Orientador: Doralice Maria Cella / Banca: Carlos Ribeiro Vilela / Banca: Claudio Juan Bidau / Banca: Francisco de Assis Ganeo de Mello / Banca: Luciana Bolsoni Lourenço / Resumo: Dentre todas as ordens de aracnideos conhecidas taxonomicamente, Araneae e a segunda mais diversa, com numero de especies menor somente em relacao a Acari. Atualmente, 39.725 especies ja foram descritas, sendo que centenas de novas descricoes sao feitas a cada ano em diversas familias de aranhas. O conhecimento citogenetico sobre a ordem restringe-se a analise de 638 especies (ca 2%) do total descrito do ponto de vista taxonomico. Este trabalho tem como objetivos fornecer uma compilacao dos dados citogeneticos existentes para a ordem na literatura ate a presente data, bem como caracterizar e estabelecer as estrategias de diferenciacao cromossomica em 13 especies de aranhas pertencentes ao grupo das haploginas, clado que corresponde a somente 3.257 especies (ca 8%) do total da ordem e a apenas 41 especies (ca 6%) do total cariotipado ate os dias atuais. Aliado a baixa representatividade dos dados cariologicos, outros pontos que fazem das haploginas um grupo interessante para estudos sao a predominancia de cromossomos meta/submetacentricos e de sistemas cromossomicos de determinacao sexual simples e multiplos, muitas vezes incluindo um cromossomo Y, ambas caracteristicas raras entre os outros clados de Araneae. As especies analisadas pertencem a tres familias de haploginas, Pholcidae (Mesabolivar luteus e Micropholcus fauroti), Sicariidae (Loxosceles amazonica, Loxosceles gaucho, Loxosceles hirsuta, Loxosceles intermedia, Loxosceles laeta, Loxosceles puortoi, Loxosceles similis e Sicarius tropicus) e Scytodidae (Scytodes fusca, Scytodes globula e Scytodes itapevi). Em Pholcidae, os resultados ineditos para os dois generos mostraram ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Mesabolivar luteus (Keyserling 1891) and Micropholcus fauroti (Simon 1887) specimens were collected in Ubatuba and Rio Claro, both in the state of São Paulo, Brazil. Mesabolivar luteus showed 2n(.) = 15 = 14 + X and 2n(.) = 16 = 14 + XX in mitotic metaphases and 7II + X in diplotenic cells. During late prophase I, all bivalents presented a ring shape, evidencing two chiasmata per bivalent. In this species, some diplotenic cells appear in pairs, maybe due to specific characteristics of the intercellular bridges. The metaphases II showed n = 7 or n = 8 = 7 + X chromosomes. Micropholcus fauroti evidenced 2n(.) = 17 = 16 + X in spermatogonial metaphases and 8II+X in diplotenic cells, with only one chiasma per bivalent, contrasting with M. luteus. In both species, all chromosomes were metacentrics. The X sexual chromosome was the largest element and appeared as a univalent during meiosis I. These are the first cytogenetical data for the genera Mesabolivar and Micropholcus. Additionally, M. luteus is the first chromosomally analyzed species of the New World clade and the observed diploid number for M. fauroti had not yet been recorded in Pholcidae. / Doutor

Orientador: João Antonio da Costa Andrade / Banca: Maria Elisa Ayres Guidetti Zagatto Paterniani / Banca: Pedro César dos Santos / Resumo: O fenômeno de xênia é descrito como o efeito direto do pólen no embrião e endosperma da semente, alterando suas características genéticas e proporcionando mudanças qualitativas e quantitativas. Vários caracteres do grão de milho como cor, tamanho, peso e teor de alguma substância apresentam esse efeito. Portanto existe a possibilidade deste fenômeno ser explorado com o cultivo de dois híbridos com sementes misturadas, buscando-se um aumento no rendimento da lavoura. O objetivo deste trabalho foi identificar pares de híbridos, em duas épocas de semeadura, que apresentem efeito xênia para os caracteres tamanho de grãos, peso médio de grãos e conteúdo de óleo e proteína. O trabalho foi conduzido na Fazenda de Ensino e Pesquisa da Faculdade de Engenharia de Ilha Solteira - UNESP, localizada no município de Selvíria - MS. Foram avaliados todos os pares possíveis, incluindo os recíprocos, entre os híbridos AG 8080, DKB 333B, DAS 32, P 30F80, TORK e XB 8010, sob