of this disease (diabetes type 1 and 2). This enhancement is caused by overweight, sedentary lifestyle and other risk factors associated to occidental habits. Yerba-mate (Ilex paraguariensis) has been presented a potential use to preventive and therapeutical aspects of diabetes due to its bioactive fractions (methylxanthines, saponins and polyphenols), which have a capability to improve energetic metabolism in murine models and human. The aim of this study was to elucidate the effect of yerba-mate on hepatic and muscle energetic metabolism of diabetic rats. To perform the diabetes inducing protocol Wistar rats received streptozotocin (65mg/kg i.p.), then the mate treatment protocol was performed daily and offered as a drink tea. After a 30-day treatment, the animals were weighed and euthanized to evaluate metabolic parameters on liver, adipose tissue, muscle and serum.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Knowledge about the nutritional requirements of fish is essential to improve the utilization of nutrients the diet. This study estimated the amino acid tryptophan requirement for silver catfish using a biological assay in a completely randomized design with five treatments and four replications. Groups of 30 fish (4.65 ± 0.68 g) were stocked in tanks (125 L) and fed diets mixed, to apparent satiation, containing different concentrations of tryptophan (0.10, 0.18, 0.26, 0.34, 0.42 g-1 tryptophan 100 g diet). After 60 days, were calculated the weight gain, specific growth rate, feed conversion, protein retention coefficient, body composition, somatic indices, and determined the concentrations of plasma metabolites, liver and digestive enzymes. The data were subjected to evaluation by means of nonlinear regression, broken line and polynomial. There was a highly significant effect (P<0.0001) the addition of tryptophan on growth, protein retention coefficient and acid protease activity. Fish fed these concentrations of tryptophan presented no alterations in metabolism and activity of digestive enzymes. The lowest concentration tested (0.10 g tryptophan 100 g-1) showed lower growth and deposition of nutrients in the body. Fish fed inadequate levels of tryptophan have submitted reduced growth, higher hepatosomatic index, alterations metabolics and enzymatic indicating gluconeogenic processes. The estimated amino acid requirement of tryptophan for maximum weight gain and protein retention coefficient is 0.25 to 0.34 g tryptophan 100 g-1 depending on the statistical model used for the estimation. / O conhecimento das exigências nutricionais dos peixes é fundamental para melhorar o aproveitamento dos nutrientes da dieta. Neste estudo foi estimada a exigência aminoacídica em triptofano para o jundiá por meio de um ensaio biológico em delineamento inteiramente casualizado com cinco tratamentos e quatro repetições. Grupos de 30 peixes (4,65 ± 0,68 g) foram estocados em tanques (125 L) e alimentados com dietas mistas, até a saciedade aparente, contendo diferentes concentrações de triptofano (0,10; 0,18; 0,26, 0,34; 0,42 g triptofano 100 g-1 da dieta). Após 60 dias, foram calculados o ganho em peso, taxa de crescimento específico, conversão alimentar, coeficiente de retenção proteica, composição corporal, índices somáticos, e determinadas as concentrações de metabólitos plasmáticos, hepáticos e enzimas digestivas. Os dados foram submetidos a avaliação por meio de regressão não linear, broken line e polinomial. Ocorreu efeito altamente significativo (P<0,0001) da inclusão de triptofano sobre o crescimento, o coeficiente de retenção proteica e atividade de protease ácida. Os peixes alimentados com estas concentrações de triptofano não apresentaram alterações no metabolismo e atividade de enzimas digestivas. A menor concentração testada (0,10 g triptofano 100 g-1) proporcionou menor crescimento e deposição de nutrientes no organismo. Os peixes alimentados com níveis inadequados de triptofano apresentaram crescimento reduzido, índice hepatossomático superior e alterações enzimáticas e metabólicas, indicando processos gliconeogênicos. A exigência aminoacídica estimada de triptofano para o máximo ganho em peso e coeficiente de retenção proteica está entre 0,25 e 0,34 g triptpfano 100 g-1, dependendo do modelo estatístico utilizado para a estimativa.

