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Epidemiologia da leishmaniose visceral no município de Sabará, Região Metropolitana de Belo Horizonte, Minas Gerais, BrasilLopes, Josiane Valadão January 2014 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / A proposta deste trabalho foi estudar algumas das variáveis envolvidas na transmissão da leishmaniose visceral (LV) em oito bairros do município de Sabará (MG). Para o levantamento da fauna de flebotomíneos, influência dos fatores climáticos, identificação de repasto sanguíneo e infecção natural por Leishmania, para isso foram realizadas capturas utilizando armadilhas luminosas do tipo HP,
tanto no peri como no intradomicílio, nos seguintes bairros: Alvorada, Novo Alvorada, Alvorada Velho, Bom Retiro, Nova Vista, Casa Branca, Rio Negro e Ana Lúcia, no período de janeiro de 2011 a dezembro 2012. Além desses estudos, foram realizados dois inquéritos caninos censitários nos mesmos bairros, nos anos de 2011 e 2012, para o cálculo da taxa de positividade. Para análises parasitológicas e
moleculares, foram selecionados aleatoriamente 50 cães soropositivos para os testes de RIFI e ELISA, que foram eutanasiados e necropsiados para obtenção de amostras de pele, linfonodo mesentérico e baço, além de aspirado de medula óssea.
Com essas amostras, foram realizados os testes: exame direto (parasitológico), PCR e mielocultura visando confirmar a infecção e identificar a espécie de Leishmania circulante. A fauna flebotomínica foi constituída de quatro espécies, sendo Lutzomyia longipalpis a mais abundante, totalizando 95,0% dos exemplares capturados. Destes, 23,0% foi capturado no intradomicílio. Verificou-se uma tendência no aumento do número de espécimens após o período chuvoso. Das 28 fêmeas ingurgitadas, 67,9% se alimentaram no homem (Homo sapiens) e 25,0%
tiveram como fonte alimentar a ave (Gallus gallus). Nove pools foram utilizados para verificar a infecção natural, destes três se apresentaram positivos e, após sequenciamento de DNA, foi observado que a espécie circulante nos vetores foi Leishmania infantum. A taxa média de infecção canina foi de 4,25% em 2011 e 3,34% em 2012. A positividade das amostras (pele, baço, medula e linfonodo) obtidas dos cães soropositivos foi de 100,0% pela PCR, 76,0% pela mielocultura e 66,0% pelo exame parasitológico direto. Entre os quatro tipos de amostras estudadas, o linfonodo foi o tecido que apresentou maior positividade (98,0%). O sequenciamento de DNA das amostras positivas de linfonodo indicou Le. Infantum como sendo a espécie circulante nos cães do município. Após se correlacionarem os casos humanos, caninos e a presença da espécie Lu. longipalpis, encontrada positiva para Le. infantum, pode-se sugerir que os bairros Alvorada e Nova Vista merecem atenção especial como importantes áreas de risco para LV no município. / The purpose of the present study was to investigate some epidemiological aspects related the transmission of visceral leishmaniasis (VL) in eight districts of the town of Sabará, in the Brazilian state of Minas Gerais. We surveyed the local phlebotomine sand fly fauna and the main feeding sources, analyzed the interference of climate variables on the populational fluctuation and verified the rates of natural infection of vector species of VL. The entomological captures were performed with HP light traps, from January 2011 to December 2012, in both intra and peridomiciles of houses located in the following districts of Sabará: Alvorada, Novo Alvorada, Alvorada Velho, Bom Retiro, Nova Vista, Casa Branca, Rio Negro and Ana Lúcia. During our study, the plebotomine sand fly population showed a tendency to increase after the rainy period. Four species of phlebotomine sand flies were present, most of them (95.0%) being Lutzomyia longipalpis. Twenty-three percent of them was captured inside the
houses. Amongst 28 engorged females, 67.9% had fed on humans (Homo sapiens) and 25% on chicken (Gallus gallus). Leishmania infantum DNA was genotyped in three of nine pooled samples of Lu. longipalpis. Two canine census surveys were performed in the same districts allowing the calculation of the average positivity rate of canine VL, in each year of study, as 4.25% in 2011 and 3.34% in 2012. Fifty among the seropositive dogs for VL faded to euthanasia were randomly selected for parasitological and molecular analyses of tissues (skin, mesenteric lymph nodes and spleen, as well as bone marrow aspirates). All those samples gave 100% of positivity by PCR, 76% positivity by myeloculture and 66% positivity by direct parasitological examination. The highest overall positivity (98%) was obtained with lymph nodes, where the infecting parasite was also genotyped as L. infantum. The combined analysis of the human and canine cases of VL and the vector population data in Sabará, allow us to suggest that Alvorada and Nova Vista districts deserve special attention as main risk areas of VL in the city.
