Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Alessandra Mara Alves Ragozo / Resumo: Atualmente, as culturas celulares são consideradas uma das ferramentas mais importantes na virologia. Os meios de cultura utilizados na manutenção destes sistemas não oferecem capacidade às células de adsorver e se multiplicar em matrizes plásticas sem a adição suplementar de soro fetal bovino (SFB). Entretanto, o uso do SFB não é aconselhável devido às variações encontradas entre os lotes, o alto grau de proteína animal e a possibilidade da presença de agentes infecciosos. Além dos aspectos sanitários, existe o aspecto ético em relação à obtenção deste produto biológico. Com o aumento dos ensaios in vitro a quantidade estimada de produção de soro fetal bovino no mundo é de aproximadamente 500.000 litros/ano, isto significa, mais de 1.000.000 de fetos bovinos sacrificados para obtenção de SFB. O objetivo deste estudo foi cultivar as células CER (chicken embryo related) em diferentes meios de cultura: M-VSFM, 293- SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, adicionados de 2mg/ml ou 5mg/ml de IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) e verificar a possibilidade das estirpes virais Lukert e Farangher de se adaptarem neste sistema. Nesta cultura a expressão da fibronectina e da laminina (LB1 e LB2) foram dectadas por imunofluorescência e imunoperoxidase indireta, respectivamente. As monocamadas de células CER foram infectadas pela estirpe Lukert e Farangher, sendo a m.o.i (multiplicidade de infecção) utilizada de 1.0. Após três passagens, o RNA viral foi extraído para determinar as substituições genéticas. A região hipervariável do gene VP2 foi amplificada por RT/PCR. Para confirmar as mutações, os produtos da PCR foram seqüênciados e comparados com as seqüências de VDIB publicadas no GenBank. Os resultados demonstraram que o meio VP-SFM e 5µg/mL de IGF-1 aplicado às culturas foi o melhor para a adaptação direta do cultivo das monocamadas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Currently, the cell culture are considered one of the tools most important in the virology. The culture medium used in the maintenance those systems do not offer capacity to the cells of attachment and if spread in plastic surfaces without the supplementary addition of foetal bovine serum (FBS). However, the use FBS is not advisable due to batch-tobatch variation in composition, the high animal protein content, and the possibility of the presence of infectious agents. Beyond the sanitary aspects, exists the ethical aspect in relation to the attainment of this biological product. With the increase of in vitro assays the amount of FBS produced in the world is estimated at approximately 500.000 litres/year, this carry in 1.000.000 bovine fetuses sacrified for FSB attainment. The aim of this study was to adapt the CER cells (chicken embryo related) on different medium: M-VSFM, 293-SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, supplemented by 2mg/ml or 5mg/ml IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) and to verify the possibility the Lukert and Farangher viral strain adapted in this system. The expression of the fibronectin and laminin (LB1 and LB2) were detected by immunofluorescence and indirect immunoperoxidase, respectively. The CER cells monolayer had been infected by Lukert and Farangher strain, being the m.o.i (infection multiplicity) used of 1.0. After three passages, viral RNA was isolated to determine the genetic changes. The hypervariable regions of the VP2 gene was amplified by RT/PCR. To confirm the genetic changes, PCR products were sequenced and compared to the sequences of the GenBank published VDIB strain.The results had demonstrated that the medium VP-SFM and 5µg/mL IGF-1 applied to the cultures was optimum for the direct adaptation of the culture of the monolayers without addition of FBS. In relation the detection of the extracellular protein, the fibronectin was induced... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Made available in DSpace on 2017-03-14T14:10:06Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-03-30. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-14T14:42:48Z : No. of bitstreams: 1 000874521_20170330.pdf: 98903 bytes, checksum: b6d5c9da1442c85bfd1576edc917d187 (MD5) Bitstreams deleted on 2017-03-31T12:19:28Z: 000874521_20170330.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-03-31T12:20:24Z : No. of bitstreams: 1 000874521.pdf: 1184298 bytes, checksum: 3c815e7db076a63baa90c4057c3bf4a2 (MD5) / Cimentos de silicato decálciosão estudados como materiais reparadores. O estudo foi divido em 4 capítulos: No primeiro, citotoxicidade (MTT e Apoptose), genotoxicidade (teste Cometa) foram avaliadas em Saos-2 para os materiais: Cimentos de silicato de cálcio puro (CSC); Modificado (CSCM); Resinoso (CSCR1, CSCR2 e CSCR3). Na viabilidade, CSC e CSCR3 (50mg/mL) foram citotóxicos. CSCR1, CSCR2 e CSCR3 mostraram maior apoptose. Somente CSC e CSCR2 não foram genotóxicos em 10mg/mL (P<0.05). No cap.2, CSCM e CSCR2, foram associados a radiopacificadores: óxido de zircônio e óxido de nióbio (micro e nano), óxido de bismuto, tungstato de cálcio. MTA foi o controle para citotoxicidade e bioatividade. Todos foram viáveis e apresentaram apoptose semelhantes (1:8). A necrose foi superior (P<0.05). Ambos CSCs induziram fosfatase alcalina (ALP) e ARS. No cap.3, Biodentine (Septodont), MTA Plus (Avalon), CSCRs Nb2O5 e ZrO2 foram analisados quanto à cito e genotoxicidade. No MTT (1, 3 e 7d), todos foram similares. No qPCR, houve expressão de BAX (3d.) para CSCRs, MTAP e CSCR ZrO2 (5d). Para BCL2, (3 e 5d) somente MTAP e CSCR Nb2O5 (5d.). Na genotoxicidade, todos (1:2 e 1:8) permaneceram similares (P<0.05). Cap. 4, os mesmos foram avaliados na bioatividade: MTT, proliferação celular, ALP (1, 3 e 7d), qPCR (alp e ocn), e ARS. Todos os grupos foram viáveis e induziram ALP, ARS e expressão gênica, destacando os materiais CSCR Nb2O5 e Biodentine. Desta forma, os materiais apresentam potencial biológico para ser usado na endodontia. Estudos adicionais devem ser realizados, especialmente para os materiais experimentais. / Calcium silicate-based cements are studied as reparative materials. This study was divided into 4 chapters: In the first, cytotoxicity (MTT and apoptosis) and genotoxicity (Comet assay) were evaluated in Saos-2 for: Pure calcium silicatebased (CSC); Modified (CSCM); resin-based (CSCR1, CSCR2, CSCR3). In the Viability assay, CSC and CSCR3 (50mg/mL) showed lower cell viability. CSCR1, CSCR2, CSCR3 showed more apoptosis. Only CSC and CSCR2 were not genotoxity in 10mg/mL (P<0.05). Chapter 2, CSCM and CSCR2 were associated with radiopacifiers: zirconium oxide and niobium oxide (micro and nano), bismuth oxide and calcium tungstate. MTA was used for the control of cytotoxicity and bioactivity tests. All were viable and showed similar apoptosis (1:8). Necrosis was superior (P<0.05). CSCM and CSCR induced alkaline phosphatase (ALP) and ARS. Chapter 3, was compared Biodentine (Septodont), MTA Plus (Avalon), CSCRs ZrO2 and Nb2O5, on cytotoxicity and genotoxicity. In MTT (1, 3 and 7 days) all were similar. In the qPCR, BAX was expressed by CSCRs (3d). MTAP and CSCR ZrO2 expressed in 5 days. For BCL2 gene (3 and 5d) only MTAP and CSCR Nb2O5 (5d). In genotoxixity assay, all (1:2 and 1:8) were similar (P<0.05). Chapter 4, we evaluated the same materials in Saos2 bioactivity: MTT, cell proliferation, ALP (1, 3 and 7d), qPCR (alp and ocn) and ARS. All groups were viable and induced ALP, ARS and gene expression, particularly CSCR Nb2O5 and Biodentine. Therefore, the biological materials has the potential to be used in endodontics. Additional studies should be conducted, especially for experimental cements. Additional studies should be conducted, especially for experimental cements.

