Submitted by Amauri Alves (amauri.alves@ufv.br) on 2015-11-23T15:39:38Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177179 bytes, checksum: dec9ea9972e24062fd20a5915e37c787 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-11-23T15:39:38Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 1177179 bytes, checksum: dec9ea9972e24062fd20a5915e37c787 (MD5) Previous issue date: 2015-07-17 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A estocagem de leite cru sob temperatura de refrigeração não impede o crescimento de bactérias psicrotróficas produtoras de proteases termorresistentes que comprometem a qualidade e reduzem a vida de prateleira de produtos lácteos. Para minimizar os problemas tecnológicos resultantes da atividade proteolítica, é desejável que proteases sejam detectadas e quantificadas em leite cru por um método rápido. No entanto, não existe um método eficiente para este fim. Este trabalho teve como objetivos identificar as espécies psicrotróficas com potencial de deterioração predominantes em leite cru brasileiro; identificar e caracterizar as proteases resistentes ao calor produzidas por esta microbiota e desenvolver um método rápido para detectar estas proteases em amostras de leite. As condições de armazenamento sob refrigeração foram simuladas e as bactérias psicrotróficas proteolíticas foram isoladas. As bactérias produtoras de proteases termorresistentes foram agrupadas após análise por Rep-PCR. Os testes bioquímicos e o sequenciamento dos genes rDNA 16S e rpoB foram utilizados para identificar representantes de cada grupo. Uma protease termorresistente produzida por Serratia liquefaciens foi caracterizada e o gene que codifica esta enzima foi identificado após análise dos peptídeos trípticos da protease por espectrometria de massa. Placas de microtitulação revestidas com caseína marcada com biotina foram utilizadas para quantificar a atividade proteolítica de amostras de leite e de proteases diluídas em solução tampão. Os isolados bacterianos altamente proteolíticos foram separados em oito grupos diferentes e quatro padrões únicos. Os isolados com potencial proteolítico são correspondentes à espécie Serratia liquefaciens e ao gênero Pseudomonas. Isolados de S. liquefaciens podem produzir uma metaloprotease termorresistente ao tratamento de 95 °C por 8,45 min, identificada como Ser2, com massa molar de, aproximadamente, 52 kDa e semelhante à protease AprX de Pseudomonas spp. Embora sequências de nucleotídeos do gene ser2 sejam conservadas entre os isolados de S. liquefaciens, o potencial de deterioração das estirpes é heterogêneo indicando diferenças nos níveis de expressão gênica, enzima viii ou modificações pós-transcricionais. O imunoensaio desenvolvido neste estudo foi eficiente para a quantificação da atividade de tripsina, papaína, pepsina, termolisina e protease de pâncreas bovino. No entanto, novas pesquisas devem ser realizadas para minimizar a influência dos componentes da amostra de leite nesta técnica para permitir a detecção acurada de proteases. Este trabalho destaca o elevado potencial de deterioração da microbiota encontrada em amostras de leite cru, além do desenvolvimento de um ensaio promissor, útil para a indústria de lacticínios, para detecção e quantificação de atividade proteolítica resultante das práticas agrícolas inadequadas nas propriedades produtoras de leite. / The storage of raw milk at cold temperatures does not prevent growth of psychrotrophic bacteria, which can produce heat-resistant proteases that compromise the quality and reduce the shelf life of dairy products. To minimize the technological problems resulting from proteolytic activity, these enzymes should be detected and quantified in raw milk before processing by a rapid method. However, there is no efficient method for this purpose. This work aimed to identify the predominant psychrotrophic species with spoilage potential in Brazilian raw milk, to identify and characterize the heat-resistant proteases produced by this microbiota and to developed a rapid method to detect these proteases in raw milk samples. The cold storage conditions were simulated and the psychrotrophic proteolytic bacteria isolated. The heat-resistant protease-producing bacteria were typing by Rep-PCR and clustered. Biochemical tests, 16S rDNA and rpoB gene sequencing were used for identifying one representative isolate from each cluster. The heat-resistant protease produced by Serratia liquefaciens was characterized. The encoding gene was identified after mass spectrometry analysis of tryptic peptides from the heat-resistant protease. The biotinylated casein was coated on microtiter plates and used as substrate to quantify proteolytic activity in solution and milk samples. Highly proteolytic strains were identified and characterized. The isolates were separated into eight different clusters and four solitary fingerprints. The most proteolytic isolates belonged to Serratia liquefaciens and Pseudomonas species. The S. liquefaciens isolates may produce Ser2, which is a a metalloprotease resistant to the heat treatment of 95 °C for 8.45 min. This metalloprotease showed a molecular weight of approximately, 52 kDa and a heat- resistance similar to AprX from Pseudomonas spp. Although nucleotide sequences of ser2 gene were conserved among S. liquefaciens isolates, the spoilage potential among them was heterogeneous indicating differences in enzyme expression levels or post-transcriptional modifications. The developed immunoassay was efficient for quantification of trypsin, papain, pepsin, thermolysin and protease from bovine x pancreas activity. However, further research should be performed to minimize the influence of milk components on the developed assay for detecting proteases in milk samples. This work highlighted the poor conditions of hygiene in milk farms and the high spoilage potential of the microbiota found in raw milk samples besides the development of a promising assay for detection and quantification of proteolytic activity useful for dairy industry.

