Orientador: Alvimar José da Costa / Coorientador: Carolina Buzzulini / Banca: Fernando de Almeida Borges / Banca: Carlos Noriyuki Kaneto / Resumo: O sistema de criação conjunta ovinos/bovinos, visando melhor aproveitamento da pastagem, provendo diversificação lucrativa, pode deparar com problemas graves nas propriedades rurais, tais como as parasitoses. Dentre as mais importantes, destaca-se a hemoncose. As espécies Haemonchus placei e Haemonchus contortus são comumente encontradas parasitando bovinos e ovinos, respectivamente. A infecção de bovinos por H. contortus constitui, ainda, uma incógnita na literatura, sobretudo a brasileira. Este helminto tem sido descrito parasitando principalmente ovinos e caprinos. As espécies mais citadas parasitando bovinos são H. placei e H. similis. Portanto, objetivou-se no presente estudo avaliar a infectividade de H. contortus para bovinos e comparar sua patogenicidade à de H. placei. Para tal, foram utilizados 10 bezerros, criados e mantidos sem contato com helmintos, assim distribuídos: GI - dois bezerros não inoculados (controle), GII - quatro bezerros inoculados com larvas infectantes (L3) de H. contortus e GIII - quatro bezerros infectados com larvas (L3) de H. placei. Cada bovino recebeu 10.000 L3, de acordo com o grupo experimental, em dose única. Exames coproparasitológicos (McMaster e coproculturas) foram realizados diariamente após o 60 dia da inoculação, objetivando estabelecer o período pré-patente. Foram colhidas, semanalmente, amostras de sangue para hemogramas e dosagens bioquímicas. Decorridos 42 dias pós-infecção, os 10 bovinos foram eutanasiados e necropsiados, sendo colhido "in totum" todos os exemplares de Haemonchus. Nos abomasos foram realizados estudos anátomo-histopatológicos. O período pré patente para H. contortus foi de 20 dias e para H. placei foi de 27 dias. Dentre os parâmetros hematológicos, apenas as quantificações de hemácias apresentaram diferenças significativas (P<0,05), entre os grupos. As concentrações séricas médias de proteínas totais, albumina, ureia ... / Abstract: The ovine/bovine joint breeding system, which aims for a better use of pastures, providing profitable diversification, can face severe problems in rural properties, such as parasites, amongst which Haemonchus infections stand out. H. placei and H. contortus species are commonly found parasitizing cattle and sheep, respectively. Bovine infections by H. contortus still persist as an unknown possibility in literature, especially in Brazil. Such helminth has been described parasitizing sheep and goats, while the main species cited as parasites of bovines are H. placei and H. similis. Therefore, the present study aimed to evaluate infectivity of H. contortus for bovines and compare its pathogenicity to that of H. placei. To achieve this goal, 10 calves were utilized, all created and maintained free of any contact with helminths, distributed as follows: GI - two non-inoculated calves (control group); GII - four animals inoculated with infecting larvae (L3) of H. contortus; and GIII - four bovines infected with larvae (L3) of H. placei. Each inoculated calf received 10,000 L3, according to its experimental group, in a single dose. Coproparasitological exams (McMaster and coprocultures) were performed daily, starting at the 6th post-inoculation day, seeking to establish prepatent periods. Blood samples, for cell counts and biochemical dosages, were collected on a weekly basis. 42 days after infection of experimental animals, all 10 calves were euthanized and necropsied, for subsequent "in totum" collection of all Haemonchus specimens. Anatomical and histopathological examinations were performed on all abomasums. Prepatent period for H. contortus was 20 days, and 27 days for H. placei. Amongst hematological parameters, only erythrocyte counts presented significant differences (P < 0.05) between experimental groups. Average serum concentrations of total proteins, albumin, urea, creatinin, AST and GGT presented significant ... / Mestre

