ArtinM é uma lectina ligante a carboidrato D-manose que se interage a receptores de células fagocíticas induzindo a produção de mediadores pró- inflamatórios relacionados à resposta imune antitumoral. Aflatoxinas são micotoxinas produzidas por fungos do gênero Aspergillus. A Aflatoxina B1 (AFB1) é a toxina sintetizada mais abundantemente e a que apresenta o maior poder toxigênico, sendo capaz de induzir carcinoma hepatocelular (CHC) em humanos. O objetivo deste estudo foi investigar o papel da lectina ArtinM na hepatocarcinogênese induzida pela AFB1 em ratos. Setenta e dois ratos recém-desmamados foram divididos em três grupos: Controle - animais tratados com veículo; AFB1 - animais intoxicados com AFB1; AFB1+ArtinM - animais tratados com AFB1 e ArtinM. Ratos Wistar foram intoxicados por gavagem com 400 ?g de AFB1 por quilograma de ração ingerida durante três meses, enquanto o grupo AFB1+ArtinM recebeu adicionalmente três doses da lectina por via subcutânea (50 ?g por quilograma de peso do animal por dose) nos 45, 60 e 75 após inicio do experimento. Animais foram eutanasiados 3 e 12 meses após início das gavagens. A expressão hepática de proteínas relacionadas à hepatocarcinogênese foi avaliada por técnicas de imunohistoquímica, Western blotting e PCR em tempo real nos animais eutanasiados após 3 meses de intoxicação. A incidência de lesões pré-neoplásicas e de tumores hepáticos foi mensurada 3 e 12 meses após início das gavagens, respectivamente. Os animais tratados com ArtinM apresentaram maior expressão hepática de proteínas supressoras tumorais além de redução do número de focos pré-neoplásicos e de tumores hepáticos em relação aos animais que receberam apenas a micotoxina. Conclui-se, portanto, que ArtinM possui efeito protetor durante o processo de hepatocarcinogênese induzida por AFB1. / ArtinM is a D-mannose carbohydrate-binding lectin that interacts with phagocytic cell receptors inducing the production of pro-inflammatory mediators related to the antitumor immune response. Aflatoxins are mycotoxins produced by fungi of the genus Aspergillus. Aflatoxin B1 (AFB1) is the toxin most abundantly synthesized and the one with the highest toxigenic power, being able to induce hepatocellular carcinoma (HCC) in humans. The aim of this study was to investigate the role of ArtinM lectin in AFB1-induced hepatocarcinogenesis in rats. Seventy-two newly weaned rats were divided into three groups: Control - vehicle-treated animals; AFB1 - animals poisoned with AFB1; AFB1 + ArtinM - animals treated with AFB1 and ArtinM. Wistar rats were gavage-poisoned with 400 ?g AFB1 per kilogram of ration fed for three months, while the AFB1 + ArtinM group received three subcutaneous doses of the lectin (50 ?g per kilogram of animal weight per dose) 45, 60 and 75 days after the start of the experiment. Animals were euthanized 3 and 12 months after initiation of treatments. Hepatic expression of hepatocarcinogenesis-related proteins was assessed by immunohistochemistry, Western blotting, and realtime PCR in euthanized animals after three months of intoxication. The incidence of pre-neoplastic lesions and liver tumors was measured 3 and 12 months after the start of treatments, respectively. Animals treated with ArtinM had fewer pre-neoplastic foci and hepatic tumors than the animals that receiving mycotoxin alone, as well as showing greater hepatic expression of tumor suppressor proteins. It is concluded, therefore, that ArtinM has a protective effect during the process of hepatocarcinogenesis induced by AFB1.

ArtinM é uma lectina ligante a carboidrato D-manose que se interage a receptores de células fagocíticas induzindo a produção de mediadores pró- inflamatórios relacionados à resposta imune antitumoral. Aflatoxinas são micotoxinas produzidas por fungos do gênero Aspergillus. A Aflatoxina B1 (AFB1) é a toxina sintetizada mais abundantemente e a que apresenta o maior poder toxigênico, sendo capaz de induzir carcinoma hepatocelular (CHC) em humanos. O objetivo deste estudo foi investigar o papel da lectina ArtinM na hepatocarcinogênese induzida pela AFB1 em ratos. Setenta e dois ratos recém-desmamados foram divididos em três grupos: Controle - animais tratados com veículo; AFB1 - animais intoxicados com AFB1; AFB1+ArtinM - animais tratados com AFB1 e ArtinM. Ratos Wistar foram intoxicados por gavagem com 400 ?g de AFB1 por quilograma de ração ingerida durante três meses, enquanto o grupo AFB1+ArtinM recebeu adicionalmente três doses da lectina por via subcutânea (50 ?g por quilograma de peso do animal por dose) nos 45, 60 e 75 após inicio do experimento. Animais foram eutanasiados 3 e 12 meses após início das gavagens. A expressão hepática de proteínas relacionadas à hepatocarcinogênese foi avaliada por técnicas de imunohistoquímica, Western blotting e PCR em tempo real nos animais eutanasiados após 3 meses de intoxicação. A incidência de lesões pré-neoplásicas e de tumores hepáticos foi mensurada 3 e 12 meses após início das gavagens, respectivamente. Os animais tratados com ArtinM apresentaram maior expressão hepática de proteínas supressoras tumorais além de redução do número de focos pré-neoplásicos e de tumores hepáticos em relação aos animais que receberam apenas a micotoxina. Conclui-se, portanto, que ArtinM possui efeito protetor durante o processo de hepatocarcinogênese induzida por AFB1. / ArtinM is a D-mannose carbohydrate-binding lectin that interacts with phagocytic cell receptors inducing the production of pro-inflammatory mediators related to the antitumor immune response. Aflatoxins are mycotoxins produced by fungi of the genus Aspergillus. Aflatoxin B1 (AFB1) is the toxin most abundantly synthesized and the one with the highest toxigenic power, being able to induce hepatocellular carcinoma (HCC) in humans. The aim of this study was to investigate the role of ArtinM lectin in AFB1-induced hepatocarcinogenesis in rats. Seventy-two newly weaned rats were divided into three groups: Control - vehicle-treated animals; AFB1 - animals poisoned with AFB1; AFB1 + ArtinM - animals treated with AFB1 and ArtinM. Wistar rats were gavage-poisoned with 400 ?g AFB1 per kilogram of ration fed for three months, while the AFB1 + ArtinM group received three subcutaneous doses of the lectin (50 ?g per kilogram of animal weight per dose) 45, 60 and 75 days after the start of the experiment. Animals were euthanized 3 and 12 months after initiation of treatments. Hepatic expression of hepatocarcinogenesis-related proteins was assessed by immunohistochemistry, Western blotting, and realtime PCR in euthanized animals after three months of intoxication. The incidence of pre-neoplastic lesions and liver tumors was measured 3 and 12 months after the start of treatments, respectively. Animals treated with ArtinM had fewer pre-neoplastic foci and hepatic tumors than the animals that receiving mycotoxin alone, as well as showing greater hepatic expression of tumor suppressor proteins. It is concluded, therefore, that ArtinM has a protective effect during the process of hepatocarcinogenesis induced by AFB1.