Está bem estabelecido que o diabetes melito está associado a uma série de distúrbios clínicos que envolvem a alteração no metabolismo de carboidratos, proteínas e lipídios. Tem-se observado aumento importante da morbidade e mortalidade associadas a esta doença, sendo que dentre as causas, em ambos os tipos de diabetes (1 e 2), têm-se o aumento de fatores de risco, como o sobrepeso ou obesidade e o estilo de vida sedentário. A erva-mate (Ilex paraguariensis) tem apresentado grande potencialidade para utilização preventiva e terapêutica no diabetes graças à atividade biotiva dos seus compostos (metilxantinas, polifenóis e saponinas), capazes de alterar o metabolismo tecidual energético tanto em protocolos experimentais com animais de laboratório quanto humanos. Assim sendo, o objetivo deste trabalho foi elucidar o efeito da administração do chá de mate em ratos Wistar diabéticos, tendo como foco o metabolismo tecidual muscular e hepático. Para tanto, ratos Wistar machos foram submetidos a indução do diabetes experimental com injeção de estreptozotocina (65 mg/kg, i.p.) e posteriormente tratados com o extrato aquoso de erva-mate através da água de beber por 30 dias. Ao final do tratamento, os animais foram eutanasiados e os tecidos (soro, músculo, fígado e tecido adiposo retroperitoneal e epididimal) foram coletados para análise. / There is a well known relationship between metabolic disturbances and clinical events related to diabetes and a dangerous prevalence increase worldwide for both types of this disease (diabetes type 1 and 2). This enhancement is caused by overweight, sedentary lifestyle and other risk factors associated to occidental habits. Yerba-mate (Ilex paraguariensis) has been presented a potential use to preventive and therapeutical aspects of diabetes due to its bioactive fractions (methylxanthines, saponins and polyphenols), which have a capability to improve energetic metabolism in murine models and human. The aim of this study was to elucidate the effect of yerba-mate on hepatic and muscle energetic metabolism of diabetic rats. To perform the diabetes inducing protocol Wistar rats received streptozotocin (65mg/kg i.p.), then the mate treatment protocol was performed daily and offered as a drink tea. After a 30-day treatment, the animals were weighed and euthanized to evaluate metabolic parameters on liver, adipose tissue, muscle and serum.

Submitted by Biblioteca do Instituto Biomédico BIB (uffbib@gmail.com) on 2017-06-05T16:57:34Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_mestrado-versão_final-_Jessika_Geisebel.pdf: 1194239 bytes, checksum: b59363ae595a444e379ef361c1b537c2 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-05T16:57:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertação_mestrado-versão_final-_Jessika_Geisebel.pdf: 1194239 bytes, checksum: b59363ae595a444e379ef361c1b537c2 (MD5) / A programação metabólica ocorre quando insultos promovem alterações adaptativas nos períodos críticos do desenvolvimento e alteram as funções endócrino-metabólicas ao longa da vida. Estudos com alimentos conhecidos por trazerem benefícios à saúde além do valor nutritivo, mostraram que seu consumo por mães gestantes e/ou lactantes podem vir a ter desfechos negativos para a prole. Já está bem caracterizado que a ingestão de canela gera benefícios para homeostase energética. Entretanto, dados prévios obtidos pelo grupo mostraram que a suplementação com extrato aquoso de canela (400mg/kg peso corporal/dia) durante a lactação leva ao desenvolvimento de obesidade visceral, hiperleptinemia, hiperinsulinemia, associada a normoglicemia, na prole adulta aos 180 dias de vida. Com o objetivo de melhor compreender as alterações endócrino-metabólicas deste modelo, avaliamos a expressão proteica no fígado e músculo esquelético por Western blot, além de avaliarmos o conteúdo de triglicerídeo e glicogênio hepáticos através de ensaios colorimétricos. No fígado, vimos uma diminuição na fosforilação do IR, entretanto, observamos aumento na fosforilação do IRS1 e AKT. Quando avaliamos a sinalização de leptina, não observamos alteração na expressão do ObRB e SOCS3, no entanto, vimos um aumento na expressão da JAK2 e na fosforilação da STAT3, sugerindo que a ativação do IRS1/AKT possa decorrer da maior ativação da via da leptina. Apesar de não observarmos alteração da via gliconeogênica (PEPCK, G6Pase, GLUT2), vimos que a programação leva a um menor conteúdo de glicogênio hepático acompanhado por maior ativação da GSK3β. Observamos aumento do conteúdo de triglicerídeo hepático acompanhado por expressão normal do PPARα e uma interessante redução da expressão do SREBP1c. Concluímos que a programação por canela na lactação altera as principais ações da