Made available in DSpace on 2018-08-01T23:19:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_9498_Resumo Dissertação Final - Letícia Ricieri Bastos PDF.pdf: 97079 bytes, checksum: be4f629a910ed776dd9aa6ffbadced09 (MD5) Previous issue date: 2016-11-24 / A pecuária de leite é uma atividade importante no Brasil e no Espírito Santo. As pequenas propriedades fornecem 80% da produção estadual. Haja vista a importância do agronegócio do leite e os problemas relacionados à sua qualidade no país, o Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (Mapa) aprovou a Instrução Normativa (IN) n⁰ 51 em 2002. Mesmo com adoção dessas medidas, o leite ordenhado em condições inadequadas de higiene pode apresentar alta contaminação por bactérias mesófilas aeróbias e psicrotróficas. Em dezembro de 2011 o Mapa publicou a IN n⁰ 62 que alterou alguns artigos da IN n⁰ 51, estabelecendo novos prazos para a redução de CBT (contagem bacteriana total) e CCS (contagem de células somáticas). O trabalho teve como objetivo avaliar a qualidade do leite produzido em unidades de produção familiares, no sul do Espírito Santo, em relação às exigências da IN 62/2011 do Mapa e outros parâmetros de qualidade. Um total de 29 tanques comunitários distribuídos em 13 munícipios do sul do estado foram avaliados. Questionários foram aplicados aos responsáveis pelos tanques e a 122 produtores que os utilizam. Foram realizadas três coletas de leite cru refrigerado nos tanques, totalizando 87 amostras, para realização das análises: CBT, CTP (contagem total de psicrotróficos), alizarol 72%, acidez titulável, densidade, gordura, EST (extrato seco total), ESD (extrato seco desengordurado), CCS e pesquisa de resíduos de antibióticos. Coletou-se 6 amostras de leite pasteurizado no mercado para verificar atendimento da RDC n⁰ 12/2001 da Anvisa (Agência Nacional de Vigilância Sanitária). Após avaliação das respostas dadas pelos responsáveis pelos tanques, constatou-se que: 45% não haviam sido treinados; 7% dos tanques não mantinham resfriamento ligado 24 horas; em 25% não era realizada análise antes de adicionar o leite ao tanque; 55% não realizavam sanitização do tanque; em 10,3% a água era proveniente de rio/córrego. Falhas nos procedimentos realizados pelos produtores também foram identificadas: 57% não faziam a limpeza do local da ordenha; o teste da caneca era realizado diariamente por apenas 27%; a lavagem dos tetos não era feita por 57%; pré e pós-dipping era realizado por somente 16%; 44% não tratavam a mastite; a água utilizada em 9% das propriedades era de rio/córrego. Dos tanques analisados, 41% apresentaram valores para as três coletas fora do padrão para CBT. Para CTP, nenhum dos tanques apresentou as três contagens fora do valor máximo considerado (5,7 log UFC/mL). Na acidez titulável, todas as médias dos tanques apresentaram resultado dentro do padrão. Para densidade relativa, 3% dos tanques apresentaram valores fora do padrão. Todos os tanques e amostras atenderam a legislação em relação ao teor de gordura. Para ESD, 90% dos tanques apresentaram-se fora do padrão. Em relação a CCS, 17% dos tanques apresentaram valores fora do padrão para as três contagens. Nenhuma amostra de leite cru apresentou presença de resíduos de antibióticos. Todas as amostras de leite pasteurizado estavam dentro do padrão. A fim de que o leite atinja os padrões aceitáveis pela legislação, recomenda-se a implementação de programas de treinamento para melhor instrução dos envolvidos na cadeia produtiva.