O carcinoma hepatocelular (HCC) é a 3ª causa de morte por neoplasias no mundo, sendo também o 5º tipo de neoplasia mais frequente. Seu tratamento limitado juntamente com o mau prognóstico tornam importante a adoção de medidas preventivas. A prevenção das etapas iniciais da hepatocarcinogênese pela administração de compostos bioativos de alimentos (CBAs) atualmente vem sendo observada em diversos estudos. Sugere-se que o processo de carcinogênese envolva alterações genéticas e epigenéticas, como a hipometilação do DNA e a desacetilação de histonas. Nesse sentido, o tratamento com ácido fólico (AF), precursor indireto de grupamento metil, e tributirina (TB), inibidora de enzimas desacetilases de histonas, quando em associação, poderia agir em adição potencializando os efeitos quimiopreventivos dos mesmos comparados às suas ações isoladas. A eventual atividade quimiopreventiva da TB (100mg/100g de peso corpóreo), do AF (0,08mg/100g de peso corpóreo), ambos com a metade da dose utilizada na literatura, e da associação entre os mesmos (AS) foi analisada durante a etapa de promoção da hepatocarcinogênese em ratos Wistar submetidos ao modelo do hepatócito resistente (HR). Para avaliação de GST-P, da proliferação celular, da apoptose, bem como a localização da histona H3K9 foi utilizada a técnica de imunohistoquímica; para a quantificação de H3K9, western blot. Em relação à análise macroscópica, os grupos tratados apresentaram menor número de nódulos em relação a MD (sem significância estatística), além de menor porcentagem de LPN menores do que 1mm nos grupos TB e AS. Na análise microscópica foi observado que os grupos TB, AF e AS apresentaram menor número de lesões pré neoplásicas persistentes (pLPN) em relação ao grupo controle isocalórico (MD, maltodextrina), assim como menor porcentagem de área ocupada por pLPN e por lesões em remodelação (rLPN). Quanto a proliferação celular, os grupos AF e AS apresentaram menor número de núcleos em fase S/mm2 quando comparados aos grupos MD e TB. Em relação à apoptose, os grupos TB e AS apresentaram maior número de hepatócitos em apoptose e corpúsculos apoptóticos/mm2 quando comparados aos grupos MD e AF. No resultado da metilação global do DNA não houve diferença entre os grupos. Em adição, os grupos AF e AS apresentaram maiores concentrações séricas de folato; o mesmo não ocorrendo para B12. No que diz respeito à acetilação de H3K9, os grupos TB e AS apresentaram maior porcentagem de acetilação quando comparados aos grupos N, MD e AF. Em conclusão, os grupos tratados com TB, AF e a associação entre eles apresentaram quimioprevenção pronunciada, sendo que o grupo AS apresentou mecanismos aditivos dos tratamentos isolados. / The hepatocellular carcinoma (HCC) is the third leading cause of death by cancer in the world, and the fifth most frequent type of neoplasm. Its limited treatment along with poor prognosis make it important to adopt preventive measures. The prevention of the initial stages of hepatocarcinogenesis by the administration of bioactive food compounds (BFCs) is currently being observed in several studies. It is suggested that the process of carcinogenesis involves genetic and epigenetic modifications, such as DNA hypomethylation and deacetylation of histones. Accordingly, treatment with folic acid (FA), indirect precursor of methyl grouping, and tributyrin (TB), a histone deacetylases inhibiting enzyme, when associated could act in addition to enhance the chemopreventive effects compared to their isolated actions. The possible chemopreventive activity of TB (100mg/100g body weight), FA (0.08 mg/100 g body weight) and the association between them (AS) were studied during the promotion stage of hepatocarcinogenesis in Wistar rats submitted to resistant hepatocyte model (RH).For evaluation of GST-P, cell proliferation, apoptosis, and the location of histone H3K9 was used immunohistochemistry, to quantify H3K9, western blot. Regarding the macroscopic analysis, the treated groups showed a lower number of nodules compared to MD (not statistically significant), and a lower percentage smaller than 1mm in groups TB and AS. Under microscopic examination the groups TB, FA and AS showed a lower number of persistent pre-neoplastic lesions (pLPN) compared to the isocaloric control group (MD, maltodextrin), as well as a lower percentage of the area occupied by pLPN and remodeling lesions (rLPN). As cell proliferation, FA and AS groups had fewer S phase nuclei/mm2 compared to MD and TB groups. Regarding apoptosis, TB and AS groups showed higher numbers of hepatocytes in apoptosis and apoptotic corpuscles/mm2 compared to MD and FA groups. Global DNA methylation did not differ between groups. In addition, AF and AS groups had higher serum concentrations of folate, which did not occur for B12.Concerning the H3K9 acetylation, the groups TB and AS showed higher percentage of acetylation when compared with the groups N, MD and FA. In conclusion, the groups treated with TB, FA and the association of both showed pronounced chemoprevention, and the AS group showed additive mechanisms compared with isolated treatments.

O câncer é um dos principais problemas de saúde pública no mundo. Dentre as neoplasias primárias que acometem o fígado, o carcinoma hepatocelular (HCC) é a mais frequente. Diversos fatores de risco predispõem ao HCC, entre eles a doença hepática gordurosa não-alcoólica (NAFLD). Segundo estudos prévios do grupo, a &#946;-ionona (BI), presente em uvas e aromatizantes de vinho, apresenta potencial quimiopreventivo da hepatocarcinogênese. Além disso, a &#946;I parece atuar na redução da colesterolemia podendo, assim, influenciar a NAFLD. Desta forma pretendeu-se, neste projeto, avaliar o desenvolvimento da NAFLD e sua influência nas etapas de iniciação e seleção/promoção da hepatocarcinogênese em ratos Wistar submetidos ao modelo do hepatócito resistente (RH), além da atividade quimiopreventiva da &#946;I, nessas condições experimentais em ratos. Para isso, os animais foram alocados em 6 grupos experimentais: RH iniciação (n=11), NAFLD iniciação (n=15), BI iniciação (n=15), RH seleção/promoção (n=11), NAFLD seleção promoção (n=15) e BI seleção/promoção (n=15). Na fase de iniciação os animais do grupo NAFLD receberam, diariamente, emulsão hipercalórica até a sexta semana do experimento um dia antes da administração de DEN. Já na fase de seleção/promoção os animais do grupo NAFLD receberam a emulsão hipercalórica, a partir de um dia após a DEN. Os animais dos grupos RH da iniciação e da seleção/promoção servem como controles e receberam, diariamente, 1mL/100g peso corpóreo de água até a sexta semana do experimento e um dia após a DEN, respectivamente. Na fase de iniciação, após 13 semanas os animais do grupo NAFLD não demonstraram sinais de esteatose, apresentaram maiores níveis séricos de triacilglicerol, colesterol total e LDL comparados ao grupo RH (P<0,05). O grupo NAFLD apresentou maior porcentagem de nódulos macroscópicos, bem como maior número e porcentagem de área hepática de lesões pré neoplásicas persistentes (pLPN) comparado ao grupo RH (P<0,05). Já o grupo BI apresentou menor número de pLPN e maior número de lesões em remodelação e uma maior porcentagem de área hepática de rLPN (p<0,05). Em relação a proliferação celular, o grupo NAFLD apresentou maior número de células em sourrounding, pLPN e rLPN comparada ao grupo RH e o grupo BI menor número em pLPN comparada a NAFLD. Já na fase de seleção/promoção foi possível observar o grupo NAFLD tem maiores valores de focos de inflamação, hepatócitos balonizados e grau de esteatose hepática em relação ao grupo BI, assim como maiores níveis séricos de triacilgliceróis, colesterol total e LDL (p<0,05). O grupo NAFLD apresentou maior porcentagem de nódulos macroscópicos <1, maior número, menor tamanho médio de pLPN comparados ao grupo RH (p<0,05). O grupo BI apresentou menor número e menor porcentagem de área em pLPN e maior porcentagem de área em rLPN (p<0,05). Em relação a proliferação celular, o grupo NAFLD apresentou maior número de células em sourrounding, pLPN e rLPN comparada ao grupo RH (p<0,05). Na expressão gênica, o grupo BI apresentou maior expressão de HMGCR em relação grupo NAFLD (p<0,05), O grupo NAFLD apresentou maior expressão de INSIG1 em relação ao grupo RH (p<0,05) e tendência na expressão de INSIG 2. / Cancer is a major public health problems in the world. Among the primary neoplasm affecting the liver, hepatocellular carcinoma (HCC) is the most frequent. Several risk factors predispose to HCC, including the non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). According to previous studies of the group, &#946;-ionone (BI), present in grapes and flavors of wine, it presents potential chemopreventive of hepatocarcinogenesis. Furthermore, &#946;I appears to act in reducing blood cholesterol and may thus influence NAFLD. In this way it was intended in this project, evaluate the development of NAFLD and its influence on the steps of initiation and selection/promotion of hepatocarcinogenesis in Wistar rats resistant hepatocyte model (HR), and the chemopreventive activity of &#946;I, these experimental conditions in rats. For this, the animals were divided into 6 groups: RH initiation (n = 11), NAFLD initiation (n = 15), BI initiation (n = 15), HR selection / promotion (n = 11), NAFLD selection promotion ( n = 15) and BI selection / promotion (n = 15). In the inception phase of the NAFLD group animals received daily calorie emulsion until the sixth week of the experiment one day prior to DEN administration. In the selection / promotion stage NAFLD group of animals received hypercaloric emulsion, from one day after the DEN. The animals of groups HR and selection of initiation / promotion serve as controls and received daily 1mL / 100g body weight of water until the sixth week of the experiment, and one day after DEN respectively. In the initiation phase, after 13 weeks the animals of group NAFLD showed no signs steatosis, had higher serum levels of triglyceride, total cholesterol and LDL compared to the HR group (P <0.05). The NAFLD showed higher prevalence of macroscopic nodules as well as higher number and percentage of liver area of persistent pre-neoplastic lesions (pLPN) compared to the HR group (P <0.05). But the BI group had fewer pLPN and higher number of lesions in remodeling and a higher percentage of liver area rLPN (p <0.05). In relation to cell proliferation, the NAFLD group had a higher number of cells in sourrounding, pLPN and rLPN compared to the RH group and the lowest number in pLPN BI group compared to NAFLD. In the selection / promotion layer was observed NAFLD group has the highest values of inflammation foci, balonizados hepatocytes and hepatic steatosis grade in relation to BI group as well as higher serum levels of triglyceride, total cholesterol and LDL (p <0 , 05). The NAFLD showed higher prevalence of macroscopic nodules <1, more, smaller average size pLPN compared to the HR group (p <0.05). The BI group had fewer and smaller percentage area in pLPN and higher percentage of area rLPN (p <0.05). In relation to cell proliferation, the NAFLD group had a higher number of cells in sourrounding, pLPN and rLPN compared to the HR group (p <0.05). In gene expression, the BI group showed higher expression of HMGCR regarding NAFLD group (p <0.05), the NAFLD group had higher expression of INSIG1 against the RH group (p <0.05) and a tendency in the expression of INSIG 2.