Orientador: Reinaldo Fernandes Cooke / Banca: José Luiz Moraes Vasconcelos / Banca: David W. Boahnet / Resumo: Este experimento analisou os efeitos da administração do meloxicam nas respostas fisiológicas e no desempenho de bovinos na fase inicial do confinamento após serem transportados. Foram utilizados 84 bezerros Angus × Hereford, divididos por peso vivo (PV) no dia -10 do experimento e distribuídos em 21 baias de confinamento. Do d -10 ao d 0, todos os animais receberam uma dieta composta por feno de alfalfa a vontade e 2,4 kg/animal (base MS) de um concentrado a base de milho. No dia 0, todas as baias foram aleatoriamente atribuídas a receberem um dos seguintes tratamentos: 1) transporte por 1.440 km em um caminhão comercial e administração oral de meloxicam (1 mg/kg do PV) no carregamento (d 0), no descarregamento (d 1) e diariamente do d 2 ao d 7 no período inicial de confinamento (MEL; n = 7), 2) transporte e administração do tratamento nos mesmos dias do grupo MEL, porém com lactose monohidratada (1 mg/kg do PV) (TRANS; n = 7), 3) ausência de transporte e administração de lactose monohidratada (1 mg/kg do PV) nos mesmos dias dos tratamentos MEL e TRANS (CON; n = 7). Logo após o descarregamento (d 1), todos os animais dos tratamentos MEL e TRANS retornaram para suas respectivas baias para o período de 21 dias de confinamento, recebendo a mesma dieta oferecida do d -10 ao d 0. Nos dias 0 e 1, os tratamentos foram aplicados através de solução aquosa e administrados via oral, porém dos dias 2 ao 7, os tratamentos foram misturados no concentrado. Para o cálculo de ganho peso diário (GPD) foram utilizados as médias de ... / Abstract: This experiment evaluated the effects of meloxicam administration on physiological and performance responses of transported cattle during feedlot receiving. Eighty-four Angus × Hereford steers were ranked by BW on d -10, and assigned to 21 dry lot pens. From d -10 to 0, pens were fed Alfalfa-grass hay ad libitum and 2.4 kg/steer daily (DM basis) of a corn-based concentrate. On d 0, pens were randomly assigned to: 1) transport for 1,440 km in a livestock trailer and oral administration of meloxicam (1 mg/kg of BW) at loading (d 0), unloading (d 1), and daily from d 2 to 7 of feedlot receiving (MEL; n = 7), 2) same transportation and treatment schedule of MEL, but oral administration of lactose monohydrate (1 mg/kg of BW) instead of meloxicam (TRANS; n = 7), or 3) no transport and oral administration of lactose monohydrate (1 mg/kg of BW) concurrently with treatment administration to MEL and TRANS (CON; n = 7). Upon arrival (d 1), MEL and TRANS steers returned to their pens for a 21-d feedlot receiving with the same diet offered from d -10 to 0. Treatments were administered to steers via oral drench on d 0 and 1, or mixed daily with the concentrate from d 2 to 7. Full BW was recorded prior to (d -2, -1, and 0) treatment application and at the end of experiment (d 20, 21, and 22) for ADG calculation. Daily DMI was recorded from d 1 to 21. Blood samples were collected on d 0, 1, 3, 5, 7, 10, 14, and 21. During the initial 7 d of feedlot receiving, hay and total DMI were reduced (P ≤ 0.03) in TRANS vs. CON and MEL, similar between CON and MEL (P ≥ 0.26), whereas concentrate DMI did not differ (P = 0.16) among ... / Mestre

Orientador: Tereza Cristina Cardoso / Co-orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Banca: Rafael Silva Cipriano / Banca: Vera Lúcia Lorenzetti Magalhaes Curci / Banca: Carlos Noriyki Kaneto / Banca: Cáris Maroni Nunes / Resumo:A infecção pelo herpesvírus Bovino tipo 5 (BoHV-5) resulta em meningoencefalite não supurativa que é responsável por perdas econômicas significativas na América do Sul. Células tronco mesenquimais (CTM) são encontradas em diferentes tecidos fetais, como no cordão umbilical que possuí diversos fatores favoráveis para obtenção destas células. O objetivo da presente pesquisa foi avaliar o isolamento e a viabilidade das CTM bovinas e sua capacidade de diferenciação em outros tecidos de origem mesenquimal, como as "neuron-like cells" - células semelhantes a neurônios - (CSN), e avaliar a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção experimental com BoHV-5. As CTM foram isoladas da geleia de Wharton e diferenciadas em tecido adiposo, cartilagem, ósseo e CSN. As linhagens celulares foram caracterizadas pela expressão genica e imunofenotipicamente, utilizando a técnica de PCR, imunocitoquímica e citometria de fluxo, respectivamente. O conjunto de primers e painel de anticorpos primários, empregados