Made available in DSpace on 2014-06-12T15:49:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2008 / Um animal imunocomprometido tem dificuldade de se restabelecer depois de sofrer uma injúria. Lectina de sementes de Parkia pendula, PpeL, foi usada como tratamento de lesões cutâneas, com o objetivo de alcançar menores efeitos colaterais, considerando seu potencial cicatrizante. O metotrexato (0.8 mg/kg/semana) foi usado como uma droga imunossupressora. Uma ferida cirúrgica foi produzida (1 cm2) na região dorsal em camundongos albinos suíços (Mus musculus), fêmeas normais e imunossuprimidas. Feridas foram tratadas diariamente com administração tópica de 100 μL das seguintes soluções: Grupo 1 - NaCl 0.15 M; Grupo 2 - imunossuprimido NaCl 0.15 M; Grupo 3 - PpeL (100 μg/ mL) ; Grupo 4 - imunossuprimido PpeL (100 μg/ mL). Foram usados parâmetros clínicos tais como, edema, hiperemia, crosta, tecido de granulação e cicatricial, como também contrações das feridas analisadas durante 12 dias. Biópsias para a análise histopatológica e exames microbiológicos foram realizadas após 2º, 7º e 12º dias. Observou-se a presença de edema e hiperemia em todos os grupos durante o período inflamatório. A primeira crosta foi observada a partir do segundo dia somente nos grupos tratados com PpeL. A análise microbiológica das lesões revelou que nos dias 0 e 2, o grupo 3 não apresentou Staphylococcus sp., entretanto foi observada a presença da bactéria nos outros grupos todos os dias. O uso da lectina também diminuiu a área da ferida, ocorrendo reepitelização total dos grupos 3 e 4 no 11º dia de evolução, enquanto os grupos controles alcançaram o fechamento das lesões no 12º dia. O presente estudo sugere que PpeL é um potencial biomaterial que apresenta evidência farmacológica preliminar no processo de reparo de lesões cutâneas

O extrato de Ascaris suum (Asc total), preparado a partir de uma mistura de vermes machos e fêmeas (albergando ovos), suprime a resposta imune específica a ovalbumina (OA). A partir do fracionamento deste extrato por gel filtração demonstrou-se que componentes protéicos de alto peso molecular (PM), eluídos no primeiro pico (PI), eram supressores da resposta a OA e os eluídos no terceiro pico (PIII) estimularam uma resposta maior de anticorpos IgE anti-Asc. Uma resposta do tipo Th2 foi preferencialmente estimulada por este extrato, sendo as citocinas IL-4 e IL-10 atuantes na supressão dos parâmetros da resposta anti-OA mediados por células Th1. Em algumas espécies de helmintos a resposta Th2 é estimulada de forma estágio-específica. Assim, analisamos neste trabalho quais dos componentes do Asc total seriam responsáveis pelo efeito supressor. Verificamos que os extratos dos vermes adultos apresentaram perfis cromatográficos semelhantes ao do extrato total. O perfil cromatográfico do Asc O foi distinto, com um segundo pico (PII) mais evidente e apresentou um quarto pico de menor PM. O fracionamento eletroforético confirmou uma concentração de proteínas com PM entre 107 e 52 kDa e a presença de proteínas adicionais entre 27,2 e 19 kDa neste extrato. Os extratos de vermes e dos ovos suprimiram a resposta imune celular específica a OA, avaliada por reações de hipersensibilidade tardia, resposta proliferativa de células de linfonodos drenantes e secreção de citocinas por estas células. A produção de anticorpos IgG1 e IgG2a anti-OA foi também diminuída acentuadamente pelos mesmos extratos. Observamos, ainda, que as citocinas predominantes na resposta aos extratos dos vermes e dos ovos foram diferentes, com maior secreção de IL-4 e IL-10 nos primeiros e IFN-g no segundo. Com relação às diferentes frações do Asc O, a produção de anticorpos IgE anti-OA foi suprimida por componentes de PI e PIII, enquanto que os de PII estimularam a síntese maior de IgE anti-Asc O. Os componentes de PIV não tiveram nenhum efeito. Nossos resultados indicam que o efeito supressivo do Asc total é uma propriedade que pode ser atribuída aos vermes machos e fêmeas. No entanto, o extrato preparado a partir dos ovos também apresenta este efeito, o qual parece ser mediado por mecanismos diferentes. / The extract of Ascaris suum (whole Asc), prepared from male and female worms (with stored eggs) suppress the specific immune response to ovalbumin (OA). This extract was fractionated by gel filtration and high and low molecular weight (MW) proteins were obtained in the first (PI) and third peak (PIII), respectively. PI suppressed the OA-specific cellular and humoral responses and PIII stimulated more anti-Asc IgE antibodies. The whole Asc stimulated a Th2 response predominantly, with high levels of IL-4 and IL-10. These cytokines had an important role in the down-regulation of the Th1 response to OA. In some helminthic infections the Th2 response is stimulated by specific stages of the life cycle. Thus, in this work we investigated which components of whole Asc were responsible for immunosuppression. The worm extracts presented similar chromatographic profiles. The profile of Asc O was distinct, with the second peak being more evident and showing a fourth peak with much lower MW components. By polyacrylamide gel electrophoresis we observed a high concentration of proteins between 107 and 52 kDa. In addition, some bands between 27,2 and 19 kDa were only present in this extract. The extracts from worms and eggs suppressed the cell-mediated immune response to OA, measured by delayed-type hypersensitivity, proliferative response of draining lymph node cells and cytokine secretion. The anti-OA IgG1 and IgG2a antibody production were as drastically reduced by these extracts. The cytokines IL-4 and IL-10 were mainly secreted in response to worm extracts, whereas the egg extract stimulated more IFN-g. Regarding the different fraction of Asc O, PI and PIII components diminished the anti-OA IgE antibody production, whereas PII components stimulated higher anti-Asc O IgE synthesis. PIV components did not display any effect. Our results indicate that the immunosuppressive effect of whole Asc is due to male and female body components. However, extracts prepared from eggs do also display this effect, that seems to be mediated by different mechanisms.