No presente estudo avaliou-se a atividade quimiopreventiva do farnesol (FR) e geraniol (GR), isoprenóides presentes em frutas e ervas, quando administrados a ratos Wistar durante as etapas de iniciação e/ou seleção/promoção do modelo de hepatocarcinogênese do \"hepatócito resistente\" (RH). No Protocolo Experimental 1, os animais receberam durante 8 semanas consecutivas, continuamente durante as etapas de iniciação e seleção/promoção, por entubação gástrica e dissolvido em óleo de milho (OM): FR (25 mg/100 g de peso corpóreo [p.c.]; grupo FR) ou GR (25 mg/100 g de p.c.; grupo GR). Além disso, 1 grupo recebeu durante o mesmo período, por entubação gástrica, apenas OM (0,25 mL/100 g de p.c.; grupo OM; controle). Duas semanas após o início dos tratamentos, todos os grupos foram submetidos ao modelo do RH. Esse consistiu na aplicação intraperitoneal de uma dose do agente iniciante dietilnitrosamina (DEN, 20 mg/100 g de p.c.), seguida, 2 semanas após, da aplicação de 4 doses consecutivas de 2-acetilaminofluoreno (2-AAF; 2,5 mg/100 g de p.c.) e de uma hepatectomia parcial (HP) a 70%, acrescida de 2 doses de 2-AAF (2 mg/100 g de p.c.) 2 e 4 dias após a cirurgia. Decorridas 6 semanas após a iniciação com DEN, os animais foram sacrificados administrando-se, entretanto, 2 h. antes desse procedimento 5-bromo-2-desoxiuridina (BrdU) (10 mg/100 g de p.c.). De acordo com a análise macroscópica dos fígados, e em comparação ao grupo OM, verificou-se que o FR inibiu a incidência (p<0,05) e número médio (p<0,05) de lesões pré-neoplásicas (LPN) hepáticas visíveis à macroscopia. No caso do grupo GR, observou-se apenas sugestão de redução da incidência e número médio dessas LPN visíveis à macroscopia. Em relação à análise morfométrica das LPN hepáticas positivas para a enzima glutationa S-transferase forma placentária (GST-P) totais (persistentes + em remodelação), observou-se que em comparação ao grupo OM, o FR reduziu o tamanho (p<0,05) e área do corte ocupada (p<0,05) por essas lesões. O GR, por sua vez, reduziu o tamanho (p<0,05) das LPN GST-P positivas totais, observando-se, também, sugestão de redução pelo isoprenóide da área do corte ocupada pelas mesmas. Em comparação ao grupo OM, o FR e o GR foram capazes de inibir (p<0,05) a proliferação celular nas LPN, enquanto apenas o GR induziu (p<0,05) a apoptose nas mesmas. Além disso, danos no DNA hepático foram menores (p<0,05) nos animais tratados com FR ou GR, em comparação aos tratados com OM (controles). O tratamento com FR, mas não com GR, resultou em inibição (p<0,05) das concentrações plasmáticas de colesterol total. A análise, por \"western blot\", da expressão hepática do receptor nuclear ativado pelo farnesóide X (FXR) não revelou diferenças (p>0,05) entre os diferentes grupos. No Protocolo Experimental 2, os ratos receberam apenas durante 2 semanas consecutivas na fase de iniciação, e por entubação gástrica, FR (25 mg/100 g p.c.; grupo FRi), GR (25 mg/100 g p.c.; grupo GRi) ou OM (0,25 mL/00 g p.c.; grupo OMi, controle), sendo então submetidos ao modelo do RH, conforme descrito para o Protocolo Experimental 1. O sacrifício dos animais ocorreu 6 semanas após iniciação com DEN. De acordo com a análise macroscópica dos fígados, não foram constatadas diferenças entre os diferentes grupos (p>0,05) quanto à incidência de LPN hepáticas visíveis à macroscopia. Em comparação ao grupo OMi (controle), observou-se nos grupos FRi e GRi sugestão de maior número de LPN hepáticas visíveis à macroscopia. Também em comparação ao grupo OMi (controle), observou-se no grupo GRi menor (p<0,05) número de LPN hepáticas GST-P positivas totais (persistentes + em remodelação), e no grupo FRi sugestão de menor número dessas LPN GST-P positivas totais. Além disso, foram observadas nos grupos FRi e GRi, em comparação ao grupo OMi, LPN hepáticas GST-P positivas totais (persistentes + em remodelação) maiores (p<0,05), bem como sugestão de maior área do corte ocupada por essas LPN GST-P positivas. Não foram observadas diferenças (p>0,05) entre os diferentes grupos quanto à concentração hepática de DNA. No Protocolo Experimental 3, os ratos receberam inicialmente uma dose de DEN (20 mg/100 g de p.c.). Duas semanas após, os animais passaram a receber por entubação gástrica, durante 6 semanas consecutivas em período compreendendo a etapa de seleção/promoção: FR (25 mg/100 g p.c.; grupo FRs/p), GR (25 mg/100 g p.c.; grupo GRs/p) ou OM (0,25 mL/100 g p.c.; grupo Oms/p; controle). Nesse experimento, as administrações de 2-AAF e a realização da HP ocorreram 4 semanas após a iniciação com DEN. O sacrifício dos animais ocorreu após 8 semanas da iniciação com DEN. Em comparação ao grupo OMs/p (controle), observou-se nos grupos FRs/p e GRs/p sugestão de menor número médio de LPN hepáticas visíveis à macroscopia. Não foram constatadas diferenças (p>O,05) entre os diferentes grupos quanto à incidência de LPN hepáticas visíveis à macroscopia; quanto ao número, tamanho e área do corte ocupada por LPN hepáticas GST-P positivas totais (persistentes + em remodelação); e quanto à concentração hepática de DNA. De acordo com os resultados do estudo, considerou-se pronunciada a atividade quimiopreventiva do FR quando administrado a ratos Wistar continuamente durante as etapas de iniciação e seleção/promoção do modelo de hepatocarcinogênese do RH (Protocolo Experimenta! 