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Desenvolvimento e validação de um ensaio de PCR-ELISA para o diagnóstico da leishmaniose visceral humana em amostras de sangue periféricoCardoso, Fernanda Alvarenga January 2013 (has links)
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Previous issue date: 2013 / Nas últimas décadas, a reação em cadeia da polimerase (PCR) vem sendo utilizada para o
diagnóstico da leishmaniose visceral (LV) com diferentes objetivos: o diagnóstico da
infecção, da doença e o controle de cura. Para utilização em larga escala, a etapa de
eletroforese para detecção dos produtos amplificados na PCR, torna a técnica complexa e onerosa. A PCR-ELISA representa uma alternativa de detecção do produto amplificado por PCR através de um ensaio imunoenzimático (ELISA). Esta técnica é capaz de conferir maior sensibilidade e rapidez para a análise de grandes números de amostras clínicas com o uso de
equipamentos utilizados para processamento de ELISA e, portanto, permite realizar PCR para fins de diagnóstico em laboratórios de média complexidade. Assim, este estudo objetivou desenvolver e validar o método de detecção colorimétrica dos produtos de amplificação gerados pela reação de PCR para o diagnóstico da LV em amostras de sangue periférico.O método de PCR-ELISA foi desenvolvido para detecção de fragmento de DNA do cinetoplasto (kDNA), complexo Donovani-específico. Utilizando-se cepas referências de Leishmania em cultivo e de painel de amostras de sangue periférico humano de 11 indivíduos não infectados,
moradores de área endêmica e 14 casos de LV, caracterizadas clínica e parasitologicamente, determinou-se o limite de detecção da reação, medidas de precisão (repetibilidade e reprodutibilidade) e limite entre positivo e negativo (cut-off). A avaliação do desempenho do ensaio foi realizada com amostras de sangue periférico de 105 pacientes portadores de LV, 25
pacientes portadores da co-infecção Leishmania/HIV e de 73 indivíduos moradores de área endêmica para a LV. Foi desenvolvido ainda um ensaio de PCR-ELISA para detecção do DNA amplificado do gene humano ACTB, para uso como controle do processo de extração de DNA e amplificação por PCR das amostras clínicas. O ensaio PCR-ELISA kDNA desenvolvido apresentou limite de detecção de 1 parasito/mL de sangue e 0,07fg/µL de DNA de L. (L.) infantum, sensibilidade de 100% (IC 95%: 97,1 a 100%) e especificidade de 95%
(IC 95%: 83,5 a 98,6%). Todos os indivíduos assintomáticos de área endêmica, com
positividade por outras técnicas diagnósticas, foram também positivos pela PCR-ELISA.