Made available in DSpace on 2016-08-29T15:36:42Z (GMT). No. of bitstreams: 1 tese_6822_RESUMO FRANCISCA.pdf: 13192 bytes, checksum: 8b66f796d2b432970c19871b9a83fbd0 (MD5) Previous issue date: 2013-06-26 / Na produção de leite exerce importância socioeconômica para produtores familiares do Estado do Espírito Santo e do município de Alegre-ES. O objetivo deste trabalho foi avaliar as condições de produção e a qualidade higiênico-sanitária do leite cru obtido de tanques de refrigeração localizado em comunidades rurais no município de Alegre-ES e investigar a presença de resíduos de antibiótico no leite. Aplicou-se um questionário previamente estruturado com base nas exigências da legislação do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (BRASIL, 2008) em 34 propriedades rurais entre fevereiro de 2012 a junho de 2012. Foram feitas coletas de dados sobre a limpeza e a estrutura física do estábulo, a origem e a existência de tratamento da água, tipo de ordenha, conduta e higiene dos manipuladores, controle de saúde dos manipuladores, procedimentos de higienização e sanitização dos tetos, tipo de material utilizado para secagem dos tetos e a realização do controle sanitário com relação à mastite, além do tratamento dado, e transporte do leite. Em resposta ao questionário aplicado aos produtores, observou-se que o baixo nível de escolaridade prepondera entre os produtores. A localização dos currais era boa: eram arejados, secos e limpos, todos os currais são cobertos e a minoria possuía piso cimentado e sala de ordenha. A quase totalidade das propriedades produzia menos de 100 litros.dia-1 e usavam ordenha manual. Todos faziam controle de endoparasitos, ectoparasitos e vacinavam contra a febre aftosa, 94,1% contra a raiva e 91,2% contra brucelose. Metade fazia a higienização dos tetos e úbere antes da ordenha, poucos realizavam o pré-dipping e o pós-dipping. Todos faziam tratamento para mastite, mas apenas 1/5 faziam o teste da caneca para mastite. E não faziam nenhum tipo de tratamento da água usada nos currais. Todo o leite produzido é transportado através de caminhão isotérmico e a grande maioria dele tem as cooperativas como destino. Todos os equipamentos usados na ordenha eram higienizados, mas a minoria utilizava produtos sanitizantes. Já poucos ordenhadores adotavam o hábito de banhar-se antes de realizar a ordenha. Poucos tiveram treinamento ou palestras sobre as normas instituídas pela IN 62. No Diagnóstico da coleta de leite cru refrigerado junto aos trabalhadores e nos pontos de coleta, observou-se que nenhuma instalação tinha proteção contra entrada de insetos e roedores e contaminantes ambientais; não possuíam tanque para lavagem de latões e de utensílios de coleta; eram mal dimensionadas e não permitiam a aplicação de medidas sanitárias adequadas; as condições higiênicas eram extremamente deficitárias e prejudicavam a manutenção da qualidade do leite; não possuíam um procedimento adequado de higienização de equipamentos. Os trabalhadores dos tanques de expansão não se banhavam antes de iniciar as atividades e nem usavam roupas específicas; não realizavam exames de saúde pessoal com periodicidade; e não adotavam nenhum sistema de tratamento da água usada nos tanques. Avaliou-se também a qualidade higiênico-sanitária e físico-química de amostras xiii de leite cru pertencentes a quatro tanques de refrigeração denominados T1, T2, T3 e T4. Os resultados encontrados nas análises físico-químicas apresentaram-se em sua maioria em conformidade com as normas estabelecidas pela IN 62, com exceção do valor do pH que apresentou alteração, o que pode ser indicativo de adição de álcalis ou possível presença de mastite no rebanho. Os valores médios encontrados nas análises microbiológicas foram: Contagem Bacteriana Total CBT 1,4x106 UFC.mL-1, bactérias psicrotróficas 6,1x105 UFC.mL-1, coliformes totais 8,5x104 UFC.mL-1, Staphylococcus spp. 2,9x105 UFC.mL-1, e Escherichia coli 4,4x104 UFC.mL-1. Os resultados das análises do leite apresentaram-se fora dos padrões microbiológicos exigidos pela legislação. Os valores encontrados para alguns tanques nas análises de CBT 6,0x105 UFC.mL-1, encontraram-se fora dos padrões estabelecidos pela IN 62, em 50% das amostras analisadas. Não havia resíduo de antibiótico no leite analisado. Existe a necessidade de adequações e melhorias nas características de produção de leite e nos tanques de refrigeração, bem como a implementação das Boas Práticas Pecuárias de Produção nas propriedades rurais de forma a garantir a segurança dos alimentos e a sustentabilidade da atividade leiteira da região.

Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2016-07-07T16:13:02Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828438 bytes, checksum: b6bd4b6a2ecc5e2ab936b04cd38b353b (MD5) / Made available in DSpace on 2016-07-07T16:13:02Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 828438 bytes, checksum: b6bd4b6a2ecc5e2ab936b04cd38b353b (MD5) Previous issue date: 2015-12-18 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais / A ATP-bioluminescência é uma técnica com grande potencial para avaliação rápida da qualidade de alimentos. Entretanto, não se sabe ao certo a relação entre o ATP e os constituintes dos alimentos. O presente trabalho teve como objetivo determinar o conteúdo de ATP presente no leite cru por meio da bioluminescência e avaliar a sua correlação com a qualidade do leite. Foram realizadas a Contagem de Células Somáticas (CCS), a Contagem Bacteriana