Made available in DSpace on 2014-06-11T19:32:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2003-02-27Bitstream added on 2014-06-13T20:03:28Z : No. of bitstreams: 1 chinelatofernandes_ar_dr_sjrp.pdf: 1322818 bytes, checksum: 5673b5d99bc2a10651970c0e6fbd4eb1 (MD5)

Submitted by Leticia Schettini (leticia@ufrrj.br) on 2017-03-17T13:12:34Z No. of bitstreams: 1 2001 - Marilene Alvares.pdf: 614893 bytes, checksum: ca3d3b41579b663ff4afa2939a0a892f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-17T13:12:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2001 - Marilene Alvares.pdf: 614893 bytes, checksum: ca3d3b41579b663ff4afa2939a0a892f (MD5) Previous issue date: 2001-08-15 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The habromatids biology and their patogenies have abready been well studied. But not na efficient technique has been developed, or peridically tested for the diagnosis of the gastric habronemiasis in equidae. Has been proposed the compation of two techniques: the UENO (1986) technique and UENO & GUTIERRES (1983), modified and the xenodiagnostic technique. On the Ueno (modified) technique to recuperate first stage larvae, has been used fecal examples of 3g and 5g, with 3 repetitions for each. From each example has been taken 0,3 ml of the sediment, divided in three microscope slides and then the slides were observed though the light microscope for counting the larvae number of Habronema spp. or Drashia megastoma. To the xenodiagnostic, larvae of Musca domestica and Stomoxys calcitrans (Muscidae: Diptera) were inoculated in the equidae feces and then were kept in the laboratory. The adults muscoids0 were dissected and the third stage larvae of the nematodes were saved and counted. The adults nematodes were colected from the stomach of 35 equidae then fixed in AFA and preserved in alcohol 70% for later identification. The comparative analysis were based on the linear correlation. The comparation of the determination rates indicated that there weren?t significative difference on the recuperation of larvae on the Ueno (modified) technique, with the two different examples weights and the xenodiagnostic technique. The Ueno (modified) technique utilizing 3g and 5g of feces had the same index of determination, 73%. The test t analysis showed no significant difference between the three slides on the Ueno technique observation. While the xenodiagnostic technique got a determination rate of 79,1%, when utilizing only M. domestica and the two especies of females of Habronema spp. And the determination index of 81,3% when utilizing M. domestica and females of Habronema muscae based on the linear correlation. / A biologia das Habronemat?neos e suas patogenias j? foi bem estudada. No entanto, nenhuma t?cnica coprosc?pica eficiente foi desenvolvida e rotineiramente testada para o diagn?stico da habronemose g?strica em eq??deos. Foi proposta a compara??o de duas t?cnicas: a t?cnica de UENO (1968) e UENO & GUTIERRES (1983) modificada e a t?cnica do xenodiagn?stico. Na t?cnica de Ueno (modificada) para recupera??o da larva de primeiro est?gio, foi utilizado amostras contendo 3g e 5g de fezes, com tr?s reparti??es para cada amostra de fezes. De cada amostra foi retirado 0,3 ml de sedimento, dividindo em tr?s l?minas sendo levado ao microsc?pio ?tico para contagem do n?mero de larvas de Habronema spp. ou Drashia megastoma. Para o xenodiagn?stico, larvas de Musca domestica e Stomoxys calcitrans (Muscidae: Diptera) foram inoculadas nas fezes dos eq??deos e mantidos em laborat?rio. Os musc?deos adultos foram dissecados e as formas de terceiro est?gio dos nemat?ides recuperados e contados. Os nemat?ides adultos foram coletados do est?mago de 35 eq??deos, fixados em AFA e conservados em ?lcool a 70%, para posterior identifica??o. A an?lise comparativa foi baseada na regress?o linear. A compara??o dos ?ndices de determina??o indicaram n?o haver diferen?a significativa na recupera??o de larvas na t?cnica de Ueno (modificada), com os dois diferentes pesos de amostras de fezes e a t?cnica do xenodiagn?stico. A t?cnica de Ueno (modificada) utilizando 3g e 5g de fezes obteve o mesmo ?ndice de determina??o 73%. A an?lise do teste t demonstrou n?o existir diferen?a significativa entre as tr?s l?minas na leitura da t?cnica de sedimenta??o. Enquanto a t?cnica do xenodiagn?stico obteve o ?ndice de determina??o de 79,1% quando utilizado apenas M. domestica para realiza??o desta, e as duas esp?cies de f?meas de Habronema spp. e o ?ndice de determina??o de 81,3% quando utilizado M. domestica e f?meas de Habronema muscae como base da regress?o linear.