delineamento estatístico de blocos casualizados com quatro repetições na primeira safra e três na segunda safra (safrinha). A polinização de cada híbrido (cruzamento ou "sib") foi realizada manualmente em cada parcela, de acordo com o tratamento especificado. As análises indicaram efeito xênia de 15%, no peso médio dos grãos do híbrido XB 8010 quando polinizado pelo TORK, na primeira safra, quando em comparação com o XB 8010 polinizado com seu próprio pólen. Na Segunda safra o híbrido DKB 333B proporcionou um aumento de 20% no peso médio dos grãos do AG 8080. Para conteúdo de proteína, o efeito xênia foi significativo e negativo (-9,0%) quando o híbrido DKB 333B recebeu pólen do híbrido TORK, na primeira safra, e nos demais cruzamentos não houve influência da fonte polinizadora. Para o caráter conteúdo de óleo, a manifestação do efeito xênia ocorreu nas duas épocas... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo). / Astract: The xenia phenomenon is described as the direct effect of the pollen in the seeds's embryo and endosperm, altering their genetic traits and providing qualitative and quantitative changes. Several grain traits as color, size, weight and contents any substance, presents this effect. Therefore there is possibility of this phenomenon to be explored with the cultivation of two hybrids with mixture of seeds, seeking for a increase in the yield. The goal of this work was identify hybrid pairs for the traits grains medium weight, grains size and the oil and protein content, that show xenia effect in two sowing season. Were appraised all the pairs possible, including the reciprocal ones, among the hybrids AG 8080, DKB 333B, DAS 32, P 30F80, TORK and XB 8010, in a complete random block design, with four replicates at normal season and three replicates at no season crop. The pollination (cross and sib) of each hybrid, were realized manually in each plot, under the specified treatment. The analyses indicated 15 % of xenia effect in the grains medium weight of the hybrid XB 8010 as pollinated by TORK, at normal season, as compared with XB 8010 pollinated by your self pollen. In no season crop the hybrid DKB 333B provided an increase of 20% in the grains medium weight of AG 8080. For the protein content, the xenia effect was significant and negative (-9,0%) when the hybrid DKB 333 received pollen of TORK, at normal season, and the of others crossing have not influence the pollen, showing a larger maternal effect. For the trait oil content the xenia effect showed up in two sowing season. At normal season the pollen of hybrid DKB 333B changed significantly the grains oil percentage of AG 8080 (15%) and TORK (14%). In no season crop, the pollen of P 30F80 and DKB 333B increase in 20% and 21% the oil contents of DAS 32 and P 30F80, respectively. Therefore it was... (Complete abstract, click electronic address below). / Mestre

Orientador: Eliana Morielle Versute / Banca: Shirley Maria Recco Pimentel / Banca: Guaracy Tadeu Rocha / Resumo: Para verificar a ocorrência de homologias cromossômicas entre espécies de Molossidae e Phyllostomidae (Chiroptera), foram realizadas análises comparativas do bandamento G e, hibridização in situ fluorescente genômica e telomérica nas espécies Carollia perspicillata (Carolliinae), Glossophaga soricina (Glossophaginae), P. hastatus (Phyllostominae), Sturnira lilium, Platyrrhinus lineatus e Artibeus planirostris (Stenodermatinae) de Phyllostomidae e, Molossus ater e Molossus molossus (Molossinae) de Molossidae. As análises do bandamento G evidenciaram que, à exceção de C. perspicillata, todas as demais espécies de Phyllostomidae compartilham homologias cromossômicas com as espécies de Molossidae. As espécies A. planirostris, P. lineatus e S. lilium apresentam 29 dos 32 braços cromossômicos de Molossus. Estas espécies compartilham dois cromossomos inteiros e os braços de oito cromossomos meta ou submetacêntricos destas espécies de Stenodermatinae apresentam homologias com cromossomos acrocêntricos e subtelocêntricos de Molossus. G. soricina também apresenta 29 braços cromossômicos de Molossus, sendo que três cromossomos inteiros são compartilhados