Todas as amostras foram testadas satisfatoriamente para o ensaio de PCR-ELISA ACTB. O
ensaio de PCR-ELISA kDNA, desenvolvido e validado neste estudo, apresenta simplicidade
metodológica e operacional, permite interpretação objetiva da amplificação por PCR do DNA
de Leishmania do complexo Donovani e desempenho adequado no diagnóstico da LV em
laboratórios de referência. / In recent decades, the polymerase chain reaction (PCR) has been used for the diagnosis of visceral leishmaniasis (VL) with different goals: diagnosis of infection, disease control and cure. For large-scale use, the step of electrophoresis to detect amplified products of PCR makes this technique more complex and costly. The PCR-ELISA is an alternative for the
detection of the amplified PCR product through an immunoenzymatic assay (ELISA). This technique offers higher sensitivity and speed for the analysis of large numbers of clinical specimens, using equipment widely used for processing sets of ELISA and therefore allows performing PCR for diagnostic purposes in laboratory of medium complexity. Thus, this study aimed to develop and validate the colorimetric detection method (ELISA) for amplification products generated by PCR targeting the diagnosis of VL.The method of PCR-ELISA was developed to detect a fragment of DNA of kinetoplast (kDNA) specific from Leishmania donovani complex. Using reference strains of Leishmania in cultivation and a panel of human peripheral blood samples of 11 non-infected individuals, residents of endemic area and 14 cases of VL with clinical and parasitological characterization, we determined the
detection limit of the reaction, precision measurements (repeatability and reproducibility) and limit between positive and negative (cut-off). The performance of the assay was evaluated with peripheral blood samples of 105 patients with VL, 25 patients showing the co-infection
Leishmania/HIV and 73 individuals living in endemic areas for VL. A PCR-ELISA assay for
detection of DNA from the human ACTB gene was also developed for use as control for the process of DNA extraction and amplification by PCR of clinical samples. The PCR-ELISA kDNA assay developed showed a detection limit of 1 parasite/ml blood and 0.07 fg/µL of DNA from L. (L.) infantum. The assay showed a sensitivity of 100% (IC 95%: 97.1 to 100%) and specificity of 95% (IC 95%: 83.5 to 98.6%). All asymptomatic individuals from an endemic area, who were diagnosed for LV by other techniques, were also positive by PCR-ELISA kDNA. All samples were tested satisfactorily by PCR-ELISA ACTB assay. The PCR-ELISA kDNA assay was developed and validated in this study. It presents methodological and operational simplicity; enables objective interpretation of PCR amplification of DNA from Leishmania donovani complex and have sufficient performance for diagnosis of VL in
reference laboratories.
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Evolução de parâmetros clínicos e da carga parasitária em sangue periférico de crianças hospitalizadas por leishmaniose visceralMourão, Maria Vitória Assumpção January 2012 (has links)
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Previous issue date: 2014 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa René Rachou. Belo Horizonte, MG, Brasil / No Brasil, observa-se aumento dos casos de leishmaniose visceral (LV) nos últimos anos, associado à alta letalidade. É necessária a identificação de indicadores sensíveis e específicos que reconheçam precocemente a gravidade e possibilitem intervenção imediata e adequada. O objetivo do presente estudo prospectivo foi correlacionar parâmetros clínicos e laboratoriais e carga parasitária à evolução da
LV em crianças. Foram incluídas 48 crianças com diagnóstico de LV, internadas no Hospital Infantil João Paulo II, em Belo Horizonte, de junho de 2010 a junho de 2011.
Os pacientes foram avaliados clinicamente e tiveram amostras de sangue periférico coletadas antes (T0), entre 10 e 15 dias (T1) e entre 40 e 60 dias (T2) após início do tratamento. Nestas amostras, a carga parasitária foi quantificada por PCR quantitativa em tempo real (qPCR), sendo o gene alvo a SSU rRNA de Leishmania.
Evolução grave foi definida como internação em UTI ou administração de amina vasoativa, ventilação mecânica ou hemotransfusão. As manifestações clínicas mais observadas à admissão foram febre, palidez e hepatosplenomegalia, associado à pancitopenia, elevação das aminotransferases hepáticas e hipoalbuminemia. A positividade da RIFI e dos testes rápidos Kalazar Detect® e Diamed-IT Leish® foi de
66,7%, 85,4% e 100%, respectivamente. Observou-se elevada positividade (100%) em exames de PCR convencional em sangue periférico e aspirado de medula óssea. Como tratamento específico, administrou-se Glucantime® em 45,8%, anfotericina B desoxicolato em 35,5%, anfotericina B lipossomal em 8,3% e associação de anfotericina B lipossomal e Glucantime® em 10,4% dos pacientes.
Considerou-se que 56,2% das crianças apresentaram evolução grave, mas sem nenhum óbito. Em T2, todos apresentavam melhora clínica. A classificação por critérios de gravidade proposta pelo Ministério da Saúde em 2006 foi aplicada à admissão, não apresentando boa acurácia para detecção de casos com evolução grave. O qPCR apresentou bom desempenho e foi positivo em todas as crianças em T0.