Submitted by Leticia Schettini (leticia@ufrrj.br) on 2017-04-27T14:24:12Z No. of bitstreams: 1 2001 - Marilene Alvares.pdf: 614893 bytes, checksum: ca3d3b41579b663ff4afa2939a0a892f (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T14:24:12Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2001 - Marilene Alvares.pdf: 614893 bytes, checksum: ca3d3b41579b663ff4afa2939a0a892f (MD5) Previous issue date: 2001-09-13 / Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES / The habromatids biology and their patogenies have abready been well studied. But not na efficient technique has been developed, or peridically tested for the diagnosis of the gastric habronemiasis in equidae. Has been proposed the compation of two techniques: the UENO (1986) technique and UENO & GUTIERRES (1983), modified and the xenodiagnostic technique. On the Ueno (modified) technique to recuperate first stage larvae, has been used fecal examples of 3g and 5g, with 3 repetitions for each. From each example has been taken 0,3 ml of the sediment, divided in three microscope slides and then the slides were observed though the light microscope for counting the larvae number of Habronema spp. or Drashia megastoma. To the xenodiagnostic, larvae of Musca domestica and Stomoxys calcitrans (Muscidae: Diptera) were inoculated in the equidae feces and then were kept in the laboratory. The adults muscoids0 were dissected and the third stage larvae of the nematodes were saved and counted. The adults nematodes were colected from the stomach of 35 equidae then fixed in AFA and preserved in alcohol 70% for later identification. The comparative analysis were based on the linear correlation. The comparation of the determination rates indicated that there weren?t significative difference on the recuperation of larvae on the Ueno (modified) technique, with the two different examples weights and the xenodiagnostic technique. The Ueno (modified) technique utilizing 3g and 5g of feces had the same index of determination, 73%. The test t analysis showed no significant difference between the three slides on the Ueno technique observation. While the xenodiagnostic technique got a determination rate of 79,1%, when utilizing only M. domestica and the two especies of females of Habronema spp. And the determination index of 81,3% when utilizing M. domestica and females of Habronema muscae based on the linear correlation. / A biologia das Habronemat?neos e suas patogenias j? foi bem estudada. No entanto, nenhuma t?cnica coprosc?pica eficiente foi desenvolvida e rotineiramente testada para o diagn?stico da habronemose g?strica em eq??deos. Foi proposta a compara??o de duas t?cnicas: a t?cnica de UENO (1968) e UENO & GUTIERRES (1983) modificada e a t?cnica do xenodiagn?stico. Na t?cnica de Ueno (modificada) para recupera??o da larva de primeiro est?gio, foi utilizado amostras contendo 3g e 5g de fezes, com tr?s reparti??es para cada amostra de fezes. De cada amostra foi retirado 0,3 ml de sedimento, dividindo em tr?s l?minas sendo levado ao microsc?pio ?tico para contagem do n?mero de larvas de Habronema spp. ou Drashia megastoma. Para o xenodiagn?stico, larvas de Musca domestica e Stomoxys calcitrans (Muscidae: Diptera) foram inoculadas nas fezes dos eq??deos e mantidos em laborat?rio. Os musc?deos adultos foram dissecados e as formas de terceiro est?gio dos nemat?ides recuperados e contados. Os nemat?ides adultos foram coletados do est?mago de 35 eq??deos, fixados em AFA e conservados em ?lcool a 70%, para posterior identifica??o. A an?lise comparativa foi baseada na regress?o linear. A compara??o dos ?ndices de determina??o indicaram n?o haver diferen?a significativa na recupera??o de larvas na t?cnica de Ueno (modificada), com os dois diferentes pesos de amostras de fezes e a t?cnica do xenodiagn?stico. A t?cnica de Ueno (modificada) utilizando 3g e 5g de fezes obteve o mesmo ?ndice de determina??o 73%. A an?lise do teste t demonstrou n?o existir diferen?a significativa entre as tr?s l?minas na leitura da t?cnica de sedimenta??o. Enquanto a t?cnica do xenodiagn?stico obteve o ?ndice de determina??o de 79,1% quando utilizado apenas M. domestica para realiza??o desta, e as duas esp?cies de f?meas de Habronema spp. e o ?ndice de determina??o de 81,3% quando utilizado M. domestica e f?meas de Habronema muscae como base da regress?o linear.