e os braços de sete cromossomos de G. soricina apresentam homologias com cromossomos acrocêntricos e subtelocêntricos de Molossus. Todos os braços cromossômicos de P. hastatus apresentaram homologias com os cromossomos de Molossus. P. hastatus e Molossus compartilham cinco cromossomos inteiros e os braços de oito cromossomos de P. hastatus apresentam homologias com os cromossomos acrocêntricos e subtelocêntricos de Molossus. Estes resultados parecem sugerir uma proximidade maior das espécies de Molossidae com P. hastatus (Phyllostominae). Além de rearranjos do tipo fusões e inversões pericêntricas, outros rearranjos cromossômicos não determinados justificam as diferenças entre os cariótipos das espécies de...(Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: To verify the occurrence of chromosome homologies between species of Molossidae and Phyllostomidae (Chiroptera), comparative analysis of the G-banding and, genomic and telomeric fluorescence in situ hibridization were accomplished in the species Carollia perspicillata (Carolliinae), Glossophaga soricina (Glossophaginae), Phyllostomus hastatus (Phyllostominae), Sturnira lilium, Platyrrhinus lineatus and Artibeus planirostris (Stenodermatinae) of Phyllostomidae and, Molossus ater and Molossus molossus (Molossinae) of Molossidae. The analysis of the G-banding evidenced that except C. perspicillata all the other species of Phyllostomidae share chromosome homologies with the species of Molossidae. The species A. planirostris, P. lineatus and S. lilium present 29 of the 32 chromosome arms of Molossus. These species share two whole chromosomes and the arms of eight meta or submetacentric chromosomes of these species of Stenodermatinae present homologies with acrocentric and subtelocentric chromosomes of Molossus. G. soricina also presents 29 chromosome arms of Molossus, in a way that three whole chromosomes are shared and the arms of seven chromosomes of G. soricina present homologies with acrocentric and subtelocentric chromosomes of Molossus. All of the chromosome arms of P. hastatus presented homologies with the chromosomes of Molossus. P. hastatus and Molossus share five whole chromosomes and the arms of eight chromosomes of P. hastatus present homologies with the acrocentrics and subtelocentrics chromosomes of Molossus. These results seem to suggest a larger proximity of the species of Molossidae with P. hastatus (Phyllostominae). Besides rearrangements like fusions and pericentric inversions, other not determined chomosome rearrangements justify the differences between the karyotype of the compared species of Phyllostomidae and Molossidae. The comparative genomic hybridizations with Molossus...(Complete abstract click electronic access below) / Mestre

Resumo: A adesão longitudinal continua a representar um dos maiores desafios da Odontologia moderna. Uma nova proposta para o estabelecimento do equilíbrio da adesão aos tecidos dentários surge, baseada na observação dos resultados obtidos com a tecnologia Grander para revitalização da água. Objetiva-se com o estudo verificar a influência dessa tecnologia nas propriedades físicas de dois sistemas adesivos (convencional e autocondicionante) à partir da medição da tensão superficial e do ângulo de contato; e avaliar a formação e a qualidade da camada híbrida em dentina humana e bovina. A tensão superficial de quatro diferentes líquidos (água, Single Bond- 3M, Primer do Clearfil SE Bond -Kuraray, e Bond do Clearfil SE-Kuraray), foi medida antes e após a modificação pelo procedimento Grander em aparelho goniômetro (Ramé-hart). O ângulo de contato com três substratos distintos (placa de titânio, dentina humana e dentina bovina), foi medido para os quatro líquidos também antes e após a modificação pelo procedimento Grander, também em goniômetro. A formação e qualidade da camada híbrida, foi avaliada em MEV, a partir da confecção de corpos de prova dos substratos humano e bovino, devidamente embutidos, preparados em lixas de variada granulação até a exposição de dentina, submetidos ao procedimento adesivo (SB ou CSEB) normal ou grander modificado, recebendo ao final dupla camada de resina composta Z250-3M, fotopolimerizada por 40s. Após armazenamento em estufa bacteriológica por 24h, os procedimentos para análise ao MEV foram realizados (fixação, desidratação, secagem e metalização). A estatística de Análise de Variância ANOVA e Teste de Tukey 5% revelou que: houve redução estatisticamente significante da tensão superficial para todos os líquidos Grander modificados; houve redução estatisticamente... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: A long-lasting adhesion is still one of the biggest challenges of the modern Dentistry. A new approach to reaching the equilibrium of the adhesion to the dental tissues emerges based on the observation of the results obtained with the Grander Technology for revitalizing water. The aim of this study was to verify the influence of this technology on the physical properties of two adhesive systems (conventional and self-etching) through the measurement of the surface tension and of the contact angle and through the evaluation of the formed hybrid layer in human and bovine dentin. The surface tension of four different liquids (water, Single Bond - 3M, Clearfil SE primer - Kuraray and Clearfil SE bond - Kuraray) was measured before and after submitting these liquids to the Grander modifying unit, with the aid of a goniometer (Ramé-hart). The measurement of the contact angle of the liquids followed the same procedure using three distinct surfaces: titanium plate, human dentin and bovine dentin. The hybrid layer formed for both: non-modified and Grander modified adhesive systems, was evaluated in SEM. For this purpose human and bovine dentin samples were prepared. The teeth were fixed in acrylic resin and the dentin surfaces exposed and finished with various grit polishing paper discs. These dentin surfaces were then treated with the adhesive procedures (normal and Grander modified), before the placement of a double composite resin layer (Z250- 3M). After storage at 37oC for 24h, the SEM analysis were conducted. The data were submitted to ANOVA and Turkeys test 5%. The results showed statistically significant reduction for the surface tension of all liquids modified by the Grander technology, as well as for the contact angle in the human dentin. Statistically significant were also the results showing a thicker hybrid layer formation with the two adhesive systems when modified by the Grander... (Complete abstract click electronic access below)

Resumo: O tumor venéreo transmissível canino (TVTC) é uma neoplasia transmitida entre cães saudáveis pelo contato direto de pele e/ou mucosas lesionadas. Face aos escassos estudos relacionados aos eventos celulares envolvidos nas fases de crescimento do TVTC, o presente estudo teve por objetivo identificar a presença do gene TP53 e o RNAm referente a proteína codificada, além de detectar a expressão das proteínas p53, Bcl-2 e p63 em cortes histológicos de 13 amostras de TVTC. Com relação à evolução da neoplasia, 46% das amostras foram consideradas em fase de progressão e 54% no estágio de regressão. Foram utilizadas as técnicas de hibridização in situ (ISH) e RT-PCR in situ, que demonstrou a presença do DNA homólogo ao TP53 e seu respectivo RNAm em 92,30% das amostras. A expressão das proteínas p53, p63 e Bcl-2 foram detectadas em 50%, 70% e 100% das amostras, respectivamente. A p63 foi expressa de forma evidente nas amostras em regressão, porém a p53 e a Bcl-2 não apresentaram relação com o estágio evolutivo do tumor e provavelmente não podem ser analisados como fatores de prognóstico do TVTC. Observou-se, nesse estudo que, através das técnicas de ISH e RT-PCR in situ foi possível detectar o DNA do TP53 e seus transcritos, porém esse fato não significou a transcrição da p53, devido aos baixos níveis de expressão nas análises quantitativa e qualitativa nas amostras de TVTC / Abstract: The canine transmissible venereal tumor (CTVT) is transmitted by direct contact of skin or mucosal presenting lesions. In fact, few reports have been found describing the cellular immune response related to the evolution of the tumor. The objective of this study was to identify the TP53 gen and its transcription