Thesis (Ph. D.)--Case Western Reserve University, 2009. / [School of Medicine] Department of Genetics. Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--Case Western Reserve University, 2008. / [School of Medicine] Department of Epidemiology and Biostatistics. Includes bibliographical references.

Submitted by Natalia Vieira (natalia.vieira@famerp.br) on 2016-05-19T19:07:09Z No. of bitstreams: 1 sabrinamayaracezario_dissert.pdf: 2283086 bytes, checksum: 130b0d9b52a17f23980c982605a0dad9 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-05-19T19:07:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 sabrinamayaracezario_dissert.pdf: 2283086 bytes, checksum: 130b0d9b52a17f23980c982605a0dad9 (MD5) Previous issue date: 2015-05-27 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo - FAPESP / Background - Age-related macular degeneration (AMD) is a complex disease. The identification of risk factors may contribute to the prognosis and treatment. Objectives – Evaluate the influence of genetic variants related to lipid metabolism, angiogenesis and inflammation and its relation with clinical and lipid profile and lifestyle beyond their gene expression in patients with AMD. Casuistic and Methods – We studied 333 individuals aged ≥50 years, 108 with AMD in exudative form (G1); 45 with AMD in dry form (G2), and 180 individuals without clinical and angiographic signs of the disease (G3). The polymorphisms of apolipoprotein E (APOE-rs429358/rs7412), triphosphate binding cassette sub -family A transport -member 4 (ABCA4-rs472908), complement factor H (CFH-rs1061170) and vascular endothelial growth factor (VEGF-rs3025039/rs1570360) were analyzed by PCR/RFLP (polymerase chain reaction/restriction fragments length polymorphism), while the respective gene expression in blood by PCR/RT (reverse transcription-PCR) and serum levels of apo E, ABCR, CFH, VEGF by ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay). Clinical and lipid profile data in addition to lifestyle were obtained from medical records and questionnaire. Level of significance was accepted for P<0.05. Results – Systemic arterial hypertension (SAH) and smoking prevailed in patients with AMD exudative form (P<0.05). Genetic polymorphisms: APOE- rs429358/rs7412 - APOE*3/3 was noted in all groups, followed by APOE*3/4, as well APOE*4 (P>0.05). ABCA4-rs472908 - Genotype A/G was more frequent in G3 (68%) versus G2 (44%; P<0.0001), while A/A in G2 (36%) versus G1 (19%; P=0.04) and G3 (14%; P=0.003). The mutant genotype (G/G) prevailed in combination (G1+G2) versus G3 (P< 0.0001), and allele G in all groups (P>0.05). CFH-rs1061170 – The wild homozygous (TT) was in evidence in G3 (58%) versus G1 (39%, P=0.003); as well the homozygous mutant (CC) in G1 (27 %) versus G3 (14%; P=0.002) and allele T in G3 (0.72) versus G1 (0.56; P=0.0002). VEGF-rs3025039 – Genotypic and allelic distribution were similar between groups (P>0.05), highlighting the CC genotype and allele C. VEGF-rs1570360 – Mutant homozygote (A/A) prevailed in G2 (21%) versus G1 (5%; P=0.002) and G3 (8%; P=0.015) as well as the wild type allele (G) G1 (0.75) and G3 (0.71) versus G2 (0.57, P=0.004, P=0.020, respectively). Gene expression – Similar values between groups for all analyzed genes (P>0.05). Serum levels (median values in ng/mL) – ApoE– Increased level in G1 (270.6) versus G2 (196.5; P<0.0001) and G3 (242.8; P=0.035), and G3 versus G2 (P=0.0002). ABCR – High levels in G1 (0.30) versus G2 (0.25; P=0.003) and G3 (0.25, P<0.0001). CFH – Increase in G1 (1198.9) versus G2 (859.8; P=0.0069), both higher than in G3 (618.3; P<0.001, P=0.001, respectively). VEGF – Similar values between groups (P>0.05). Lipid profile – G3 showed the highest level of HDLc (median=71mg /dL), compared to G2 (60mg/dL), and G1 (45mg/dL; P=0.003, P=0.029, respectively). Conclusion – Genetic variants of ABCA4, VEGF and CFH, besides SAH, smoking and increased serum levels of apo E, ABCR and CFH are associated with AMD, whereas the expression of the respective genes not differentiate AMD exsudative and dry forms, in contrast CFH (homozygous wild-type) has a protective character, as well as serum levels of HDLc. / Introdução – Degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma doença complexa. A identificação de fatores de risco poderá contribuir no seu prognóstico e tratamento. Objetivos – Avaliar a influência de variantes genéticas, relacionadas com o metabolismo de lipídios, angiogênese e inflamação e sua relação com perfil clínico e lipídico e hábitos de vida, além das respectivas expressões gênicas em pacientes com DMRI. Casuística e Métodos – Foram estudados 333 indivíduos com idade ≥50 anos, sendo 108 com DMRI na forma exsudativa (G1); 45 com DMRI na forma seca (G2) e 180 indivíduos sem sinais clínicos e angiográficos da doença (G3). Os polimorfismos de apolipoproteína E (APOE-rs429358/rs7412), triphosphate binding cassette transporte sub-family A-member 4 (ABCA4-rs472908), complemento do fator H (CFH-rs1061170) e fator de crescimento endotelial vascular (VEGF-rs3025039/rs1570360) foram analisados por PCR/RFLP (polymerase chain reaction/restriction fragments lengh polymorphism), enquanto as respectivas expressões gênicas no sangue por PCR/RT (reverse transcription-PCR) e níveis séricos de apo E, ABCR, CFH, VEGF por ELISA (enzyme linked immuno sorbent assay). Dados de perfil clínico e lipídico, além de hábitos de vida, foram obtidos em prontuário médico e questionário. Admitiu-se nível de significância para P<0,05. Resultados – Hipertensão arterial sistêmica (HAS) e tabagismo prevaleceram em pacientes com DMRI exsudativa (P<0,05). Polimorfismos genéticos: APOE-rs429358/rs7412–APOE*3/3 destacou-se em todos os grupos, seguido de APOE*3/4, assim como o alelo APOE*4 (P>0,05). ABCA4-rs472908–O genótipo A/G foi mais frequente em G3 (68%) versus G2 (44%; P<0,0001), enquanto A/A em G2 (36%) versus G1 (19%; P=0,043) e G3 (14%; P=0,003). O genótipo mutante (G/G) prevaleceu na combinação (G1+G2) versus G3 (P<0,0001), e o alelo G em todos os grupos (P>0,05). CFH-rs1061170–O homozigoto selvagem (TT) destacou-se em G3 (58%) versus G1 (39%, P=0,003); já o homozigoto mutante (CC) em G1 (27%) versus G3 (14%; P=0,002), e o alelo T em G3 (0,72) versus G1 (0,56; P=0,0002). VEGF-rs3025039–Distribuição genotípica e alélica semelhante entre os grupos (P>0,05), destacando-se o genótipo CC e alelo C. VEGF-rs1570360–Homozigoto mutante (A/A) prevaleceu em G2 (21%) versus G1 (5%; P=0,002) e G3 (8%; P=0,015), assim como o alelo selvagem (G) em G1 (0,75) e G3 (0,71) versus G2 (0,57; P=0,004; P=0,020, respectivamente). Expressão gênica–Valores semelhantes entre os grupos para todos os genes analisados (P>0,05). Níveis séricos (valores de mediana em ng/mL)–ApoE–Aumento em G1 (270,6) versus G2 (196,5; P<0,0001) e G3 (242,8; P=0,035), e G3 versus G2 (P=0,0002). ABCR–Níveis elevados em G1 (0,30) versus G2 (0,25; P=0,003) e G3 (0,25; P<0,0001). CFH–Aumento em G1 (1.198,9) versus G2 (859,8; P=0,0069), ambos com acréscimo em relação a G3 (618,3; P<0,001; P=0,001, respectivamente). VEGF–Valores semelhantes entre os grupos (P>0,05). Perfil lipídico–G3 mostrou valor mais elevado de HDLc (mediana=71mg/dL), comparado a G2 (60mg/dL) e G1 (45mg/dL) (P=0,003; P=0,029, respectivamente). Conclusão – Variantes genéticas de ABCA4, VEGF e CFH, além de HAS, tabagismo e nível sérico elevado de apoE, ABCR e CFH associam-se a DMRI, enquanto a expressão dos referidos genes não diferencia DMRI exsudativa e seca, em contrapartida CFH (homozigoto selvagem) tem caráter protetor, assim como nível sérico de HDLc.