Orientador: Claudia Regina Bonini-Domingos / Banca: Paulo César Naoum / Banca: Carlos Roberto Ceron / Banca: Luiz Carlos de Mattos / Wilson Araújo da Silva Júnior / Doutor

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:24:45Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-02-27Bitstream added on 2014-06-13T19:11:25Z : No. of bitstreams: 1 souza_avg_me_botfm.pdf: 5208360 bytes, checksum: d0caf95e74fc05f32950a4bbcec4f765 (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O Vírus Sincicial Respiratório humano (VSR) é o principal agente causal das Infecções Respiratórias Agudas (IRAs) em lactantes e pré-escolares. Apresenta dois subgrupos – A e B – sendo o primeiro responsável por quadros clínicos mais graves. Os RNA mensageiros virais codificam 11 proteínas conhecidas, das quais a proteína F é responsável pela fusão viral à célula e se apresenta na forma de F0 com peso molecular de 67kDa, podendo ser clivada em duas unidades: F2 de 20kDa e a F1 de 47kDa. A proteína F recombinante (Fr), expressa em E.coli (BL21A no vetor pET28a), foi cedida por pesquisadores da UNESP de São José do Rio Preto. Com intuito de produzir anticorpos monoclonais contra a proteína Fr para fins de diagnóstico laboratorial, inoculamo-la em camundongos isogênicos Balb/c. Durante o desenvolvimento do monoclonal, foi necessário a eliminação da contaminação de cultura por Mycoplasma ssp. Após ajuste de dose de inoculação e descontaminação do antígeno (hipótese: contaminação com endotoxinas provenientes de E.coli), seis clones secretores de anticorpos monoclonais foram produzidos (5 do tipo IgM e 1 do tipo IgG2a) e testados, simultâneamente, contra toxina bacteriana e proteína Fr (40μg/mL) por técnica de ELISA indireto. Paralelamente, testes por citometria de fluxo foram realizados, incubando-se os clones obtidos com E.coli (bactéria com membrana permeabilizada e in natura). Os clones (VIRSV2-87A74 e VIRSV2-87A80) apresentam um reconhecimento inespecífico de proteínas da E. coli e não foi possível caracterizar os clones obtidos em função da dificuldade de se obter novas amostras de proteína Fr. Para o futuro, os anticorpos obtidos deverão ser marcados com isotiocinato de fluoroceína e comporem um amplo teste epidemiológico em paralelo com o kit disponível em mercado respeitando a sazonalidade da doença. Novos ensaios para caracterização... / The Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) is the main cause of Acute Respiratory Insufficiency in suckling child and children below 5 years old. It has 2 subgroups – A and B – being the first one responsible for more dangerous clinical situations. The viral messenger RNA codifies 11 known proteins, which the F protein is responsible for the viral fusion and it is presented as F0 with molecular weight of 67kDa, but once is broke it generates two units: F2 with 20kDa and F1 with 47kDa. The recombinant F (Fr) protein were expressed on E.coli (BL21A, on vector pET28a), and it was given to us by researches from UNESP of São José do Rio Preto. Wishing to produce monoclonal antibodies (Mab) against Fr protein to laboratorial diagnosis, mice (Balb/c) were inoculated with de antigen (Fr protein). During the development of the Mab, it was necessary to eliminate, from the culture, Mycoplasma spp. After we adjusted the necessary amount to inoculate on the mice and eradicated the contamination of the antigen (hypotheses: there were endotoxins from the E.coli), six clones that secrete Mab were produced (5 of the kind IgM, and 1 of the kind IgG2a) and they were tested, simultaneously, against bacterium toxin and Fr protein (40μg/mL) using ELISA technique. Together, flow cytometry test were performed when we incubated the clones with E. coli (bacterium with permeable membrane and in natura). The clones (VIRSV2-87A74 and VIRSV2-87A80) presented an unspecific recognition for the proteins from E.coli and it was not possible to characterize the cells because we couldn´t get more samples of Fr protein. For the future, the Mab should be conjugated with FITC and then, they must be part of a wide epidemiologic test side by side from the commercial kit, always respecting the seasonal disease. New assays to characterize antibodies (like Western blotting and imunepreciptation) are already being done... (Complete abstract click electronic access below)