Total (CBT), Contagem celular diferencial (CCD) e composição centesimal de 15 amostras compostas de leite cru em equipamentos eletrônicos baseados na citometria de fluxo. O conteúdo de ATP do leite foi avaliado utilizando kits para a avaliação da quantidade de ATP total para amostras líquidas e a leitura da bioluminescência foi realizada em luminômetro comercial, com os resultados expressos em Unidades Relativas de Luz (URL). Para a avaliação do procedimento de higienização dos equipamentos e mão de manipuladores, os kits empregados foram para determinação de ATP total em superfícies. Os resultados demonstraram que 9 amostras de leite apresentaram baixa CCS ( log de cel·mL -1 ≤ 5,0), 2 amostras apresentaram média CCS (5,0<log de cel·mL -1 ≤ 5,7) e 4 amostras apresentaram alta CCS (log de cel·mL -1 >5,7), indicando aproximadamente uma prevalência de 27% de vacas com mastite no rebanho. Entretanto, 93% das amostras de leite apresentaram valores de CBT abaixo do limite (log de UFC·mL -1 ≤ 5,5), atualmente estabelecido pela Instrução Normativa no 62, evidenciando qualidade microbiológica satisfatória das amostras em estudo. Em relação ao perfil celular das amostras, observou- se que a CCD boa correlação (r=0,83) com a contagem de células somáticas e que os animais com processe infeccioso na glândula mamária foram aquele que além de possuírem alta CCS, apresentaram porcentagem de macrófagos acima de 26%. Os resultados da bioluminescência, demonstraram que o conteúdo médio de ATP, em log de URL·mL -1 , nas amostras de leite foi 4,22, variando de 3,58 a 4,87. Em relação aos efeitos da bioluminescência sobre os constituintes do leite, observou-se que um aumento no valor de ATP acarreta em um acréscimo da porcentagem de CCS (r= 0,720). O mesmo pode ser visualizado para a porcentagem de CBT (r= 0,614). Entretanto, para a porcentagem de lactose, foi encontrada correlação negativa (r= -0,570). Da mesma maneira, com base em regressão não linear, observou-se correlação positiva entre o aumento de ATP (log de URL·mL -1 ) e o incremento nos valores de CBT (R 2 =0,61) e CCS (R 2 =0,81). Assim, constatou-se resposta para qualidade microbiológica e celular do leite em função da ATP-bioluminescência, quando o conteúdo de ATP (log de URL·mL -1 ) foi acima de 4,21 e 4,44 para CCS e CBT, respectivamente. No que se refere a avalição da higienização dos equipamentos e mão de manipuladores, constatou-se uma redução significativa (P<0,05) nos valores de URL após a limpeza e sanitização dos mesmos. Os resultados podem no futuro contribuir para o desenvolvimento e aplicação de ATP-bioluminescência na avaliação da qualidade de leite cru. / ATP-bioluminescence is a technique with great potential for rapid assessment of the quality of food. However, no one knows for sure the relationship between the ATP and the constituents of food. This study aimed to determine the ATP content present in raw milk by means of bioluminescence and evaluate their correlation with the quality of milk. We performed a Somatic Cell Count (SCC), the Total Bacterial Count (TBC), Count differential cell (CCD) and chemical composition of 15 composite samples of raw milk in electronic equipment based on flow cytometry. The ATP content of the milk was assessed using kits for evaluating the total amount of ATP for liquid samples and reading the bioluminescence was performed on a commercial luminometer, with the results expressed in Relative Light Units (URL). For the evaluation of the cleaning procedure of the equipment and manipulators hand, the kits were used to determine ATP full surfaces. Results showed that 9 samples showed low SCC milk (cel log · mL -1 ≤ 5.0), 2 samples showed an average CCS (5.0 <cel log · mL -1 ≤ 5.7) and 4 samples had high SCC (cel log · mL -1 > 5.7), approximately indicating a prevalence of 27% of cows with mastitis in the herd.However, 93% of milk samples showed CBT values below the limit (CFU log · mL -1 ≤ 5.5), currently established by Instruction No. 62, indicating a satisfactory microbiological quality of samples analyzed. Regarding the cellular profile of the samples it was observed that the CCD good correlation (r = 0.83) with somatic cell count and the animals with infectious process in the mammary gland were one that besides having high SCC, presented percentage macrophage above 26%. The results of bioluminescence show that the average ATP content, URL log · ml -1 in the milk samples was 4.22, ranging from 3.58 to 4.87. In relation to the effects of bioluminescence on the milk constituent, it was observed that an increase in the amount of ATP causes an increase in the percentage of CCS (r = 0.720). The same can be displayed for the percentage of CBT (r = 0.614). However, for the percentage of lactose, found a negative correlation (r= -0.570). Similarly, based on non-linear regression, there was a positive correlation between increased ATP (URL log · ml -1) and the increase in CBT (r 2 = 0.61) and CCS (2 R = 0.81). Thus, it was found answer to microbiological quality of the milk and cell function in the ATP-bioluminescence, when the content of ATP (URL log · ml -1) was above 4.21 and 4.44 for SCC and TBC, respectively. As regards This evaluation of the cleanliness of equipment and manipulators hand, we found a significant reduction (P <0.05) values for the URL after cleaning and sanitizing the same. The results may eventually contribute to the development and application of ATP-bioluminescence in assessing the quality of raw milk.

