Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:44:12Z : No. of bitstreams: 1 pedrazaordonez_fj_dr_jabo.pdf: 707975 bytes, checksum: 9868dbb427049fb448644457810a5e65 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O BoHV-5 é um alfa herpesvírus neurovirulento, que causa meningoencefalite fatal em bezerros. A morbidade é baixa contrastando com uma alta mortalidade, embora alguns animais possam-se recuperar. Varias pesquisas tem sido desenvolvidas para determinar a patogênese deste tipo de doença. No presente trabalho coelhos experimentalmente infectados com o Herpesvírus Bovino 5 (BoHV-5) foram submetidos a análise imuno-histoquímica e molecular, mediante a real time PCR, para descrever a resposta inflamatória em seis diferentes regiões do seu encéfalo. Todos os animais mostraram sinais neurológicos severos e foram eutanasiados vinte dias após a infecção inicial. Microscopicamente foi descrita uma meningoencefalite não supurativa, caracterizada por meningite, manguitos perivasculares mononucleares e malacia, mas não foram observados corpúsculos de inclusão viral. Os linfócitos T constituíram uma alta percentagem das células mononucleares envolvidas na neuroinflamação. Não foram encontradas diferenças significativas na resposta astrocitária quando comparados o grupo experimental e o grupo controle (p > 0,05). A quantificação viral pela qPCR permitiu achar partículas virais em todas as regiões encefálicas, de todos os animais do grupo experimental, sendo diretamente proporcional a quantidade de vírus e a visualização de lesões histológicas no encéfalo dos coelhos, assim como a imunodetecção do BoHV-5 pela imunohistoquímica. É possível suspeitar de um forte envolvimento do sistema imunitário do hospedeiro que fez a maioria dos animais reagir de maneira diferente ante a mesma quantidade do inóculo viral ministrado / The BoHV-5 is a neurovirulent alpha herpesvirus, which causes fatal meningoencephalitis in calves. The morbidity is low in contrast with a high mortality, although some animals can heal. Several surveys have been developed trying to better understand the pathogenesis of this type of disease. In this study rabbits experimentally infected with bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) were subjected to immunohistochemical and molecular analysis by real time PCR, to describe the inflammatory response in six different regions of his brain. All animals showed severe neurological signs and were euthanized twenty days after the initial infection. Microscopically was described a meningoencephalitis characterized by nonsuppurative meningitis, mononuclear perivascular cuffs and malacia, but were not observed viral inclusion corpuscles. T lymphocytes constituted a high percentage of mononuclear cells involved in neuroinflammation and there were no significant differences in astrocyte response when comparing the experimental and control groups (p> 0.05). The viral quantification by qPCR allowed found viral particles in all brain regions of all experimental animals, being directly proportional to the amount of virus and the visualization of lesions in the brain of rabbits, as well as immunodetection of BoHV-5 by immunohistochemistry. It is possible to suspect a strong engagement of the host immune system that made the majority of animals respond differently compared to the same administered amount of viral inoculum

Orientador: Antonio Carlos Alessi / Coorientador: Noeme Sousa Rocha / Banca: Gisele Fabrino Machado / Banca: Mary Suzan Varaschin / Banca: Rosemeri de Oliveira Vasconcelos / Banca: Luiz Carlos Marques / Resumo: O BoHV-5 é um alfa herpesvírus neurovirulento, que causa meningoencefalite fatal em bezerros. A morbidade é baixa contrastando com uma alta mortalidade, embora alguns animais possam-se recuperar. Varias pesquisas tem sido desenvolvidas para determinar a patogênese deste tipo de doença. No presente trabalho coelhos experimentalmente infectados com o Herpesvírus Bovino 5 (BoHV-5) foram submetidos a análise imuno-histoquímica e molecular, mediante a real time PCR, para descrever a resposta inflamatória em seis diferentes regiões do seu encéfalo. Todos os animais mostraram sinais neurológicos severos e foram eutanasiados vinte dias após a infecção inicial. Microscopicamente foi descrita uma meningoencefalite não supurativa, caracterizada por meningite, manguitos perivasculares mononucleares e malacia, mas não foram observados corpúsculos de inclusão viral. Os linfócitos T constituíram uma alta percentagem das células mononucleares envolvidas na neuroinflamação. Não foram encontradas diferenças significativas na resposta astrocitária quando comparados o grupo experimental e o grupo controle (p > 0,05). A quantificação viral pela qPCR permitiu achar partículas virais em todas as regiões encefálicas, de todos os animais do grupo experimental, sendo diretamente proporcional a quantidade de vírus e a visualização de lesões histológicas no encéfalo dos coelhos, assim como a imunodetecção do BoHV-5 pela imunohistoquímica. É possível suspeitar de um forte envolvimento do sistema imunitário do hospedeiro que fez a maioria dos animais reagir de maneira diferente ante a mesma quantidade do inóculo viral ministrado / Abstract: The BoHV-5 is a neurovirulent alpha herpesvirus, which causes fatal meningoencephalitis in calves. The morbidity is low in