Blood flukes of the genus Schistosoma are parasitic trematodes that cause schistosomiasis, a serious disease afflicting more than 240 million people. The proteolytic system of schistosomes is essential for their viability: it participates in important processes during host-parasite interactions such as food digestion, invasion and tissue migration. Thus, schistosomal proteases are promising molecular targets for therapeutic intervention in schistosomiasis treatment. The thesis focuses on the protease cathepsin B2 from S. mansoni (SmCB2) which has not been studied in detail so far in terms of biochemical properties and biological function. Recombinant SmCB2 was prepared using yeast and bacterial expression systems and was chromatographically purified. Using an in vitro activity assay, the first effective inhibitors of SmCB2 were identified which inhibited its proteolytic activity in submicromolar concentrations. Specific polyclonal antibodies against SmCB2 were prepared and used for immunomicroscopic localization of this protease on the surface of the parasite. ELISA analysis demonstrated that SmCB2 is a parasite antigen recognized by the host immune system in the mouse model of schistosomiasis. The thesis provides valuable information about SmCB2 as a potential target molecule for synthetic...

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:46:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 406137 bytes, checksum: 691c5cada5b56820bfd7b97686fb4cbc (MD5) Previous issue date: 2006-07-27 / In this study, the standard microbiological method, immuno-analysis and polymerase chain reaction - PCR were evaluated using, respectively, 135, 70 and 90 carcass samples, distributed into five different slaughter stages of a poultry slaughterhouse. The comparison of the Salmonella sp. contamination frequency among the different slaughter stages and the comparison of the detection efficiency among the three methods were evaluated, considering the possible use as a monitoring tool for the Hazard Analysis and Critical control Points program (HACCP). The whole three methods were compared by the Qui-Squared test (χ2), obtaining a value of 18.51 (p ≤ 0.01). These methods also were compared two by two, to quantify the Odds Ratio (OR). Was obtained a χ2 = 8.72 (p ≤ 0.01), when were compared the positive results of the immuno-analysis and the Standard Microbiological ones; and the OR calculated was 3.34 (IC: 1.36 8.32). When comparing the positive results of PCR and the standard microbiological ones, were obtained χ2 of 18.37 (p ≤ 0.01) and OR = 4.83 (IC: 2.13 11.15). The same didn t happen when comparing the PCR and immuno-analysis methods. These, comparing to the standard microbiological technique, were considered more efficient e suitable methods for utilization as monitoring tools for HACCP. The slaughter stage localized after the chiller (Point E) shows itself as the most suitable as a critical control point, because it was less contaminated and takes over a strategic position at the end of the slaughter line. / Foram avaliados neste estudo os métodos convencional, imunoanalítico e por reação de polimerase em cadeia PCR para a pesquisa de Salmonella sp. em, respectivamente, 135, 70 e 90 amostras de carcaças de frangos, distribuídas em cinco diferentes etapas de abate em um abatedouro. Procedeu-se a comparação da freqüência de detecção de Salmonella sp. das carcaças nas diferentes etapas de abate, e da eficiência de detecção dos três métodos, visando a indicação de método alternativo para o monitoramento no programa de Análise de Perigos e Pontos Críticos de Controle (APPCC). Os resultados foram comparados pelo teste do Qui-quadrado (χ2), obtendo um valor 18,51 (p ≤ 0,01) na análise conjunta dos três métodos avaliados. Tais métodos também foram comparados, dois à dois, para a quantificação das chances de detecção de cada um pela Razão de Chances ou Odds Ratio (OR). Obteve-se um χ2 = 8,72 (p ≤ 0,01), comparando-se os resultados positivos obtidos pelo sistema imunoanalítico com os do método microbiológico convencional, sendo a OR igual a 3,34 e Intervalo de Confiança (IC) entre 1,36 e 8,32. Também houve diferença estatística com um χ2 de 18,37 (p ≤ 0,01) entre os resultados positivos totais da PCR e do método microbiológico convencional, sendo a OR igual a 4,83 (IC: 2,13 - 11,15). O mesmo não ocorreu entre os métodos PCR e imunoanalítico. Estes dois, quando comparados com a microbiologia convencional, foram considerados mais eficientes e adequados para a utilização em monitoramento no APPCC. A etapa de abate localizada após o pré-resfriamento (ponto E) foi considerada a mais adequada como ponto crítico de controle por apresentar a menor contaminação e por assumir uma posição estratégica no final da linha de abate.