Orientador: Angelica Zaninelli Schreiber / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas / Made available in DSpace on 2018-08-04T03:53:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Alves_PatriciaConceicao_M.pdf: 5237202 bytes, checksum: 7eddb31b7f4d22513ad78a658f396585 (MD5) Previous issue date: 2004 / Resumo: Levando em consideração as características terciárias do Hospital das Clínicas da UNICAMP, com uma grande população de pacientes imunossuprimidos, conhecer a epidemiologia e o perfil de suscetibilidade dos principais patógenos rungicos isolados, seria de grande valia. De janeiro de 1999 a dezembro de 2003, 3.926 cepas de Candida spp, foram isoladas de 3.297 pacientes. C.albicans foi a espécie mais freqüente com 64,4% dos isolados, seguida por C. tropicalis (11,8%), C.glabrata (10,8%) e C.parapsilosis (6,5%). Cepas de C. albicans foram mais isoladas de escarro (34,8%), urina (20,5%), lavado brônquico (11,6%) e swab perineal (8,3%). C. parapsilosis foi mais relacionada a cateteres (10,0%) e hemoculturas (24,1%), enquanto C.tropicalis (35,0%) e C.glabrata (50,00,10) foram mais fteqüentes em urina. Estes dados revelam as espécies mais prevalentes e a necessidade do conhecimento de sua suscetibilidade aos antifúngicos em uso, se não para nortear a terapia, ao menos como guia para terapêutica empírica. No presente estudo, 175 cepas de Candida isoladas a partir de culturas de sangue, cateter e urina: foram submetidas ao teste de suscetibilidade ftente a anfotericina B, fluconazol, cetoconazol e itraconazol pelas técnicas NCCLS e EUCAST, para comparação estatística das CIMs obtidas. Tornando-se a concordância exata entre as 2 metodologias, os melhores resultados foram obtidos para C. parapsilosis frente a itraconazol (88,57%) e cetoconazol (85,71%). Com diferenças de até 1 diluição, resultados acima de 90% de concordância, foram obtidos para C.krusei frente a anfotericina B (97,14%) e fluconazol (94,2%), C.glabrata frente a itraconazol (97,14%) e C.parapsilosis frente a itraconazol (100,0%) e cetoconazol (91,4%). Com até 2 diluições de diferença 100% de concordância foi obtida frente a anfotericina B para todas as espécies avaliadas; para itraconazol frente a C.glabrata, C.krusei e C.tropicalis; para cetoconazol, frente a C.parapsilosis e C.krusei e para fluconazol frente a C.glabrata, C.krusei e C.tropicalis.. Pôde-se observar que, para a maioria das drogas avaliadas, as CIMs mais altas foram obtidas com a metodologia NCCLS e que os testes realizados com as cepas de C.parapsilosis foram os que apresentaram mais resultados homogêneos entre as metodologias. De acordo com o documento NCCLS M27 A2, as cepas avaliadas foram classificadas quanto à sua suscetibilidade, para as duas metodologias empregadas. Frente ao fluconazol, os resultados foram bastante concordantes, exceto para C. krusei, onde a metodologia NCCLS apontou cepas mais resistentes. Para itraconazol, de modo geral, a metodologia NCCLS apontou cepas mais resistentes. Frente a anfotericina B as cepas menos sensíveis foram observadas pela metodologia NCCLS, com exceção da C.albicans. Assim, em nossa instituição, no período avaliado, o índice de resistência das cepas isoladas frente ao fluconazol foi de 6,8%,para metodologia NCCLS e de 5,1% para EUCAST; frente ao itraconazol foi de 32,6% para metodologia NCCLS e de 31,4% para o EUCAST e frente a anfotericina B foi de 23,4% para NCCLS e de 9,1% para EUCAST. De modo geral, os dados de sensibilidade e resistência são compatíveis com os relatados na literatura consultada. Finalmente, um procedimento mais adequado à rotina de um laboratório de microbiologia, utilizaria leitura espectrofotométrica, após 24 e 48 h de incubação, em placas de fundo chato, de testes realizados pela metodologia NCCLS / Abstract: Considering the tertiary characteristics of the Clinical Hospital of the State University of Campinas, with a large number of immunocompromised patients, it would be very important to know the susceptibility pattem from the fungal pathogens. From anuary 1999 to December 2003,3926 Candida strains were isolated from3297 patients. C.albicans was the most frequent species with 64, 4%, followed by C. tropicalis (11, 8%), C.glabrata (10, 8%) and C.parapsilosis (6,5%). C. albicans strains were mosdy isolated Itomsputum (34,8%), urine (20,5%), bronchoalveolar lavage (11,6%) and perinea swab (8,3%). C. parapsilosis was more related to catheters (10,0%) and blood cultures (24,1%), while C.tropicalis (35,0%) and C.glabrata (50,0%) were frequent in urine. This data showed the most prevalent species and the necessity to know their susceptibility pattem to current in use antifungal drugs. In this work, 175 Candida strains isolated from blood, catheter and urine were submitted to antifungal susceptibility tests to amphotericin B, fluconazole, ketoconazole and itraconazole by NCCLS and EUCAST methodologies, for statistical comparison of MICs. Exact agreement of the two methodologies was obtained for 88,57% of C. parapsilosis strains when testing itraconazole and ketoconazole (85,71%). Until 1 dilution and results over 90% of