Orientadora: Cristiane Duque / Banca: Ana Claudia Okamoto / Banca: Vivien Thiemy Sakai / Resumo: Terapias biológicas tem buscado novas substâncias/protocolos que promovam a eliminação microbiana e induzam ou estimulem a regeneração pulpa r e o desenvolvimento completo radicular d e dente s permanente s jove ns com processos patológicos pulpares. Os objetivos do estudo foram avaliar a a tividade antimicrobiana /antibiofilme de algumas combinações de antibióticos sobre microrganismos de interesse endodôntico e analisar o efeito da combinação de antibióticos com melhor ação antimicrobiana associada à sinvastatina na expressão de marcadores o dontoblásticos em células da polpa dental humana (CPDH) . A atividade antimicrobiana dos seguintes antibióticos : Metronidazol (ME), C iprofloxacina (CI), Minociclina (MI), Doxicilina (DO) e F osfomicina (FO), isolados ou em combinação dupla (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) ou tripla (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO) foram testados contra Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii e Candida albicans em condições planctônicas. Biofilmes mono - espécie de E. faecalis e biofilmes em dual - espécies de E. faecalis and C. albicans fora m prepara dos em bloc os de dentina para testar a atividade anti biofilme das combinações de antibióticos com os melhores result ados microbiológicos. O efeito antibiofilme das combinações antibióticas sobre biofilme de E. faecalis dentro dos túbulos dentinários foi também avaliada por microscopia confocal. Culturas de CPDH foram expostas à combinação antibiótica com melhor resultad o microbiol ógico e sinvastatina e determinada a viabilidade celular, atividade da f osfatase alcalina (ALP), deposição de nódulos de mineralização e expressão de DSPP (sialofosfoproteína dentinária), importante marcador odontoblástico... / Abstract: Biological therapies have searching for substances/protocols, which promote microbial elimination and induce or sti mulate pulp regeneration and completion of apical root development in young perm anent teeth wi th pulp pa thological processes . The objective s of this study were to evaluate the anti microbial /anti - biofilm activity of some antibiotics combinations on endodontic microorgan isms and the effect of the combina tion of anti biotics with the best anti microbial action associated with simvastatin on expression of odontoblast markers by human dental pulp cells (HDPC) . The antimicrobial activity of the following antibiotics : Metronidazole ( ME ), Ciprofloxacin ( CI), Minocycline (MI), Doxycycline (DO) and Fosfomycin ( FO), either alone or in double (ME+CI, ME+MI, ME+DO, ME+FO, CI+MI, CI+DO, CI+FO, DO+FO, MI+FO) or triple combinations (ME+CI+MI, ME+CI+FO, ME+MI+FO, ME+CI+DO, ME+DO+FO, CI+DO+FO, CI+MI+FO ) were tested against Streptococcus mutans, Enterococcus faecalis, Actinomyces israelii and Candida albicans in planktonic conditions . Mono - species biofilm of E. faecalis and dual - species biofilms of E. faecalis and C. albicans were prepared in dentin blocks to test the anti - biofilm activity of antibiotic combi nations with the best microbiolo gical results . Antibiofilm effect of antibiotic combination on E. faecalis biofilm inside dentin tubules was also evaluated by confocal microscopy . Culture s of HDPC were exposed to the antibiotic combination with the best antimicrobial effect and simvastatin and determined cell viability, alkaline phosphatase activity, deposition of mineralization nodules and expression of Dspp (dentin sialophosphoprotein), important odontoblast markers of dentin mineralization. Data were analyzed statistically, considering p<0.05 . All antibiotic combina tions reduced statistically the growth of bacteria... / Mestre

Orientador: Fausto Viterbo de Oliveira Neto / Resumo: A pesquisa em Biologia Celular, depende de técnicas laboratoriais que possam ser usadas para estudar a estrutura e função celular. Importantes avanços na compreensão das células têm sucedido diretamente o desenvolvimento de novas técnicas, que permitiram novos meios de investigação. Uma grande inovação da indústria biotecnológica é a produção de anticorpos monoclonais que são de extrema importância na área médica. Todas as células do organismo apresentam um conjunto de marcadores de superfície que caracterizam a singularidade biológica e a marca das células que os contêm. Contudo, as células-tronco mesenquimais (CTMs) apresentam poucos marcadores imunofenotípicos específicos, sendo sua caracterização estabelecida pela identificação de um perfil de marcadores específicos e não específicos. Essa imunofenotipagem é realizada com a utilização de anticorpos monoclonais que reconhecem esses antígenos de superfície da membrana celular, conforme demonstrado em estudos contemporâneos. Tendo em vista a inexistência no mercado de testes rápidos para identificação das CTM-TA, optou-se em delinear um projeto que desenvolvesse a ferramenta diagnóstica explorando seu potencial de uso, caracterizando os anticorpos monoclonais previamente produzidos a partir de células-tronco mesenquimais do tecido adiposo humano utilizando as técnicas de Western blotting e Citometria de fluxo com posterior análise proteômica a fim de identificar a especificidade dos mesmos em um processo de validação e inova... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:32Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-08-10Bitstream added on 2014-06-13T20:02:14Z : No. of bitstreams: 1 salles_lp_dr_arafo.pdf: 1231496 bytes, checksum: 3488f858f33655af04a14dc9aa04ee94 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo deste estudo foi analisar as respostas biológicas `a materiais utilizados em Endodontia que apresentam na formulação Mineral Trióxido Agregado (MTA) ou cimento Portland (PC) utilizando sistemas de cultura de células. O estudo foi dividido em três capítulos: No capitulo 1 foram avaliados bioatividade e biocompatibilidade de dois novos cimentos endodônticos comercialmente disponíveis; MTA Fillapex (MTA-F, cimento endodôntico à base de MTA, Ângelus) e Ephiphany SE (EP-SE, cimento endodôntico a base de resina metacrilato, SybronEndo). A linhagem de osteoblastos humanos (Saos-2) foi utilizada como modelo de estudo. Os resultados de MTT mostraram uma taxa significante de morte celular nas primeiras horas de exposição para todos os materiais avaliados. Entretanto, o grupo MTA-F apresentou aumento de células viáveis após 7 dias de presa. As imagens de microscopia eletrônica de varredura e o resultado de EDS (energia de dispersão atômica) mostraram diferenças na morfologia dos nódulos minerais formados pelos osteoblastos expostos ao MTA-F. No capítulo 2, células de folículo dental humanos (hDFCs) de dois terceiros molares inclusos indicados para exodontia por razões ortodônticas foram isoladas para avaliação da bioatividade e da biocompatibilidade do PC associado a diferentes agentes radiopacificadores em cultura primária de células. Os materiais estudados foram o cimento Portland branco (PC) e as associações de PC com: óxido de bismuto (CPBi), óxido de zircônio (CPZir) e tungstato de cálcio (CPCa). Além dos resultados de viabilidade celular e atividade de fosfatase alcalina, a biocompatibilidade do PC e das associações com agentes radiopacificadores foi analisada por imagens de microscopia eletrônica de varredura, que mostraram as hDFCs aderidas aos materiais. O capítulo 3 apresenta um estudo original de pesquisa básica, no qual foi avaliada... / The aim of this study was to analyze the biological responses to new endodontic materials based on Portland cement (PC) and the PC itself in cell culture systems. The study was divided into three chapters as follows: The first chapter describes a research in which the bioactivity and biocompatibility of two new commercially available sealers; MTA Fillapex (MTA-F, PC-based sealer, Angelus) and Ephiphany SE (EP-SE, resin-based sealer, SybronEndo); were evaluated in human osteoblast-like cells (Saos-2). The MTT results showed a significant cell death rate during the first hours of exposure to all test materials. After 7 days of exposure, MTA-F group showed a suitable increasing rate of cell viability. Interestingly, the images of scanning electron microscopy and the result of EDS (energy-dispersive X-ray spectroscopy) showed morphological differences in the mineralized nodules formed by osteoblasts exposed to MTA-F. In Chapter 2, human dental follicle cells (hDFCs) were isolated from two included third molars, which were extracted for orthodontic reasons. The hDFCs were suitable to assess the bioactivity and biocompatibility of PC associated with different radiopacifying agents in primary cell culture system. The materials tested were the white Portland cement (PC) and PC associations with radiopacifying agents: bismuth oxide (PCBi), zirconium oxide (PCZir) and calcium tungstate (PCCa). Besides the results of cell viability and alkaline phosphatase activity, the biocompatibility of the PC was corroborated by the images of scanning electron microscopy, which allowed us to visualize the hDFCs adhered to the material surfaces. Chapter 3 presents an original study of basic research, aimed to evaluate the hypothesis of the transcription factor NFATc1 activation in human osteoblast-like cells as a result of exposure to PC... 9Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:08Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2012-02-17Bitstream added on 2014-06-13T19:21:22Z : No. of bitstreams: 1 machado_mf_dr_botib.pdf: 3725562 bytes, checksum: d4f694ed133c9c007068eeeff7ba0042 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Fatores de crescimento fibroblástico (FGFs) regulam o desenvolvimento folicular e a maturação oocitária através de ligação aos seus receptores (FGFRs). Os RNAm que codificam o FGFR2c e o FGFR3c foram detectados em folículos antrais bovinos. Com o objetivo de identificar FGFs que poderiam regular a foliculogênese por meios