insulina no fígado, levando a uma menor síntese de glicogênio e acúmulo de gordura neste tecido, sem gerar alterações significativas no músculo esquelético. / Metabolic programming occurs when insults promotes adaptive changes in critic periods of development that alters the endocrine-metabolic functions in the offspring in medium and long terms. Studies with foods known to promote health benefits in addition to the nutritive value, shows that its consumption by pregnant and/or lactating females could induce negative outcomes to the offspring. It is well characterized that cinnamon intake promotes benefits to energy homeostasis. However, previous data obtained by our research group showed that supplementation with cinnamon water extract (400mg/kg body weight/day) during lactation leads to the development of visceral obesity, hyperleptinemia, hyperinsulinemia, associated to normoglycemia, in the adult offspring with 180 days old. To increase the knowledge about the endocrine-metabolic changes in this model, we evaluated the protein expression in liver and skeletal muscle by Western blot, and evaluated the hepatic content of triacylglycerol and glycogen using colorimetric assays. In liver, we observed a reduced IR phosphorylation; however, we observed increased phosphorylation of IRS1 and AKT. Concerning leptin signaling pathway, we did not observed changes in the ObRB and SOCS3 expression, but we observed an increased expression of JAK2 and phosphorylation of STAT3, suggesting that the activation of IRS1/AKT could be resulted by the increased activation of leptin signaling pathway. Although we observed no changes in the gluconeogenic pathway (PEPCK, G6Pase, GLUT2), we observed that the programmed group exhibit a lower hepatic glycogen content accompanied by increased activation of GSK3β. We observed increased hepatic triacylglycerol content accompanied by normal PPARα expression and an interesting reduction of SREBP1c expression. We conclude that the programming induced by cinnamon intake during lactation alters the main actions of insulin in liver; leading to lower glycogen synthesis and accumulation of fat in this tissue, without promote important changes in skeletal muscle.

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Submitted by Fernando Bombarda Oda null (fer_oda@fcfar.unesp.br) on 2017-07-20T17:23:30Z No. of bitstreams: 1 Dissertação_Fernando_Oda_Final.pdf: 7648101 bytes, checksum: f78680181e6caaa8a443897d877a8eae (MD5) / Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-07-21T18:30:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oda_fb_me_arafcf_parc.pdf: 1138705 bytes, checksum: a9ec30f0d79f53facd0d1b055e2a1bc4 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-07-21T18:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oda_fb_me_arafcf_parc.pdf: 1138705 bytes, checksum: a9ec30f0d79f53facd0d1b055e2a1bc4 (MD5) Previous issue date: 2017-06-19 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Casearia sylvestris Swartz, conhecida como guaçatonga, está distribuída em todo Brasil e é muito utilizada na medicina popular, com registro etnofarmacológico desde 1877. Muitos desses usos, como o antiofídico, antiulcerogênico e antiinflamatório já foram comprovados em estudos farmacológicos, os quais mostraram também a baixa toxicidade aguda por via oral de seus derivados vegetais. Estudos in vivo revelaram que os diterpenos clerodânicos são os responsáveis pelas atividades antiulcerogênica e anti-inflamatória de C. sylvestris, o que valoriza ainda mais o uso medicinal desta planta. Entretanto, a constatação de que os diterpenos clerodânicos podem sofrer degradação em meio ácido levantaram dúvidas sobre quais substâncias realmente chegam aos receptores e têm atividade: diterpenos ou seus produtos de degradação? Para elucidar essa questão, os diterpenos clerodânicos isolados casearina J (cas J) e O (cas O) foram submetidos isoladamente à degradação ácida em fluido gástrico simulado sem enzimas (PDA) e, posteriormente, metabolizados com enzimas hepáticas da fração S9 (PDA-ME). A metabolização direta dos diterpenos com a fração S9 também foi realizada (PME). As respectivas casearinas remanescentes foram quantificadas em todos os produtos de metabolização. Posteriormente, foram conduzidos ensaios de síntese e/ou liberação de óxido nítrico em macrófagos RAW 267.7 estimulados por LPS in vitro. Para a determinação estrutural dos derivados formados foram utilizadas técnicas cromatográficas (CLAEDAD) e espectrométricas (CLUE-EM, RMN de 1H e 13C). Foram identificadas dez substâncias formadas após degradação ácida da cas J (PDA-J), além da casearina remanescente (5,05%) e seu epímero (PDA-J8). As estruturas propostas desses produtos resultaram da hidrólise