Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, 2007. / Submitted by Luis Felipe Souza (luis_felas@globo.com) on 2008-12-01T16:52:13Z No. of bitstreams: 1 Tese_2007_ DavidCruvinelIsaac.pdf: 3988354 bytes, checksum: 32d0b93c9f81c88bba1d50f26c0bf064 (MD5) / Approved for entry into archive by Georgia Fernandes(georgia@bce.unb.br) on 2009-02-11T17:21:20Z (GMT) No. of bitstreams: 1 Tese_2007_ DavidCruvinelIsaac.pdf: 3988354 bytes, checksum: 32d0b93c9f81c88bba1d50f26c0bf064 (MD5) / Made available in DSpace on 2009-02-11T17:21:20Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Tese_2007_ DavidCruvinelIsaac.pdf: 3988354 bytes, checksum: 32d0b93c9f81c88bba1d50f26c0bf064 (MD5) / A Degeneração Macular Relacionada à Idade (DMRI) constitui a principal causa de cegueira legal no mundo ocidental, em faixas etárias superiores a 50 anos. A DMRI é classificada em forma não-neovascular e forma neovascular. Esta última caracteriza-se pela presença da neovascularização de coróide (NVC), sendo responsável por 80% dos casos de cegueira legal atribuídos à doença. A detecção precoce da NVC se faz necessária, uma vez que os tratamentos disponíveis para a doença apresentam melhores resultados quando empregados precocemente. Este estudo tem por objetivo comparar a utilização do Perímetro de Hiperacuidade Preferencial (Preview PHP; Carl Zeiss Meditec, Dublin, Califórnia - EUA) com a tela de Amsler original, ambos métodos não invasivos, na detecção de NVC em pacientes com idade superior a 50 anos, sem doença retiniana ou portadores de diferentes estágios de degeneração macular relacionada à idade (DMRI). Os pacientes incluídos no estudo foram classificados em grupos baseados na gravidade da DMRI e foram submetidos aos testes do PHP e da tela de Amsler. Para comparação entre os métodos foram determinadas asensibilidade, especificidade e acurácia do PHP e da tela de Amsler. Convencionou-se como “Alta”: sensibilidade, especificidade e/ou acurácia, a observação de valores maiores ou iguais a 80%, todos com intervalo de confiança de 95%. Determinou-se como “Baixa”: sensibilidade, especificidade e/ou acurácia, a observação de resultados menores que 80%. Sessenta e cinco pacientes (65 olhos) foram analisados estatisticamente. A sensibilidade de detecção de NVC foi de 70% pela tela de Amsler (95% intervalo de confiança [IC], 58,9%-81,1%) e 90% pelo PHP (95% IC, 82,7%-97,3%), enquanto a especificidade da tela de Amsler foi de 85,5% (95% IC, 76,9%-94,1%) e do PHP 81,8% (95% IC, 74,4-91,2%). A acurácia da tela de Amsler foi de 77,7% (95% IC, 60,1%-95,4%) e do PHP de 85,9% (95% IC, 73,5%-98,4). O PHP apresentou maior sensibilidade que a tela de Amsler (estatisticamente significante). Não houve diferença estatística na especificidade e acurácia entre os métodos. O PHP apresenta maior sensibilidade que a tela de Amsler original na detecção de NVC entre pacientes com idade superior a 50 anos e é um método mais eficaz no monitoramento de pacientes com DMRI. O PHP apresentou alta sensibilidade, alta especificidade e alta acurácia no diagnóstico de NVC secundária à DMRI. A tela de Amsler apresentou alta especificidade e baixa sensibilidade e acurácia no diagnóstico de NVC no grupo de pacientes com idade maior que 50 anos, com diferentes estágios de gravidade da DMRI. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT / Age-related macular degeneration (AMD) is the major cause of blindness in the Western world, among people with 50 years of age or older. AMD is classified in nonexudative AMD and neovascular AMD. The neovascular mainstay is the presence of Choroidal neovascularization (CNV), and it is responsible for 80% of the cases of legal blindness secondary to the disease. The need for early detection is supported by studies that shown that current treatments are associated with better results when the diagnose is precocius. This study has the purpose of compare the use of Preferential Hyperacuity Perimeter (Preview PHP; Carl Zeiss Meditec, Dublin, CA, USA) with the original Amsler grid, both non-invasive methods, in the detection of choroidal neovascularization (CNV) in patients older than 50 years, without retinal disease or different stages of age-related macular degeneration (AMD). Included patients were classified into groups, based on the severity of the AMD and underwent PHP and Amsler grid testing. “High” sensitivity, specificity and/or accuracy of a method were defined as the observation of a value of equal or higher than 80%, with confidence interval of 95%. “Low” sensitivity, specificity and/or accuracy was defined as the observation of a value of less than 80%. Sixty-five patients (65 eyes) were analyzed statistically. The sensitivity of detection of CNV was 70% by the Amsler grid (95% confidence interval [CI], 58.9%-81.1%) and 90% by the PHP (95% CI, 82.7%-97.3%) and the specificity of the Amsler grid was 85.5% (95% CI, 76.9%-94.1%) and the PHP 81.8% (95% CI, 74.4-91.2%). The accuracy of Amsler grid was 77.7% (95% CI, 60.1%-95.4%) and the accuracy of PHP was 85.9% (95% CI, 73.5%-98.4). The PHPhas shown higher sensitivity than the Amsler grid (statistically significant). There was no statistical difference in the specificity and accuracy between both methods. The PHP has greater sensitivity than the Amsler grid in the detection of CNV among patients over 50 years of age and is a more efficient method for monitoring patients with AMD. The PHP has shown to have high sensitivity, high specificity and high accuracy in the diagnosis of CNV. The Amsler grid has shown high specificity and low sensitivity and accuracy.