Este trabalho tem por finalidade reunir informações para que em um local de produção de leite com finalidade econômica se possa ter um produto com o minimo possível de bactérias, não patogênicas para o consumo humano. Descrevemos o desenvolvimento da glândula mamária, porque, é aí que começa o problema do leite: podemos chamá-la de \"Fábrica de leite\", com todos os seus incovenientes. Tomamos a precaução de informar sobre os cuidados higiênicos e mecânicos quando houver a manipulação do úbere para a extração do leite. Ressaltamos as possíveis fontes de contaminação do lei te iniciando com o animal passando pelo meio ambiente, pelo ordenhador, transporte e distribuição. Relacionamos os locais utilizados para o manejo dos animais em produção e as condições higiênicas necessárias para tal. Sobre microrganismos, lembramos os que se desenvolvem no leite e os transformam causando alterações prejudiciais ao produto e os outros que prejudicam os consumidores causando-lhe doenças, algumas muito graves, outras menos graves; mas todas quebrando a higidez do consumidor e por consequência avolumando o rol das doenças notificáveis. Analisamos os componentes do leite, frente a legislação vigente, apresentando uma tabela com a composição do leite das diversas espécies animais. Repassamos as análises químicas e físicas que os regulamentos impõem e apresentamos as recomendações do Ministério da Saúde quanto á flora bacteriana mínima permitida. Os objetivos são bem claros, pois há necessidade de uma assistência sanitária aos criadores, uma orientação aos comerciantes e esclarecimentos às autoridades administrativas, da saúde e educação. As tabelas obtidas com as análises realizadas, demonstram claramente as distorções encontradas nas amostras de leite colhidas nas regiões de Itapecerica da Serra e Juquitiba. A porcentagem de amostras de leite que estariam condenadas somam, para Itapecerica da Serra 76,18% e para Juquitiba 71,72%. Esse quadro dá idéia perfeita de que a produção de leite naquela região está abandonada pelas autoridades responsáveis pela Vigilância Sanitária (Setor Saúde) e pela Defesa Sanitária Animal (Setor Econômico). / This paper aims at assembling information in order that the least number possible of non-pathogenic bacteria for human consumption can be achieved in a site designed for a profitable dairy. The development of the mammary gland is described since it is there that the problem of milk begins; it can be called a \"milk-factory\", with all its inconveniences. All precautions are taken to inform about sanitary and mechanical procedures on the process of milk-extraction carried out by ubre handling. Some possible sources of milk contamination are emphasized, beginning with those related to the animal and going on with those originated from the enviroment, the milker, and the milk transportation and distribuition. The most common sites used for managing animals in production are mentioned, as well as the needed sanitary conditions for such end. In what microorganisms are concerned to, we point out the ones which are developed within the milk, transforming it and causing harmfull alterations to the product and others that injure the consumer\'s health causing diseases, some of them very serious, other less serious, but all of them breaking the consumer\'s state of health and, as a consequence, increasing the roll communicable diseases. Milk components are analysed in face of the current legislation with the presentation of a table containing the milk-composition concerning various animal species. A review on the chemical and psysical analyses required by law is made, presenting the recommendations of the Ministry oh Health as to the minimal bacterial flora allowed. The objectives of the paper are rather clear, since there is a need for sanitary assistance on the part of the cattle breeders, orientation to be provided to milk-traders and englightenment to both, the health and education administrative authorities. Data from the analyses carried out clearly demonstrate the distortions found out in milk-samples collected along the Itapecerica da Serra and Juquitiba regions. The percentage of milk-samples which would be condemned by health authorities sums up 76.18% for Itapecerica da Serra and 71.72% for Juquitiba. This picture gives a perfect idea of how the milk-production in that region is left abandonmed by the authorities in charge of the sanitary surveillance (Health sector) and the Animal sanitary Defense (Economic Sector).

Este trabalho tem por finalidade reunir informações para que em um local de produção de leite com finalidade econômica se possa ter um produto com o minimo possível de bactérias, não patogênicas para o consumo humano. Descrevemos o desenvolvimento da glândula mamária, porque, é aí que começa o problema do leite: podemos chamá-la de \"Fábrica de leite\", com todos os seus incovenientes. Tomamos a precaução de informar sobre os cuidados higiênicos e mecânicos quando houver a manipulação do úbere para a extração do leite. Ressaltamos as possíveis fontes de contaminação do lei te iniciando com o animal passando pelo meio ambiente, pelo ordenhador, transporte e distribuição. Relacionamos os locais utilizados para o manejo dos animais em produção e as condições higiênicas necessárias para tal. Sobre microrganismos, lembramos os que se desenvolvem no leite e os transformam causando alterações prejudiciais ao produto e os outros que prejudicam os consumidores causando-lhe doenças, algumas muito graves, outras menos graves; mas todas quebrando a higidez do consumidor e por consequência avolumando o rol das doenças notificáveis. Analisamos os componentes do leite, frente a legislação vigente, apresentando uma tabela com a composição do leite das diversas espécies animais. Repassamos as análises químicas e físicas que os regulamentos impõem e apresentamos as recomendações do Ministério da Saúde quanto á flora bacteriana mínima permitida. Os objetivos são bem claros, pois há necessidade de uma assistência sanitária aos criadores, uma orientação aos comerciantes e esclarecimentos às autoridades administrativas, da saúde e educação. As tabelas obtidas com as análises realizadas, demonstram claramente as distorções encontradas nas amostras de leite colhidas nas regiões de Itapecerica da Serra e Juquitiba. A porcentagem de amostras de leite que estariam condenadas somam, para Itapecerica da Serra 76,18% e para Juquitiba 71,72%. Esse quadro dá idéia perfeita de que a produção de leite naquela região está abandonada pelas autoridades responsáveis pela Vigilância