desses, investigou-se os padrões de expressão do FGF16 e FGF20 em folículos antrais bovinos, bem como os níveis de RNAm desses FGFs e seus receptores (FGFR2c e FGFR3c) durante a maturação in vitro de complexos cumulus-oócito (COCs). Além disso, dados preliminares do nosso laboratório indicativos de que a expressão do FGF17 em oócitos é regulada ao longo da maturação oocitária motivaram a investigação da função dessa proteína na maturação de COCs in vitro. Sendo assim, avaliou-se o efeito do FGF17 na expansão do cumulus e no controle da transcrição de fatores EGF-like [ampiregulina (AREG), epiregulina (EREG) e betacelulina (BTC)] e outros genes reguladores da expansão [cicloxigenase 2 (COX2), hialurona sintase 2 (HAS 2), pentraxina 3 (PTX3), proteína indutora do fator de necrose tumoral 6 (TSG6)]. Os RNAm dos FGF16 e FGF20 e as respectivas proteínas foram detectados no ovário bovino. A abundância de RNAm de FGF16 e FGF20 foi maior em células da granulosa e da teca de folículos atrésicos comparados a folículos saudáveis ou transicionais. O tratamento com FSH diminuiu a abundância de RNAm para FGF16 e FGF20 e o IGF1 inibiu FGF16 em células da granulosa cultivadas in vitro. Ao longo da maturação a expressão do FGF16 e do FGF20 foi estável no oócito, enquanto que a expressão dos receptores FGFR2c e FGFR3c foi estimulada nas células do cumulus pelo FSH. A proteína FGF16 foi localizada no oócito, células do cumulus e da teca e o FGF20 em oócitos, células do cumulus, da granulosa e da teca. O FGF17 aumentou a proporção... / Fibroblast growth factors (FGFs) regulate follicular development and oocyte maturation. Messenger RNA encoding receptors FGFR3c and FGFR2c have been detected in bovine antral follicles. Aiming to identify FGFs that can potentially regulate folliculogenesis through these receptors, the expression patterns of FGF16 and FGF20 were assessed in bovine antral follicles. Messenger RNA expression of these FGFs and their receptors (FGFR2c and FGFR3c) was also assessed in oocytes and cumulus cells, respectively, during in vitro maturation. In addition, previous data suggesting that FGF17 mRNA expression is regulated in the oocyte led us to investigate the effects of FGF17 on cumulus expansion and on the expression of EGF-like factors [amphiregulin (AREG), epiregulin (EREG) and betacelullin (BTC)] and other genes that regulate expansion [cyclooxygenase 2 (COX2), hyaluronan synthase 2 (HAS 2), pentraxin 3 (PTX3), protein-inducing tumor necrosis factor 6 (TSG6)]. FGF16 and FGF20 mRNA and proteins were detected in the bovine ovary. Messenger RNA abundance of FGF16 and FGF20 was higher in granulosa and theca cells from atretic follicles compared with healthy or transitional follicles. Treatment with FSH decreased mRNA expression of FGF16 and FGF20 and IGF1 inhibited FGF16 mRNA abundance in cultured granulosa cells. During maturation, mRNA expression of FGF16 and FGF20 was stable in the oocyte, while FGFR2c and FGFR3c were stimulated in cumulus cells by FSH. FGF16 protein was localized to the oocyte, cumulus and theca cells, and FGF20 was detected in the oocyte, cumulus, granulosa and theca cells. Supplementation of maturation medium with FGF17 increased the proportion of fully expanded COCs, but did not alter mRNA expression of COX2, HAS2, PTX3, TSG6, AREG, EREG and BTC in cumulus cells during in vitro maturation. In conclusion, FGF17 enhances bovine cumulus expansion... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:20Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-26Bitstream added on 2014-06-13T18:31:21Z : No. of bitstreams: 1 tapparo_af_me_sjrp.pdf: 812527 bytes, checksum: aac6f17be2c6552511dcaa2c2bd79c32 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Atualmente, as culturas celulares são consideradas uma das ferramentas mais importantes na virologia. Os meios de cultura utilizados na manutenção destes sistemas não oferecem capacidade às células de adsorver e se multiplicar em matrizes plásticas sem a adição suplementar de soro fetal bovino (SFB). Entretanto, o uso do SFB não é aconselhável devido às variações encontradas entre os lotes, o alto grau de proteína animal e a possibilidade da presença de agentes infecciosos. Além dos aspectos sanitários, existe o aspecto ético em relação à obtenção deste produto biológico. Com o aumento dos ensaios in vitro a quantidade estimada de produção de soro fetal bovino no mundo é de aproximadamente 500.000 litros/ano, isto significa, mais de 1.000.000 de fetos bovinos sacrificados para obtenção de SFB. O objetivo deste estudo foi cultivar as células CER (chicken embryo related) em diferentes meios de cultura: M-VSFM, 293- SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, adicionados de 2mg/ml ou 5mg/ml de IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) e verificar a possibilidade das estirpes virais Lukert e Farangher de se adaptarem neste sistema. Nesta cultura a expressão da fibronectina e da laminina (LB1 e LB2) foram dectadas por