O comprometimento macular na retinopatia diabética pode ocorrer devido a isquemia macular, hemorragias maculares intra-retinianas e pré-retinianas, descolamento macular tracional, neovascularização e mais freqüentemente o edema macular. Cerca de 10% da população total de pacientes com diabete melito (DM) e 25% daqueles com mais de 20 anos de evolução da doença apresentam edema macular, constituindo a principal causa de perda visual neste grupo de pacientes(1-3). Em pacientes com DM tipo 1, o edema macular é visto raramente antes dos primeiros nove anos após o diagnóstico de DM(4), ao contrário de pacientes diabéticos tipo 2 cujo início da maculopatia é mais precoce. A detecção e o tratamento precoce do edema macular podem resultar na melhora ou na estabilização da visão. Novas teorias sobre a fisiopatologia do edema macular surgiram nos últimos anos e novas terapias como a triancinolona sub-tenoneana ou intravítrea, os anti-VEGFs e implantes intravítreos de liberação lenta de dexametasona foram testadas a partir destes conhecimentos. Este manuscrito propõe a revisão destes conceitos e em especial, dos novos aspectos terapêuticos. / The macular commitment on diabetic retinopathy can occur due to macular ischaemia, intraretinal or preretinal haemorrhages, tractional detachment, neovascularization and more frequently, macular edema. About 10% of the diabetic population and 25% of those with more than 20 years of illness, present macular edema, constituting the main cause of visual loss in this group of patients (1-3). In diabetic type 1 patients, macular edema is rarely seen before 9 years after the diagnostic(4). On the other hand, in diabetic type 2 patients, the maculopathy appears earlier. The detection and the precocious treatment of macular edema can result a visual improvement or stabilization. New theories about the fisiopathology of macular edema had appeared in the last years and new therapies such as sub-tenonean or intravitreal triamcinolone, the anti- VEGFs and slow liberation intravitreal implants of dexametazone were tested since this knowledge. This article considers the revision of these concepts and specially, new therapeutic aspects.