Sanitária (Setor Saúde) e pela Defesa Sanitária Animal (Setor Econômico). / This paper aims at assembling information in order that the least number possible of non-pathogenic bacteria for human consumption can be achieved in a site designed for a profitable dairy. The development of the mammary gland is described since it is there that the problem of milk begins; it can be called a \"milk-factory\", with all its inconveniences. All precautions are taken to inform about sanitary and mechanical procedures on the process of milk-extraction carried out by ubre handling. Some possible sources of milk contamination are emphasized, beginning with those related to the animal and going on with those originated from the enviroment, the milker, and the milk transportation and distribuition. The most common sites used for managing animals in production are mentioned, as well as the needed sanitary conditions for such end. In what microorganisms are concerned to, we point out the ones which are developed within the milk, transforming it and causing harmfull alterations to the product and others that injure the consumer\'s health causing diseases, some of them very serious, other less serious, but all of them breaking the consumer\'s state of health and, as a consequence, increasing the roll communicable diseases. Milk components are analysed in face of the current legislation with the presentation of a table containing the milk-composition concerning various animal species. A review on the chemical and psysical analyses required by law is made, presenting the recommendations of the Ministry oh Health as to the minimal bacterial flora allowed. The objectives of the paper are rather clear, since there is a need for sanitary assistance on the part of the cattle breeders, orientation to be provided to milk-traders and englightenment to both, the health and education administrative authorities. Data from the analyses carried out clearly demonstrate the distortions found out in milk-samples collected along the Itapecerica da Serra and Juquitiba regions. The percentage of milk-samples which would be condemned by health authorities sums up 76.18% for Itapecerica da Serra and 71.72% for Juquitiba. This picture gives a perfect idea of how the milk-production in that region is left abandonmed by the authorities in charge of the sanitary surveillance (Health sector) and the Animal sanitary Defense (Economic Sector).

Amostras de leite \'in natura\'coletados de diferentes latões foram analisadas por espectrofotometria de absorção atômica com forno de grafite, para determinação dos níveis residuais de cádmio, tendo sido selecionados latões com pontos de solda(L1), latões velhos(L2) e latões reestanhados(L3), perfazendo um total de 59 amostras, sendo o seguinte os valores médios encontrados: Latões com pontos de solda: 0,0169 ppm Latões velhos: 0,0168 ppm Latões reestanhados 0,0118 ppm Não foram encontradas diferenças significativas nos níveis residuais de cádmio considerando-se os diferentes tipos de latões, tendo-se efetuado o teste de Significância entre duas médias a um nível de garantia de 95 %. Os valores absolutos estiveram entre 0,0500 ppm e 0,0020 ppm de cádmio. Avaliaram-se os valores residuais de cádmio, considerando-se apenas a origem do leite, ou seja a propriedade rural, tendo-se observado valores médios variando de 0,0080 ppm a 0,0272 ppm. Foram encontradas diferenças significativas entre os níveis residuais de cádmio nas amostras de leite levando-se em conta a origem do produto. Coletaram-se amostras de leite de 05 animais diretamente na propriedade rural, e o valor médio encontrado foi de 0,01738 ppm, mais elevado do que a média encontrada nos diferentes latões. Pelos valores determinados por outros autores em diferentes países, quando comparados com os resultados da presente pesquisa, pode-se supor que os níveis aqui detectados, embora dentro dos padrões da legislação brasileira, podem estar elevados, colocando em risco a saúde de crianças e pessoas debilitadas, tendo em vista o potencial do metal pesado se acumular no organismo, causando-lhe danos irreversíveis. O autor sugere maiores pesquisas sobre os níveis residuais de metais pesados em órgãos de animais abatidos, utilizados na alimentação humana e na fabricação de rações animais. Sugere ainda pesquisas abrangentes nos adubos fosfóricos utilizados nas plantações e levantamentos epidemiológicos nas populações rurais que consomem produtos diretamente das propriedades onde ocorrem as contaminações. Não foram encontradas as fontes de contaminação do leite, porém vários autores asseveraram que pode estar ocorrendo uma contaminação natural de plantas e animais decorrentes do uso de produtos contaminados com metais pesados, podendo ainda ser uma contaminação casual e até do próprio solo, contaminado pelo cádmio. / A total of 64 samples of raw milk collected in a processing plant were analysed for the determination of cadmium levels, using the Atomic Absorption Spectrophotometry attached to a Carbon Rod atomizer.The cans used for milk transportation were selected as follow: soldered cans, older cans and tinned cans. The mean average of cadmium levels in milk sanples were: soldered cans- 0,0169 ppm, older cans- 0,0168 ppm tinned cans 0,0118 ppm There were no statistical differences amongst the cadmium levels in milk from different cans. The cadmium levels in milk were analysed to verify the statistical differences amongst the sites of production, and the mean values ranged from 0,0272 ppm to 0,0020 ppm. Statistical differences in cadmium levels related to the different sites of production were found. Samples of cows milk were collected and analysed for cadmium determination, and mean average level was 0,01738 ppm., higher tham the mean average levels from different cans. The mean cadmium values from this issue , and the values reported by other authors in papers ,allow us to say that probably the cadmium levels found in milk samples might be hight specially for children and older persons. These levels may be a Public Health hazard to those who consume products from animal sources The author suggests that more issues to determine the metal levels in animal organs consumed by the population and used for animal feedstuff should be made. In attempt to an epidemiological study in the population that uses milk and others products from farms, more studies should be made. Sources of milk contamination were not found, and authors claimmed that these metals are present in plants and soil with an unknown origin, probably due to environmental contamination.