ObjetivosEstudiar el papel de la extracción de la membrana limitante interna (MLI) durante la vitrectomía posterior por vía pars plana (VPP), en el tratamiento quirúrgico de lo agujero macular (AM) y de lo edema macular crónico diabético (EMCD). Hemos estudiado las tasas de éxito clínico de la extracción de la MLI durante la VPP. Además hemos analizado el procedimiento técnico de extracción de la MLI, el aporte de la extracción de la MLI en la resolución clínica del EMCD después de la VPP y el valor de la tomografía de coherencia óptica (TCO) en el seguimiento de pacientes con EMCD y AM.El objetivo secundario consistía en establecer una correlación clínico-patológica mediante el examen histológico de la MLI. Este estudio abarcaba los descubrimientos histológicos y las diferencias de la MLI observadas mediante microscopia electrónica de transmisión (MET) y microscopia óptica (MO).Material y MétodosEstudio prospectivo de un año de 28 pacientes, no randomizado, no comparativo, con dos grupos de pacientes: 1) grupo con AM; 2) grupo con EMCD resistente al tratamiento láser.Los pacientes habían sido sometidos, antes y después de la VPP, a un examen oftalmológico: refracción objetiva, mejor agudeza visual (AV) corregida con teste de Snellen, medición de la presión intraocular, biomicroscopia, examen del fondo ocular y oftalmoscopia indirecta. El seguimiento postoperatorio fue efectuado durante el primer año a un día, una semana, 1, 3, 6 y 12 meses del postoperatorio. Los pacientes fueron sometidos a angiografía fluoresceínica digital, fotografía del fondo de ojo y mapado macular con TCO, como exámenes diagnósticos complementarios. Todos los pacientes fueron sometidos a la VPP y el objetivo principal era la disección epiretiniana y extracción de la MLI. Las MLIs fueron preparadas para un análisis con MO y MET. ResultadosEn el grupo con AM formado por diez ojos, seis tenían AM de tipo 2 y 3 y cuatro de tipo 4 (clasificación de Gass). Cinco pacientes presentan AM idiopáticos. Todos, salvo uno, mantuvieron o mejoraron la mejor AV corregida al final del estudio. La mejora de la VA era significativa estadísticamente sólo después del tercer mes del postoperatorio. El seguimiento mediante OCT demostró que el cierre del los AM fue alcanzado en nueve de ellos. La TCO pudo acompañar la evolución anatómica del cierre del agujero. En los 18 pacientes con EMCD, trece ojos mejoraron la AV, en dos no se produjo ningún cambio y tres empeoraron la AV, al final del seguimiento. La mejora de la AV comenzó a ser significativa entre el tercer y sexto mes del postoperatorio. El espesor foveal postoperatorio se redujo de manera significativa y progresiva respecto al observada en el preoperatorio. Hemos observado una disminución graduada y evidente del espesor macular paralelamente con una mejora progresiva de la AV: cuanto menos espessa era la fovea (TCO), mayor resultaba la mejor AV corregida. Hemos analizado las características ultraestructurales de la MLI normal en las retinas extraídas de dos donadores de ojos y comparado la MLI obtenida de los ojos sometidos a la VPP. Hemos realizado el examen histopatológico en 10 muestras del grupo con AM. Hemos podido observar la presencia de la MLI en 9 muestras. Hemos encontrado residuos de retina neurosensorial asociada con la superficie retinal de la MLI en 3 muestras. Pocas MLI presentaban un componente celular asociado con la superficie vítrea. En algunas MLI, hemos observado la presencia de fragmentos condensados de la hialoides posterior, a veces asociado con componente celular. Hemos llevado a cabo 75 mediciones correspondientes a distintos segmentos de la MLI. Los resultados han demostrado una significativa diferencia (p = 0.00011) entre el promedio del espesor de la MLI en el grupo con AM y en máculas normales. Al comparar el promedio de espesor observado en el grupo con AM con los obtenidos en el grupo con EMCD (2.2 ± 0.78 µm), la diferencia era siempre significativa (p = 0.03).En las muestras diabéticas examinadas mediante MET, hemos podido observar la presencia de la MLI en 7 muestras sobre 10. En 3 muestras sobre 10 no había ninguna MLI y la membrana epiretiniana presentaba una gran cantidad de matriz extracelular (colágeno y una gran variabilidad de células). El único descubrimiento histopatológico observado en 5 muestras mediante MET consistía en segmentos de MLI sin componentes fibrilares o celulares. Cuatro muestras presentaban una abundante disposición de colágeno compatible con el espesoramiento de la membrana hialoides o MER. Distintos tipos que rodeaban el colágeno extracelular componen la