Le virus Epstein-Barr (EBV) est un virus herpès oncogène causant la mononucléose infectieuse et est associé à différents types de cancer d'origine épithélial et lymphoïde. Nous avons précédemment démontré que EBV peut infecter et se répliquer dans les monocytes humains. Suite à cette infection, plusieurs fonctions importantes du monocyte s'en trouvent affectées, dont la phagocytose, la biosynthèse de prostaglandine E2 et la production de TNF-oc et d'IFN-a. Il est bien connu que l'IFN de type I (IFN-a/(3) est un puissant médiateur antiviral qui est rapidement sécrété par les cellules infectées lors des stades précoces de l'infection. OBJECTIFS Ce projet vise à caractériser le(s) mécanismes(s) affectant la production d'IFN-a par les monocytes humains infectés par le virus EBV en étudiant notamment la cascade d'activation des protéines JAKs et STATs. MÉTHODES Nous avons évalué l'effet de l'infection des monocytes humains par EBV sur l'activation des facteurs de transcription IRF-3 et IRF-7, sur les protéines de la cascade des JAKs-STATs Qakl, Tyk2, Statl et Stat2) ainsi que sur les protéines SOCS. RÉSULTATS L'activation des protéines IRF-3 et IRF-7 n'est pas affectée, puisqu'il a été possible d'observer une translocation nucléaire de ces facteurs de transcription suite à l'infection par EBV. Cependant, la boucle d'amplification de la voie des JAKs-STATs est supprimée suite à l'inhibition de la phosphorylation de Statl. Le mécanisme d'inhibition de la synthèse d'IFN-a par le virus EBV dans les monocytes humains implique l'activation de la protéine SOCS-3. CONCLUSION Ce projet permet d'approfondir nos connaissances sur les mécanismes immunosuppresseurs mis en œuvre par EBV afin de supprimer les fonctions monocytaires. / Epstein-Barr virus (EBV) is an oncogenic herpesvirus recognized as the causative agent of infectious mononucleosis and is associated with several human malignancies. We have recently provided evidences that human monocytes were permissive to EBV infection and replication. Following infection, EBV can affect various cellular functions of monocytes, such as phagocytosis, biosynthesis of prostaglandins E2 and production of TNF-a and IFN-a. The type I interferon System (IFN-a/p) represents an important elements of host defence against ail kinds of pathogens, mainly viruses. Following infection, virus-infected cells rapidly produce and secrete IFN-a/p. OBJECTIVES The present work aims to determine the mechanism affecting the IFN-a production by the EBV-infected monocytes, in particular by the study of the JAK-STAT pathway. METHODS We examined the effect of EBV infection in monocytes on IRF-3 and IRF-7 nuclear accumulation, on JAKs and STATs proteins activation (Jakl, Tyk2, Statl and Stat2), and on SOCS proteins expression. RESULTS The IRF-3 and IRF-7 activation is not affected, since it was possible to observe a nuclear translocation of these transcription factors following EBV infection. However, the positive-feedback loop of the JAK-STAT pathway was found to be affected by the inhibition of Statl phosphorylation. The mechanism of IFN-a inhibition in EBV-infected monocytes involves the SOCS-3 protein activation. CONCLUSION Further description of EBV inhibitory mechanisms on monocytes immune functions would certainly improve our understanding of the role of these cells in the early stages of EBV pathogenesis.

Le ciblage de l’activité de l’IFNα est une stratégie développée afin d’augmenter l’index thérapeutique de cette cytokine, dont l’efficacité requiert de fortes doses au site d’action, responsables d’une toxicité systémique. Du fait de l’expression ubiquitaire de son récepteur, le ciblage de l’IFNα par immunocytokine est limité. En se basant sur le concept d'immunocytokine et utilisant un IFNα muté, peu actif, une efficacité de ciblage de 3 log a pu être obtenue, dans le système humain et murin, grâce au rétablissement de l'activité de l'IFNα sur les cellules ciblées. Ces IFNα ciblés sont doués d'une activité biologique, notamment antitumorale, dont la cible cellulaire reste à déterminer. Une stratégie inverse, en cours d'optimisation, permet d'inhiber l’activité des IFN-I spécifiquement sur les cellules ciblées. Cette double stratégie de ciblage de l’activité et de l’inhibition de l’IFN devrait permettre de déterminer les cibles des effets bénéfiques et néfastes des IFN-I, avec des applications thérapeutiques éventuelles. / Targeting IFN activity is a strategy developed to increase the therapeutic index of thiscytokine, whose efficiency requires high doses to site of action, responsible for systemictoxicity. Due to the ubiquitous expression of its receptor, the targeting efficiency of IFNbasedimmunocytokine is limited. Using a mutated IFNα, poorly active, a 3 log targetingefficiency was achieved, in the human and mouse system, by restoring the activity of IFNα ontargeted cells. The biological activity of these targeted IFNα include an antitumoral effect,the cellular target remains to be determined. A reverse strategy being optimized, can inhibitIFN-I activity specifically on targeted cells. This dual targeting strategy of the activity andinhibition of IFN should identify the targets of beneficial and deleterious effects of IFN-I,with possible therapeutic applications.