na experimentação, permitiu caracterizar as células tronco e sua diferenciação em células neuronais. Após a adaptação e diferenciação, ambas as células foram infectadas pelo BoHV-5, exibindo efeito citopático e taxa de replicação viral aumentada 72 h pós infecção. A técnica de hibridização in situ identificou as partículas virais no interior das CSN e no meio extracelular. Os resultados demonstram a capacidade de diferenciação das CTM em outros tipos celulares e a possibilidade da utilização das mesmas como modelo de infecção in vitro de células neuronais pelo BoHV-5. Estes resultados corroboram o uso de MSC como fonte de NLC para uso no estudo da patogênese da infecção experimental pelo BoHV-5 / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) infection results in non- suppurative meningoencephalitis which underlies significant economic losses in South America. Mesenchymal stem cells (MSCs) are found in fetal tissues, such as the umbilical cord. The goal of this research was to characterize the isolation and viability of bovine umbilical cord MSCs for in vitro differentiation into "neuron-like cells" (NLC) to be used as a model for experimental infection with BoHV-5. MSCs were isolated from Wharton's jelly and differentiated in vitro into adipogenic, chondrogenic, and osteogenic cells as well as NLC. The cells lines were characterized molecularly and immunophenotypically, using PCR, immunocytochemistry, and flow cytometry. The set of primers and panel of primary antibody used in the experiments confirmed the isolation of mesenchymal stem cells and their differentiation into neuronal-like cells. After adaptation and differentiation, the cells were infected with BoHV-5, exhibiting typical cytopathic effect and increased viral replication rate 72 h post-infection. Viral particles were identified in the NLC and in the extracellular environment. by in situ hybridization These results corroborate the use of MSCs as a source of NLC which can be used to study the pathogenesis of the experimental in vitro infection wtih BoHV-5 / Doutor

Resumo:O Herpesvírus bovino tipo 5 (BoHV-5) e o herpesvirus bovino tipo 1 (BoHV-1), membros da família Herpesviridae, subfamília Alphaherpesvirinae; podem replicar-se em diferentes tecidos como nervoso, glandular, linfóide e em órgãos parenquimatosos. São capazes de permanecer em estado de latência, alojando-se nos gânglios nervosos. No Brasil, casos clínicos de encefalites por BoHV-5 são a segunda maior causa de morte por encefalite com etiologia determinada, suplantada somente pela raiva, enquanto o BoHV-1 está presente de forma endêmica no rebanho nacional, sendo responsável por uma variedade de sinais clínicos como rinotraqueíte, abortamento, conjuntivite, vulvovaginite e balanopostite. É esperado que um agente viral, ao infectar uma célula, ative as vias do processo de morte celular programada, entretanto há relatos de que o gene relacionado à latência (RL) do Herpesvírus é capaz de inibir a apoptose celular, protegendo a célula infectada durante a latência, por meio de mecanismos ainda desconhecidos. Este estudo demontra a capacidade do BoHV-5 e BoHV-1 de manipular o metabolismo mitocondrial da célula infectada, interferindo na via intrínseca de apoptose / Abstract:Bovine Herpesvirus type 5 (BoHV-5) and bovine herpesvirus type 1 (BoHV-1), members of Herpesviridae family, Alphaherpesvirinae subfamily; may replicate in different tissues such as nervous, glandular, lymphoid and parenchymal organs and are able to remain in a latent state, lodged in nerve ganglia. In Brazil clinical cases of BoHV - 5 encephalitis are the second leading cause of death due to encephalitis with determined etiology, supplanted only by rabies, while the BoHV-1 is present in an endemic form in the national herd, being responsible for a variety of clinical signs as rhinotracheitis, abortion, conjunctivitis, vulvovaginitis and balanoposthitis. It is expected that a viral agent, to infect a cell, activate the pathways of programmed cell death process, however there are reports that the gene related to latency (RL) of Herpesvirus is able to inhibit cell apoptosis, protecting the infected cell during latency through unknown mechanisms. Therefore, this study demonstrated the capacity of BoHV-5 and BoHV-1 to manipulate mitochondrial metabolism of the infected cell, interfering with intrinsic pathway of apoptosis / Orientador:Tereza Cristina Cardoso Silva / Banca:Camila da Silva Frade / Banca:Roberto Gameiro de Carvalho / Mestre

