Made available in DSpace on 2014-06-11T19:33:25Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-01-30Bitstream added on 2014-06-13T19:44:12Z : No. of bitstreams: 1 pedrazaordonez_fj_dr_jabo.pdf: 707975 bytes, checksum: 9868dbb427049fb448644457810a5e65 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / O BoHV-5 é um alfa herpesvírus neurovirulento, que causa meningoencefalite fatal em bezerros. A morbidade é baixa contrastando com uma alta mortalidade, embora alguns animais possam-se recuperar. Varias pesquisas tem sido desenvolvidas para determinar a patogênese deste tipo de doença. No presente trabalho coelhos experimentalmente infectados com o Herpesvírus Bovino 5 (BoHV-5) foram submetidos a análise imuno-histoquímica e molecular, mediante a real time PCR, para descrever a resposta inflamatória em seis diferentes regiões do seu encéfalo. Todos os animais mostraram sinais neurológicos severos e foram eutanasiados vinte dias após a infecção inicial. Microscopicamente foi descrita uma meningoencefalite não supurativa, caracterizada por meningite, manguitos perivasculares mononucleares e malacia, mas não foram observados corpúsculos de inclusão viral. Os linfócitos T constituíram uma alta percentagem das células mononucleares envolvidas na neuroinflamação. Não foram encontradas diferenças significativas na resposta astrocitária quando comparados o grupo experimental e o grupo controle (p > 0,05). A quantificação viral pela qPCR permitiu achar partículas virais em todas as regiões encefálicas, de todos os animais do grupo experimental, sendo diretamente proporcional a quantidade de vírus e a visualização de lesões histológicas no encéfalo dos coelhos, assim como a imunodetecção do BoHV-5 pela imunohistoquímica. É possível suspeitar de um forte envolvimento do sistema imunitário do hospedeiro que fez a maioria dos animais reagir de maneira diferente ante a mesma quantidade do inóculo viral ministrado / The BoHV-5 is a neurovirulent alpha herpesvirus, which causes fatal meningoencephalitis in calves. The morbidity is low in contrast with a high mortality, although some animals can heal. Several surveys have been developed trying to better understand the pathogenesis of this type of disease. In this study rabbits experimentally infected with bovine herpesvirus 5 (BoHV-5) were subjected to immunohistochemical and molecular analysis by real time PCR, to describe the inflammatory response in six different regions of his brain. All animals showed severe neurological signs and were euthanized twenty days after the initial infection. Microscopically was described a meningoencephalitis characterized by nonsuppurative meningitis, mononuclear perivascular cuffs and malacia, but were not observed viral inclusion corpuscles. T lymphocytes constituted a high percentage of mononuclear cells involved in neuroinflammation and there were no significant differences in astrocyte response when comparing the experimental and control groups (p> 0.05). The viral quantification by qPCR allowed found viral particles in all brain regions of all experimental animals, being directly proportional to the amount of virus and the visualization of lesions in the brain of rabbits, as well as immunodetection of BoHV-5 by immunohistochemistry. It is possible to suspect a strong engagement of the host immune system that made the majority of animals respond differently compared to the same administered amount of viral inoculum

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Co-orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Rafael Silva Cipriano / Banca: Vera Lúcia Lorenzetti Magalhaes Curci / Banca: Carlos Noriyki Kaneto / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo:A infecção pelo herpesvírus Bovino tipo 5 (BoHV-5) resulta em meningoencefalite não supurativa que é responsável por perdas econômicas significativas na América do Sul. Células tronco mesenquimais (CTM) são encontradas em diferentes tecidos fetais, como no cordão umbilical que possuí diversos fatores favoráveis para obtenção destas células. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar o isolamento e a viabilidade das CTM bovinas e sua capacidade de diferenciação em outros tecidos de origem mesenquimal, como as "neuron-like cells" - células semelhantes a neurônios - (CSN), e avaliar a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção experimental com BoHV-5. As CTM foram isoladas da geleia de Wharton e diferenciadas em tecido adiposo, cartilagem, ósseo e CSN. As linhagens celulares foram caracterizadas pela expressão genica e imunofenotipicamente, utilizando a técnica de PCR, imunocitoquímica e citometria de fluxo, respectivamente. O conjunto de primers e painel de anticorpos primários, empregados na experimentação, permitiu caracterizar as células tronco e sua diferenciação em células neuronais. Após a adaptação e diferenciação, ambas as células foram infectadas pelo BoHV-5, exibindo efeito citopático e taxa de replicação viral aumentada 72 h pós infecção. A técnica de hibridização in situ identificou as partículas virais no interior das CSN e no meio extracelular. Os resultados demonstram a capacidade de diferenciação das CTM em outros tipos celulares e a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção in vitro de células neuronais pelo BoHV-5. Estes resultados corroboram o uso de MSC como fonte de NLC para uso no estudo da patogênese da infecção experimental pelo BoHV-5 / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) infection results in non- suppurative meningoencephalitis which underlies significant economic losses in South America. Mesenchymal stem cells (MSCs) are found in fetal tissues, such as the umbilical cord. The goal of this research was to characterize the isolation and viability of bovine umbilical cord MSCs for in vitro differentiation into "neuron-like cells" (NLC) to be used as a model for experimental infection with BoHV-5. MSCs were isolated from Wharton's jelly and differentiated in vitro into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic cells as well as NLC. The cells lines were characterized molecularly and immunophenotypically, using PCR, immunocytochemistry, and flow cytometry. The set of primers and panel of primary antibody used in the experiments confirmed the isolation of mesenchymal stem cells and their differentiation into neuronal-like cells. After adaptation and differentiation, the cells were infected with BoHV-5, exhibiting typical cytopathic effect and increased viral replication rate 72 h post-infection. Viral particles were identified in the NLC and in the extracellular environment. by in situ hybridization These results corroborate the use of MSCs as a source of NLC which can be used to study the pathogenesis of the experimental in vitro infection wtih BoHV-5 / Doutor

Resumo:O Herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) e o herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1), membros da família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae; podem replicar-se em diferentes tecidos como nervoso, glandular, linfóide e em órgãos parenquimatosos. São capazes de permanecer em estado de latência, alojando-se nos gânglios nervosos. No Brasil, casos clínicos de encefalites por BoHV-5 são a segunda maior causa de morte por encefalite com etiologia determinada, suplantada somente pela raiva, enquanto o BoHV-1 está presente de forma endêmica no rebanho nacional, sendo responsável por uma variedade de sinais clínicos como rinotraqueíte, abortamento, conjuntivite, vulvovaginite e balanopostite. É esperado que um agente viral, ao infectar uma célula, ative as vias do processo de morte celular programada, entretanto há relatos de que o gene relacionado à latência (RL) do Herpesvírus é capaz de inibir a apoptose celular, protegendo a célula infectada durante a latência, por meio de mecanismos ainda desconhecidos. Este estudo demontra a capacidade do BoHV-5 e BoHV-1 de manipular o metabolismo mitocondrial da célula infectada, interferindo na via intrínseca de apoptose / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), members of Herpesviridae family, Alphaherpesvirinae subfamily; may replicate in different tissues such as nervous, glandular, lymphoid and parenchymal organs and are able to remain