Orientador: Elenice Deffune / Banca: Mirthes Ueda / Banca: Rejane Tommasini Grotto / Resumo: O Vírus Sincicial Respiratório humano (VSR) é o principal agente causal das Infecções Respiratórias Agudas (IRAs) em lactantes e pré-escolares. Apresenta dois subgrupos - A e B - sendo o primeiro responsável por quadros clínicos mais graves. Os RNA mensageiros virais codificam 11 proteínas conhecidas, das quais a proteína F é responsável pela fusão viral à célula e se apresenta na forma de F0 com peso molecular de 67kDa, podendo ser clivada em duas unidades: F2 de 20kDa e a F1 de 47kDa. A proteína F recombinante (Fr), expressa em E.coli (BL21A no vetor pET28a), foi cedida por pesquisadores da UNESP de São José do Rio Preto. Com intuito de produzir anticorpos monoclonais contra a proteína Fr para fins de diagnóstico laboratorial, inoculamo-la em camundongos isogênicos Balb/c. Durante o desenvolvimento do monoclonal, foi necessário a eliminação da contaminação de cultura por Mycoplasma ssp. Após ajuste de dose de inoculação e descontaminação do antígeno (hipótese: contaminação com endotoxinas provenientes de E.coli), seis clones secretores de anticorpos monoclonais foram produzidos (5 do tipo IgM e 1 do tipo IgG2a) e testados, simultâneamente, contra toxina bacteriana e proteína Fr (40μg/mL) por técnica de ELISA indireto. Paralelamente, testes por citometria de fluxo foram realizados, incubando-se os clones obtidos com E.coli (bactéria com membrana permeabilizada e in natura). Os clones (VIRSV2-87A74 e VIRSV2-87A80) apresentam um reconhecimento inespecífico de proteínas da E. coli e não foi possível caracterizar os clones obtidos em função da dificuldade de se obter novas amostras de proteína Fr. Para o futuro, os anticorpos obtidos deverão ser marcados com isotiocinato de fluoroceína e comporem um amplo teste epidemiológico em paralelo com o kit disponível em mercado respeitando a sazonalidade da doença. Novos ensaios para caracterização... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The Human Respiratory Syncytial Virus (HRSV) is the main cause of Acute Respiratory Insufficiency in suckling child and children below 5 years old. It has 2 subgroups - A and B - being the first one responsible for more dangerous clinical situations. The viral messenger RNA codifies 11 known proteins, which the F protein is responsible for the viral fusion and it is presented as F0 with molecular weight of 67kDa, but once is broke it generates two units: F2 with 20kDa and F1 with 47kDa. The recombinant F (Fr) protein were expressed on E.coli (BL21A, on vector pET28a), and it was given to us by researches from UNESP of São José do Rio Preto. Wishing to produce monoclonal antibodies (Mab) against Fr protein to laboratorial diagnosis, mice (Balb/c) were inoculated with de antigen (Fr protein). During the development of the Mab, it was necessary to eliminate, from the culture, Mycoplasma spp. After we adjusted the necessary amount to inoculate on the mice and eradicated the contamination of the antigen (hypotheses: there were endotoxins from the E.coli), six clones that secrete Mab were produced (5 of the kind IgM, and 1 of the kind IgG2a) and they were tested, simultaneously, against bacterium toxin and Fr protein (40μg/mL) using ELISA technique. Together, flow cytometry test were performed when we incubated the clones with E. coli (bacterium with permeable membrane and in natura). The clones (VIRSV2-87A74 and VIRSV2-87A80) presented an unspecific recognition for the proteins from E.coli and it was not possible to characterize the cells because we couldn't get more samples of Fr protein. For the future, the Mab should be conjugated with FITC and then, they must be part of a wide epidemiologic test side by side from the commercial kit, always respecting the seasonal disease. New assays to characterize antibodies (like Western blotting and imunepreciptation) are already being done... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre