Submitted by ARTHUR POMBO ALMEIDA null (arthurpombo_mv@hotmail.com) on 2016-02-24T11:32:48Z No. of bitstreams: 1 Almeida, A. P. - dissertação mestrado.pdf: 778761 bytes, checksum: f00e92022ebbb906ef31cb9f42ed714d (MD5) / Approved for entry into archive by Ana Paula Grisoto (grisotoana@reitoria.unesp.br) on 2016-02-26T17:12:37Z (GMT) No. of bitstreams: 1 almeida_ap_me_bot.pdf: 778761 bytes, checksum: f00e92022ebbb906ef31cb9f42ed714d (MD5) / Made available in DSpace on 2016-02-26T17:12:37Z (GMT). No. of bitstreams: 1 almeida_ap_me_bot.pdf: 778761 bytes, checksum: f00e92022ebbb906ef31cb9f42ed714d (MD5) Previous issue date: 2016-02-15 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo desse estudo foi identificar fatores de risco para casos repetidos de mastite clínica (MC). Duas fazendas foram visitadas mensalmente durante 10 meses. Amostras de leite foram colhidas de todos os casos incidentes de MC. Vacas foram observadas prospectivamente e um caso foi definido quando uma vaca sofreu o segundo caso de MC na mesma lactação. Para cada caso, três controles pareados por dias em lactação foram selecionados aleatoriamente a partir do coorte de vacas que não tiveram MC. Em cada visita, uma série de características do úbere e tetas foram avaliadas durante a ordenha. O tempo mediano até a ocorrência do primeiro caso de MC foi de 84 dias e o intervalo entre o primeiro e segundo casos foi de 39 dias. Distância da teta ao solo, hiperqueratose da extremidade da teta e produção de leite foram associadas individualmente à ocorrência de um caso repetido de MC, mas não permaneceram no modelo multivariável final. Vacas avaliadas como "muito fácil de ordenhar" foram 3,7 vezes mais propensas a sofrerem um caso repetido de MC do que vacas avaliadas como "difícil de ordenhar". Vacas cujos úberes eram posicionados abaixo do jarrete, e de paridade >2, foram 3,6 e 2,5 vezes mais propensas a sofrerem um caso repetido de MC do que aquelas cujo úbere foi posicionado acima do jarrete e vacas de paridade 1, respectivamente. Resultados deste estudo destacam a importância das características das tetas e do úbere como fatores de risco para casos repetidos de CM. / The objective of this study was to identify risk factors for the occurrence of repeated cases of clinical mastitis (CM). Two farms were visited monthly during 10 months. Milk samples were collected from all cases of CM. Cows were observed prospectively and a case was defined when a cow experienced the second case of CM within the same lactation. For each repeated case, three controls matched by days in milk (DIM) were randomly selected from the cohort of cows who did not experience CM. On each visit day, a series of udder and teat characteristics were recorded during milking. The median time to occurrence of the first case of CM was 84 DIM and the median interval between the first and second cases was 39 days. Teat to ground distance, teat-end hyperkeratosis, and milk production were individually associated with the occurrence of a repeated case of CM but did not remain in the final multivariable model. The odds of a repeated case of CM were 3.7 times greater for cows who were “very easy to milk”, as compared to cows who were “difficult to milk”. Cows who had their udders below the hock, and those of parity > 2 were 3.6 and 2.5 times more likely to experience a repeated case of CM, as compared to cows whose udder was positioned above the hock, and cows of parity 1, respectively. Findings of this study highlight the importance of teat and udder characteristics as risk factors for repeated cases of CM. / FAPESP: 2014/12642-0