in a latent state, lodged in nerve ganglia. In Brazil clinical cases of BoHV - 5 encephalitis are the second leading cause of death due to encephalitis with determined etiology, supplanted only by rabies, while the BoHV-1 is present in an endemic form in the national herd, being responsible for a variety of clinical signs as rhinotracheitis, abortion, conjunctivitis, vulvovaginitis and balanoposthitis. It is expected that a viral agent, to infect a cell, activate the pathways of programmed cell death process, however there are reports that the gene related to latency (RL) of Herpesvirus is able to inhibit cell apoptosis, protecting the infected cell during latency through unknown mechanisms. Therefore, this study demonstrated the capacity of BoHV-5 and BoHV-1 to manipulate mitochondrial metabolism of the infected cell, interfering with intrinsic pathway of apoptosis / Orientador:Tereza Cristina Cardoso Silva / Banca:Camila da Silva Frade / Banca:Roberto Gameiro de Carvalho / Mestre

Resumo:A meningoencefalite por herpesvírus bovino 5 (BHV5) foi descrita em várias regiões do mundo. A doença ocorre na forma de surtos ou de casos isolados. No Brasil, encefalites causadas pelo BHV5 têm sido confirmadas de forma crescente nos rebanhos, sendo considerada a segunda maior causa de encefalite com etiologia determinada em bovinos. Nesse sentido, o presente estudo objetivou caracterizar as regiões do sistema nervoso central (SNC) com maior freqüência do BHV5, o envolvimento de diferentes populações de lincócitos e a expressão de citocinas relacionadas ao processo inflamatório. As amostras (n=8) foram submetidas às análises histopatológica, imuno-histoquímica e molecular. A principal lesão observada foi caracterizada como infiltrado perivascular, classificado em leve, moderado e severo. Em todos os casos o infiltrado perivascular foi notado de forma severa no bulbo olfatório, lobos frontal, temporal e parietal. A expressão de citocinas foi principalmente detectada nas regiões do bulbo olfatório e lobo piriforme. Este estudo abordou que a incidência do BHV5 ocorreu principalmente na região frontal, visto que a contaminação pelo vírus ocorre de forma nasal, tendo como primeiro contato a região frontal do cérebro com o BHV5 / Abstract:Meningoencephalitis caused by bovine Herpesvirus 5 (BHV5) has been described worldwide. The disease occurred as outbreaks of isolates clinical cases. In Brazil, encephalitis caused by BHV5 has been confirmed by the increase of positive animals, being the second major cause of bovine viral encephalitis. Likewise, the aim of this study was to characterize brain regions from central nervous system (CNS) presenting high frequency of BHV5 antigen and genome, phenotype lymphocytes subpopulations among perivascular cuffs and compare these results with cytokines transcription. The samples (n=8) were submitted to histopathological analysis, immunohistochemistry and molecular evaluation. The main histopathological lesions were characterized as perivascular cuffs, classified as severe, and sometimes moderate. All cases, perivascular infiltrates were severe in olfactory bulb, and frontal, temporal and parietal lobes. The cytokines expression was considered up regulated in olfactory bulb and piriform lobe. This study addressed the BHV5 distribution mainly observed in frontal regions from CNS, what confirmed the respiratory route as important for virus infection / Orientador:Tereza Cristina Cardoso Silva / Banca:Andréa Fontes Garcia / Banca:Cristina Maria Rodrigues Monteiro / Mestre