Les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) sont des cellules dendritiques spécialisées, aussi connues sous le nom de cellules productrices d’interféron-α (IFN-α). Les pDC jouent un rôle essentiel dans l’induction de la réponse immunitaire antivirale, en reconnaissant les antigènes viraux via les Toll-like receptors (TLR) 7 et 9. Toutefois, les pDC du sang de cordon sont incapables de produire de l’IFN-α en réponse à une stimulation du TLR9, mais leur maturation en cellules présentatrices d’antigènes est normale. Dans le cadre de ce travail, nous nous sommes intéressés aux effets des facteurs immuno-régulateurs sécrétés par le placenta sur la différenciation et la fonction des pDC. Nous avons analysé l’effet, seules ou en combinaison, de la progestérone (PG), de l'interleukine (IL)-10 et du tumor growth factor (TGF)-β sur la différenciation et la fonction des pDC. Nous démontrons qu’à des niveaux supra-physiologiques ces trois facteurs modulent la différenciation et la production d’IFN-α des pDC. À des niveaux observés dans le sang de cordon, ces facteurs ont peu d’impact sur les pDC lorsque utilisés individuellement. Toutefois lorsque utilisés en combinaison, ils diminuent la production d’IFN-α. Nous avons aussi démontré que la PG, l’IL-10 et le TGF-β n’induisent pas l’expression des micro-ARN 146a et 155 par les pDC. Finalement nous démontrons que les niveaux de ces molécules sont plus élevés dans le sang de cordon que dans le sang d’adulte. Nos résultats révèlent le rôle important des facteurs immuno-régulateurs sécrétés par le placenta sur la fonction des pDC et en conséquence, sur la réponse immunitaire fœtale et néonatale. / Plasmacytoid dendritic cells (pDC) are specialized dendritic cells, also known as IFN-α producing cells. pDC are key inducers of immune responses following viral infections, by detecting viral antigens through the Toll-like-receptors (TLR) 7 and 9. Although cord blood pDC are unable to produce IFN-α after stimulation, they retain their capacity to mature into antigen presenting cells. To gain insights into the mechanisms of pDC regulation in cord blood, we investigated the effects of immune regulators secreted by the placenta on the differentiation and function of pDC. Using in vitro differentiated pDC, we analyzed the effect of progesterone (PG), IL-10 and TGF-β, separately or in combination, on pDC differentiation and activation. The data revealed that supra-physiological concentrations of these three factors could individually impair pDC differentiation and IFN-α production. Physiological concentrations of PG, IL-10 or TGF-β, individually, had low impact on pDC while in combination they were able to modulate IFN-α production. We also showed that PG, IL-10 or TGF-β failed to induce the expression of micro-RNA 146a and 155 in pDC. Lastly, our results indicated that PG, IL-10 and TGF-β were present at high levels in cord blood as compared to adult blood. These results, therefore, shed new light on the synergy of immune regulators secreted by the placenta and their impact on foetal and neonatal immune responses.

Les cellules dendritiques plasmacytoïdes (pDC) sont des cellules dendritiques spécialisées, aussi connues sous le nom de cellules productrices d’interféron-α (IFN-α). Les pDC jouent un rôle essentiel dans l’induction de la réponse immunitaire antivirale, en reconnaissant les antigènes viraux via les Toll-like receptors (TLR) 7 et 9. Toutefois, les pDC du sang de cordon sont incapables de produire de l’IFN-α en réponse à une stimulation du TLR9, mais leur maturation en cellules présentatrices d’antigènes est normale. Dans le cadre de ce travail, nous nous sommes intéressés aux effets des facteurs immuno-régulateurs sécrétés par le placenta sur la différenciation et la fonction des pDC. Nous avons analysé l’effet, seules ou en combinaison, de la progestérone (PG), de l'interleukine (IL)-10 et du tumor growth factor (TGF)-β sur la différenciation et la fonction des pDC. Nous démontrons qu’à des niveaux supra-physiologiques ces trois facteurs modulent la différenciation et la production d’IFN-α des pDC. À des niveaux observés dans le sang de cordon, ces facteurs ont peu d’impact sur les pDC lorsque utilisés individuellement. Toutefois lorsque utilisés en combinaison, ils diminuent la production d’IFN-α. Nous avons aussi démontré que la PG, l’IL-10 et le TGF-β n’induisent pas l’expression des micro-ARN 146a et 155 par les pDC. Finalement nous démontrons que les niveaux de ces molécules sont plus élevés dans le sang de cordon que dans le sang d’adulte. Nos résultats révèlent le rôle important des facteurs immuno-régulateurs sécrétés par le placenta sur la fonction des pDC et en conséquence, sur la réponse immunitaire fœtale et néonatale. / Plasmacytoid dendritic cells (pDC) are specialized dendritic cells, also known as IFN-α producing