1). Nessas mesmas condições, considerou-se moderada a atividade quimiopreventiva do GR. Inibições da proliferação celular e de danos no DNA parecem estar envolvidas com as ações anticarcinogênicas do FR e GR, enquanto que a indução da apoptose parece ser mecanismo de ação específico do GR. Além disso, as ações protetoras do FR e GR não parecem envolver alterações na expressão do receptor nuclear FXR. Finalmente, quando administrados especificamente durante a etapa de iniciação (Protocolo Experimental 2) ou de seleção/promoção (Protocolo Experimental 3), ambos os isoprenóides não foram capazes de apresentar atividades quimiopreventivas efetivas. Dessa forma, em ratos Wistar submetidos ao modelo do RH, é necessária a administração contínua de FR ou GR durante as etapas de iniciação e seleção/promoção para a ocorrência de atividades quimiopreventivas. / In the present study, the chemopreventive activity of farnesol (FR) and geraniol (GR), isoprenoids present in fruits and herbs, was evaluated when administered to Wistar rats during the initiation and/or selection/promotion phases of the \"resistant hepatocyte\" (RH) model of hepatocarcinogenesis. In Experimental Protocol 1, animals received during 8 consecutive weeks, continuously during the initiation and selection/promotion phases, by gavage and dissolved in corn oil (CO): FR (25 mg/100g9 body weight [b.w.]; FR group) or GR (25 mg/100 g de b.w.; GR group). Moreover, 1 group received during the same period, by gavage, only CO (0,25 mL/100 g de b.w.; CO group; controls). Two weeks after the beginning of the treatments, all groups were submitted to the RH model. Initiation was obtained by administration of a single intraperitoneal dose of diethylnitrosamine (DEN; 20 mg/100 g b.w.) followed, 2 weeks after, by the administration of 4 consecutive doses of 2-acetylaminofluorene (2-AAF; .2.5 mg/100 b.w.) and by a partial (70%) hepatectomy (PH). Finally, 2 and 4 days after PH, 2 additional 2-AAF doses (2 mg/100 g b.w.) were administered. Six weeks after initiation with DEN, the animals were anesthetized and sacrificed by exsanguination. Two hours before sacrifice, the rats received 5-bromo-2\'-deoxyuridine (10 mg/100 g b.w.). According to the macroscopic examination of the livers, and compared to CO group, FR inhibited the incidence (P<0.05) and mean number (P<0.05) of visible hepatic preneoplastic lesions (PNL). Regarding GR group, only a suggestion of inhibition of visible PNL incidence and mean number was observed. Morphometrical analysis of total (persitent and remodeling) glutathione S-transferase (GST-P) positive PNL showed that compared to CO group, FR group presented with smaller total GST-P positive PNL (p<0.05) that occupied a smaller area of the liver section (p<0.05). Also compared to CO group, GR group presented with smaller total GST-P positive PNL (p<0.05) and a suggestion of reduction of the liver section area occupied by these LPN was observed. Compared to CO group, FR and GR inhibited (p<0.05) PNL cell proliferation, whereas only GR induced (p<0.05) apoptosis in these PNL. Furthermore, hepatic DNA damage was lower (p<0.05) in FR or GR treated animals, compared to CO treated ones (controls). Animal treatment with FR, but not with GR, inhibited (p<0,05) total plasma cholesterol levels. Farnesoid X activated receptor (FXR) expression analysis by western blot did not reveal differences (p>0,05) between the different groups. In the Experimental Protocol 2, rats received only for 2 consecutive weeks during the initiation phase, and by gavage: FR (25 mg/100 g body weight b.w.; FRi group), GR (25 mg/100 g de b.w.; GRi group) or CO (0,25 mL/100 g de b.w.; COi group; controls) being submitted to the RH model as described for Experimental Protocol 1. Six weeks after initiation with DEN, the animals were sacrificed. According to the macroscopic examination of the livers, no differences (p>0.05) were observed among the different groups regarding the incidence of visible PNL. In FRi and GRi groups a suggestion of higher number of visible PNL was observed, when compared to COi group (controls). Also compared to COi group, GRi group presented with smaller (p<0.05) number of total (persistente + remodeling) GST-P positive PNL, whereas in FRi group a suggestion of smaller number of these visible PNL was observed. Moreover, compared to COi group, FRi and GRi groups presented with total (persistent + remodelling) GST-P positive PNL with greater (p<0,05) size, and a suggestion of greater area of the liver section occupied by these GST -P positive PNL was observed. No differences (p>0.05) among the different groups were observed regarding hepatic DNA concentration. In Experimental Protocol 3, rats were first initiated with DEN (20 mg/100 g de b.w.). After 2 weeks, animals received by gavage for 6 consecutive weeks during the selection/promotion phase: FR (25 mg/100 g body weight b.w.; FRs/p group), GR (25 mg/100 g de b.w.; GRs/p group) or CO (0,25 Ml/100 g de b.w.; COs/p group; controls). In this experiment animals received 2-AAF doses and were submitted to PH 4 weeks after initiation with DEN. Six weeks after initiation with DEN, the animals were sacrificed. Compared to COs/p group (controls), a suggestion of smaller visible PNL mean number was observed in FRs/p e GRs/p groups. No differences (p>0.05) among the different groups were observed regarding visible PNL incidence; regarding number, size and liver section occupied by total (persistent + remodeling) GST-P positive PNL; and regarding hepatic DNA concentration. According to the results of the study, FR chemopreventive activity was considered pronounced when administered to Wistar rats continuously during the initiation and selection/promotion phases of the RH model of hepatocarcinogenesis (Experimental Protocol 1). In these same conditions, GR chemopreventive activity was considered moderate. Cell proliferation and DNA damage inhibition seem to be involved with FR and GR anticarcinogenic actions, whereas apoptosis induction seems to represent a GR specific mechanism. Furthermore, FR and GR protective actions do not seem to involve alterations in FXR expression. Finally, when administered specifically during the initiation (Experimental Protocol 2) or selection/promotion (Experimental Protocol 3) phase, both isoprenoids did not present effective chemopreventive activity. Thus, in Wistar rats submitted to the RH model, FR or GR should be administered continuously during the initiation and selection/promotion phases in order to obtain chemopreventive activities.