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Numa propriedade leiteira do município de Taquara, Rio Grande do Sul, Brasil, diversas medidas terapêuticas e higiênico-sanitárias foram introduzidas com o objetivo de monitorar sua influência sobre a produção leiteira e a etiopatogenia dos agentes envolvidos nos casos de mastite. No início dos trabalhos, em 1990, mais de 70% dos animais apresentavam pelo menos um quarto mamário com mamite clínica, sendo que ao final do estudo, em 2002, nenhum caso clínico da enfermidade foi relatado, tendo sido eliminado completamente agentes como Streptococcus agalactiae, Arcanobacterium pyogenes e Nocardia spp. O conjunto de medidas introduzidas elevou a produção/dia da propriedade em mais de 600%, melhorando a qualidade genética e sanitária do rebanho. Apesar de ainda existirem casos esporádicos de mamite subclínica, as mudanças favoreceram na identificação de problemas ou falhas no processo, possibilitando medidas rápidas e eficazes de controle e tratamento. / The bovine mastite is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to industry and the final consumer. In a dairy herd of the district of Taquara, Rio Grande do Sul, Brazil, several therapeutic and hygienicsanitary measures were introduced with the objective of monitoring the influence on the milking process and the etiopatogeny of the agents involved in cases of mastitis. In the beginning of the study, in 1990, more than 70% of the animals presented at least one mammary quarter with clinical mastitis, and at the end of the study, in 2002, no clinical cases of the illness was related, having been completely eliminated agents as Streptococcus agalactiae, Arcanobacterium pyogenes and Nocardia spp. The group of introduced measures elevated the production of the property, per day, in more than 600%, improving the genetic and sanitary quality of the flock. In spite of sporadic cases of subclinical mamitis that still exist, the measures provided a support in the identification of problems or flaws in the process, making possible fast and effective action of control and treatment.

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Foram analisadas 240 amostras de leite proveniente de animais com mastite clínica e de animais com mastite subclínica, criados em propriedades leiteiras de alta produção, da região do Planalto Médio, Rio Grande do Sul. Houve isolamento de 250 agentes bacterianos em 218 amostras (90,8%) e 65 agentes leveduriformes em 39 amostras (16,25%). Foram identificados 10 gêneros e 12 espécies de bactérias, sendo os gêneros Staphylococcus, Corynebacterium e Nocardia responsáveis por 88% dos isolados. Foram identificados 08 gêneros (29 espécies) de leveduras além de 02 gêneros de fungos semelhantes a leveduras (04 espécies), sendo os gêneros Candida, Pichia, Cryptococcus e Rhodotorula responsáveis por 80% das espécies isoladas.Apenas 03 amostras apresentaram crescimento puro de leveduras, o restante estando associado com isolamentos bacterianos, o que demonstra uma importante relação entre fungos e bactérias na etiologia das mastites. Mais de 90% dos agentes leveduriformes isolados tiveram crescimento em temperaturas acima de 37ºC, demonstrando seu potencial patogênico. Verificou-se que a prevalência de mastite fúngica na região é significante e fortemente relacionada com a presença de agentes bacterianos, o tratamento inadequado com produtos antimicrobianos e a saúde do úbere. / The bovine mastitis is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to the industry and to the final consumer. High production dairy herds were analyzed in Planalto Médio, Rio Grande do Sul, were 240 samples with clinical and subclínica mastitis were collected. There was the isolation of 250 bacterial agents in 218 samples (90,8%) and 65 yeast organisms in 39 samples (16,25%). There was identification of 10 genera and 12 species of bacteria, and 88% of the isolates were from genera Staphylococcus, Corynebacterium and Nocardia. There was the identification of 08 genera (29 species) of yeasts and 02 genera of yeast-like organisms (04 species), and 80% of the isolates were from genera Candida, Pichia, Cryptococcus and Rhodotorula. Only 03 samples presented pure growth of yeasts, the remaining was associated with bacterial isolations, which demonstrates an important relationship between yeasts and bacteria in the etiology of the mastitis. More than 90% of the yeast isolates had growth in temperatures above 37ºC, which demonstrates their pathogenic potential. It was verified that in this particularly region, the occurrence of mastitis caused by yeasts has a significant importance and are closely related with the bacterial agents' presence, the inadequate treatment with antibiotic products and udder’s health.