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca: Roberto Gameiro de Carvalho / Banca: Camila da Silva Frade / Resumo: Pertencente a família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae, o Herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5), é o agente causal da meningoencefalite bovina não supurativa, que atinge majoritariamente bovinos jovens. No Brasil, os casos de encefalite por BoHV-5 são a segunda maior causa de óbitos no rebanho. A infecção viral geralmente resulta em alteração no processo de morte celular programada, pela via mitocondrial, estimulando ou inibindo genes relacionados à apoptose, favorecendo a replicação e disseminação viral. O presente estudo teve como objetivo a análise da expressão de genes relacionados à apoptose (Apaf-1, α, FasL e citocromo c) em células MDBK infectadas ou não com o BoHV-5. Foi possível observar um aumento (p<0,05) na expressão dos genes estudados para o grupo infectado comparado ao controle, em diferentes momentos pós-infecção experimental. No caso da família Herpesviridae, a modulação da apoptose parecer ser uma etapa chave para sua patogênese, apesar da associação das atividades anti e pró-apoptóticas com o BoHV-5 ser completamente desconhecida. Este estudo demonstra a capacidade do BoHV-5 em modular, seja ativando ou inibindo, a via extrínseca da apoptose / Abstract: Belonging to the family Herpesviridae, subfamily Alphaherpesvirinae, bovine Herpesvirus type 5 ( BoHV-5) is the causative agent of bovine non-suppurative meningoencephalitis, which predominantly affects young cattle. In Brazil, cases of encephalitis caused by BoHV-5 are the second leading cause of deaths in the herd. Viral infection usually results in a change in the programmed cell death via mitochondrial, stimulating or inhibiting apoptosis related genes, promoting viral replication and dissemination process. The present study aimed to analyze the expression of apoptosis related genes (Apaf-1, TNFα-R1, FasL and cytochrome c) in infected or uninfected MDBK cells with BoHV-5. We observed an increase ( p < 0.05 ) in expression of the genes studied for the infected group compared with controls, in different times post-infection experimental. In the case of the Herpesviridae family, modulation of apoptosis appears to be a key step in its pathogenesis, despite the association of anti and pro-apoptotic activities with BoHV-5 is completely unknown. This study demonstrates the ability of BoHV-5 in modulating either activating or inhibiting the extrinsic pathway of apoptosis / Mestre

Orientador: Roberto Calderon Gonçalves / Coorientador: Ivan Roque de Barros Filho / Banca: Simone Biagio Chiacchio / Banca: José Paes Oliveira Filho / Banca: Sílvia Cristina Osaki / Banca: Andreza Amaral da Silva / Resumo: Realizou-se levantamento sorológico dos seguintes vírus respiratórios Herpesvírus Bovino 1 (BoHV-1), Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), Vírus da Parainfluenza Bovina Tipo 3 (bPIV-3) e Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) em bovinos da raça Holandesa variedade Preta e Branca (HPB), criados no estado do Paraná. Colheram-se 714 amostras de sangue da veia jugular de bovinos, não vacinados para os agentes estudados, com mais de seis meses de idade, de 26 propriedades leiteiras, distribuídas em 17 municípios do estado do Paraná. Paralelamente à colheita, aplicou-se um questionário para cada propriedade estudada, com a finalidade de avaliar os fatores de risco associados aos vírus examinados. As amostras sorológicas foram submetidas ao teste de diagnóstico de virusneutralização no Laboratório de Viroses de Bovinos do Instituto Biológico de São Paulo. Foram observadas prevalências de 22,3%; 35,8%; 80,4% e 93,5% de bovinos sororreagentes e 65,3%, 88,5%, 96,1% e 100% das propriedades reagentes para BoHV-1, BVDV, bPIV-3 e BRSV, respectivamente. A coinfecção que ocorreu com maior prevalência foi a bPIV-3 e BRSV (37,1%). Após análise de regressão logística, os fatores de risco associados ao BoHV-1 foram: bovinos com idade maior que 48 meses (OR=15,012; IC95% 7,500 - 30,051), área da propriedade 26 a 50 hectares (OR=11,328; IC95% 2,482 - 51,697), lotação maior de três bovinos por hectare (OR=1,026; IC95% 0,370 - 2,847), percentual de entrada maior que 10% de bovinos (OR=52,520; IC95% 13,269 - 207,876); para o BVDV foram: bovinos com idade maior que 48 meses (OR=4,407; IC95% 2,456 - 7,906), região Sudoeste (OR=52,388; IC95% 4,629 - 5892,873), sistema de produção semi-intensivo (OR=1,333; IC95% 0,261 - 6,815), propriedade com número de animais menor ou igual a 50 bovinos (OR=16,682; IC95% 3,218 - 86,481), percentual de entrada maior que 10% de bovinos (OR=17,56; IC95% 7,613 - 40,506) e ... / Abstract: A serological survey of the following respiratory viruses: Bovine Herpesvirus 1 (BoHV-1), Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV), Bovine Parainfluenza Virus Type 3 (bPIV-3) and Bovine Respiratory Syncytial Virus (BRSV) in Holstein cattle black and White (HPB), raised in Paraná state was performed. 