Amostras de leite \'in natura\'coletados de diferentes latões foram analisadas por espectrofotometria de absorção atômica com forno de grafite, para determinação dos níveis residuais de cádmio, tendo sido selecionados latões com pontos de solda(L1), latões velhos(L2) e latões reestanhados(L3), perfazendo um total de 59 amostras, sendo o seguinte os valores médios encontrados: Latões com pontos de solda: 0,0169 ppm Latões velhos: 0,0168 ppm Latões reestanhados 0,0118 ppm Não foram encontradas diferenças significativas nos níveis residuais de cádmio considerando-se os diferentes tipos de latões, tendo-se efetuado o teste de Significância entre duas médias a um nível de garantia de 95 %. Os valores absolutos estiveram entre 0,0500 ppm e 0,0020 ppm de cádmio. Avaliaram-se os valores residuais de cádmio, considerando-se apenas a origem do leite, ou seja a propriedade rural, tendo-se observado valores médios variando de 0,0080 ppm a 0,0272 ppm. Foram encontradas diferenças significativas entre os níveis residuais de cádmio nas amostras de leite levando-se em conta a origem do produto. Coletaram-se amostras de leite de 05 animais diretamente na propriedade rural, e o valor médio encontrado foi de 0,01738 ppm, mais elevado do que a média encontrada nos diferentes latões. Pelos valores determinados por outros autores em diferentes países, quando comparados com os resultados da presente pesquisa, pode-se supor que os níveis aqui detectados, embora dentro dos padrões da legislação brasileira, podem estar elevados, colocando em risco a saúde de crianças e pessoas debilitadas, tendo em vista o potencial do metal pesado se acumular no organismo, causando-lhe danos irreversíveis. O autor sugere maiores pesquisas sobre os níveis residuais de metais pesados em órgãos de animais abatidos, utilizados na alimentação humana e na fabricação de rações animais. Sugere ainda pesquisas abrangentes nos adubos fosfóricos utilizados nas plantações e levantamentos epidemiológicos nas populações rurais que consomem produtos diretamente das propriedades onde ocorrem as contaminações. Não foram encontradas as fontes de contaminação do leite, porém vários autores asseveraram que pode estar ocorrendo uma contaminação natural de plantas e animais decorrentes do uso de produtos contaminados com metais pesados, podendo ainda ser uma contaminação casual e até do próprio solo, contaminado pelo cádmio. / A total of 64 samples of raw milk collected in a processing plant were analysed for the determination of cadmium levels, using the Atomic Absorption Spectrophotometry attached to a Carbon Rod atomizer.The cans used for milk transportation were selected as follow: soldered cans, older cans and tinned cans. The mean average of cadmium levels in milk sanples were: soldered cans- 0,0169 ppm, older cans- 0,0168 ppm tinned cans 0,0118 ppm There were no statistical differences amongst the cadmium levels in milk from different cans. The cadmium levels in milk were analysed to verify the statistical differences amongst the sites of production, and the mean values ranged from 0,0272 ppm to 0,0020 ppm. Statistical differences in cadmium levels related to the different sites of production were found. Samples of cows milk were collected and analysed for cadmium determination, and mean average level was 0,01738 ppm., higher tham the mean average levels from different cans. The mean cadmium values from this issue , and the values reported by other authors in papers ,allow us to say that probably the cadmium levels found in milk samples might be hight specially for children and older persons. These levels may be a Public Health hazard to those who consume products from animal sources The author suggests that more issues to determine the metal levels in animal organs consumed by the population and used for animal feedstuff should be made. In attempt to an epidemiological study in the population that uses milk and others products from farms, more studies should be made. Sources of milk contamination were not found, and authors claimmed that these metals are present in plants and soil with an unknown origin, probably due to environmental contamination.