in CTVT in different stages of evolution, collected from dogs (N=13) examined at veterinary school, UNESP, Aracatuba, SP, Brasil. In addition, it was also evaluated the expression of p53, p63 and Bcl-2 in histological sections by the use of immunohistochemystry assay. The p53, p63 and Bcl-2 were evident in 50, 70 and 100% of analyzed samples. Regarding to tumor evolution, 6 out of 13 were considered in a progressive stage (46%), was list 7 out of 13 were classified in a regressive stage (54%). The use of in situ hybridization and reverse transcriptase polymerase chain reaction in situ (RT-PCR), revealed that TP53 was present in all samples and P63 was more expressed than p53. Take all results together, the real role of those marker are extremely important to understand the biological behavior and to improve therapeutic procedures for CTVT / Orientador: Maria Cecília Rui Luvizotto / Coorientador: Tereza Cristina Cardoso / Banca: Alexandre Lima de Andrade / Banca: Paula Rahal / Mestre

Orientador: Maria Inês M. C. Pardini / Banca: Giovanni Faria Silva / Banca: Isabel Maria Vicente Guedes de Carvalho Mello / Resumo: A identificação dos diferentes genótipos e subtipos do VHC tem sido útil para o entendimento da evolução da doença e da epidemiologia do vírus em relação a fatores de risco. Atualmente, os métodos de genotipagem assim como a região do genoma viral a ser utilizada constituem temas de discussão. O presente trabalho teve por objetivo comparar a metodologia de hibridização reversa (kit comercial INNO-LiPAÒ v1.0) ao seqüenciamento direto das regiões 5'UTR, NS5B e core do genoma do VHC. Foram utilizadas 92 amostras de plasma de pacientes do Ambulatório de Hepatites da Disciplina de Gastroenterologia Clínica da Faculdade de Medicina de Botucatu (UNESP). Dentre as 92 amostras constituintes deste trabalho, 64 foram selecionadas aleatoriamente e 28 foram escolhidas segundo a genotipagem prévia realizada com o kit INNO-LiPAÒ v.1.0. Dentre estas 28 amostras escolhidas, 10 foram genotipadas como 1a/1b, 2 como 2, 2 como 5, 7 apenas como 1 e 7 foram inconclusivas para a genotipagem com o kit comercial. A genotipagem por seqüenciamento direto foi efetuada seguindo as etapas de: extração do RNA viral, transcrição reversa, amplificação das regiões 5'UTR, NS5B e 5'UTR-core por Nested-PCR, reação de marcação fluorescente e eletroforese em aparelho automático ABI 377 (Applied Biosystems). Todas as amostras puderam ser amplificadas para a região 5'UTR e 62 para NS5B. Para as 30 amostras que não puderam ser amplificadas para NS5B foi realizada a amplificação da região 5'UTR-core que se mostrou eficiente na amplificação de 28 (93%) das amostras. A análise de seqüência permitiu uma maior precisão na classificação viral. O seqüenciamento direto foi eficaz na solução de 100% dos resultados inconclusivos pela metodologia de hibridização reversa. Assim como já reportado na literatura o kit comercial INNO-LiPAÒ v.1.0 produziu resultados errôneos com... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The HCV genotypes and subtypes identification has been useful to understand the disease evolution and viral epidemiological regarding risk factors. Recently, the genotyping methods and viral genomic region used in viral typing have been very discussed in scientific community. The goal of this study was to compare the reverse hybridization methodology and sequencing of the HCV genomic regions 5'UTR, NS5B and core. Ninety-two plasma sample with viral RNA detected from patients assisted in the Department of Internal Medicine - Gastroenterology Division, Botucatu Medical School, University of São Paulo State - UNESP were used in this study. From these 92 samples, 64 were randomly selected and 28 choose according genotyping result by reverse hybridization. The genotyping by reverse hybridization were performed with INNO-LiPAÒ v.1.0, according manufacturer's instructions. To genotyping by sequencing viral RNA isolated from plasma samples was used as a source for RT-PCR amplification and automatic sequencing in ABI 377 sequencer (Applied Biosystems). All samples were amplified to 5'UTR genomic region and 62 to