Observou-se variação ampla da carga parasitária em T0, não correlacionada a características clínicas e laboratoriais, a critérios de gravidade e escores preditores de óbito à admissão e à evolução grave durante a internação. Redução significativa do número de cópias do fragmento gênico foi constatada em T1 e T2, que não variou de acordo com a medicação usada. Identificaram-se como fatores de risco para evolução grave idade menor do que 12 meses, taquidispneia, infecção, hepatomegalia volumosa, anemia, plaquetopenia e hipoalbuminemia à admissão. / In Brazil, there is an increasing number of cases of visceral leishmaniasis (VL) in recent years, associated to a high case-fatality rate. It is necessary to identify sensitive and specific clinical factors that may prompt to adequate and immediate intervention. The purpose of this prospective study was to correlate clinical and laboratory parameters and parasite load with clinical outcome in children with VL.
Forty-eight children diagnosed with VL and hospitalized in Hospital Infantil João Paulo II, in Belo Horizonte, Brazil, were included from June 2010 to June 2011. The patients were assessed clinically and peripheral blood samples were obtained before (T0), from 10 to 15 (T1) and from 40 to 60 days (T2) after starting treatment. In these samples, the parasite load was quantified by real-time quantitative PCR (qPCR) using as molecular target the SSU rRNA gene of Leishmania. Severe outcome was defined as admission in intensive care unit, administration of vasoactive amines, mechanical ventilation or blood transfusion. The most frequently observed features were fever, pallor and hepatosplenomegaly associated with pancytopenia, elevated liver aminotransferases and hypoalbuminemia. The positivity of IFAT and of the rapid tests Kalazar Detect® and Diamed-IT Leish® was 66,7%, 85,4% e 100%, respectively. There was a high positive rate (100%) in conventional PCR in peripheral blood and bone marrow aspirates. The drugs used for specific therapy were Glucantime® in 45,8%, amphotericin B deoxycholate in 35,5%, liposomal amphotericin B in 8,3% and combination of liposomal amphotericin B and Glucantime® in 10,4% of the patients. It was considered that 56,2% of the children presented severe outcome but no deaths occurred. At T2, all patients had clinical
improvement. The classification of severity proposed by the Ministry of Health in 2006, applied at admission, showed low accuracy for detection of severe cases. The quantitative PCR assay presented high performance and was positive in all children in T0. There was a wide variation in parasite load at T0 and no correlation was observed with clinical and laboratory features, with severity at admission and with severe outcome. Significant decrease in the number of copies of the gene fragment was found in T1 and T2, which did not vary according to the drug used. The identified risk factors for severe outcome were children younger than 12 months and the presence of tachydyspnea, infection, hepatomegaly, anemia, thrombocytopenia and hypoalbuminemia at admission.
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Avaliação da infecciosidade em cães vacinados com Leish-Tec® (Hertape Saúde Animal S/A) para Lutzomyia longipalpis (Diptera: Psychodidae, Phlebotominae)Silva, Shara Regina da January 2015 (has links)
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Previous issue date: 2015 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisa Rene Rachou / O presente trabalho avaliou a transmissibilidade de
Leishmania
spp. para
Lutzomyia
longipalpis
em 136 cães nativos e beagles-sentinelas
, vacinados ou não (placebo) com Leish-
Tec
®
(vacina anti-leishmaniose visceral canina), domiciliados em Porteirinha, município
endêmico para leishmaniose visceral, em Minas Gerais. Esses animais foram selecionados a
partir da amostra total de cães que compõem o
ensaio clínico de fase III que determinou a
eficácia da vacina Leish-Tec
®
, conforme diretrizes estabelecida
s pelo Ministério da Saúde do
Brasil. Além da técnica de xenodiagnóstico, e
sses cães também foram submetidos aos testes
diagnósticos ELISA, RIFI, te
ste rápido Kalazar Detect
TM
e exames de detecção do parasito.