población celular asociada al tejido diabético: a) células glials; b) células fibroblásticas; c) células epiteloides; d) células plasmáticas macrófagas. En la MET hemos podido demostrar la presencia de componentes retinales neurosensoriales asociadas con la superficie retiniana de la MLI en 3 muestras.ConclusionesGrupo de Agujeros Maculares: 1. La VPP asociada a la extracción de la MLI es un procedimiento de utilidad para el tratamiento quirúrgico de los AM. En el presente estudio prospectivo de un año, la tasa de cierre anatómico fue de un 90% y la mejor media de la AV final corregida se obtuvo en los ojos con éxito anatómico.2. La TCO contribuyó para el diagnóstico, se presentó como una alternativa no invasiva para la evaluación del estado foveal y permitió documentar y analizar la evolución del cierre anatómico de los AM.Grupo de Edema Macular Diabético:1. El presente estudio clínico prospectivo de un año demostró los beneficios de la extracción de la MLI, mediante VPP, como tratamiento quirúrgico del EMCD. La extracción de la MLI conllevó a una disminución del engrosamiento de la retina, a la resolución clínica del edema macular y a una mejor AV.2. La TCO permitió un seguimiento cualitativo del perfil de la retina y un análisis cuantitativo de las pequeñas variaciones del espesor macular. El espesor de la macula ha disminuido significativamente al final del primer mes del postoperatorio (p = 0,00016) comparado con una mejoría significativa de la AV corregida a partir del sexto mes de seguimiento clínico (p = 0,05).3. Mediante MO y MET, el estudio histológico mostró la ausencia de fragmentos de MLI en algunos de los especimenes analizados. Algunas piezas histológicas eran membranas epirretinianas o la hialoides posterior engrosada. Ambos Grupos:1. La correlación clínico-patológica indicó que la presencia de elementos de la retina neurosensorial observados en la cara retiniana de algunos especimenes de MLI fue extraída de ojos que presentarían una peor AV final corregida.2. El espesor de la MLI observado en el grupo de AM fue mayor que el observado en el grupo de EMCD (p = 0,03) que, a su vez, fue mayor que el espesor observado en la MLI de la retina normal (p = 0,00003).

Although bevacizumab is one of the most commonly used treatments for DME and AMD, there are concerns regarding safety and effectiveness due to its off-label use. The study objectives were to determine if: 1) the risk of cardiovascular/ hemorrhagic events (safety) and visual impairment (effectiveness) differed by bevacizumab use (i.e., use vs. non-use and number of treatments) among DME and AMD patients; and 2) direct medical costs differed between DME and DME control patients. A retrospective cohort analysis was conducted with Texas Medicaid medical and prescription data (9/1/07-12/31/12) for patients: 18- 63 years, continuously enrolled 1-year pre- and post-index, and diagnosed with DME or AMD. The index date was the first date of diagnosis. The dependent variables were: 1) cardiovascular/hemorrhagic risk; 2) visual impairment; 3) direct medical costs. The independent variables were bevacizumab use and number of bevacizumab treatments. Covariates were disease state, Charlson Comorbidity Index (CCI) score, total medication use, number of laser treatments, and demographics. Propensity scoring technique was used to match: 1) bevacizumab users and non-users; and 2) DME and DME control cohorts. Descriptive analyses, logistic regression, Cox-regression, and generalized linear models were employed. A final cohort of 3,647 DME, 297 AMD, and 57,897 DME control patients were included. The majority (DME and AMD) was between 45-63 years of age (86.6%), Hispanic (54.0%), and female (65.1%). The mean total number of unique medications and mean CCI were 2.7 ± 3.4 and 6.0 ± 3.3, respectively. Total direct medical costs/person (Mean (±SD)) incurred by DME, DME control, and AMD subjects in the post-index period were $6,704(±9,338), $5,495(±10,153), and $4,935(±12,702), respectively. No differences in cardiovascular/ hemorrhagic risk were found between bevacizumab users and non-users. The claims data lacks the detail to determine the effectiveness of bevacizumab. DME control patients had lower overall direct medical costs than DME patients (p<0.0001). In conclusion, although bevacizumab is a less expensive off-label alternative of ranibizumab, the choice between bevacizumab and ranibizumab should be made through careful consideration. However, as the use of anti-VEGF agent increases, further research should be conducted to determine if any changes in cardiovascular adverse events occur. / text