imunofluorescência e imunoperoxidase indireta, respectivamente. As monocamadas de células CER foram infectadas pela estirpe Lukert e Farangher, sendo a m.o.i (multiplicidade de infecção) utilizada de 1.0. Após três passagens, o RNA viral foi extraído para determinar as substituições genéticas. A região hipervariável do gene VP2 foi amplificada por RT/PCR. Para confirmar as mutações, os produtos da PCR foram seqüênciados e comparados com as seqüências de VDIB publicadas no GenBank. Os resultados demonstraram que o meio VP-SFM e 5µg/mL de IGF-1 aplicado às culturas foi o melhor para a adaptação direta do cultivo das monocamadas... / Currently, the cell culture are considered one of the tools most important in the virology. The culture medium used in the maintenance those systems do not offer capacity to the cells of attachment and if spread in plastic surfaces without the supplementary addition of foetal bovine serum (FBS). However, the use FBS is not advisable due to batch-tobatch variation in composition, the high animal protein content, and the possibility of the presence of infectious agents. Beyond the sanitary aspects, exists the ethical aspect in relation to the attainment of this biological product. With the increase of in vitro assays the amount of FBS produced in the world is estimated at approximately 500.000 litres/year, this carry in 1.000.000 bovine fetuses sacrified for FSB attainment. The aim of this study was to adapt the CER cells (chicken embryo related) on different medium: M-VSFM, 293-SFMII, VP-SFM, VP-SFM AGT, Glasgow, Leibovitz 15, supplemented by 2mg/ml or 5mg/ml IGF-1 (Insulin-like Growth Factor) and to verify the possibility the Lukert and Farangher viral strain adapted in this system. The expression of the fibronectin and laminin (LB1 and LB2) were detected by immunofluorescence and indirect immunoperoxidase, respectively. The CER cells monolayer had been infected by Lukert and Farangher strain, being the m.o.i (infection multiplicity) used of 1.0. After three passages, viral RNA was isolated to determine the genetic changes. The hypervariable regions of the VP2 gene was amplified by RT/PCR. To confirm the genetic changes, PCR products were sequenced and compared to the sequences of the GenBank published VDIB strain.The results had demonstrated that the medium VP-SFM and 5µg/mL IGF-1 applied to the cultures was optimum for the direct adaptation of the culture of the monolayers without addition of FBS. In relation the detection of the extracellular protein, the fibronectin was induced... (Complete abstract click electronic access below)

Made available in DSpace on 2016-07-01T13:10:30Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2015-10-06. Added 1 bitstream(s) on 2016-07-01T13:14:14Z : No. of bitstreams: 1 000858650_20171206.pdf: 332516 bytes, checksum: 70e313bfe3038c6e08843ff13630ba6f (MD5) Bitstreams deleted on 2017-12-08T12:00:19Z: 000858650_20171206.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2017-12-08T12:01:08Z : No. of bitstreams: 1 000858650.pdf: 3854372 bytes, checksum: bb214b255e58792b837adf820a19c09d (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / As proteases são importantes enzimas industriais com vasta área de aplicação. Como catalisam a hidrólise de proteínas, são amplamente exploradas na produção de hidrolisados proteicos a partir das proteínas do leite (caseínas e soro de queijo), soja e peixe, gerando produtos de alto valor agregado. Neste trabalho, a tripsina (EC 3.4.2.1.4) e pepsina (EC 3.4.23.1) foram imobilizadas em suporte alternativo de baixo custo pó de sabugo de milho (SM) para a obtenção de hidrolisados parciais do soro de queijo bovino e bubalino, principal subproduto da indústria de laticínios. O suporte pré-tratado foi ativado com grupos glioxil e IDA-glioxil (tripsina) e glutaraldeído (tripsina e pepsina). Os derivados apresentaram rendimentos de imobilização maiores que 80% para a tripsina e 90% para a pepsina com atividades recuperadas maiores que 85% e 94%, respectivamente. O derivado de tripsina-glioxil-SM exibiu uma excelente estabilidade térmica a 65 ° C, que foi 1111 vezes maior em comparação à enzima livre seguido pelos derivados tripsina-IDA-glioxil-SM (900 vezes) e tripsina-glutaraldeído-SM (5,38 vezes). Para o derivado pepsina-glutaraldeído-SM a estabilidade térmica foi realizada em 45ºC e foi 1,42 vezes maior com relação à enzima livre. Os derivados estabilizados tripsina-glioxil-SM e pepsina-glutaraldeído-SM foram empregados em um reator de leito empacotado para hidrólise do lactosoro bovino e bubalino. A relação derivado enzimático/volume útil foi de 1:2 e o processo foi conduzido a 45ºC com uma vazão de 10,1mL/h. Para a hidrólise, os soros de queijo bovino e bubalino foram dialisados e tratados com caulim para a redução dos teores de lactose e gordura, respectivamente. Os hidrolisados foram fracionados por cromatografia de filtração em gel (Sephadex G25) para obtenção de pools de peptídeos ˂5kDa. O transporte e a absorção de