contrast with a high mortality, although some animals can heal. Several surveys have been developed trying to better understand the pathogenesis of this type of disease. In this study rabbits experimentally infected with bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) were subjected to immunohistochemical and molecular analysis by real time PCR, to describe the inflammatory response in six different regions of his brain. All animals showed severe neurological signs and were euthanized twenty days after the initial infection. Microscopically was described a meningoencephalitis characterized by nonsuppurative meningitis, mononuclear perivascular cuffs and malacia, but were not observed viral inclusion corpuscles. T lymphocytes constituted a high percentage of mononuclear cells involved in neuroinflammation and there were no significant differences in astrocyte response when comparing the experimental and control groups (p> 0.05). The viral quantification by qPCR allowed found viral particles in all brain regions of all experimental animals, being directly proportional to the amount of virus and the visualization of lesions in the brain of rabbits, as well as immunodetection of BoHV-5 by immunohistochemistry. It is possible to suspect a strong engagement of the host immune system that made the majority of animals respond differently compared to the same administered amount of viral inoculum / Doutor

Submitted by Cássia Santos (cassia.bcufg@gmail.com) on 2016-03-15T12:49:24Z No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danilo Rezende e Silva - 2014.pdf: 795804 bytes, checksum: 70571f234568a148006646c85383db05 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Approved for entry into archive by Luciana Ferreira (lucgeral@gmail.com) on 2016-03-16T11:26:10Z (GMT) No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danilo Rezende e Silva - 2014.pdf: 795804 bytes, checksum: 70571f234568a148006646c85383db05 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-16T11:26:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 Dissertação - Danilo Rezende e Silva - 2014.pdf: 795804 bytes, checksum: 70571f234568a148006646c85383db05 (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2014-09-04 / Identification of herpesvirus in specimes fixed in formalin and paraffin embedded has been used in experimental analysis. Several molecular techniques have been used in research and in diagnosing of herpesviral meningoencephalitis. 80 cases of routine in veterinary pathology were reviewed on the Department of Animal Pathology of Veterinary and Science Animal School Medicine of Federal University of Goias, Goiania, GO (EVZ/UFG) performed between January 2007 to December 2012. Were used 18 cases with a total of 44 paraffin blocks (Group I - 14 blocks, Group II - 17 blocks and Group III - 13 blocks), which were grouped according to histopathological diagnosis, in Group I - samples without histological changes and no clinical history of neurological disease, Group II - samples with nonspecific encephalitis, Group III - samples with rabies encephalitis. Were extracted DNA fragments, from cuts blocks, using a commercial extraction kit of formalin and paraffin embedded tissue. Afterwards the technique standardization of conventional PCR for bovine herpesvirus-1 and bovine herpersvírus type-5 was performed. Were positive for BoHV-5 28% (5/18) of cases, with 11% (2/18) of the group with nonspecific encephalitis and 17% (3/18) of the group with encephalitis and positive for the rabies virus. In the test for checking of the bands for the BoHV-1, all samples, 100% (18/18) were negative. These results demonstrate that the conventional PCR technique is helpful in aiding the definitive diagnosis of encephalitis bovine herpesvirus type-5. / A extração do DNA de herpesvírus em amostras fixadas em formol, assim como amostras emblocadas em parafina, tem sido utilizada em análises experimentais, permitindo o emprego de técnicas moleculares em pesquisas e no diagnóstico das meningonencefalites por herpesvírus. Foram revisados 80 casos da rotina anatomopatológica do Setor de Patologia Animal da Escola de Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Goiás, Goiânia, GO (EVZ/UFG) realizados entre janeiro de 2007 à dezembro de 2012. Foram utilizados 18 casos com um total de 44 blocos (Grupo I – 14 blocos, Grupo II – 17 blocos e Grupo III – 13 blocos), os quais foram agrupados, de acordo com diagnóstico histopatológico, em Grupo I – amostras sem alterações histológicas e sem histórico clínico de doença neurológica, Grupo II – amostras com encefalite inespecífica, Grupo III – amostras com encefalite por Raiva. DNA dos fragmentos foram obtidos a partir dos cortes dos blocos, foi extraído com kit comercial de extração de material parafinizado. Posteriormente foi realizada a padronização da técnica de PCR convencional para herpesvírus bovino tipo-1 e herpersvírus bovino tipo-5. Foram positivos para BoHV-5 28% (5/18) dos casos, sendo 11% (2/18) do grupo com encefalite inespecífica e 17% (3/18) do grupo com encefalite e positivos para o vírus da raiva. No teste para verificação das bandas para o BoHV-1, todas as amostras, 100% (18/18), foram negativas. Esses resultados comprovam que a técnica de PCR convencional é útil no auxílio do diagnóstico definitivo de encefalite por herpesvírus bovino tipo-5.