do grupamento éster em C-18 (PDA-J1), hidrólise do grupamento éster em C-19 (PDA-J3), formação de dialdeído após quebra do anel diacetálico C (PDA-J2, majoritário), e adições nos grupos aldeídos do PDA-J2 de uma molécula de água (PDJ-7), uma (PDA-J4 e PDA-J4.1) ou duas de etanol (PDJ-5) e hidrólise do éster em C-18 do PDA-J2 (PDJ-6). Foram identificadas nove substâncias formadas após degradação ácida da cas O, além da casearina remanescente (13,1%). Suas estruturas resultaram da hidrólise dos grupos ésteres em C-18 (PDA-O1) e C-19 (PDA-O3), formação do dialdeído após quebra do anel C (PDA-O2, majoritário), adições nos grupos aldeídos do PDA-O2 de uma (PDA-O4 e PDA-O 4.1) ou duas moléculas de etanol (PDA-O5) e hidrólise do éster em C-7 do PDA-O2 (PDA-O5), além da hidrólise do grupamento esterificado em C-6 do PDA-O5 (PDA-O6 ou PDA-O6.1). A metabolização da cas J pela fração S9 gerou duas substâncias correspondentes à quebra do butanoato em C-18 (PME-J1) e formação do seu epímero (PME-J2), permanecendo 36,8% íntegra. Em relação à metabolização da cas O, 36,5% permaneceu íntegra, e ocorreu a formação de uma molécula após quebra dos substituintes esterificados em C-18 e C-19 (PME-O1) e de outra após a formação do dialdeído no anel C (PME-O2). As análises indicaram que as metabolizações enzimáticas dos PDA resultaram nas mesmas substâncias. Os ensaios em macrófagos estimulados por LPS in vitro mostraram que os produtos de degradação ácida e/ou metabolização enzimática das casearinas não têm atividade antiinflamatória in vitro na inibição da liberação e/ou produção de NO, igualmente às casearinas J e O íntegras. / Casearia sylvestris Swartz known as guaçatonga is distributed throughout Brazil and has been widely used in folk medicine since 1877. Many of these uses, such as anti-fungal, antiulcerogenic and anti-inflammatory, have already been proven in pharmacological studies, also demonstrating low acute oral toxicity. In vivo studies have shown that clerodane diterpenes are responsible for the antiulcerogenic and antiinflammatory activities of C. sylvestris, which further enhances the medicinal use of this plant or its derivatives. However, the finding that clerodane diterpenes may suffer degradation in acid medium have raised doubts about the actual substances reached the receptors and carry out activity: diterpenes or their degradation products? In order to elucidate this issue, purified clerodane diterpenes casearin J (cas J) and O (cas O) were subjected to acid degradation in simulated gastric fluid without enzymes (PDA) alone and subsequently metabolized with S9 fraction (PDAME) liver enzymes. A direct metabolization of diterpenes with a S9 fraction (PME) was also performed. Respective remaining casearins were quantified in all the metabolizing products. In the end, macrophage stimulated by LPS in vitro assays of nitric oxide synthesis were conducted using as sample the purified cas J and O, PDA, PME and PDAME. Chromatographic (HPLC-PDA) and spectrometric techniques (UPLC-PDA-MS, 1H and and 13C NMR) were used for the structural determination of the generated derivatives. Ten substances were identified after the acid degradation of cas J (PDA-J), in addition to the remaining casearin (5.05%) and its epimer. Proposed structures of these compounds result of ester group hydrolysis in C-18 (PDA-J1), and in C-19 (PDA-J7), dialdehyde formation after diacetal C ring breaking (PDA-J2, majority), and additions in the aldehyde groups of the PDA-J2 of a water molecule (PDJ-3), one (PDA-J4 and PDA-J4.1) or two ethanol molecules (PDJ-5) and ester hydrolysis in C-7 of PDA-J2 (PDJ-6). Besides the remaining cas O (13.1%), nine compounds were identified after acid degradation. Their structures result of hydrolysis of the esterified groups in C-18 and C-19 (PDA-O1), dialdehyde formation after C-ring rupture (PDA-O2, majority), additions in the PDA-O2 aldehyde groups of one (PDA-O3 and PDA -O3.1) or two ethanol molecules (PDA-O4) and ester hydrolysis at C-6 (PDA-O5). Metabolization of casearin J by the S9 fraction generated two substances corresponding to the breakdown of n-butanoate in C-18 (PME-J1) and formation of cas J epimer (PME-J2), remaining 36.8% intact. In relation to the metabolization of casearin O, 36.5% remained intact and one molecule was formed after breaking the esterified substituents in C-6 and C-7 (PME-O1) and the other after the formation of dialdehyde at C ring (PME-O2). The analyzes indicated that the enzymatic metabolism of the PDA resulted in the same substances. In vitro LPS stimulated macrophage assays have shown that PDA and PME do not have in vitro anti-inflammatory activity of NO inhibition, as well as intact J and O casearins. / CNPq: 130329/2015-0