cada um dos pools de peptídeos foram avaliados pelos métodos in vitro da... / Proteases are important industrial enzymes with wide range of application. They catalyze the hydrolysis of proteins and are widely exploited in the production of protein hydrolysates from milk protein (casein and whey), soy and fish, generating high value-added products. In this work, trypsin (EC 3.4.21.4) and pepsin (EC 3.4.23.1) were immobilized on a low cost alternative support, corn cob powder (CCP) to obtain partial hydrolysates of bovine and buffalo cheese whey, the main by-product of the dairy industry. The pretreated support was activated with glyoxyl and IDA-glyoxyl groups (trypsin) and glutaraldehyde (trypsin and pepsin). The derivatives showed immobilization yields higher than 80% and 90% for trypsin and pepsin, respectively, and recovered activities higher than 85% for trypsin derivatives and 94% for pepsin derivative. The derivative trypsin-glyoxyl-CCP showed excellent thermal stability at 65 ° C, which was 1111 times higher that obtained with free enzyme, followed by derivative trypsin-IDA-glyoxyl-CCP (900-fold) and trypsin-glutaraldehyde-CCP (5.38-fold). For the derivative pepsin-glutaraldehyde-CCP the thermal stability was held at 45 ° C and was 1.42 times greater than the free enzyme. Stabilized derivatives trypsin-glyoxyl-CCP and pepsin-glutaraldehyde-CCP were used in a packed bed reactor for the hydrolysis of bovine and buffalo cheese whey. The relationship derivative/working volume was 1:2 and the process was conducted at 45 ° C with a flow of 10.1mL/h. For the hydrolysis, bovine and buffalo cheese whey were dialyzed and treated with kaolin to reduce lactose and fats, respectively. The hydrolysates were fractionated by gel filtration chromatography (Sephadex G25) to obtain 5kDa peptide pools. The transport and absorption of each peptide pools were evaluated by in vitro methods simulating the gastrointestinal digestion/dialysability and by Caco-2 cell ... / FAPESP: 12/07680-4

Orientador: Mario Tanomaru Filho / Coorientador: Ricardo Battaglino / Banca: Renato de Toledo Leonardo / Banca: Leslie Morse / Banca: Fernanda de Freitas Anibal / Resumo: O objetivo deste estudo foi analisar as respostas biológicas 'a materiais utilizados em Endodontia que apresentam na formulação Mineral Trióxido Agregado (MTA) ou cimento Portland (PC) utilizando sistemas de cultura de células. O estudo foi dividido em três capítulos: No capitulo 1 foram avaliados bioatividade e biocompatibilidade de dois novos cimentos endodônticos comercialmente disponíveis; MTA Fillapex (MTA-F, cimento endodôntico à base de MTA, Ângelus) e Ephiphany SE (EP-SE, cimento endodôntico a base de resina metacrilato, SybronEndo). A linhagem de osteoblastos humanos (Saos-2) foi utilizada como modelo de estudo. Os resultados de MTT mostraram uma taxa significante de morte celular nas primeiras horas de exposição para todos os materiais avaliados. Entretanto, o grupo MTA-F apresentou aumento de células viáveis após 7 dias de presa. As imagens de microscopia eletrônica de varredura e o resultado de EDS (energia de dispersão atômica) mostraram diferenças na morfologia dos nódulos minerais formados pelos osteoblastos expostos ao MTA-F. No capítulo 2, células de folículo dental humanos (hDFCs) de dois terceiros molares inclusos indicados para exodontia por razões ortodônticas foram isoladas para avaliação da bioatividade e da biocompatibilidade do PC associado a diferentes agentes radiopacificadores em cultura primária de células. Os materiais estudados foram o cimento Portland branco (PC) e as associações de PC com: óxido de bismuto (CPBi), óxido de zircônio (CPZir) e tungstato de cálcio (CPCa). Além dos resultados de viabilidade celular e atividade de fosfatase alcalina, a biocompatibilidade do PC e das associações com agentes radiopacificadores foi analisada por imagens de microscopia eletrônica de varredura, que mostraram as hDFCs aderidas aos materiais. O capítulo 3 apresenta um estudo original de pesquisa básica, no qual foi avaliada... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The aim of this study was to analyze the biological responses to new endodontic materials based on Portland cement (PC) and the PC itself in cell culture systems. The study was divided into three chapters as follows: The first chapter describes a research in which the bioactivity and biocompatibility of two new commercially available sealers; MTA Fillapex (MTA-F, PC-based sealer, Angelus) and Ephiphany SE (EP-SE, resin-based sealer, SybronEndo); were evaluated in human osteoblast-like cells (Saos-2). The MTT results showed a significant cell death rate during the first hours of exposure to all test materials. After 7 days of exposure, MTA-F group showed a suitable increasing rate of cell viability. Interestingly, the images of scanning electron microscopy and the result of EDS (energy-dispersive X-ray spectroscopy) showed morphological differences in the mineralized nodules formed by