agreement were obtained for C.krusei when testing amphotericin B (97,14%) and fluconazole (94,2%), C.glabrata tested with itraconazole (97,14%) and C.parapsilosis with itraconazole (100,0%) and ketoconazole (91,4%). With until 2 dilutions difference 100% agreement was obtained for all evaluated strains with amphotericin B, C.glabrata, C.krusei and C.tropicalis with itraconzole, C.parapsilosis and C.krusei with ketoconazole; C.tropicalis, C.krusei and C.glabrata for fluconazole For the most drugs evaluated, higher MICs were observed with NCCLS methodology. C.parapsilosis strains showed, in general the best results. According to the NCCLS M27 A2 document all strains, testes by the two methodologies, were classified by their susceptibility. Results shoed good agreement for fluconazole, except for C.krusei strains, pointed as more resistant by NCCLS. The same happened with all strains when testing itraconazole. Also for amphotericin B less sensible strains were pointed by NCCLS with exception to C.albicans. So, in our institution, in the evaluated period, the resistance tax for fluconazole was 6,8% by NCCLS and 5,1% by EUCAST; for itraconazole was 32,6% by NCCLS and 31,4% by EUCAST and for amphotericin B 23,4% by NCCLS and 9,1% by EUCAST. In general, this data of susceptibility are compatible with literature relates. And finally, a routine performing test would be very good if utilize spectrophotometric lectures after 24 and 48h incubation, in flat microtitulation plates of NCCLS methodology tests / Mestrado / Ciencias Biomedicas / Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Márcia Marinho / Banca: Luzia Helena de Queiroz / Banca: Simone Baldini Lucheis / Resumo: Foram acompanhados 310 parturições de receptoras, com embriões fertilizados in vivo (FV) e in vitro (FIV) da raça Nelore, para determinar os índices de partos distócicos em receptoras meio sangue das raças Braford/Nelore, Hereford/Nelore, Simental/Nelore, Red Angus/Nelore, Nelore e anelorados, com idade entre três e seis anos, assim como avaliar o estado de saúde dos bezerros obtidos por intermédio de transferência de embriões, resultantes das técnicas de fertilização in vivo (FV) ou fertilização in vitro (FIV). Observou-se a ocorrência de 38 partos distócicos (38/310) e oito abortos (8/310), dos quais cinco fetos eram oriundos da técnica de fertilização in vivo (FV) e três da técnica de fertilização in vitro (FIV). A taxa de mortalidade em animais neonatos foi de 3,4% (10/290). Os bezerros nascidos de partos distócicos mais duradouros, entre quatro e seis horas, apresentaram os maiores valores médios de freqüência respiratória. A temperatura retal foi mais elevada em animais nascidos de partos laboriosos do que naqueles nascidos de partos normais. / Abstract: Cryptococcosis is an opportunistic fungal infection caused by Cryptococcus yeasts, especially C. neoformans and Cryptococcus gattii, which may be associated with immunosuppression or not. The fungus is found in substrates of animal and vegetable origin, and infection occurs through inhalation and seedlings present in the environment. The present study aimed to investigate the existence of microfocus Cryptococcus sp. from the environmental samples Araçatuba city, São Paulo, featuring new niches, by decoupling the direct relationship between fungus and host. in order to minimize the risk of contamination of man and animals, understanding the ecoepidemiology of Cryptococcus. Samples 50 originated from hollow logs and trees (Cassia sp., Ficus sp. and Caesalpinea peltophorides) of ten point the urban perimeter points. The samples were immediately sent to the Laboratory of Bacteriology and Mycology, Faculty of Veterinary Medicine Araçatuba - Unesp where they were processed and plated on Petri dishes containing agar seed Niger and Sabouraud dextrose agar with chloramphenicol, incubated at 30ºC for a period not less than 5 days. Colonies yeast growth were analyzed considering the macro and micro morphological compatible gender Cryptococcus, and later peaked in Niger agar, grown in time and above temperature and subjected to biochemical tests: urease production, thermotolerance at 37°C and quimiotipagem in CGB agar (L- Canavanine, Glinica bromothymol blue). The results showed that 17 (34%) cultures were positive for Cryptococcus, and 9 (18% ) were Cryptococcus gattii and 8 (16%) for Cryptococcus neoformans. Other yeast correlated as Rhodotorula sp. and Candida sp. were isolated. For these reasons, we conclude that the infectious propagules of Cryptococcus are dispersed in nature constitute environmental microfocus, not necessarily being bound to a single host / Mestre