Submitted by Nathália Faria da Silva (nathaliafsilva.ufv@gmail.com) on 2017-06-13T14:45:37Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 282625 bytes, checksum: 1e1c48c9480ac4efd3e2ae6aca4983db (MD5) / Made available in DSpace on 2017-06-13T14:45:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 282625 bytes, checksum: 1e1c48c9480ac4efd3e2ae6aca4983db (MD5) Previous issue date: 2003-02-26 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / A diversidade genética entre 113 culturas de bactérias psicrotróficas proteolíticas isoladas de amostras de leite cru granelizado foi avaliada utilizando- se a técnica de RAPD. Foi constatada uma grande diversidade genética entre os isolados, indicando fontes de contaminação diversas. A presença do gene apr, que codifica metaloproteases termorresistentes, foi avaliada por PCR em 26 culturas controle e em 133 isolados psicrotróficos proteolíticos de leite cru resfriado e granelizado. Detectou-se a presença do amplificado do gene apr apenas nas culturas de referência Serratia marcescens ATCC 8100, Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 e estirpes de P. aeruginosa ATCC 15442 e ATCC 27853. A presença do gene apr foi detectada na mistura de DNA dos isolados psicrotróficos proteolíticos que apresentaram características fenotípicas de espécies do gênero Pseudomonas, quais sejam, Gram-negativas, não fermentadoras, catalase e oxidase positivas. Os demais isolados Gram-negativos e os Gram-positivos, embora tenham apresentado atividade proteolítica, não apresentaram o amplificado do gene apr. A técnica de PCR permitiu identificar a presença de população acima de 10 5 UFC/mL de P. fluorescens inoculada em leite desnatado reconstituído após a extração do DNA total das bactérias. Entretanto, quando amostras de leite pasteurizado inoculado com populações variando de 10 5 a 10 8 UFC/mL foram analisadas por PCR, sem a etapa de extração do DNA total, o limite de detecção foi de 10 8 UFC/mL. / The genetic diversity of 113 cultures of proteolytic psychrotrophic bacteria isolated from raw milk collected from cooling tanks was analyzed by RAPD. A great genetic diversity was detected among these isolates indicating different sources of contamination. The presence of the apr gene, which codes a heat- resistant metalloprotease, was assessed by PCR in 26 type strains and in 136 proteolytic psychrotrophic bacteria isolated from raw milk. The presence of the apr gene was only detected in Serratia marcescens ATCC 8100, Pseudomonas fluorescens ATCC 13525 and, strains of P. aeruginosa ATCC 15442 and ATCC 27853. The apr gene was detected in total DNA extracted from proteolytic psychrotrophics that showed phenotypic characteristics belonging to Pseudomonads such as Gram-negative, non-fermentative, positive-catalase and positive-oxidase. The apr gene was not detected in the other Gram-negative and Gram-positive isolates studied although they have displayed proteolysis. The PCR technique identified the presence of Pseudomonas fluorescens when total DNA was extracted from skim milk previously inoculated with a bacterial population containing 10 5 CFU/mL. However, the detection limit of apr gene without the DNA extraction step was 10 8 CFU/mL in pasteurized milk.

Submitted by Mario BC (mario@bc.ufrpe.br) on 2018-09-04T12:05:15Z No. of bitstreams: 1 Arthur Vinicius Lago Lopes.pdf: 789894 bytes, checksum: ed857b8c03a8e4151b4055f27b4d30a9 (MD5) / Made available in DSpace on 2018-09-04T12:05:15Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Arthur Vinicius Lago Lopes.pdf: 789894 bytes, checksum: ed857b8c03a8e4151b4055f27b4d30a9 (MD5) Previous issue date: 2018-02-28 / The storage of food at low temperatures is the most widely used form of preservation in the production and distribution of fresh food. The practice of storing raw milk refrigerated at the source of production was instituted by the Ministry of Agriculture, Livestock and Food Supply (MAPA) in 2002, aiming to reduce the losses due to the acidifying action of mesophiles. The research of contaminating microorganisms allows the identification of the flaws that lead to the proliferation of these bacterial groups with consequent loss of product quality, and allows the adoption of control measures in order to meet the standards established by the legislation. The objective was to determine the microbiological quality of raw milk from 12 farms located in Pernambuco, Brazil, through quantification of mesophiles and coliforms, which are the micro-organisms of choice for quality control of refrigerated raw milk, whose maximum amounts are established in the current legislation. After quantification and establishment of the cooling effect, 80 isolates of these microorganisms were stocked and passed through molecular tests for genotypic identification of the Escherichia coli strain O157: H7 species. Refrigeration for 24 hours did not interfere with microbial proliferation (P≥0.05) and E. coli O157: H7 was not identified. It is concluded that the milk produced in the properties of three municipalities that compose the milk basin of the state of Pernambuco presents low microbiological quality, which can result in harm to the producers. / O armazenamento de alimentos a baixas temperaturas é a forma de conservação mais utilizada na produção e distribuição de alimentos frescos. A prática de estocagem do leite cru refrigerado na fonte de produção foi instituída pelo Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento - MAPA em 2002, visando reduzir as perdas por ação acidificante de mesófilos. A pesquisa de micro-organismos contaminantes permite a identificação das falhas que levam a proliferação desses grupos bacterianos com consequente perda da qualidade do produto, e possibilita a adoção de medidas de controle de forma a atender os padrões estabelecidos pela legislação. Objetivou-se determinar a qualidade microbiológica do leite cru de 12 propriedades localizadas no agreste pernambucano, por meio de quantificação de mesófilos e coliformes, que são os micro-organismos indicadores de eleição para o controle da qualidade do leite cru refrigerado, cujo as quantidades máximas permitidas são estabelecidas na legislação vigente. Após a quantificação e o estabelecimento do efeito da refrigeração, 80 isolados desses micro-organismos foram estocados e passaram por testes moleculares para identificação genotípica da espécie Escherichia coli cepa O157:H7. A refrigeração por 24 horas não interferiu na proliferação microbiana (P≥0,05) e a E. coli O157:H7 não foi identificada. Conclui-se que o leite produzido nas propriedades de três municípios que compõem a bacia leiteira do estado de Pernambuco apresenta baixa qualidade microbiológica, o que pode resultar em prejuízo aos produtores.