Made available in DSpace on 2015-03-26T13:51:52Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 738414 bytes, checksum: 553ba8cf81504abac249e2eb5a629a5d (MD5) Previous issue date: 2008-06-18 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The use of Reference Material (RM) in microbiological food analyses increased around the world, mainly with the introduction of quality control and management programs in laboratories. The necessity of the standardization of analysis methods makes the demand for this type of material increase which allows the determination of precision and repeatability of the experimental data. This study aimed to prepare microbiological RMs for quantitative and qualitative analyses of Salmonella, to evaluate the homogeneity and stability of the material during storage time and to compare the sensitivity of the Salmonella detection methods. The study was performed in two stages. The first with RM containing approximately 103 CFU/ g of Salmonella cells, submitted or not to starvation and storage conditions, up until 240 days, at -20 °C. The second stage consisted of the RM preparation containing approximately 10 CFU/ g for comparison of the methodology sensibility of Salmonella detection in food. The RM homogeneity and stability containing approximately 103 CFU/ g was evaluated through the T1 statistical test, analysis of linear regression and proficiency test, while the RM performed with a low number of Salmonella cells was evaluated by the T2 statistical test and by the Epiinfo program of the Center for Disease Control (CDC) of the USA for the evaluation of the detection methods of Salmonella in this material. The T1 statistical test for the RM prepared with 103 CFU/ g demonstrated superior values to the recommended ones for this type of material, which indicated the necessity for new studies for the improvement of the Salmonella resistance to the dehydration and storage conditions. However, the same material presented itself homogeneous in the proficiency test performed by three different laboratories, when the σp value was obtained until 25 % as recommended by the Food Examination Performance Assessment Scheme (FEPAS) of the United Kingdom. In the linear regression analysis, no significant difference was noted between the RMs produced with and without stressed cells, in spite of the decline tendency of the number of Salmonella cells in the material made without stressed cells being obvious after 240 storage days at -20 °C. For the RM prepared with 10 CFU/ g, the T2 statistical test presented acceptable results, after 60 storage days at 4 °C. One gram servings of this RM were evaluated by three analytical methodologies which included the conventional method, the immunoanalytical method VIDAS® and automated PCR, by the BAX system. The results were consistent in all the analyzed samples in the first two methods, with a Kappa rate equal to 1. The PCR method presented an agreement in approximately 95 % to the conventional methodology, with a Kappa rate equal to 0.64. False-negative results were observed in 5% of the analyzed samples, when the PCR method was used. However, this result does not compromise the technique sensibility. This study demonstrated advantages of the quick methodology use of Salmonella detection in food, which offers, besides greater speed and practicality forgetting results, similar sensitivity to the conventional method recommended by Brazil´s Ministry of Agriculture. / A utilização de Material de Referência (MR) na análise microbiológica de alimentos aumentou em todo o mundo, principalmente com a implantação de programas de controle e gestão da qualidade em laboratórios. A necessidade de padronização de métodos de análise faz aumentar a demanda por este tipo de material que permite determinar a precisão e repetibilidade dos dados experimentais. Este estudo teve como objetivo preparar MRs microbiológicos para análises quantitativa e qualitativa de Salmonella, avaliar a homogeneidade e estabilidade ao longo do tempo de estocagem e comparar a sensibilidade dos métodos de detecção de Salmonella. O estudo foi conduzido em duas etapas, a primeira com MR contendo, aproximadamente, 103 UFC/ g de células de Salmonella, submetidas ou não a condições de estresse nutricional e estocadas, por até 240 dias, a -20 °C. A segunda etapa consistiu no preparo de MR contendo, aproximadamente, 10 UFC/ g para comparação da sensibilidade das metodologias de detecção de Salmonella em alimentos. A homogeneidade e a estabilidade do MR contendo, aproximadamente, 103 UFC/ g foram avaliadas por meio do teste estatístico de T1, análise de regressão linear e ensaio de proficiência, enquanto que o MR feito com baixo número de células de Salmonella foi avaliado pelo teste estatístico de T2 e por meio do programa Epiinfo do Centro de Prevenção e Controle de Doenças dos EUA (CDC) para avaliação dos métodos de detecção de Salmonella neste material. O teste estatístico de T1 para o MR preparado com 103 UFC/ g demonstrou valores superiores aos recomendados para este tipo de material, o que indicou a necessidade de realização de novos estudos para melhoria da resistência de Salmonella às condições de desidratação e de estocagem. No entanto, o mesmo material apresentou-se homogêneo no ensaio de proficiência realizado por três diferentes laboratórios, obtendo-se o valor de σp de até 25 % como recomendado pelo Esquema de Avaliação de Desempenho na Análise de Alimentos do Reino Unido (FEPAS). Na análise de regressão linear constatou-se não haver diferença significativa entre os MRs produzidos com e sem células estressadas, apesar de ter sido evidente a tendência de declínio do número de células de Salmonella no material feito sem células estressadas, após 240 dias de estocagem a -20 °C. Para o MR preparado com 10 UFC/ g, o teste estatístico de T2 evidenciou resultados aceitáveis, após 60 dias de estocagem a 4 °C. Porções de 1 g deste MR foram avaliadas por três metodologias analíticas que incluíram o método convencional, o método imunoanalítico VIDAS® e PCR automatizado, pelo sistema BAX. Os resultados foram concordantes em todas as amostras analisadas nos dois primeiros métodos, com índice de Kappa igual a 1. O método de PCR apresentou concordância em aproximadamente 95 % com a metodologia convencional, com índice de Kappa igual a 0,64. Resultados falso-negativos foram observados em 5 % das amostras analisadas, quando utilizado o método de PCR, no entanto, este resultado não compromete a sensibilidade da técnica. Neste trabalho foram destacadas as vantagens do uso de metodologias rápidas de detecção de Salmonella em alimentos, que oferecem além de maior rapidez e praticidade para obtenção dos resultados, sensibilidade semelhante ao método convencional recomendado pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento do Brasil.