Uma tendência de redução da infectividade (p
-valor 0,052) foi obser
vada no grupo de cães
vacinados com Leish-Tec
®
que apresentaram resposta sorológi
ca positiva ao antígeno vacinal
A2. Os testes RIFI, Kalazar Detect
TM
e xenodiagnóstico apresentar
am maior percentual de
positividade entre os cães sintomáticos da amostra (p<0,05), quando comparados aos cães
assintomáticos, na análise global. Na análise estr
atificada e, para o grupo de cães que recebeu
vacina, as diferenças se mantiveram para
a RIFI e o teste rápido, mas não para o
xenodiagnóstico; já para os cães que receberam pl
acebo, as diferenças entre grupos clínicos se
mantiveram para o xenodiagnóstico e teste
rápido, mas não para a RIFI. Nossos resultados
sugerem que a Leish-Tec
®
possui potencial de redução da in
fectividade em cães vacinados e
desafiados em área endêmica e que a vacinação com Leish-Tec
®
pode contribuir para a
redução da transmissão da leishmaniose viscer
al canina, desde que utilizada como medida
protetiva individual e em conjunto com as dema
is estratégias, individuais e coletivas, de
prevenção e controle da doença. Com rel
ação à diferença de desempenho dos testes
diagnósticos entre grupos clínicos, nossos resultados apontam para a necessidade de
desenvolvimento de testes mais eficazes no di
agnóstico da infecção assintomática por
Leishmania
e demonstra que essas diferenças in
terferem nos resultados e devem ser
consideradas na avaliação de ensaios clínicos. / This study evaluated the transmission of
Leishmania
spp. to
Lutzomyia
longipalpis
in 136
native and beagles sentinel dogs, vaccina
ted or not (placebo) with Leish-Tec
®
(canine visceral
anti-leishmaniasis vaccine), domiciled in Port
eirinha, visceral leishm
aniasis endemic county
in Minas Gerais, Brazil. These animals were sele
cted from the total sample of dogs that make
up the phase III clinical trial that
determined the efficacy of Leish-Tec
®
vaccine, according to
guidelines established by Brazilia
n Ministry of Health. Beside
s the xenodiagnosis technique,
these dogs were also subjected
to the sorological tests ELI
SA, IFAT, rapid test Kalazar
Detect
TM
and parasite detection. A
tendency of reduction of infectivity (p-value 0.052) was
observed in the group of dogs vaccinated with Leish-Tec
®
that presented positive serological
response to the vaccine antig
en A2. IFAT, Kalazar Detect
TM
and xenodiagnosis showed a
higher percentage of positivity among symptomatic dogs (p <0.05) compared to
asymptomatic dogs. In stratified analysis,
and for the vaccine dogs group, differences
remained for the IFAT and the rapid test, bu
t not for xenodiagnosis; already for placebo dogs
group, the differences between clinical groups re
mained to xenodiagnosis and rapid test, but
not for the IFAT. Our results suggest that the Leish-Tec
®
has the potential to reduce the
infectivity of vaccinated and challenged dogs in
endemic areas and could contribute to the
reduction of transmission of canine visceral le
ishmaniasis, since used as an individual
protective measure and together w
ith other strategies, individual and collective, to prevent and
control the disease. Regarding
the performance difference of di
agnostic tests between clinical
groups, our results point to the need for developm
ent of more effective tests in the diagnosis
of asymptomatic
Leishmania
infection and shows that these di
fferences affect the results and
should be considered in ev
aluating clinical trials.