Orientador: Luís Gustavo Modelli de Andrade / Banca: André Luíz Balbi / Banca: Silvana Molina / Banca: Lilian Monteiro Pereira / Banca: Marilda Mazzali / Resumo: Introdução: Os receptores de transplante de órgãos sólidos apresentam elevada incidência de não adesão medicamentosa. Existem poucos estudos de intervenção com abordagens visando o aumento da adesão. Objetivo: Avaliar o impacto da estratégia educacional e comportamental na adesão de transplantados renais no período dos três primeiros meses após o transplante. Métodos: Estudo prospectivo de pacientes incidentes em transplante renal. Os pacientes foram randomizados em dois grupos: Grupo controle de orientações usuais da equipe médica e grupo intervenção de orientações usuais somadas à educação complementar (orientações sobre a importância dos imunossupressores e modificações comportamentais com duração de 30 minutos). A adesão foi avaliada pelo questionário de adesão ITAS ao fim de três meses. Foram avaliadas a função renal aos 3, 6 e 12 meses e a incidência de rejeição. Resultados: A não adesão foi de 46,4% no grupo controle e 14,5% no grupo de tratamento (p=0,001). O razão de chance para não adesão foi 2,59 (IC: 1,38 - 4,88) vezes maior no grupo controle. A análise multivariada mostrou que pertencer ao grupo controle aumentou o risco de não adesão em 5,84 vezes (IC: 1,8 - 18,8, p=0,003). Não houve diferenças na função renal e nas taxas de rejeição entre os grupos. Conclusão: A não adesão é elevada nos três primeiros meses do transplante. A estratégia comportamental e educativa objetivando maior esclarecimento da importância do uso dos imunossupressores aumentou significantemente à adesão a terapia imunossupressora / Abstract: Not available / Doutor

A sepse é uma síndrome de resposta inflamatória sistêmica decorrente de um processo infeccioso, a qual acarreta alta taxa de mortalidade. Relatos da literatura tem demonstrado que pacientes e animais de experimentação que sobrevivem à sepse desenvolvem quadro de imunossupressão tardia, o qual contribui com a maior sucetibilidade destes a infecções secundárias. Nosso grupo demonstrou que as células T reguladoras (Tregs) participam ativamente do desenvolvimento desta imunossupressão. O Fator de Necrose Tumoral (TNF) é uma citocina pleotrópica responsável por diversas funções durante a resposta inflamatória, apresentando dois receptores responsáveis pelas suas atividades: o TNFR1 e o TNFR2. Foi demonstrando que o TNF exerce um importante papel na atividade de Tregs, induzindo a proliferação, estabilização do fenótipo e aumentando sua atividade imunossupressora, sugerindo que tais atividades sejam atribuidas ao TNFR2. Desta forma, nosso objetivo foi avaliar a participação dos receptores de TNF no desenvolvimento da imunossupressão pós-sepse. Para isso animais WT, TNFR1-/- e TNFR1/2 -/- foram submetidos à sepse grave, induzida por CLP e tratados com um suporte básico (reposição hidríca e antibioticoterapia). Inicialmente avaliamos a participação dos receptores de TNF na fase aguda da sepse. Demonstramos que nesta fase os receptores de TNF, principalmente TNFR1, apresentam um papel prejudicial na migração de neutrófilos, no controle do processo infeccioso e nas lesões de orgãos decorrentes da sepse. Posteriormente, os animais sobreviventes foram infectados com um dose subletal de L. pneumophila i.n 15 dias após a CLP. Avaliamos a participação dos receptores TNF na sucetibilidade à infecção secundária induzida por L. pneumophila em animais sobreviventes à sepse. Observamos que animais TNFR1-/- sobreviventes à sepse são mais suscetíveis, ao passo que animais TNFR1/2-/- sobreviventes à sepse são resitentes à infecção secundária em relação aos animais WT sobreviventes à sepse. Avaliamos então, a expansão de Tregs no baço destes animais sobreviventes à sepse e, observamos que animais TNFR1-/- apresentam aumento da expansão de Tregs, ao passo que os animais TNFR1/2-/- não apresentaram expansão de Tregs comparados ao WT. Observamos também que as Tregs apresentam maior densidade de receptores de TNF do que as células T convencionais e, que durante a sepse ocorre aumento da densidade destes receptores nas Tregs. Sugerimos então que possivelmente o TNFR1 seja um regulador negativo, enquanto o TNFR2 possa assumir um papel na regulação positiva na expansão de Tregs após a sepse, durante o desenvolvimento da imunossupressão. / Sepsis is a systemic inflammatory response syndrome resulting from infectious process, resulting in high mortality rate. It has been shown that septic mice and patients that survived from sepsis develop a late immunosuppression, which contributes to greater susceptibility to these secondary infections. Our group has shown that regulatory T cells (Tregs) actively participate in the development of this immunosuppression. The Tumor Necrosis Factor (TNF) is pleiotropic cytokine responsible for several processes in the inflammatory response. Two receptors are responsible for the various activities of TNF: TNFR1 and TNFR2. It have shown that TNF plays an important role in the activity of Tregs, inducing proliferation, stabilization of phenotype and increasing their immunosuppressive activity. The authors also suggested that these activities are TNFR2-mediated. Thus, our objective was to evaluate the role of TNF receptors in the acute phase of sepsis and also in the development of immunosuppression post-sepsis. For that, TNFR1-/ -, TNFR1/2 -/ - and WT mice were underwent to severe sepsis induced by CLP and treatment with basic support (hydration and antibiotics). Initially we