714 blood samples were collected from the jugular vein of cattle not vaccinated for the studied agents, over six months of age, from 26 dairy herds, distributed in 17 municipalities of Paraná state. Alongside the collection, a questionnaire was used for each property studied in order to assess the risk factors associated with the viruses examined. The serum samples were subjected to the diagnosis test of virus neutralization at the Laboratory of Viral Diseases of Cattle of the Biological Institute of São Paulo. Frequencies of 22.3%; 35.8%; 80.4% and 93.5% of seropositive cattle were observed and 65.3%, 88.5%, 96.1% and 100% of the seropositive properties BoHV-1, BVDV, bPIV-3 and BRSV, respectively. The co-infection that occurred most frequently was the bPIV-3 and BRSV (37.1%). After logistic regression analysis, risk factors associated with BoHV-1 were cattle with more than 48 months of age (OR = 15.012; 95% CI 7.500 to 30.051), property area 26-50 hectares (OR = 11.328; 95% CI 2.482 - 51.697), stocking higher than three animals per hectare (OR = 1.026; 95% CI 0.370 to 2.847), cattle entry percentage higher than 10% (OR = 52.520 entry; 95% CI 13.269 to 207.876); for BVDV were cattle older than 48 months (OR = 4.407; 95% CI 2.456 to 7.906), Southwest region (OR = 52.388; 95% CI 4.629 to 5892.873), semi-intensive production system (OR = 1.333; 95% CI 0.261 to 6.815),property with fewer animals than or equal to 50 (OR = 16.682; 95% CI 3.218 to 86.481), a percentage of cattle entry higher than 10% (OR = 17.56; 95% CI 7.613 - 40.506) and neighboring pasture sharing (OR = 9.148; 95% CI 3.751 to 22.310); for bPIV-3 cattle older than 48 months ... / Doutor

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-01-22. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:41Z : No. of bitstreams: 1 000848970.pdf: 988571 bytes, checksum: dcc8f965284a638ff0467c668813e6f1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), members of Herpesviridae family, Alphaherpesvirinae subfamily; may replicate in different tissues such as nervous, glandular, lymphoid and parenchymal organs and are able to remain in a latent state, lodged in nerve ganglia. In Brazil clinical cases of BoHV - 5 encephalitis are the second leading cause of death due to encephalitis with determined etiology, supplanted only by rabies, while the BoHV-1 is present in an endemic form in the national herd, being responsible for a variety of clinical signs as rhinotracheitis, abortion, conjunctivitis, vulvovaginitis and balanoposthitis. It is expected that a viral agent, to infect a cell, activate the pathways of programmed cell death process, however there are reports that the gene related to latency (RL) of Herpesvirus is able to inhibit cell apoptosis, protecting the infected cell during latency through unknown mechanisms. Therefore, this study demonstrated the capacity of BoHV-5 and BoHV-1 to manipulate mitochondrial metabolism of the infected cell, interfering with intrinsic pathway of apoptosis

Made available in DSpace on 2015-10-06T13:03:35Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-09-03. Added 1 bitstream(s) on 2015-10-06T13:18:21Z : No. of bitstreams: 1 000819068.pdf: 952868 bytes, checksum: 7410b5526acec730446d60283aed0de1 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O presente estudo buscou detectar o herpesvirus felino tipo 1 (HVF-1) em fragmentos de conjuntiva de uma população de gatos pela técnica de PCR em tempo real. Além disso, procurou-se associar estes resultados aos sinais oculares verificados nestes animais. Para isso, foram utilizados 70 gatos, que conviviam em contato direto, provenientes de uma residência da cidade de Araçatuba, SP. Por meio de PCR em tempo real, foi detectado DNA de HVF-1 em 78,1% (25/32) dos gatos com ao menos um sinal ocular e em 26,3% (10/38) dos assintomáticos, totalizando