cells. pDC are key inducers of immune responses following viral infections, by detecting viral antigens through the Toll-like-receptors (TLR) 7 and 9. Although cord blood pDC are unable to produce IFN-α after stimulation, they retain their capacity to mature into antigen presenting cells. To gain insights into the mechanisms of pDC regulation in cord blood, we investigated the effects of immune regulators secreted by the placenta on the differentiation and function of pDC. Using in vitro differentiated pDC, we analyzed the effect of progesterone (PG), IL-10 and TGF-β, separately or in combination, on pDC differentiation and activation. The data revealed that supra-physiological concentrations of these three factors could individually impair pDC differentiation and IFN-α production. Physiological concentrations of PG, IL-10 or TGF-β, individually, had low impact on pDC while in combination they were able to modulate IFN-α production. We also showed that PG, IL-10 or TGF-β failed to induce the expression of micro-RNA 146a and 155 in pDC. Lastly, our results indicated that PG, IL-10 and TGF-β were present at high levels in cord blood as compared to adult blood. These results, therefore, shed new light on the synergy of immune regulators secreted by the placenta and their impact on foetal and neonatal immune responses.

Le but de ce travail a été d’étudier l’implication de la réponse immunitaire innée au cours du lupus érythémateux systémique (LES) et de la polyarthrite rhumatoïde (PR). Dans le LES humain, nous montrons que les plaquettes sont activées par les complexes immuns circulants (CICs) et que le CD154 dérivé des plaquettes activées participe avec les CICs à la sécrétion aberrante par les cellules dendritiques d’interféron alpha, cytokine fondamentale dans la physiopathologie du LES. Dans deux modèles murins nous démontrons qu’inhiber l’activation plaquettaire améliore significativement les paramètres lupiques et la survie suggérant que l’activation plaquettaire pourrait constituer une nouvelle cible thérapeutique. Les cytokines inflammatoires tiennent un rôle central dans la physiopathologie de la PR mais les déterminants de leur production restent mal connus. Des polymorphismes du facteur de transcription interferon regulatory factor 5 (IRF5) sont associés au risque de développer une PR. Dans un modèle murin, nous montrons que l’inactivation du gène codant pour IRF5 améliore la maladie. IRF5 étant impliqué dans la signalisation des TLRs, nous mettons alors en évidence in vivo que l’inactivation des voies de signalisation des Toll-like récepteurs (TLRs) TLR3 et TLR7, récepteurs pour les ARN, améliore la maladie. Nous démontrons in vitro un effet synergique dépendant d’IRF5 de ces TLRs pour la production de cytokines inflammatoires. Enfin les souris invalidées pour la signalisation combinée des TLR3 et TLR7 sont spectaculairement épargnées par la maladie suggérant ainsi un rôle clé pour les ligands ARN endogènes dans la pathogénie de la PR. Ces données démontrent l’importance des mécanismes immunitaires innés dans la physiopathologie des maladies auto-immunes systémiques, apportant ainsi de nouvelles voies de recherche thérapeutiques. / The aim of the present sudy was to investigate the involvement of the innate immune system in the pathogenesis of systemic lupus erythematosus (SLE) and rheumatoid arthritis (RA), two models of systemic autoimmune diseases. We show that in SLE patients, platelets are activated by circulating immune complexes. Activated platelet derived CD154 enhances interferon alpha production by immune complex-stimulated dendritic cells in a CD154/CD40 dependent manner. In lupus prone mice, we show that targeting platelet activation improves all measures of disease and overall survival suggesting that this process may provide a new therapeutic target. Proinflammatory cytokines play a central role in the pathogenesis of RA. Gain-of-function polymorphisms in the transcription factor interferon regulatory factor 5 (IRF5) are associated with an increased of developping RA. We now show that IRF5 deficiency substantially reduces disease in a mouse model of RA. As IRF5 participates in TLR signaling, we evaluated TLR requirements in this model and found a significant réduction in disease severity in mice deficient in signaling through the RNA-sensing TLR3 and TLR7. In vitro studies show that TLR3 and TLR7 synergize for proinflammatory cytokine production and that this synergy is markedly diminished in the absence of IRF5. Notably, mice with combined deficiency of TLR3 and TLR7 signaling developed minimal disease indicating an important role for endogenous RNA ligands in disease pathogenesis. Our results bring new elements in the comprehension of the role of innate immunity in the pathogenesis of systemic autoimmune diseases and provide new therapeutic targets.