NS5B. From 30 samples that showed insucess in NS5B amplification, 28 (93%) were amplified to 5'UTR-core region with efficiency. The genotyping by sequencing allowed more precision in viral classification. The sequencing showed efficient in the resolution of the 100% of cases inconclusive by reverse hybridization. The genotyping by INNOLiPA Ò v.1.0 showed wrong results in relation of viral subtyping, corroborating previous results of the scientific literature. The sequencing also demonstrated at least a change of viral genotype when compared with INNO-LiPAÒ v.1.0, result that could influence the therapeutic decision, turning questionable the INNO-LiPAÒ v.1.0 efficiency to determine the viral genotypes, too. / Mestre

Resumo: A produção in vitro (PIV) de embriões e a transferência de embriões (TE) tratam-se de biotecnologias da reprodução, as quais são rotineiramente aplicadas no melhoramento genético da espécie bovina. No entanto, resta determinar até que ponto sua utilização implica na disseminação de patógenos no rebanho. A fim de elucidar a possibilidade de transmissão do BoHV-5 através de células germinativas e/ou embriões, após exposição experimental in vitro, uma série de 3 experimentos foram realizados. Estes consistiram na exposição de oócitos, espermatozóides e embriões bovinos ao BoHV-5, tendo como critério de avaliação o desenvolvimento embrionário, bem como a detecção do vírus através de emprego da técnica de hibridização in situ (ISH) e PCR, além da apoptose, determinada pelo teste de TUNEL e pela imunomarcação dos fatores pro-apoptóticos (anexina-V, caspase-2 e -3) e antiapoptóticos (BCl-2). O experimento I foi realizado durante o período de maturação oocitária, sendo dividido em I (controle + 10% SFB), II (vírus + 10% SFB; BoHV-SFB) e III (vírus + 1 mg/mL PVA; BoHV-PVA); o experimento II foi realizado na etapa de fertilização, sendo dividido em I (controle) e II (exposto; BoHV-SPTZ); e o experimento III foi feito no período de cultura embrionária, sendo dividido em I (controle) e II (exposto; BoHV-PZ). A análise estatística para os resultados de desenvolvimento embrionário será feita pela ANOVA e teste-t de Bonferroni para os dados dos oócitos infectados e pelo teste t não pareado para os resultados de espermatozóides e embriões infectados, já para a análise da apoptose e marcadores apoptóticos será empregado o teste de Kruskal-Wallis e Dunn, diferenças serão consideradas significativas quando p<0,05. / Abstract: The in vitro production (IVP) of embryos and embryo transfer (ET) are reproduction biotechnologies, which are routinely applied in breeding bovine. However, it remains to determine if these techniques can promote spread of pathogens in the herd. In order to elucidate the possibility of transmission of BoHV-5 by germ cells and/or embryos after in vitro experimental exposure, a total of 3 experiments were performed. These consisted of exposure of oocytes, sperm and embryos to BoHV-5, with the evaluation embryonic development, and detection of the virus through use of the technique of in situ hybridization (ISH) and PCR, in addition to apoptosis, determined by TUNEL test and by immunostaining of the factors pro-apoptotic (annexin-V, caspase-2 and -3) and anti-apoptotic (Bcl-2). The first experiment was conducted during the period of oocyte maturation and was divided into I (control + 10% FBS), II (virus + 10% fetal calf serum; BoHV-SFB) and III (virus + 1 mg / ml PVA, BoHV-PVA ), the second trial was conducted at the stage of fertilization, was divided into I (control) and II (exposure, BoHV-SPTZ), and experiment III was done during the growing stage, and divided into I (control) and II (exposure; BoHV-PZ). Statistical analysis for the results of embryo development will be made by ANOVA and Bonferroni-t test to the data from exposed oocytes and the unpaired t test for the results of sperm and embryos exposed, as for the analysis of apoptosis will be used the Kruskal-Wallis and Dunn, differences are considered significant when p <0.05. / Orientadora: Tereza Cristina Cardoso / Coorientador: Alicio Martins Júnior / Banca: José Fernando Garcia / Banca: Magali D'Angelo / Mestre