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2012 / Bibliografia: f. 53-63 / A degeneração macular relacionada à idade (DMRI) é uma doença ocular degenerativa. Alguns dos fatores causais desta doença são compartilhados pela doença aterosclerótica, sendo a origem de ambas relacionadas à alterações inflamatórias. OBJETIVO: avaliar, / Age-related macular degeneration (AMD) is a degenerative eye disease. Some of the causal factors of this disease are common to atherosclerotic diseases and the origin of both diseases is related to inflammatory changes. OBJECTIVE: To evaluate by histomorp

Dissertação (mestrado) - Pontifícia Universidade Católica do Paraná, Curitiba, 2012 / Bibliografia: f. 50-59 / O presente trabalho teve por objetivo investigar os principais efeitos da linhaça na retina, coróide e esclera de coelhos submetidos à dieta hipercolesterolêmica. A metodologia de trabalho que norteou a pesquisa observou os passos a seguir. Coelhos New Ze / The present study aims to investigate the main flaxseed effects on the retina, choroid and sclera of rabbits fed on a hypercholesterolemic diet. The research methodology was grounded on the following procedures. New Zealand rabbits were divided into three

In vitro disease models are powerful platforms for the development of drugs and novel therapies. Stem-cell based approaches have emerged as cutting-edge tools in disease modelling, allowing for deeper insights into previously unknown disease mechanisms. Hence the significant role of these disease-in-a-dish methods in therapeutics and translational medicine. Impedance sensing is a non-invasive, quantitative technique that can monitor changes in cellular behaviour and morphology in real-time. Bioimpedance measurements can be used to characterize and evaluate the establishment of a valid disease model, without the need for invasive end-point biochemical assays. In this work, two stem cell-based disease models-on-a-chip are proposed for acute liver failure (ALF) and age-related macular degeneration (AMD). The ALF disease model-on-a-chip integrates impedance sensing with the highly-differentiated HepaRG cell line to monitor in real-time quantitative and dynamic response to various hepatotoxins. Bioimpedance analysis and modelling has revealed an unknown mechanism of paracetamol hepatotoxicity; a temporal, dose-dependent disruption of tight junctions (TJs) and cell-substrate adhesion. This disruption has been validated using ultrastructural imaging and immunostaining of the TJ-associated protein ZO-1. Age-related macular degeneration (AMD) is the leading cause of blindness in the developed world with a need for disease models for its currently incurable forms. Human induced pluripotent stem cells (hiPSCs) technology offers a novel approach for disease modelling, with the potential to impact translational retinal research and therapy. Recent developments enable the generation of Retinal Pigment Epithelial cells from patients (hiPSC-RPE), thus allowing for human retinal disease in vitro studies with great clinical and physiological relevance. In the current study, the development of a tissue-on- a-chip AMD disease model has been established using RPE generated from a patient with an inherited macular degeneration (case cell line) and from a healthy sibling (control cell line). A reproducible Electric Cell-substrate Impedance Sensing (ECIS) electrical wounding assay was conducted to mimic RPE damage in AMD. First, a robust and reproducible real-time quantitative monitoring over a 25-day period demonstrated the establishment and maturation of RPE layers on microelectrodes. A spatially-controlled RPE layer damage that mimicked cell loss in AMD was then initiated. Post recovery, significant differences in migration rates were found between case and control cell lines. Data analysis and modelling suggested this was due to the lower cell-substrate adhesion of the control cell line. These findings were confirmed using cell adhesion biochemical assays. Moreover, different-sized, individually-addressed square microelectrode arrays with high spatial resolution were designed and fabricated in-house. ECIS wounding assays were performed on these chips to study immortalized RPE migration. Migration rates comparable to those obtained with ECIS circular microelectrodes were determined. The two proposed disease-models-on-a-chip were then used to explore the therapeutic potential of the antioxidant N-Acetyl-Cysteine (NAC) on hiPSC-RPE and HepaRG cell recovery. Addition of 10 mM NAC at the end of a 24h paracetamol challenge caused a slight increase in the measured impedance, suggesting partial cell recovery. On the other hand, no effect on case hiPSC-RPE migration has been observed. More experiments are needed to examine the effect of different NAC concentrations and incubation periods. The therapeutic potential of electrical stimulation has also been explored. A preliminary study to evaluate the effect of electrical stimulation on RPE migration has been conducted. An externally applied direct current electric field (DC EF) of 300 mV/mm was found to direct the migration of the immortalized RPE cell line (hTERT-RPE1) perpendicular to the EF. The cells were also observed to elongate and to realign their long axes perpendicular to the applied EF. The proposed tissue-on-a-chip disease models are powerful platforms for translational studies. The potential of such platforms has been demonstrated through revealing unknown effects of acetaminophen on the liver as well as providing deeper insights into the underlying mechanisms of macular degeneration. Combining stem cell technology with impedance sensing provides a high throughput platform for studying patient-specific diseases and evaluating potential therapies.