O câncer é um dos principais problemas de saúde pública no mundo. Dentre as neoplasias primárias que acometem o fígado, o carcinoma hepatocelular (HCC) é a mais frequente. Diversos fatores de risco predispõem ao HCC, entre eles a doença hepática gordurosa não alcóolica (NAFLD). Segundo estudos prévios do grupo, a &#946-ionona (BI), apresenta potencial quimiopreventivo na hepatocarcinogênese, promovendo redução de lesões preneoplásicas (LPN). Assim pretendeu-se investigar se a NAFLD potencializaria o desenvolvimento de LPN em ratos Wistar submetidos ao modelo do hepatócito resistente (RH) na etapa de iniciação/promoção inicial da hepatocarcinogênese e se a BI apresenta efeito quimiopreventivo nesse contexto. Para tanto, os animais foram distribuídos em 4 grupos experimentais: grupo não-tratado (NT), grupo submetido ao RH (RH), grupo submetido ao RH e ao modelo de NAFLD, que consiste na administração de emulsão hiperlipídica, (AS) e grupo AS tratado com BI (AS + BI). Em uma primeira instância, 5 animais pertencentes aos grupos NT, AS,AS + BI foram eutanasiados após 6 semanas de administração de emulsão hiperlipídica, antes da aplicação do modelo RH, para se confirmar o desenvolvimento da NAFLD. Foi possível observar que a administração de emulsão hiperlipídica durante 6 semanas foi suficiente para o desenvolvimento de esteatose hepática. Após as 6 semanas foi introduzido o modelo do RH concomitante à administração da emulsão hipercalipídica até o fim do experimento na 13a semana . Após 13 semanas o grupo AS apresentou maiores (p<0,05) valores de focos de inflamação, hepatócitos balonizados e grau de esteatose hepática em relação ao grupo AS+BI, assim como maiores (p<0,05) níveis séricos de triacilgliceróis, colesterol, HDL, LDL, VLDL, e maior (p<0,05) valor de MDA em relação ao grupo RH embora sem diferença estatística. O grupo AS também apresentou maior (p<0,05) incidência, número total e multiplicidade de nódulos, além de maior (p<0,05) número e tamanho de LPN persistentes (pLPN) e índice de proliferação quando comparado aos grupos RH e AS+BI. O grupo AS + BI, por sua vez, demonstrou menores (p<0,05) valores de escore de células ovais e menores valores de comprimentos de cometa e danos no DNA quando comparado ao grupo AS, embora sem diferença estatista para este último parâmetro. Em relação à expressão gênica, o grupo AS apresentou menores (p<0,05) valores de expressão do gene Hmgcr em relação ao grupo RH e maiores (p<0,05) valores dos genes Insig 1 e Thy 1 quando comparados ao grupo AS+BI. Portanto, no contexto de esteatose hepática associada ao modelo do RH, a administração de BI durante a etapa de iniciação/promoção em ratos Wistar resultou em atividade quimiopreventiva que se deu pela diminuição de pLNP, redução da proliferação celular e do número de células ovais, consideradas potenciais alvos para o desenvolvimento da hepatocarcinogênese, entretanto os genes analisados parecem não serem modulados pela BI. / Cancer is a major public health problem in the world. Among the primary neoplasms affecting the liver, hepatocellular carcinoma (HCC) is the most frequent. Several risk factors predispose to HCC, including the nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). According to previous studies of the group, the &#946-ionone (BI), has potential chemopreventive in hepatocarcinogenesis, promoting reduction of preneoplastic lesions (LPN). Thus we investigated whether NAFLD would increase the development of LPN in Wistar rats resistant hepatocyte model (RH) at the stage of initiation / promotion of hepatocarcinogenesis and if BI has chemopreventive effect in this context. Therefore, the animals were divided into 4 groups: non-treated group (NT), the group submitted to HR (HR), the group submitted to HR and NAFLD model, consisting of the fatty emulsion administration (AS) and AS group treated with BI (AS + BI). In a first point, 5 animals belonging to the groups NT, AS, AS + BI were euthanized after 6 weeks of administration of fat emulsion prior to application of the HR model, to confirm the development of NAFLD. It was observed that the administration of fatty emulsion for 6 weeks was sufficient to the development of hepatic steatosis. After 6 weeks it was introduced into the model HR the concomitant administration of fatty emulsion until the end of the experiment at 13 weeks. In the endpoint, the AS group had higher (p <0.05) of serum triacylglycerols, cholesterol, HDL, LDL, VLDL although no statistical difference inrelation to RH group, and increased (p <0.05) amount of MDA in relation to the group RH. The AS group also had higher (p <0.05) incidence, multiplicity and total number of nodes and greater (p <0.05) number and size of persistent LPN (pLPN) and proliferation index when compared to HR groups and AS + BI. AS + BI group. It was observed in AS+BI group lower (p <0.05) cell oval score values compared to AS group. In addition the AS+BI group showed lower values of the comet length and DNA damage compared to the AS group, although no statistical differences. In relation to gene expression, the AS group showed lower(p <0.05) HMGCR gene expression values in relation to HR group and higher (p <0.05) expression of Insig genes 1 and Thy 1 compared to group AS + BI.Therefore, in the context of hepatic steatosis associated with HR model BI for administration to the stage of initiation / promotion in rats resulted in chemopreventive activity was due to decrease in area of pLNP, reducing cell proliferation, and the number of oval cells, as potential targets for the development of hepatocarcinogenesis, however the genes do not seem to be modulated analyzed by BI.

O câncer é um dos principais problemas de saúde pública no mundo. Dentre as neoplasias primárias que acometem o fígado, o carcinoma hepatocelular (HCC) é a mais frequente. Diversos fatores de risco predispõem ao HCC, entre eles a doença hepática gordurosa não-alcoólica (NAFLD). Segundo estudos prévios do grupo, a &#946;-ionona (BI), presente em uvas e aromatizantes de vinho, apresenta potencial quimiopreventivo da hepatocarcinogênese. Além disso, a &#946;I parece atuar na redução da colesterolemia podendo, assim, influenciar a NAFLD. Desta forma pretendeu-se, neste projeto, avaliar o desenvolvimento da NAFLD e sua influência nas etapas de iniciação e seleção/promoção da hepatocarcinogênese em ratos Wistar submetidos ao modelo do hepatócito resistente (RH), além da atividade quimiopreventiva da &#946;I, nessas condições experimentais em ratos. Para isso, os animais foram alocados em 6 grupos experimentais: RH iniciação (n=11), NAFLD iniciação (n=15), BI iniciação (n=15), RH seleção/promoção (n=11), NAFLD seleção promoção (n=15) e BI seleção/promoção (n=15). Na fase de iniciação os animais do grupo NAFLD receberam, diariamente, emulsão hipercalórica até a sexta semana do experimento um dia antes da administração de DEN. Já na fase de seleção/promoção os animais do grupo NAFLD receberam a emulsão hipercalórica, a partir de um dia após a DEN. Os animais dos grupos RH da iniciação e da seleção/promoção servem como controles e receberam, diariamente, 1mL/100g peso corpóreo de água até a sexta semana do experimento e um dia após a DEN, respectivamente. Na fase de iniciação, após 13 semanas os animais do grupo NAFLD não demonstraram sinais de esteatose, apresentaram maiores níveis séricos de triacilglicerol, colesterol total e LDL comparados ao grupo RH (P<0,05). O grupo NAFLD apresentou maior porcentagem de nódulos macroscópicos, bem como maior número e porcentagem de área hepática de lesões pré neoplásicas persistentes (pLPN) comparado ao grupo RH (P<0,05). Já o grupo BI apresentou menor número de pLPN e maior número de lesões em remodelação e uma maior porcentagem de área hepática de rLPN (p<0,05). Em relação a proliferação celular, o grupo NAFLD apresentou maior número de células em sourrounding, pLPN e rLPN comparada ao grupo RH e o grupo BI menor número em pLPN comparada a NAFLD. Já na fase de seleção/promoção foi possível observar o grupo NAFLD tem maiores valores de focos de inflamação, hepatócitos balonizados e grau de esteatose hepática em relação ao grupo BI, assim como maiores níveis séricos de triacilgliceróis, colesterol total e LDL (p<0,05). O grupo NAFLD apresentou maior porcentagem de nódulos macroscópicos <1, maior número, menor tamanho médio de pLPN comparados ao grupo RH (p<0,05). O grupo BI apresentou menor número e menor porcentagem de área em pLPN e maior porcentagem de área em rLPN (p<0,05). Em relação a proliferação celular, o grupo NAFLD apresentou maior número de células em sourrounding, pLPN e rLPN comparada ao grupo RH (p<0,05). Na expressão gênica, o grupo BI apresentou maior expressão de HMGCR em relação grupo NAFLD (p<0,05), O grupo NAFLD apresentou maior expressão de INSIG1 em relação ao grupo RH (p<0,05) e tendência na expressão de INSIG 2. / Cancer is a major public health problems in the world. Among the primary neoplasm affecting the liver, hepatocellular carcinoma (HCC) is the most frequent. Several risk factors predispose to HCC, including the non-alcoholic fatty liver disease (NAFLD). According to previous studies of the group, &#946;-ionone (BI), present in grapes and flavors of wine, it presents potential chemopreventive of hepatocarcinogenesis. Furthermore, &#946;I appears to act in reducing blood cholesterol and may thus influence NAFLD. In this way it was intended in this project, evaluate the development of NAFLD and its influence on the steps of initiation and selection/promotion of hepatocarcinogenesis in Wistar rats resistant hepatocyte model (HR), and the chemopreventive activity of &#946;I, these experimental conditions in rats. For this, the animals were divided into 6 groups: RH initiation (n = 11), NAFLD initiation (n = 15), BI initiation (n = 15), HR selection / promotion (n = 11), NAFLD selection promotion ( n = 15) and BI selection / promotion (n = 15). In the inception phase of the NAFLD group animals received daily calorie emulsion until the sixth week of the experiment one day prior to DEN administration. In the selection / promotion stage NAFLD group of animals received hypercaloric emulsion, from one day after the DEN. The animals of groups HR and selection of initiation / promotion serve as controls and received daily 1mL / 100g body weight of water until the sixth week of the experiment, and one day after DEN respectively. In the initiation phase, after 13 weeks the animals of group NAFLD showed no signs steatosis, had higher serum levels of triglyceride, total cholesterol and LDL compared to the HR group (P <0.05). The NAFLD showed higher prevalence of macroscopic nodules as well as higher number and percentage of liver area of persistent pre-neoplastic lesions (pLPN) compared to the HR group (P <0.05). But the BI group had fewer pLPN and higher number of lesions in remodeling and a higher percentage of liver area rLPN (p <0.05). In relation to cell proliferation, the NAFLD group had a higher number of cells in sourrounding, pLPN and rLPN compared to the RH group and the lowest number in pLPN BI group compared to NAFLD. In the selection / promotion layer was observed NAFLD group has the highest values of inflammation foci, balonizados hepatocytes and hepatic steatosis grade in relation to BI group as well as higher serum levels of triglyceride, total cholesterol and LDL (p <0 , 05). The NAFLD showed higher prevalence of macroscopic nodules <1, more, smaller average size pLPN compared to the HR group (p <0.05). The BI group had fewer and smaller percentage area in pLPN and higher percentage of area rLPN (p <0.05). In relation to cell proliferation, the NAFLD group had a higher number of cells in sourrounding, pLPN and rLPN compared to the HR group (p <0.05). In gene expression, the BI group showed higher expression of HMGCR regarding NAFLD group (p <0.05), the NAFLD group had higher expression of INSIG1 against the RH group (p <0.05) and a tendency in the expression of INSIG 2.