evaluated the participation of TNF receptors in the acute phase of sepsis. We suggest that at this stage the TNF receptor, TNFR1 mainly exert a deleterious role in the migration of neutrophils in control of the infectious process and the tissue damage resulting from sepsis. In addition, the survivors from the septic event were intranasaly infected with L. pneumophila in the 15th day after sepsis induction. We evaluated the participation of these receptors in susceptibility to secondary infection induced by L. pneumophila in survivors from sepsis. Comparing the animals that survived from sepsis, we observed that TNFR1/2-/- , like WT mice, are not susceptible to the secondary infection, while TNFR1-/- survivors are more susceptible to it. We also observed that TNFR1-/ - animals show increased expansion of Tregs in the spleen, different of TNFR1/2-/- mice, that did not show expansion of Tregs compared to WT. We also observed Tregs have a higher density of receptors for TNF than conventional T cells, whereas during sepsis occurs increased expression of this receptor in Tregs. Altogether, the results suggest that TNFR1 is a negative regulator, whereas TNFR2 may play a role in the upregulation during expansion of Tregs, in development of sepsis-induced imunossupression.

Orientador: Milton Artur Ruiz / Banca: Flavia Cristina Rodrigues Lisoni / Banca: Rubens Camargo Siqueira / Resumo: O transplante de células tronco hematopoéticas (TCTH) constitui uma importante opção terapêutica para pacientes com doenças onco-hematológicas, autoimunes e alguns tumores sólidos; caracteriza-se pela infusão intravenosa de células progenitoras hematopoéticas com o objetivo de restabelecer a função medular e imunológica. No entanto, esse procedimento requer imunossupressão o que favorece o desenvolvimento de complicações, principalmente infecciosas, as quais frequentemente se manifestam ou se originam na cavidade bucal podendo ser causadora de infecções sistêmicas. O estado de saúde bucal do paciente submetido ao TCTH tem sido considerado como um fator que interfere diretamente no grau de morbimortalidade. A mucosite representa o principal fator de risco para as infecções sistêmicas e está entre as complicações de maior relevância. Uma vez que existe uma relação direta entre inflamação crônica e muitas doenças emergentes, tem se destacado o estudo da melatonina (MEL), um hormônio fabricado pela glândula pineal, que pode ser capaz de proteger não somente a cavidade bucal, mas todo o organismo dos radicais livres produzidos por processos inflamatórios e infecciosos. O objetivo deste estudo foi avaliar a prevalência e os fatores de risco desencadeadores das infecções odontogênicas, lesões da mucosa oral, estabelecendo um índice de complicações orais (ICO-TCTH) e sua relação com a concentração de melatonina extraída da saliva dos pacientes, doenças de base e tipo de transplante;... / Abstract: Hematopoietic stem cell transplantation (HSCT) is an important therapeutic option for patients with onco-hematological, autoimmune and some solid tumors; It is characterized by the intravenous infusion of hematopoietic progenitor cells with the objective of restoring the medullary and immunological function. However, this procedure requires an effect of complications, mainly infectious, how often they manifest or originate in the oral cavity and can be the cause of systemic infections. The state of oral health of patients submitted to HSCT has been considered as a factor that directly interferes with the degree of morbidity and mortality. Mucositis represents the main risk factor for systemic infections and is among the most relevant complications. Since there is a direct relationship between chronic inflammation and many emerging diseases, a melatonin (MEL) is a hormone made by the pineal gland, which may be able to protect not only an oral cavity, but the entire body of free radicals produced by processes Inflammatory and infectious.The objective of this study is to evaluate the prevalence and risk factors of odontogenic infections, lesions of the oral mucosa, to meet the oral complications index (ICO-HSCT) and to relate it to the concentration of melatonin extracted from the patient's saliva, Underlying diseases and type of transplant presenting an oral cavity treatment plan that may interfere with no transplant success; One might advocate this hormone as a prognostic ... / Mestre

Hamsteres infectados com Leishmania (L.) chagasi são considerados um dos melhores modelos para estudo de fatores relacionados à imunossupressão que ocorre durante a leishmaniose visceral ativa, pois apresenta manifestações clínicas similares ao que ocorre no homem e não conseguem controlar a infecção. Neste estudo, hamsteres infectados intraperitonealmente com 2x107 parasitos foram utilizados para avaliação de possíveis fatores envolvidos na dinâmica da imunossupressão. Os parâmetros avaliados foram a produção de citocinas de padrão Th1 e Th2, produção de óxido nítrico por células esplênicas e detecção de apoptose em linfócitos esplênicos em tempos precoces (6, 20, 48 e 72 horas), intermediários (7 e 15 dias) e tardios (30 e 60 dias) de infecção. Inicialmente avaliamos a carga parasitária no baço e observamos aumento progressivo dependente do tempo de infecção, ratificando que hamster infectado é um bom modelo para desenvolvimento de doença. A resposta celular frente a mitógeno e antígeno de Leishmania foi o parâmetro utilizado para avaliação de imunossupressão. Observamos resposta preservada à concanavalina A em todos os tempos de infecção e resposta preservada ao antígeno de Leishmania nos tempos precoces, porém com ausência de resposta antígeno específica a partir do tempo de 7 dias de infecção. A quantificação de óxido nítrico foi determinada em sobrenadante de células esplênicas de cultura estimuladas com concanavalina A e antígeno de Leishmania, pelo método de Griess. Observamos inicialmente baixo nível de produção de óxido nítrico em todos os tempos de infecção, no entanto quando as células foram estimuladas com antígeno de Leishmania observamos níveis ainda menores nos tempos de 48 e 72 horas de infecção. O perfil de citocinas produzido foi determinado pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa, sendo detectado RNA mensageiro tanto de citocinas Th1, quanto Th2 em todos os tempos de infecção (precoce, intermediária e tardia), em células ex-vivo e estimuladas; e também em animais controles não infectados; não havendo um padrão de dicotomização de produção de citocinas neste modelo experimental. Detecção de apoptose em células esplênicas não aderentes (prováveis linfócitos T) ex-vivo e em cultura estimuladas com concanavalina A e antígeno de Leishmania foi avaliada pelos seguintes métodos: Anexina V, caspase 3 clivada e TUNEL por citometria de fluxo. Houve marcação da exposição de fosfatidil serina pelo método da anexina V, nos tempos de 6 horas de infecção, quando as células foram estimuladas com mitogeno ou antígeno de Leishmania; e com 48 horas e 60 dias de infecção somente quando estimuladas com antígeno de Leishmania. Em células esplênicas em cultura estimuladas com concanavalina não houve marcação de caspase 3 clivada, porém em células esplênicas ex-vivo nos tempos 20, 48 e 72 horas de infecção houve detecção de apoptose, definida por marcação de caspase 3 clivada. A marcação de células esplênicas não aderentes para quebra de DNA foi baixa em todos os tempos analisados, porém observamos aumento de marcação em células esplênicas não aderentes, estimuladas com antígeno nos tempos de 20 horas e posteriormente de 7 dias até 60 dias de infecção. Nossos resultados sugerem que a imunossupressão na leishmaniose visceral no modelo de hamsteres infectados com Leishmania (L.) chagasi é antígeno dependente e instala-se nos tempos intermediários de infecção, a partir de 7 dias. Esta imunossupressão parece estar relacionada com aumento de apoptose em linfócitos já nos tempos precoces de infecção, que pode favorecer a progressão da infecção, por ocorrer principalmente em células esplênicas antígenos reativas. Nossos dados sugerem ainda, que a imunossupressão não é decorrente da dicotomização da produção de citocinas Th1 e Th2 / Hamsters infected by Leishmania (L.) chagasi are considered one of the most remarkable models to study several characteristics related to immunosuppression, raised during active visceral leishmaniasis especially because hamsters show similar clinical manifestations as it is found in humans without surmounting the infection. In this study, hamsters infected intraperitoneally with 2x107 parasites were used to evaluate the possible factors involved in the dynamic of immunosuppression that occurs during the disease development. The evaluated parameters were the production of Th1 and Th2 cytokines profile, nitric oxide production of splenic cells and detection of apoptosis in splenic lymphocytes at early (6,20, 48 e 72 hours), intermediate (7 e 15 days) and late times (30 e 60 days) of infection. Initially, we evaluate the parasite load in the spleen and observed a progressive increase dependent on the time of infection, ratifying that infected hamsters are good models to set up the disease development. Cellular response upon mitogen or Leishmania antigen was the parameter used to evaluate the immunosuppression showing a preserved response to concanavalin A at all period of infection and a preserved response to the Leishmania antigen at all early phases however with no specific antigen response from 7 day of infection until the late phase of infection. Nitric oxide quantification was determined in the splenic cells supernatant in culture stimulated upon concanavalin A and Leishmania antigen and we observed initially low level of nitric oxide production, measured by the Griess method. Nonetheless, when the cells were stimulated upon Leishmania antigen we observed a lower level nitric oxide production at 48 and 72 hours of infection. mRNA of Th1 e Th2 cytokines profile was determined by RT-PCR at all period of infection studied in infected or non infected hamsters showing no difference at the cytokine profile in this experimental model. Detection of apoptosis in the non adherent splenic cells (probably T lymphocytes) ex-vivo and in the stimulated culture with concanavalin A and Leishmania antigen was evaluated by the following methods: annexin V-FITC, cleaved caspase 3 and TUNEL by flow cytometry analysis. There was phosphatidilserine staining by annexin method, at 6 hour of infection when cells were stimulated by mitogen or Leishmania antigen at 48 hours and 60 days of infection only when stimulated by Leishmania antigen. Splenic cells in culture stimulated by concanavalin A showed no cleaved caspase 3 staining in all period of infection studied. Otherwise, apoptosis was detected in the ex-vivo splenic cells at 20, 48 and 72 hours of infection by cleaved caspase 3 staining. We observed a low DNA break staining of non adherent splenic cells in all period analyzed, although this staining was increased in non adherent cells stimulated upon Leishmania antigen at 20 hours from 7 day of infection until 60 day of infection. Our results suggest that a visceral leishmaniasis immunosuppression in the hamsters model infected by Leishmania (L.) chagasi is antigen dependent and sets up in the intermediate phases of infection from 7 days on. This immunosuppression seems to be related to the apoptosis increase in lymphocytes already in the early period of infection probably favoring its progression especially because of its occurrence in reactive splenic antigen. Our data also suggest that the immunosuppression is not provided by dichotomization in the Th1 and Th2 cytokines profile

Orientador: Áureo Evangelista Santana / Coorientadora: Annelise Carla Camplesi / Banca: Marco Antônio de Andrade Belo / Banca: Thiago Demarchi Munhoz / Resumo: A quimioterapia metronômica é uma estratégia de uso crescente em Medicina Veterinária, que emprega fármacos em baixas doses e por longos períodos de tempo para controlar o crescimento tumoral. Objetivou-se avaliar os efeitos tóxicos de dois quimioterápicos antineoplásicos em animais livres de tumores seguindo esquemas metronômicos, assim como os efeitos residuais uma vez que a terapia foi suspensa. Para tanto, foram empregados 54 ratos Wistar, divididos em 3 grupos de tratamento de 18 animais cada, que receberam doses baixas de ciclofosfamida (CPX), metotrexato (MTX) ou placebo (grupo controle, CTR), via oral, por meio de gavage, durante 45 dias. Os animais tiveram acompanhamento periódico para pesagem e monitoramento clínico e do consumo de alimento e água. Realizou-se eutanásia em seis animais de cada grupo aos 30 (M1), 45 (M2) e 60 dias (M3), para coleta de amostras para hemograma, bioquímica sérica, citologia de medula óssea e análise histopatológica de baço, fígado, rim, intestino, pulmão, coração, cérebro e artéria. Empregou-se o teste de Qui-quadrado para análise estatística das variáveis não paramêtricas e o teste T-student para amostras não pareadas ou uma ANOVA seguida de uma comparação múltipla de Tukey para as variáveis paramêtricas. Seis animais do grupo CPX morreram, portanto a terapia foi suspensa aos 30 dias de tratamento, mantendo o período de observação até 45 dias. Os animais tratados com CPX exibiram significativa redução de peso e do consumo de alimento e... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Metronomic chemotherapy is a growing strategy in veterinary medicine that uses low doses of antineoplastic drugs for sustained periods of time to control tumor growth. This work aimed to evaluate toxic effects of metronomic chemotherapy schemes in tumor-free animals, and residual toxicity once treatment was suspended. There were used 54 healthy Wistar rats, divided in 3 groups (18 animals each), that received low-doses of cyclophosphamide (CPX), methotrexate (MTX) or placebo (control group, CTR) by oral gavage during 45 days. Clinical alterations, body weight, water and food intake were monitored periodically. Euthanasia was practiced within 6 animals from each group at 30 (M1), 45 (M2) and 60 days (M3) to perform hematological, biochemical and histopathologic analysis (spleen, liver, kidney, gut, lung, heart, brain and artery), and bone marrow cytology. An unpaired T-student test or a one-way ANOVA in conjunction with a Tukey multiple comparison test were done to analyze parametrical data, as a Chi-square test for semi-quantitative parameters. Six animals treated with CPX died and therapy was suspended at 30 days, within 15 days of observation after withdrawal. CPX treated animals exhibited significant reduction of weight gain, water and food intake (p<0.05), and clinical alterations related to respiratory and neuromuscular involvement, which even persisted after CPX withdrawal. At M1, significant neutrophil augmentation and reduction of leukocytes, lymphocytes and albumin was predominant in blood, as bone marrow reduction of lymphocytes, plasmatic cells and mature erythroid populations were significantly prevalent (p<0.05). At M2, only higher neutrophils count and reduction of lymphocytes persisted, as depletion of mature erythroid populations (p<0.05). MTX treated animals only evidenced mild to moderate (Complete abstract click electronic access below) / Mestre