A contagem de células somáticas (CCS) é o padrão ouro de avaliação da integridade da glândula mamária e da qualidade do leite. A haptoglobina (Hp) é uma das principais proteínas de fase aguda que se eleva em processos inflamatórios, infecciosos e de estresse em ruminantes. Este estudo avaliou a relação entre os níveis séricos de Hp e a CCS, através de coletas de amostras de leite e sangue de vacas leiteiras de rebanhos do Noroeste do estado do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas, entre fevereiro e outubro de 2008 de 150 animais da raça Holandesa, sem distinção de idade e número de lactação, divididos em três grupos de 50 animais separados conforme o valor da CCS. O grupo 1 (G1) incluiu vacas com CCS abaixo de 600.000 cel/mL; o grupo 2 (G2), vacas com CCS superior a 600.000 cel/mL e, o grupo 3 (G3), vacas que apresentavam sinais clínicos de mastite. Para cada amostra de leite, foi determinada a CCS, a contagem bacteriana total (CBT) e os níveis de proteína, gordura, lactose e sólidos totais. Coletouse 5 mL de sangue através de punção da veia coccígea para avaliar contagem total e diferencial de leucócitos, fibrinogênio, hematócrito, proteínas plasmáticas totais e haptoglobina. A análise estatística demonstrou diferença significativa entre os três grupos quanto à CCS, CBT e lactose. A proteína apresentou diferença significativa entre G1 para G2 e G3. Nos sólidos totais, G1 e G2 apresentaram diferença significativa para G3. A gordura não apresentou diferença significativa entre os grupos. Análises não paramétricas demonstraram forte correlação positiva entre CCS e CBT (r=0,852, P<0,005). Quanto às análises hematológicas, o leucograma e as proteínas plasmáticas totais não apresentaram diferença significativa entre os grupos. Fibrinogênio e hematócrito se diferenciaram estatisticamente nos grupos 1 e 3. Na análise do diferencial, os monócitos do G1 e G3 apresentaram diferença estatística para G2. Além disso, o fibrinogênio apresentou correlação leve, mas significativa (r= 0,270, P<0,001), em relação ao valor de CCS. Análises não paramétricas apresentaram correlação média entre CCS e concentração de Hp (r= 0,357, P<0,001), demonstrando associação entre as variáveis. Quanto à concentração de Hp, houve diferença significativa do G1 (0,41 g/L) e G2 (0,41 g/L) para G3 (0,70 g/L), ou seja, se comprovou a elevação dos níveis séricos de Hp em vacas com processo inflamatório instalado; entretanto, a Hp não se mostrou sensível para detecção de mastite subclínica. Sugere-se que estudos adicionais possam elucidar tais associações. / Somatic cell count (SCC) is the gold standard of both the mammalian gland and milk quality evaluation. The haptoglobin (Hp) is one of the main acute phase proteins, which increase in inflammation, infectious and stress processes of ruminants. This work evaluated the relation between Hp serum level and SCC, through the analysis of milk and blood samples from dairy cows from herds in the northwest Rio Grande do Sul state. Samples were obtainned, between February and October 2008, from 150 Holstein cows, without age or milking number discrimination and that were separate in three different groups with 50 animals each, according SCC value. Group 1 (G1) included cows with SCC below 600.000 cells/mL; group 2 (G2), cows with SCC above 600.000 cells/mL and group 3 (G3), cows with signs of clinical mastitis. For each milk sample, it was determined SCC, total bacteria count (TBC), and the protein, fat, lactose, and total solid contents. A 5 mL blood sample was collected by puncturing coccigeal vein to evaluate total and differential leucocytes counts, fibrinogen, hematocrit, total serum protein, and haptoglobin. Statistic analysis showed significant differences among the three groups for SCC, TBC, and lactose. The protein average showed significant difference among G1 to G2 and G3. Total solid contents from G1 and G2 were significantly different to that from G3. Fat content had not significant differences among groups. Not parametric analysis demonstrated strong positive association between SCC and TBC (r= 0,852, P< 0,005). For the hematological analysis, leucograma and total serum protein had no significant differences among groups. Both, fibrinogen and hematocrit showed statistical differences in G1 and G3. Regarding the differential analysis, the monocytes of G1 and G3 showed statistical differences to that of G2. Moreover, although short, there was significant correlation (r= 0,270, P<0,001) between fibrinogen and SCC. Not parametric analysis displayed mean correlation between SCC and Hp concentration (r= 0,357, P<0,001), demonstrating association between the variables. For the concentration of Hp, there was significant differences between G1 (0,41 g/L) and G2 (0,41 g/L) to G3 (0,70 g/L) proving the Hp increase in cows affected by clinical mastitis; nevertheless, the Hp was not a sensible marker to subclinical mastitis. It is suggested that further studies may elucidate those associations.