No presente estudo avaliou-se a atividade quimiopreventiva do farnesol (FR) e geraniol (GR), isoprenóides presentes em frutas e ervas, quando administrados a ratos Wistar durante as etapas de iniciação e/ou seleção/promoção do modelo de hepatocarcinogênese do \"hepatócito resistente\" (RH). No Protocolo Experimental 1, os animais receberam durante 8 semanas consecutivas, continuamente durante as etapas de iniciação e seleção/promoção, por entubação gástrica e dissolvido em óleo de milho (OM): FR (25 mg/100 g de peso corpóreo [p.c.]; grupo FR) ou GR (25 mg/100 g de p.c.; grupo GR). Além disso, 1 grupo recebeu durante o mesmo período, por entubação gástrica, apenas OM (0,25 mL/100 g de p.c.; grupo OM; controle). Duas semanas após o início dos tratamentos, todos os grupos foram submetidos ao modelo do RH. Esse consistiu na aplicação intraperitoneal de uma dose do agente iniciante dietilnitrosamina (DEN, 20 mg/100 g de p.c.), seguida, 2 semanas após, da aplicação de 4 doses consecutivas de 2-acetilaminofluoreno (2-AAF; 2,5 mg/100 g de p.c.) e de uma hepatectomia parcial (HP) a 70%, acrescida de 2 doses de 2-AAF (2 mg/100 g de p.c.) 2 e 4 dias após a cirurgia. Decorridas 6 semanas após a iniciação com DEN, os animais foram sacrificados administrando-se, entretanto, 2 h. antes desse procedimento 5-bromo-2-desoxiuridina (BrdU) (10 mg/100 g de p.c.). De acordo com a análise macroscópica dos fígados, e em comparação ao grupo OM, verificou-se que o FR inibiu a incidência (p<0,05) e número médio (p<0,05) de lesões pré-neoplásicas (LPN) hepáticas visíveis à macroscopia. No caso do grupo GR, observou-se apenas sugestão de redução da incidência e número médio dessas LPN visíveis à macroscopia. Em relação à análise morfométrica das LPN hepáticas positivas para a enzima glutationa S-transferase forma placentária (GST-P) totais (persistentes + em remodelação), observou-se que em comparação ao grupo OM, o FR reduziu o tamanho (p<0,05) e área do corte ocupada (p<0,05) por essas lesões. O GR, por sua vez, reduziu o tamanho (p<0,05) das LPN GST-P positivas totais, observando-se, também, sugestão de redução pelo isoprenóide da área do corte ocupada pelas mesmas. Em comparação ao grupo OM, o FR e o GR foram capazes de inibir (p<0,05) a proliferação celular nas LPN, enquanto apenas o GR induziu (p<0,05) a apoptose nas mesmas. Além disso, danos no DNA hepático foram menores (p<0,05) nos animais tratados com FR ou GR, em comparação aos tratados com OM (controles). O tratamento com FR, mas não com GR, resultou em inibição (p<0,05) das concentrações plasmáticas de colesterol total. A análise, por \"western blot\", da expressão hepática do receptor nuclear ativado pelo farnesóide X (FXR) não revelou diferenças (p>0,05) entre os diferentes grupos. No Protocolo Experimental 2, os ratos receberam apenas durante 2 semanas consecutivas na fase de iniciação, e por entubação gástrica, FR (25 mg/100 g p.c.; grupo FRi), GR (25 mg/100 g p.c.; grupo GRi) ou OM (0,25 mL/00 g p.c.; grupo OMi, controle), sendo então submetidos ao modelo do RH, conforme descrito para o Protocolo Experimental 1. O sacrifício dos animais ocorreu 6 semanas após iniciação com DEN. De acordo com a análise macroscópica dos fígados, não foram constatadas diferenças entre os diferentes grupos (p>0,05) quanto à incidência de LPN hepáticas visíveis à macroscopia. Em comparação ao grupo OMi (controle), observou-se nos grupos FRi e GRi sugestão de maior número de LPN hepáticas visíveis à macroscopia. Também em comparação ao grupo OMi (controle), observou-se no grupo GRi menor (p<0,05) número de LPN hepáticas GST-P positivas totais (persistentes + em remodelação), e no grupo FRi sugestão de menor número dessas LPN GST-P positivas totais. Além disso, foram observadas nos grupos FRi e GRi, em comparação ao grupo OMi, LPN hepáticas GST-P positivas totais (persistentes + em remodelação) maiores (p<0,05), bem como sugestão de maior área do corte ocupada por essas LPN GST-P positivas. Não foram observadas diferenças (p>0,05) entre os diferentes grupos quanto à concentração hepática de DNA. No Protocolo Experimental 3, os ratos receberam inicialmente uma dose de DEN (20 mg/100 g de p.c.). Duas semanas após, os animais passaram a receber por entubação gástrica, durante 6 semanas consecutivas em período compreendendo a etapa de seleção/promoção: FR (25 mg/100 g p.c.; grupo FRs/p), GR (25 mg/100 g p.c.; grupo GRs/p) ou OM (0,25 mL/100 g p.c.; grupo Oms/p; controle). Nesse experimento, as administrações de 2-AAF e a realização da HP ocorreram 4 semanas após a iniciação com DEN. O sacrifício dos animais ocorreu após 8 semanas da iniciação com DEN. Em comparação ao grupo OMs/p (controle), observou-se nos grupos FRs/p e GRs/p sugestão de menor número médio de LPN hepáticas visíveis à macroscopia. Não foram constatadas diferenças (p>O,05) entre os diferentes grupos quanto à incidência de LPN hepáticas visíveis à macroscopia; quanto ao número, tamanho e área do corte ocupada por LPN hepáticas GST-P positivas totais (persistentes + em remodelação); e quanto à concentração hepática de DNA. De acordo com os resultados do estudo, considerou-se pronunciada a atividade quimiopreventiva do FR quando administrado a ratos Wistar continuamente durante as etapas de iniciação e seleção/promoção do modelo de hepatocarcinogênese do RH (Protocolo Experimenta! 