Orientador: Helio Langoni / Coorientador: Rodrigo Costa da Silva / Banca: Simone Baldini Lucheis / Banca: Aristeu Vieira da Silva / Banca: Germano Francisco Biondi / Banca: Nádia dos Reis Carvalho / Resumo: Toxoplasma gondii é um protozoário parasito intracelular obrigatório, amplamente distribuído pelo mundo, sendo responsável por perdas na produção animal e sério problema de saúde pública. Os produtos cárneos podem albergar formas infectantes de diversos agentes zoonóticos, sendo um deles os bradizoítos de T. gondii. Deste modo, o presente estudo objetivou determinar a presença de T. gondii em produtos cárneos comercializados na região de Botucatu, SP, Brasil. Foram analisados 141 cortes comerciais de carne suína, sendo 49 de pernil (34,75%); 48 de músculo traseiro bovino (34,04%) e de quibe cru (44; 31,21%), com as técnicas de bioensaio em camundongos, e pesquisa do DNA do parasito pela Reação em Cadeia pela Polimerase (PCR) do gene repetitivo 200-300x no genoma, amplificando 529pb. Todas as amostras foram negativas ao bioensaio. Das amostras positivas à PCR, foram pesquisadas a carga parasitária pela PCR quantitativa (qPCR) do mesmo gene, utilizando-se sistema SYBR Green, e genotipagem pela multiplex-, nested- e RFLP- PCR utilizando 11 marcadores: SAG1, 5'-3'SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6, PK1, Apico. Das amostras estudadas, nove (6,38%) foram positivas à PCR, sendo cinco (55,56%) bovinas, três (33,33%) suínas e uma (11,11%) de quibe, apresentando carga parasitária com medianas variando de zero até 390 parasitos.mL-1. A genotipagem foi possível em somente uma amostra que apresentou genótipo semelhante a outros já identificados na literatura (MAS, TgCkBr89 e TgCkBr147). Adicionalmente, nested- e RFLP-PCR do gene 18S ribossomal RNA (18S rRNA), sequenciamento dos produtos da nested-PCR e alinhamento com a base de dados do GenBank no NCBI foram realizados para todas as nove amostras positivas para verificar a possibilidade de co-infecção com outros protozoários Apicomplexa, resultando em 100% de homologia com T. gondii em quatro amostras, sendo três suínas e um quibe ... / Abstract: Toxoplasma gondii is an obligate intracellular protozoan parasite, widely distributed throughout the world, accounting for losses in animal production and serious public health problem. The meat products may harbor infectious forms of various zoonotic agents, one of them being the bradyzoites of T. gondii. Thus, the present study aimed to determine the prevalence of T. gondii in meat products marketed in Botucatu, SP, Brazil. We analyzed 141 commercial cuts of pork (ham, 49; 34.75%) and beef (muscle, 48, 34.04%), and raw kibbe (44, 31.21%) by bioassay in mice, and survey of parasite DNA by polymerase chain reaction (PCR) gene repetitive 200- 300x in the genome, amplifying 529bp. All samples were negative by bioassay. Of the PCR-positive samples were studied parasite load by quantitative PCR (qPCR) of the same gene, using the SYBR Green system and the multiplex genotyping, nested PCR and RFLP markers using 11: SAG1, 5'-3 ' SAG2, alt.SAG2, SAG3, B-TUB, GRA6, L358, c22-8, c29-6 PK1, Apico. Of the samples studied, nine (6.38%) were positive for PCR, five (55.56%) for cattle, three for pork (33.33%) and one for raw kibbe (11.11%), with median parasite load ranging from 16 to 390 parasitos.mL-1. Genotyping was possible in only one sample that showed genotype similar to those already identified in the literature (MAS, TgCkBr89 and TgCkBr147). In addition, nested PCR and RFLP gene 18S ribosomal RNA (18S rRNA) sequencing of the nested-PCR products and alignment to the GenBank database at NCBI were performed for all nine positive samples to verify the possibility of co-protozoa infection with other Apicomplexa, resulting in 100% homology with T. gondii in four samples, three from pork meat sows and one from kibbe (44.44%; GenBank accession number L37415.1), Sarcocystis hominis was foundin two samples of cattle (22.22%, GenBank accession number AF006471.1), Sarcocystis cruzi in two samples of beef (22.22%; GenBank ... / Mestre