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Abordagem clínica da leishmaniose visceral entre adultos infectados pelo HIV: acurácia diagnóstica, fatores prognósticos e eficácia terapêuticaCota, Glaucia Fernandes January 2013 (has links)
Submitted by Nuzia Santos (nuzia@cpqrr.fiocruz.br) on 2013-08-14T18:03:14Z
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Previous issue date: 2013 / Leishmaniose visceral (LV) entre infectados pelo HIV tem incidência crescente em
regiões onde as duas infecções são endêmicas. Reconhece-se hoje que a doença
está associada a maior mortalidade, menor taxa de resposta clínica e parasitológica
e maior toxicidade ao tratamento que as observadas em pacientes não infectados
pelo HIV. Várias são as incertezas e dificuldades a cerca do diagnóstico, tratamento e seguimento dos pacientes coinfectados com Leishmania-HIV. Esta tese é
composta por três revisões sistemáticas e um estudo clínico e busca contribuir para
a redução de algumas lacunas do conhecimento à cerca da coinfecção Leishmania-HIV. Por meio de revisões sistemáticas da literatura e de um estudo transversal, que comparou a acurácia de métodos invasivos e não invasivos para o diagnóstico de LV entre infectados pelo HIV, confirmamos baixa sensibilidade dos testes sorológicos, à
exceção do teste de aglutinação direta, que deve ser preferido em rotinas de
investigação. Incluindo nossos próprios resultados, foram identificados apenas três
estudos que avaliaram o desempenho de testes imunocromatográficos rápidos, baseados na pesquisa do anticorpo contra o antígeno recombinante K39, entre infectados pelo HIV. Por sua vez, testes baseados na reação em cadeia da polimerase, incluindo a técnica que utiliza como alvo a subunidade ribossomal do RNA e testada em nosso meio, apresentam alto desempenho global e despontam como alternativa menos invasiva ao exame parasitológico. De acordo com a
evidência disponível, a terapia antirretroviral altamente potente não constitui intervenção suficiente para evitar a recidiva. Por outro lado, o uso de profilaxia secundária reduz significativamente a ocorrência de episódios subsequentes de LV.
A revisão da literatura nos permitiu ainda identificar algumas condições marcadoras
do risco de recidiva que, se presentes, reforçam a indicação de profilaxia
secundária: ausência de elevação da contagem de linfócitos T CD4+ no seguimento;
história prévia e recidiva de LV; contagem de linfócitos T CD4+ abaixo de 100
células/mL na ocasião do primeiro diagnóstico de LV. Os trabalhos publicados
revelam maior taxa de resposta clínica com o uso de anfotericina B em relação ao
tratamento com derivados de antimônio, o que parece estar relacionado à menor toxicidade que à maior eficácia. Os derivados de antimônio são drogas mal toleradas pelos pacientes coinfectados com HIV, associando-se a alta taxa de descontinuidade do tratamento e mortalidade três vezes maior que a observada com o tratamento com anfotericina B. Os dados disponíveis até o momento são insuficientes para se comparar a eficácia entre as várias formulações de anfotericina ou se definir a dose e o tempo de tratamento ideais para LV entre infectados pelo HIV. / Concurrent visceral leishmaniasis (VL) and HIV infection have been reported in most
areas of the world where the geographical distribution of the two infections overlap.
The disease is characterized by significantly lower cure rates, higher drug toxicity, relapse and mortality rates than those for VL in non-HIV-infected individuals. There are many uncertainties and difficulties about the diagnosis, treatment and monitoring of Leishmania-HIV coinfected patients. This dissertation is composed of three systematic reviews and a clinical study and aims to contribute to the reduction of some of the knowledge gaps in Leishmania-HIV coinfection field. Through a
systematic literature review and a cross-sectional study, designed to evaluate the
accuracy of invasive and noninvasive tests for VL diagnosis in HIV-infected patients,
it was confirmed the low sensitivity of serological tests, except for direct agglutination test. Including our own results, there are only three studies evaluating the performance of anti-rK39 based dipsticks tests among HIV-infected patients. Tests based on DNA detection are highly sensitive and may contribute to a VL diagnostic workup. A good performance was also obtained (in our cross-sectional study) with a real time PCR (polymerase chain reaction) using as target the small subunit of ribosomal RNA. PCR tests are emerging as a less invasive and a useful alternative to
parasitological examination. According to the available evidence, highly active
antiretroviral therapy is not sufficient to prevent VL recurrence. In contrast, secondary prophylaxis was shown to be protective against relapse. Some predictors of VL relapse could be identified: a) the absence of an increase in CD4+ cells at follow-up; b) lack of secondary prophylaxis; and c) previous history of VL relapse. CD4+ counts below 100 cells/mL at the time of primary VL diagnosis may also be a predictive factor for VL relapse. Based on these observations, a high-risk population might be identified and such patients might then be eligible for secondary prophylaxis.
Available evidence suggests higher clinical response rate with amphotericin B than
with antimony treatment, which appears to be related to less toxicity than with higher
effectiveness. Antimonial therapy carries a higher rate of drug discontinuation and a
significantly higher mortality indirectly compared to treatment with amphotericin B.
The optimal dose of amphotericin and the difference in efficacy between its various
formulations remain to be established.
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