1). Nessas mesmas condições, considerou-se moderada a atividade quimiopreventiva do GR. Inibições da proliferação celular e de danos no DNA parecem estar envolvidas com as ações anticarcinogênicas do FR e GR, enquanto que a indução da apoptose parece ser mecanismo de ação específico do GR. Além disso, as ações protetoras do FR e GR não parecem envolver alterações na expressão do receptor nuclear FXR. Finalmente, quando administrados especificamente durante a etapa de iniciação (Protocolo Experimental 2) ou de seleção/promoção (Protocolo Experimental 3), ambos os isoprenóides não foram capazes de apresentar atividades quimiopreventivas efetivas. Dessa forma, em ratos Wistar submetidos ao modelo do RH, é necessária a administração contínua de FR ou GR durante as etapas de iniciação e seleção/promoção para a ocorrência de atividades quimiopreventivas. / In the present study, the chemopreventive activity of farnesol (FR) and geraniol (GR), isoprenoids present in fruits and herbs, was evaluated when administered to Wistar rats during the initiation and/or selection/promotion phases of the \"resistant hepatocyte\" (RH) model of hepatocarcinogenesis. In Experimental Protocol 1, animals received during 8 consecutive weeks, continuously during the initiation and selection/promotion phases, by gavage and dissolved in corn oil (CO): FR (25 mg/100g9 body weight [b.w.]; FR group) or GR (25 mg/100 g de b.w.; GR group). Moreover, 1 group received during the same period, by gavage, only CO (0,25 mL/100 g de b.w.; CO group; controls). Two weeks after the beginning of the treatments, all groups were submitted to the RH model. Initiation was obtained by administration of a single intraperitoneal dose of diethylnitrosamine (DEN; 20 mg/100 g b.w.) followed, 2 weeks after, by the administration of 4 consecutive doses of 2-acetylaminofluorene (2-AAF; .2.5 mg/100 b.w.) and by a partial (70%) hepatectomy (PH). Finally, 2 and 4 days after PH, 2 additional 2-AAF doses (2 mg/100 g b.w.) were administered. Six weeks after initiation with DEN, the animals were anesthetized and sacrificed by exsanguination. Two hours before sacrifice, the rats received 5-bromo-2\'-deoxyuridine (10 mg/100 g b.w.). According to the macroscopic examination of the livers, and compared to CO group, FR inhibited the incidence (P<0.05) and mean number (P<0.05) of visible hepatic preneoplastic lesions (PNL). Regarding GR group, only a suggestion of inhibition of visible PNL incidence and mean number was observed. Morphometrical analysis of total (persitent and remodeling) glutathione S-transferase (GST-P) positive PNL showed that compared to CO group, FR group presented with smaller total GST-P positive PNL (p<0.05) that occupied a smaller area of the liver section (p<0.05). Also compared to CO group, GR group presented with smaller total GST-P positive PNL (p<0.05) and a suggestion of reduction of the liver section area occupied by these LPN was observed. Compared to CO group, FR and GR inhibited (p<0.05) PNL cell proliferation, whereas only GR induced (p<0.05) apoptosis in these PNL. Furthermore, hepatic DNA damage was lower (p<0.05) in FR or GR treated animals, compared to CO treated ones (controls). Animal treatment with FR, but not with GR, inhibited (p<0,05) total plasma cholesterol levels. Farnesoid X activated receptor (FXR) expression analysis by western blot did not reveal differences (p>0,05) between the different groups. In the Experimental Protocol 2, rats received only for 2 consecutive weeks during the initiation phase, and by gavage: FR (25 mg/100 g body weight b.w.; FRi group), GR (25 mg/100 g de b.w.; GRi group) or CO (0,25 mL/100 g de b.w.; COi group; controls) being submitted to the RH model as described for Experimental Protocol 1. Six weeks after initiation with DEN, the animals were sacrificed. According to the macroscopic examination of the livers, no differences (p>0.05) were observed among the different groups regarding the incidence of visible PNL. In FRi and GRi groups a suggestion of higher number of visible PNL was observed, when compared to COi group (controls). Also compared to COi group, GRi group presented with smaller (p<0.05) number of total (persistente + remodeling) GST-P positive PNL, whereas in FRi group a suggestion of smaller number of these visible PNL was observed. Moreover, compared to COi group, FRi and GRi groups presented with total (persistent + remodelling) GST-P positive PNL with greater (p<0,05) size, and a suggestion of greater area of the liver section occupied by these GST -P positive PNL was observed. No differences (p>0.05) among the different groups were observed regarding hepatic DNA concentration. In Experimental Protocol 3, rats were first initiated with DEN (20 mg/100 g de b.w.). After 2 weeks, animals received by gavage for 6 consecutive weeks during the selection/promotion phase: FR (25 mg/100 g body weight b.w.; FRs/p group), GR (25 mg/100 g de b.w.; GRs/p group) or CO (0,25 Ml/100 g de b.w.; COs/p group; controls). In this experiment animals received 2-AAF doses and were submitted to PH 4 weeks after initiation with DEN. Six weeks after initiation with DEN, the animals were sacrificed. Compared to COs/p group (controls), a suggestion of smaller visible PNL mean number was observed in FRs/p e GRs/p groups. No differences (p>0.05) among the different groups were observed regarding visible PNL incidence; regarding number, size and liver section occupied by total (persistent + remodeling) GST-P positive PNL; and regarding hepatic DNA concentration. According to the results of the study, FR chemopreventive activity was considered pronounced when administered to Wistar rats continuously during the initiation and selection/promotion phases of the RH model of hepatocarcinogenesis (Experimental Protocol 1). In these same conditions, GR chemopreventive activity was considered moderate. Cell proliferation and DNA damage inhibition seem to be involved with FR and GR anticarcinogenic actions, whereas apoptosis induction seems to represent a GR specific mechanism. Furthermore, FR and GR protective actions do not seem to involve alterations in FXR expression. Finally, when administered specifically during the initiation (Experimental Protocol 2) or selection/promotion (Experimental Protocol 3) phase, both isoprenoids did not present effective chemopreventive activity. Thus, in Wistar rats submitted to the RH model, FR or GR should be administered continuously during the initiation and selection/promotion phases in order to obtain chemopreventive activities.

O carcinoma hepatocelular (HCC) é a 3&#170; causa de morte por neoplasias no mundo, sendo também o 5º tipo de neoplasia mais frequente. Seu tratamento limitado juntamente com o mau prognóstico tornam importante a adoção de medidas preventivas. A prevenção das etapas iniciais da hepatocarcinogênese pela administração de compostos bioativos de alimentos (CBAs) atualmente vem sendo observada em diversos estudos. Sugere-se que o processo de carcinogênese envolva alterações genéticas e epigenéticas, como a hipometilação do DNA e a desacetilação de histonas. Nesse sentido, o tratamento com ácido fólico (AF), precursor indireto de grupamento metil, e tributirina (TB), inibidora de enzimas desacetilases de histonas, quando em associação, poderia agir em adição potencializando os efeitos quimiopreventivos dos mesmos comparados às suas ações isoladas. A eventual atividade quimiopreventiva da TB (100mg/100g de peso corpóreo), do AF (0,08mg/100g de peso corpóreo), ambos com a metade da dose utilizada na literatura, e da associação entre os mesmos (AS) foi analisada durante a etapa de promoção da hepatocarcinogênese em ratos Wistar submetidos ao modelo do hepatócito resistente (HR). Para avaliação de GST-P, da proliferação celular, da apoptose, bem como a localização da histona H3K9 foi utilizada a técnica de imunohistoquímica; para a quantificação de H3K9, western blot. Em relação à análise macroscópica, os grupos tratados apresentaram menor número de nódulos em relação a MD (sem significância estatística), além de menor porcentagem de LPN menores do que 1mm nos grupos TB e AS. Na análise microscópica foi observado que os grupos TB, AF e AS apresentaram menor número de lesões pré neoplásicas persistentes (pLPN) em relação ao grupo controle isocalórico (MD, maltodextrina), assim como menor porcentagem de área ocupada por pLPN e por lesões em remodelação (rLPN). Quanto a proliferação celular, os grupos AF e AS apresentaram menor número de núcleos em fase S/mm2 quando comparados aos grupos MD e TB. Em relação à apoptose, os grupos TB e AS apresentaram maior número de hepatócitos em apoptose e corpúsculos apoptóticos/mm2 quando comparados aos grupos MD e AF. No resultado da metilação global do DNA não houve diferença entre os grupos. Em adição, os grupos AF e AS apresentaram maiores concentrações séricas de folato; o mesmo não ocorrendo para B12. No que diz respeito à acetilação de H3K9, os grupos TB e AS apresentaram maior porcentagem de acetilação quando comparados aos grupos N, MD e AF. Em conclusão, os grupos tratados com TB, AF e a associação entre eles apresentaram quimioprevenção pronunciada, sendo que o grupo AS apresentou mecanismos aditivos dos tratamentos isolados. / The hepatocellular carcinoma (HCC) is the third leading cause of death by cancer in the world, and the fifth most frequent type of neoplasm. Its limited treatment along with poor prognosis make it important to adopt preventive measures. The prevention of the initial stages of hepatocarcinogenesis by the administration of bioactive food compounds (BFCs) is currently being observed in several studies. It is suggested that the process of carcinogenesis involves genetic and epigenetic modifications, such as DNA hypomethylation and deacetylation of histones. Accordingly, treatment with folic acid (FA), indirect precursor of methyl grouping, and tributyrin (TB), a histone deacetylases inhibiting enzyme, when associated could act in addition to enhance the chemopreventive effects compared to their isolated actions. The possible chemopreventive activity of TB (100mg/100g body weight), FA (0.08 mg/100 g body weight) and the association between them (AS) were studied during the promotion stage of hepatocarcinogenesis in Wistar rats submitted to resistant hepatocyte model (RH).For evaluation of GST-P, cell proliferation, apoptosis, and the location of histone H3K9 was used immunohistochemistry, to quantify H3K9, western blot. Regarding the macroscopic analysis, the treated groups showed a lower number of nodules compared to MD (not statistically significant), and a lower percentage smaller than 1mm in groups TB and AS. Under microscopic examination the groups TB, FA and AS showed a lower number of persistent pre-neoplastic lesions (pLPN) compared to the isocaloric control group (MD, maltodextrin), as well as a lower percentage of the area occupied by pLPN and remodeling lesions (rLPN). As cell proliferation, FA and AS groups had fewer S phase nuclei/mm2 compared to MD and TB groups. Regarding apoptosis, TB and AS groups showed higher numbers of hepatocytes in apoptosis and apoptotic corpuscles/mm2 compared to MD and FA groups. Global DNA methylation did not differ between groups. In addition, AF and AS groups had higher serum concentrations of folate, which did not occur for B12.Concerning the H3K9 acetylation, the groups TB and AS showed higher percentage of acetylation when compared with the groups N, MD and FA. In conclusion, the groups treated with TB, FA and the association of both showed pronounced chemoprevention, and the AS group showed additive mechanisms compared with isolated treatments.

O câncer é um dos principais problemas de saúde pública no mundo. Dentre as neoplasias primárias que acometem o fígado, o carcinoma hepatocelular (HCC) é a mais frequente. Diversos fatores de risco predispõem ao HCC, entre eles a doença hepática gordurosa não alcóolica (NAFLD). Segundo estudos prévios do grupo, a &#946-ionona (BI), apresenta potencial quimiopreventivo na hepatocarcinogênese, promovendo redução de lesões preneoplásicas (LPN). Assim pretendeu-se investigar se a NAFLD potencializaria o desenvolvimento de LPN em ratos Wistar submetidos ao modelo do hepatócito resistente (RH) na etapa de iniciação/promoção inicial da hepatocarcinogênese e se a BI apresenta efeito quimiopreventivo nesse contexto. Para tanto, os animais foram distribuídos em 4 grupos experimentais: grupo não-tratado (NT), grupo submetido ao RH (RH), grupo submetido ao RH e ao modelo de NAFLD, que consiste na administração de emulsão hiperlipídica, (AS) e grupo AS tratado com BI (AS + BI). Em uma primeira instância, 5 animais pertencentes aos grupos NT, AS,AS + BI foram eutanasiados após 6 semanas de administração de emulsão hiperlipídica, antes da aplicação do modelo RH, para se confirmar o desenvolvimento da NAFLD. Foi possível observar que a administração de emulsão hiperlipídica durante 6 semanas foi suficiente para o desenvolvimento de esteatose hepática. Após as 6 semanas foi introduzido o modelo do RH concomitante à administração da emulsão hipercalipídica até o fim do experimento na 13a semana . Após 13 semanas o grupo AS apresentou maiores (p<0,05) valores de focos de inflamação, hepatócitos balonizados e grau de esteatose hepática em relação ao grupo AS+BI, assim como maiores (p<0,05) níveis séricos de triacilgliceróis, colesterol, HDL, LDL, VLDL, e maior (p<0,05) valor de MDA em relação ao grupo RH embora sem diferença estatística. O grupo AS também apresentou maior (p<0,05) incidência, número total e multiplicidade de nódulos, além de maior (p<0,05) número e tamanho de LPN persistentes (pLPN) e índice de proliferação quando comparado aos grupos RH e AS+BI. O grupo AS + BI, por sua vez, demonstrou menores (p<0,05) valores de escore de células ovais e menores valores de comprimentos de cometa e danos no DNA quando comparado ao grupo AS, embora sem diferença estatista para este último parâmetro. Em relação à expressão gênica, o grupo AS apresentou menores (p<0,05) valores de expressão do gene Hmgcr em relação ao grupo RH e maiores (p<0,05) valores dos genes Insig 1 e Thy 1 quando comparados ao grupo AS+BI. Portanto, no contexto de esteatose hepática associada ao modelo do RH, a administração de BI durante a etapa de iniciação/promoção em ratos Wistar resultou em atividade quimiopreventiva que se deu pela diminuição de pLNP, redução da proliferação celular e do número de células ovais, consideradas potenciais alvos para o desenvolvimento da hepatocarcinogênese, entretanto os genes analisados parecem não serem modulados pela BI. / Cancer is a major public health problem in the world. Among the primary neoplasms affecting the liver, hepatocellular carcinoma (HCC) is the most frequent. Several risk factors predispose to HCC, including the nonalcoholic fatty liver disease (NAFLD). According to previous studies of the group, the &#946-ionone (BI), has potential chemopreventive in hepatocarcinogenesis, promoting reduction of preneoplastic lesions (LPN). Thus we investigated whether NAFLD would increase the development of LPN in Wistar rats resistant hepatocyte model (RH) at the stage of initiation / promotion of hepatocarcinogenesis and if BI has chemopreventive effect in this context. Therefore, the animals were divided into 4 groups: non-treated group (NT), the group submitted to HR (HR), the group submitted to HR and NAFLD model, consisting of the fatty emulsion administration (AS) and AS group treated with BI (AS + BI). In a first point, 5 animals belonging to the groups NT, AS, AS + BI were euthanized after 6 weeks of administration of fat emulsion prior to application of the HR model, to confirm the development of NAFLD. It was observed that the administration of fatty emulsion for 6 weeks was sufficient to the development of hepatic steatosis. After 6 weeks it was introduced into the model HR the concomitant administration of fatty emulsion until the end of the experiment at 13 weeks. In the endpoint, the AS group had higher (p <0.05) of serum triacylglycerols, cholesterol, HDL, LDL, VLDL although no statistical difference inrelation to RH group, and increased (p <0.05) amount of MDA in relation to the group RH. The AS group also had higher (p <0.05) incidence, multiplicity and total number of nodes and greater (p <0.05) number and size of persistent LPN (pLPN) and proliferation index when compared to HR groups and AS + BI. AS + BI group. It was observed in AS+BI group lower (p <0.05) cell oval score values compared to AS group. In addition the AS+BI group showed lower values of the comet length and DNA damage compared to the AS group, although no statistical differences. In relation to gene expression, the AS group showed lower(p <0.05) HMGCR gene expression values in relation to HR group and higher (p <0.05) expression of Insig genes 1 and Thy 1 compared to group AS + BI.Therefore, in the context of hepatic steatosis associated with HR model BI for administration to the stage of initiation / promotion in rats resulted in chemopreventive activity was due to decrease in area of pLNP, reducing cell proliferation, and the number of oval cells, as potential targets for the development of hepatocarcinogenesis, however the genes do not seem to be modulated analyzed by BI.