Orientador: Mônica Barbosa de Melo / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas / Made available in DSpace on 2018-08-28T01:54:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Hirata_FabioEndo_M.pdf: 1885791 bytes, checksum: ccde99235ea9bbbcda8608e4c5aaf996 (MD5) Previous issue date: 2015 / Resumo: Introdução: A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma doença crônica degenerativa que afeta a área macular da retina causando diminuição da visão central. É a causa mais comum de perda visual irreversível nos países desenvolvidos. A DMRI é caracterizada pela presença de drusas, anormalidades do epitélio pigmentar da retina (EPR), atrofia geográfica, descolamento do EPR, neovascularização de coróide e cicatriz disciforme. Sua etiologia permanece pouco esclarecida, entretanto fatores genéticos associados a fatores ambientais possuem papel na etiologia e na progressão da doença. Dentre as variações gênicas, uma associação entre o polimorfismo Ala69Ser do gene LOC387715/ARMS2 ( rs10490924 C/T ) e o desenvolvimento da DMRI tem sido relatada em diferentes populações. Objetivo: O objetivo deste estudo foi avaliar se o polimorfismo rs10490924 está associado com a DMRI em uma amostra da população brasileira. Métodos: Cento e vinte e seis pacientes, sem parentesco, com DMRI (idade média de 74,17 ± 7,64) foram comparados com 86 controles saudáveis (idade média 71,82 ± 7,12). Os sujeitos do estudo foram classificados de acordo com o tipo de DMRI em DMRI seca e DMRI exsudativa. O polimorfismo LOC387715/ARMS2 rs10490924 foi avaliado através da reação em cadeia da polimerase e sequenciamento direto. Resultados: A frequência do alelo T foi significativamente maior em pacientes com DMRI do que nos controles (39,6% em comparação com 20,3%, p = 0,00002). O odds ratio (OR) para DMRI foi de 2,05 (IC95 % 1,09-3,89 ) para os heterozigotos (TG) e 8,45 ( IC95 % 2,21-37,82 ) para homozigotos (TT). Conclusões: Os resultados sugerem que há uma contribuição do SNP rs10490924 do gene LOC387715/ARMS2 para susceptibilidade à DMRI nesta amostra da população brasileira / Abstract: Introduction: Age-related macular degeneration (AMD) is a chronic degenerative disease that affects the macular area causing decreased central vision. It is the most common cause of irreversible vision loss in developed countries. It is characterized by the presence of drusen, abnormalities of the retinal pigment epithelium (RPE), geographic atrophy, RPE detachment, choroidal neovascularization, and disciform scar. The etiology of AMD remains poorly understood, but genetic factors associated with environmental factors have a role in the etiology and progression of the disease. Among the analyzed genetic variations, an association between LOC387715/ARMS2 (rs10490924) gene polymorphism and AMD has been reported in different populations. Purpose: The aim of this study was to evaluate whether this polymorphism is associated with AMD in a Brazilian cohort. Methods: A hundred and twenty six unrelated AMD patients (mean age 74.17 ± 7.64) were compared with 86 healthy controls (mean age 71.82 ± 7.12). Study subjects were classified according to the type of AMD in dry and wet AMD. The LOC387715/ARMS2 rs10490924 polymorphism was evaluated through polymerase chain reaction and direct sequencing. Results: The T allele frequency was significantly higher in AMD patients than controls (39.6% compared to 20.3%, p = 0,00002). The odds ratio (OR) for AMD was 2.05 (CI95% 1.09-3.89) for heterozygotes (TG) and 8.45 (CI95% 2.21-37.82) for homozygotes (TT). Conclusions: These results suggest that there is a contribution of the rs10490924 SNP of the LOC387715/ARMS2 gene to AMD susceptibility in this sample of Brazilian population / Mestrado / Oftalmologia / Mestre em Ciências Médicas

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The purpose of this project is to find a mathematical model to describe the vision profile of patients after treatment for choroidal neovascularization. In this model the dependent variable is the level of vision which will be predicted by time after treatment and a number of other variables measured before treatment. A standard multiple regression analysis is used to find significant predictor variables, to investigate interactions and an appropriate transformation. To take the correlation of observations on the same patient into account a linear mixed effects model is fitted. Finally the usefulness of a nonlinear mixed effects model is investigated. / Thesis / Master of Science (MS)

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