1 Abstract Introduction The vitreoretinal (VR) interface of the eye is a dynamically evolving environment which significantly influences and indicates the course of macular disorders. The main topic of the presented paper is research on the VR interface in relation to surgery on diabetic macular edema (ME), partial macular defects (PMD) and idiopathic macular holes (IMH). Aims The aims of the research were to find out new knowledge about specific characteristics of and changes in the VR interface in eyes with diabetic ME, PMD and IMH, namely with main attention focused on the internal limiting membrane (ILM) of the retina and the epimacular membrane (EMM). Methods Histopathologic and morphometric analyses were carried out on samples of the ILM of the retina and the EMM which were taken during pars plana vitrectomy (PPV) of eyes of sets of patients with diabetic ME, PMD and IMH. The analytic results were statistically evaluated and interpreted in relation to clinical factors and anatomical results of the PPV. Results Treatment of diabetic ME with removal of the ILM resulted in improved visual acuity (VA), at minimum 2 lines on the ETDRS table, in 51.8% surgically treated eyes and remained the same in 33.9% of eyes. A comparison study confirmed that PPV with preserving of the ILM achieved a long-term...

O comprometimento macular na retinopatia diabética pode ocorrer devido a isquemia macular, hemorragias maculares intra-retinianas e pré-retinianas, descolamento macular tracional, neovascularização e mais freqüentemente o edema macular. Cerca de 10% da população total de pacientes com diabete melito (DM) e 25% daqueles com mais de 20 anos de evolução da doença apresentam edema macular, constituindo a principal causa de perda visual neste grupo de pacientes(1-3). Em pacientes com DM tipo 1, o edema macular é visto raramente antes dos primeiros nove anos após o diagnóstico de DM(4), ao contrário de pacientes diabéticos tipo 2 cujo início da maculopatia é mais precoce. A detecção e o tratamento precoce do edema macular podem resultar na melhora ou na estabilização da visão. Novas teorias sobre a fisiopatologia do edema macular surgiram nos últimos anos e novas terapias como a triancinolona sub-tenoneana ou intravítrea, os anti-VEGFs e implantes intravítreos de liberação lenta de dexametasona foram testadas a partir destes conhecimentos. Este manuscrito propõe a revisão destes conceitos e em especial, dos novos aspectos terapêuticos. / The macular commitment on diabetic retinopathy can occur due to macular ischaemia, intraretinal or preretinal haemorrhages, tractional detachment, neovascularization and more frequently, macular edema. About 10% of the diabetic population and 25% of those with more than 20 years of illness, present macular edema, constituting the main cause of visual loss in this group of patients (1-3). In diabetic type 1 patients, macular edema is rarely seen before 9 years after the diagnostic(4). On the other hand, in diabetic type 2 patients, the maculopathy appears earlier. The detection and the precocious treatment of macular edema can result a visual improvement or stabilization. New theories about the fisiopathology of macular edema had appeared in the last years and new therapies such as sub-tenonean or intravitreal triamcinolone, the anti- VEGFs and slow liberation intravitreal implants of dexametazone were tested since this knowledge. This article considers the revision of these concepts and specially, new therapeutic aspects.