osteoblasts exposed to MTA-F. In Chapter 2, human dental follicle cells (hDFCs) were isolated from two included third molars, which were extracted for orthodontic reasons. The hDFCs were suitable to assess the bioactivity and biocompatibility of PC associated with different radiopacifying agents in primary cell culture system. The materials tested were the white Portland cement (PC) and PC associations with radiopacifying agents: bismuth oxide (PCBi), zirconium oxide (PCZir) and calcium tungstate (PCCa). Besides the results of cell viability and alkaline phosphatase activity, the biocompatibility of the PC was corroborated by the images of scanning electron microscopy, which allowed us to visualize the hDFCs adhered to the material surfaces. Chapter 3 presents an original study of basic research, aimed to evaluate the hypothesis of the transcription factor NFATc1 activation in human osteoblast-like cells as a result of exposure to PC... 9Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Orientador: Rubens Monti / Banca: Jonas Contiero / Banca: Luis Henrique Souza Guimarães / Banca: Guilherme Peixoto / Banca: Kátia Sivieri / Resumo: As proteases são importantes enzimas industriais com vasta área de aplicação. Como catalisam a hidrólise de proteínas, são amplamente exploradas na produção de hidrolisados proteicos a partir das proteínas do leite (caseínas e soro de queijo), soja e peixe, gerando produtos de alto valor agregado. Neste trabalho, a tripsina (EC 3.4.2.1.4) e pepsina (EC 3.4.23.1) foram imobilizadas em suporte alternativo de baixo custo pó de sabugo de milho (SM) para a obtenção de hidrolisados parciais do soro de queijo bovino e bubalino, principal subproduto da indústria de laticínios. O suporte pré-tratado foi ativado com grupos glioxil e IDA-glioxil (tripsina) e glutaraldeído (tripsina e pepsina). Os derivados apresentaram rendimentos de imobilização maiores que 80% para a tripsina e 90% para a pepsina com atividades recuperadas maiores que 85% e 94%, respectivamente. O derivado de tripsina-glioxil-SM exibiu uma excelente estabilidade térmica a 65 ° C, que foi 1111 vezes maior em comparação à enzima livre seguido pelos derivados tripsina-IDA-glioxil-SM (900 vezes) e tripsina-glutaraldeído-SM (5,38 vezes). Para o derivado pepsina-glutaraldeído-SM a estabilidade térmica foi realizada em 45ºC e foi 1,42 vezes maior com relação à enzima livre. Os derivados estabilizados tripsina-glioxil-SM e pepsina-glutaraldeído-SM foram empregados em um reator de leito empacotado para hidrólise do lactosoro bovino e bubalino. A relação derivado enzimático/volume útil foi de 1:2 e o processo foi conduzido a 45ºC com uma vazão de 10,1mL/h. Para a hidrólise, os soros de queijo bovino e bubalino foram dialisados e tratados com caulim para a redução dos teores de lactose e gordura, respectivamente. Os hidrolisados foram fracionados por cromatografia de filtração em gel (Sephadex G25) para obtenção de pools de peptídeos ˂5kDa. O transporte e a absorção de cada um dos pools de peptídeos foram avaliados pelos métodos in vitro da... / Abstract: Proteases are important industrial enzymes with wide range of application. They catalyze the hydrolysis of proteins and are widely exploited in the production of protein hydrolysates from milk protein (casein and whey), soy and fish, generating high value-added products. In this work, trypsin (EC 3.4.21.4) and pepsin (EC 3.4.23.1) were immobilized on a low cost alternative support, corn cob powder (CCP) to obtain partial hydrolysates of bovine and buffalo cheese whey, the main by-product of the dairy industry. The pretreated support was activated with glyoxyl and IDA-glyoxyl groups (trypsin) and glutaraldehyde (trypsin and pepsin). The derivatives showed immobilization yields higher than 80% and 90% for trypsin and pepsin, respectively, and recovered activities higher than 85% for trypsin derivatives and 94% for pepsin derivative. The derivative trypsin-glyoxyl-CCP showed excellent thermal stability at 65 ° C, which was 1111 times higher that obtained with free enzyme, followed by derivative trypsin-IDA-glyoxyl-CCP (900-fold) and trypsin-glutaraldehyde-CCP (5.38-fold). For the derivative pepsin-glutaraldehyde-CCP the thermal stability was held at 45 ° C and was 1.42 times greater than the free enzyme. Stabilized derivatives trypsin-glyoxyl-CCP and pepsin-glutaraldehyde-CCP were used in a packed bed reactor for the hydrolysis of bovine and buffalo cheese whey. The relationship derivative/working volume was 1:2 and the process was conducted at 45 ° C with a flow of 10.1mL/h. For the hydrolysis, bovine and buffalo cheese whey were dialyzed and treated with kaolin to reduce lactose and fats, respectively. The hydrolysates were fractionated by gel filtration chromatography (Sephadex G25) to obtain 5kDa peptide pools. The transport and absorption of each peptide pools were evaluated by in vitro methods simulating the gastrointestinal digestion/dialysability and by Caco-2 cell ... / Doutor