uma prevalência de 50% (35/70) na amostra global. Nos animais com sinais de conjuntivite, em 60% (21/35) dos gatos positivos havia ao menos um destes sinais e nenhum destes nos 40% (14/35) restantes. Nos gatos com sinais de ceratite, em 49% (17/35) dos positivos havia ao menos um destes sinais e nenhum deste nos 51% (18/35) restantes. Foi detectada a presença de HVF-1 em todos (17/100%) os gatos com defeito epitelial corneal. Houve associação significativa entre a presença de ao menos um sinal ocular, ao menos um sinal de conjuntivite e de ceratite com os resultados do PCR. Em relação a cada sinal ocular, somente o defeito epitelial corneal e o blefarospasmo tiveram associação significativa com estes resultados e também estavam associados entre si, sugerindo que, nos gatos com sinais de ceratoconjuntivite, o defeito epitelial corneal pode ser um fator de influência ao surgimento do blefarospasmo. A elevada prevalência da infecção ocular por HVF-1 encontrada nos animais com sinais oculares sugere o agente como possível causador destas lesões / This study aimed to detect feline herpesvirus type 1 (FHV-1) in the conjunctival fragments of a cat population by PCR real-time. In addition, we sought to associate these results to ocular signs observed in these animals. For this, we used 70 cats that lived in direct contact, from a residence from Araçatuba, SP. By means of real-time PCR, DNA was detected FHV-1 in 78.1% (25/32) of cats with at least one ocular sign and 26.3% (10/38) of asymptomatic patients, a total prevalence 50% (35/70) in the sample. In animals with signs of conjunctivitis in 60% (21/35) cats were positive at least one of these signals and none of the 40% (14/35) remaining. In cats with signs of keratitis in 49% (17/35) were positive from at least one of the signals and none of the 51% (18/35) remaining. We have detected the presence of FHV-1 at all (17/100%) cats with corneal epithelial defect. There was a significant association between the presence of at least one eye sign, at least a sign of conjunctivitis and keratitis with PCR results. For each ocular sign, only the corneal epithelial defect and blepharospasm were significantly associated with these outcomes and also were associated with each other, suggesting that, in cats with signs of keratitis, corneal epithelial defect may be a factor influencing the emergence of blepharospasm. The high prevalence of ocular infection by FHV-1 found in animals with ocular signs suggested as a possible causative agent of these injuries

Made available in DSpace on 2015-04-09T12:28:10Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-27Bitstream added on 2015-04-09T12:48:04Z : No. of bitstreams: 1 000814098.pdf: 1490588 bytes, checksum: ac5274fb5b2345e0c2260a454c1dfdd0 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) infection results in non- suppurative meningoencephalitis which underlies significant economic losses in South America. Mesenchymal stem cells (MSCs) are found in fetal tissues, such as the umbilical cord. The goal of this research was to characterize the isolation and viability of bovine umbilical cord MSCs for in vitro differentiation into neuron-like cells (NLC) to be used as a model for experimental infection with BoHV-5. MSCs were isolated from Wharton's jelly and differentiated in vitro into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic cells as well as NLC. The cells lines were characterized molecularly and immunophenotypically, using PCR, immunocytochemistry, and flow cytometry. The set of primers and panel of primary antibody used in the experiments confirmed the isolation of mesenchymal stem cells and their differentiation into neuronal-like cells. After adaptation and differentiation, the cells were infected with BoHV-5, exhibiting typical cytopathic effect and increased viral replication rate 72 h post-infection. Viral particles were identified in the NLC and in the extracellular environment. by in situ hybridization These results corroborate the use of MSCs as a source of NLC which can be used to study the pathogenesis of the experimental in vitro infection wtih BoHV-5 / FAPESP: 2010/50626-5