A sepse é uma síndrome de resposta inflamatória sistêmica decorrente de um processo infeccioso, a qual acarreta alta taxa de mortalidade. Relatos da literatura tem demonstrado que pacientes e animais de experimentação que sobrevivem à sepse desenvolvem quadro de imunossupressão tardia, o qual contribui com a maior sucetibilidade destes a infecções secundárias. Nosso grupo demonstrou que as células T reguladoras (Tregs) participam ativamente do desenvolvimento desta imunossupressão. O Fator de Necrose Tumoral (TNF) é uma citocina pleotrópica responsável por diversas funções durante a resposta inflamatória, apresentando dois receptores responsáveis pelas suas atividades: o TNFR1 e o TNFR2. Foi demonstrando que o TNF exerce um importante papel na atividade de Tregs, induzindo a proliferação, estabilização do fenótipo e aumentando sua atividade imunossupressora, sugerindo que tais atividades sejam atribuidas ao TNFR2. Desta forma, nosso objetivo foi avaliar a participação dos receptores de TNF no desenvolvimento da imunossupressão pós-sepse. Para isso animais WT, TNFR1-/- e TNFR1/2 -/- foram submetidos à sepse grave, induzida por CLP e tratados com um suporte básico (reposição hidríca e antibioticoterapia). Inicialmente avaliamos a participação dos receptores de TNF na fase aguda da sepse. Demonstramos que nesta fase os receptores de TNF, principalmente TNFR1, apresentam um papel prejudicial na migração de neutrófilos, no controle do processo infeccioso e nas lesões de orgãos decorrentes da sepse. Posteriormente, os animais sobreviventes foram infectados com um dose subletal de L. pneumophila i.n 15 dias após a CLP. Avaliamos a participação dos receptores TNF na sucetibilidade à infecção secundária induzida por L. pneumophila em animais sobreviventes à sepse. Observamos que animais TNFR1-/- sobreviventes à sepse são mais suscetíveis, ao passo que animais TNFR1/2-/- sobreviventes à sepse são resitentes à infecção secundária em relação aos animais WT sobreviventes à sepse. Avaliamos então, a expansão de Tregs no baço destes animais sobreviventes à sepse e, observamos que animais TNFR1-/- apresentam aumento da expansão de Tregs, ao passo que os animais TNFR1/2-/- não apresentaram expansão de Tregs comparados ao WT. Observamos também que as Tregs apresentam maior densidade de receptores de TNF do que as células T convencionais e, que durante a sepse ocorre aumento da densidade destes receptores nas Tregs. Sugerimos então que possivelmente o TNFR1 seja um regulador negativo, enquanto o TNFR2 possa assumir um papel na regulação positiva na expansão de Tregs após a sepse, durante o desenvolvimento da imunossupressão. / Sepsis is a systemic inflammatory response syndrome resulting from infectious process, resulting in high mortality rate. It has been shown that septic mice and patients that survived from sepsis develop a late immunosuppression, which contributes to greater susceptibility to these secondary infections. Our group has shown that regulatory T cells (Tregs) actively participate in the development of this immunosuppression. The Tumor Necrosis Factor (TNF) is pleiotropic cytokine responsible for several processes in the inflammatory response. Two receptors are responsible for the various activities of TNF: TNFR1 and TNFR2. It have shown that TNF plays an important role in the activity of Tregs, inducing proliferation, stabilization of phenotype and increasing their immunosuppressive activity. The authors also suggested that these activities are TNFR2-mediated. Thus, our objective was to evaluate the role of TNF receptors in the acute phase of sepsis and also in the development of immunosuppression post-sepsis. For that, TNFR1-/ -, TNFR1/2 -/ - and WT mice were underwent to severe sepsis induced by CLP and treatment with basic support (hydration and antibiotics). Initially we evaluated the participation of TNF receptors in the acute phase of sepsis. We suggest that at this stage the TNF receptor, TNFR1 mainly exert a deleterious role in the migration of neutrophils in control of the infectious process and the tissue damage resulting from sepsis. In addition, the survivors from the septic event were intranasaly infected with L. pneumophila in the 15th day after sepsis induction. We evaluated the participation of these receptors in susceptibility to secondary infection induced by L. pneumophila in survivors from sepsis. Comparing the animals that survived from sepsis, we observed that TNFR1/2-/- , like WT mice, are not susceptible to the secondary infection, while TNFR1-/- survivors are more susceptible to it. We also observed that TNFR1-/ - animals show increased expansion of Tregs in the spleen, different of TNFR1/2-/- mice, that did not show expansion of Tregs compared to WT. We also observed Tregs have a higher density of receptors for TNF than conventional T cells, whereas during sepsis occurs increased expression of this receptor in Tregs. Altogether, the results suggest that TNFR1 is a negative regulator, whereas TNFR2 may play a role in the upregulation during expansion of Tregs, in development of sepsis-induced imunossupression.