O comprometimento macular na retinopatia diabética pode ocorrer devido a isquemia macular, hemorragias maculares intra-retinianas e pré-retinianas, descolamento macular tracional, neovascularização e mais freqüentemente o edema macular. Cerca de 10% da população total de pacientes com diabete melito (DM) e 25% daqueles com mais de 20 anos de evolução da doença apresentam edema macular, constituindo a principal causa de perda visual neste grupo de pacientes(1-3). Em pacientes com DM tipo 1, o edema macular é visto raramente antes dos primeiros nove anos após o diagnóstico de DM(4), ao contrário de pacientes diabéticos tipo 2 cujo início da maculopatia é mais precoce. A detecção e o tratamento precoce do edema macular podem resultar na melhora ou na estabilização da visão. Novas teorias sobre a fisiopatologia do edema macular surgiram nos últimos anos e novas terapias como a triancinolona sub-tenoneana ou intravítrea, os anti-VEGFs e implantes intravítreos de liberação lenta de dexametasona foram testadas a partir destes conhecimentos. Este manuscrito propõe a revisão destes conceitos e em especial, dos novos aspectos terapêuticos. / The macular commitment on diabetic retinopathy can occur due to macular ischaemia, intraretinal or preretinal haemorrhages, tractional detachment, neovascularization and more frequently, macular edema. About 10% of the diabetic population and 25% of those with more than 20 years of illness, present macular edema, constituting the main cause of visual loss in this group of patients (1-3). In diabetic type 1 patients, macular edema is rarely seen before 9 years after the diagnostic(4). On the other hand, in diabetic type 2 patients, the maculopathy appears earlier. The detection and the precocious treatment of macular edema can result a visual improvement or stabilization. New theories about the fisiopathology of macular edema had appeared in the last years and new therapies such as sub-tenonean or intravitreal triamcinolone, the anti- VEGFs and slow liberation intravitreal implants of dexametazone were tested since this knowledge. This article considers the revision of these concepts and specially, new therapeutic aspects.

Made available in DSpace on 2014-06-12T18:28:59Z (GMT). No. of bitstreams: 2 arquivo3535_1.pdf: 4497210 bytes, checksum: aa2e672b4d17f24b8c8446cc122032b6 (MD5) license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) Previous issue date: 2009 / A hipomelanose macular progressiva é uma dermatose caracterizada por máculas hipocrômicas localizadas principalmente em tronco, que tendem a confluir na linha média. Em pacientes melanodérmicos, as lesões contrastam com a pele normal prejudicando a auto-estima dos pacientes. Sua etiologia permanece especulativa, sendo sugerida a participação do Propionibacterium acnes, um membro da flora cutânea normal. Objetivo: Avaliar a presença do Propionibacterium acnes na pele lesional e não lesional de pacientes com hipomelanose macular progressiva, por meio da reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa e cultura bacteriológica de fragmento de pele e, determinar o ponto de corte para o número de cópias de genoma de Propionibacterium acnes, como marcador de sua positividade na pele lesional de pacientes com hipomelanose macular progressiva, utilizando a reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa e considerando a cultura como padrão-ouro. Pacientes e Métodos: Estudo exploratório, observacional com grupo de comparação foi realizado envolvendo 36 pacientes, atendidos nos ambulatórios de dermatologia do Hospital Universitário Oswaldo Cruz, Recife, Pernambuco, Brasil, entre março e maio de 2008. Todos os pacientes foram submetidos a exame sob luz de Wood, pesquisa micológica e biópsias de pele lesional e não lesional do dorso. Os fragmentos de biópsia de pele foram submetidos a exame histopatológico, cultura bacteriológica e reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa, utilizando oligoiniciadores específicos para a região 16S do RNA ribossomal do Propionibacterium acnes. A pele lesional foi comparada a não lesional quanto à positividade da reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa e da cultura, considerada padrão-ouro. Com o programa Statistical Package for Social Sciences, versão 12.0, procedeu-se à determinação de associação com os testes de Wilcoxon e de McNemar, em nível de significância de 0,05, e do ponto de corte com a curva ROC para valores máximos. Resultados: Houve predomínio significante do Propionibacterium acnes na pele lesional, comparada com a pele não lesional (p<0,001), demonstrado por cultura bacteriológica e reação em cadeia da polimerase em tempo real quantitativa. O ponto de corte para o número de cópias de genoma de Propionibacterium acnes como marcador de sua positividade na pele lesional de pacientes com hipomelanose macular progressiva igualou-se a 1.333, com sensibilidade de 87,9% e especificidade de 100,0%. Conclusão: Apesar do Propionibacterium acnes ser um saprófita do folículo pilossebáceo, ele esta mais presente em pele lesional dos pacientes com hipomelanose macular progressiva, sugerindo sua participação no desenvolvimento dessa dermatose

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