Made available in DSpace on 2015-05-14T16:53:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2014-12-16Bitstream added on 2015-05-14T16:58:54Z : No. of bitstreams: 1 000828431.pdf: 2597564 bytes, checksum: d2a5d2090c67ea6f9db3f644cfef982f (MD5) / Realizou-se levantamento sorológico dos seguintes vírus respiratórios Herpesvírus Bovino 1 (BoHV-1), Vírus da Diarreia Viral Bovina (BVDV), Vírus da Parainfluenza Bovina Tipo 3 (bPIV-3) e Vírus Respiratório Sincicial Bovino (BRSV) em bovinos da raça Holandesa variedade Preta e Branca (HPB), criados no estado do Paraná. Colheram-se 714 amostras de sangue da veia jugular de bovinos, não vacinados para os agentes estudados, com mais de seis meses de idade, de 26 propriedades leiteiras, distribuídas em 17 municípios do estado do Paraná. Paralelamente à colheita, aplicou-se um questionário para cada propriedade estudada, com a finalidade de avaliar os fatores de risco associados aos vírus examinados. As amostras sorológicas foram submetidas ao teste de diagnóstico de virusneutralização no Laboratório de Viroses de Bovinos do Instituto Biológico de São Paulo. Foram observadas prevalências de 22,3%; 35,8%; 80,4% e 93,5% de bovinos sororreagentes e 65,3%, 88,5%, 96,1% e 100% das propriedades reagentes para BoHV-1, BVDV, bPIV-3 e BRSV, respectivamente. A coinfecção que ocorreu com maior prevalência foi a bPIV-3 e BRSV (37,1%). Após análise de regressão logística, os fatores de risco associados ao BoHV-1 foram: bovinos com idade maior que 48 meses (OR=15,012; IC95% 7,500 – 30,051), área da propriedade 26 a 50 hectares (OR=11,328; IC95% 2,482 – 51,697), lotação maior de três bovinos por hectare (OR=1,026; IC95% 0,370 – 2,847), percentual de entrada maior que 10% de bovinos (OR=52,520; IC95% 13,269 – 207,876); para o BVDV foram: bovinos com idade maior que 48 meses (OR=4,407; IC95% 2,456 – 7,906), região Sudoeste (OR=52,388; IC95% 4,629 – 5892,873), sistema de produção semi-intensivo (OR=1,333; IC95% 0,261 – 6,815), propriedade com número de animais menor ou igual a 50 bovinos (OR=16,682; IC95% 3,218 – 86,481), percentual de entrada maior que 10% de bovinos (OR=17,56; IC95% 7,613 – 40,506) e ... / A serological survey of the following respiratory viruses: Bovine Herpesvirus 1 (BoHV-1), Bovine Viral Diarrhea Virus (BVDV), Bovine Parainfluenza Virus Type 3 (bPIV-3) and Bovine Respiratory Syncytial Virus (BRSV) in Holstein cattle black and White (HPB), raised in Paraná state was performed. 714 blood samples were collected from the jugular vein of cattle not vaccinated for the studied agents, over six months of age, from 26 dairy herds, distributed in 17 municipalities of Paraná state. Alongside the collection, a questionnaire was used for each property studied in order to assess the risk factors associated with the viruses examined. The serum samples were subjected to the diagnosis test of virus neutralization at the Laboratory of Viral Diseases of Cattle of the Biological Institute of São Paulo. Frequencies of 22.3%; 35.8%; 80.4% and 93.5% of seropositive cattle were observed and 65.3%, 88.5%, 96.1% and 100% of the seropositive properties BoHV-1, BVDV, bPIV-3 and BRSV, respectively. The co-infection that occurred most frequently was the bPIV-3 and BRSV (37.1%). After logistic regression analysis, risk factors associated with BoHV-1 were cattle with more than 48 months of age (OR = 15.012; 95% CI 7.500 to 30.051), property area 26-50 hectares (OR = 11.328; 95% CI 2.482 – 51.697), stocking higher than three animals per hectare (OR = 1.026; 95% CI 0.370 to 2.847), cattle entry percentage higher than 10% (OR = 52.520 entry; 95% CI 13.269 to 207.876); for BVDV were cattle older than 48 months (OR = 4.407; 95% CI 2.456 to 7.906), Southwest region (OR = 52.388; 95% CI 4.629 to 5892.873), semi-intensive production system (OR = 1.333; 95% CI 0.261 to 6.815),property with fewer animals than or equal to 50 (OR = 16.682; 95% CI 3.218 to 86.481), a percentage of cattle entry higher than 10% (OR = 17.56; 95% CI 7.613 – 40.506) and neighboring pasture sharing (OR = 9.148; 95% CI 3.751 to 22.310); for bPIV-3 cattle older than 48 months ...