Submitted by (edna.saturno@ufrpe.br) on 2016-10-13T16:32:06Z No. of bitstreams: 1 Karla Patricia Chaves da Silva.pdf: 1396251 bytes, checksum: 8552def0e4e6ca947fd2a699f600a245 (MD5) / Made available in DSpace on 2016-10-13T16:32:06Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Karla Patricia Chaves da Silva.pdf: 1396251 bytes, checksum: 8552def0e4e6ca947fd2a699f600a245 (MD5) Previous issue date: 2010-07-13 / The objective this study produce and evaluate PPD-mallein with potential for application in the diagnosis of glanders from of the the production and purification of immunogenic proteins of B. mallei isolates from equines with glanders in Brazil. Were isolated and characterized phenotypically and by detecting the activity of proteases, polyphenol oxidases, esterases and determination of the resistance profile in vitro. Samples of B. mallei studied were susceptible to antimicrobial gentamicin, ciprofloxacin, norfloxacin, doxycycline and enrofloxacin and resistant to trimethoprim / sulfamethoxazole, amoxicillin and ampicillin. Was observed the activity of proteases, absence esterases polyphenyloxidase and bacterial growth resulted in toxic metabolites. For the production and purification of the protein partially mallein were used two strains of B. mallei Brazilian already characterized phenotypically and genotypically. Was inoculated broth samples Dorset-Henley to metabolize and get the bacterial proteins. Proteins were separated and precipitated with trichloroacetic acid and ammonium sulphate. The PPD-mallein were concentrated at 1.0 mg / mL and evaluation in guinea pigs previously sensitized with bacter were effective for identifying infection in animals truly positive and exclude the animals truly negative. Histological analysis of the application site of mallein revealed the development of Type IV hypersensitivity. Was evaluated the PPD-mallein about their power in five asinines with clinical signs, with bacteriological diagnosis and positive serology for glanders and five asinines negative in serology and bacteriology. The animals were tested according to the criteria established by paragraph IN nº24 regarding the diagnosis of glanders. After 48 hours of inoculation, there was swelling in the area of injection, presence of ocular discharge and tearing confirming the diagnosis of glanders. The other seronegative animals showed no inflammatory reaction at the site of inoculation of PPD-mallein. This immunogen produced and being tested in Brazil was effective being a new possibility for diagnosis and control of glanders in this country. / Objetivou-se nesse estudo produzir e avaliar PPD-maleína com potencial para aplicação no diagnóstico do mormo a partir da purificação de proteínas imunogênicas de Burkholderia. mallei isoladas de equídeos com mormo no Brasil. As bactérias foram isoladas e caracterizadas fenotipicamente por meio da detecção da atividade de proteases, polifenoloxidases e esterases, além da determinação do perfil de resistência à antimicrobianos in vitro. Para produção e purificação parcial da maleína foram utilizadas duas estirpes de B. mallei brasileiras fenotípica e genotipicamente caracterizadas. Inoculou-se as amostras em caldo Dorset-Henley para metabolizar e obter as proteínas bacterianas. As proteínas foram separadas e precipitadas com ácido tricloroacético e sulfato de amônia. As PPDs maleína foram concentradas em 1,0mg/mL e na avaliação realizada em cobaios previamente sensibilizados com a bactéria foram eficazes na identificação dos animais verdadeiros positivos e na exclusão dos verdadeiros negativos. Avaliou-se a PPD-maleína quanto a sua potência em cinco asininos com sinais clínicos e diagnóstico bacteriológico e sorológico positivo para o mormo e em cinco asininos negativos na sorologia e bacteriologia. As amostras de B. mallei estudadas foram sensíveis à gentamicina, ciprofloxacina, norfloxacina, doxiciclina e enrofloxacina, e resistentes a trimetoprim/sulfametoxazol, amoxacilina e ampicilina. Observou-se a atividade de proteases, ausência de esterases e polifenoloxidades e o crescimento bacteriano em meio de cultura resultou em metabólitos tóxicos. A análise histológica do local de aplicação da maleína, em cobaias, revelou o desenvolvimento de hipersensibilidade do tipo IV. Os asininos foram testados de acordo com os critérios estabelecidos pela IN nº24 do Ministério de Agricultura Pecuária e Abastecimento referente ao diagnóstico do mormo. Após 48 horas da inoculação, observou-se edema na área da injeção, presença de secreção ocular e lacrimejamento, confirmando-se o diagnóstico do mormo. Os outros animais sorologicamente negativos não apresentaram reação inflamatória no local de inoculação da PPD-maleína. Esse imunógeno produzido e em fase de teste no Brasil é uma nova alternativa para o diagnóstico e controle do mormo no país.