O estudo objetivou identificar a presença de fungos no leite mastítico; avaliar a ação in vitro do óleo essencial de O. vulgare frente a microrganismos isolados de leite; estudar a toxicidade deste óleo e realizar ensaio clínico de preparado fitoterápico a base de óleo essencial de orégano à 3% em vacas com mastite. O levantamento fúngico foi realizado em 1499 amostras de leite de quartos mamários reagentes ao California Mastitis Test (CMT). A extração do orégano foi realizada por hidrodestilação e o óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa. Os testes in vitro seguiram as normas do documento CLSI M7-A6 (2005) e CLSI- M27A3 (2008) adaptadas a fitofármaco. A avaliação da Concentração Bactericida Mínima (CBM) foi realizada frente a 71 bactérias isoladas de leite, dos gêneros Staphylococcus sp., Streptococcus sp. e Corynebacterium sp. e três cepas padrões. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram realizados testes frente a 35 leveduras, sendo um Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii e Kodamaea ohmeri e 32 do gênero Candida spp. Foi realizada análise histológica de úberes de duas vacas tratadas com produto fitoterápico e como controle gentamicina a 1,35% para avaliação da toxicidade e testes de irritação dérmica e de mucosa ocular em coelhos de acordo com OECD 404 e OECD 405, respectivamente. Seis coelhos foram testados com veículo utilizado na formulação fitoterápica e seis com veículo acrescido de 3% de óleo de orégano. Essa formulação fitoterápica foi testada em 15 quartos mamários que apresentaram reação ao CMT. O grupo controle foi tratado com gentamicina a 1,35%, constituído de 14 quartos mamários com avaliação de CMT, Contagem de Células Somáticas (CCS) e cura microbiológica através de isolamento bacteriano. Foram isolados fungos em 116 (7,74%) amostras de leite com total de 121 fungos isolados. Destes, 94 eram leveduras e 27 fungos filamentosos. Dentre as leveduras, a maioria foi do gênero Candida spp. (64). O óleo essencial de orégano apresentou como principais constituintes α-terpineno, 4-terpineol e timol. A CBM média variou de 0,23% a 2% frente a cepas isoladas de leite e de 3,17% e 0,35% frente aos padrões S. aureus e Escherichia coli e não apresentou efeito para Pseudomonas aeruginosas. Todas as amostras de leveduras foram sensíveis ao óleo de orégano nas concentrações testadas, onde a CIM e a CFM variaram de 0,0625% a 1%. As alterações encontradas na histologia dos úberes foram compatíveis com mastite. Nos testes de irritação dérmica e ocular em coelhos, houve reversão das lesões em no máximo 72h. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos de tratamento com relação ao CMT e CCS nos dias 7, 14 e 21 após tratamento. Entretanto, houve diferença estatística para a cura microbiológica em todos os dias analisados (p<0,05), em favor do grupo controle. Pode-se concluir que os fungos estão presentes no leite mastítico, que o óleo essencial de orégano testado apresentou atividade antibacteriana e antifúngica em testes in vitro e não produziu efeito toxicológico persistente, porém não foi eficiente no tratamento da mastite subclínica. / The study aimed to identify the presence of fungi in mastitic milk and to evaluate the in vitro action of essential oil of O. vulgare against microorganisms isolated from milk and to study the toxicity of the oil and perform clinical trial of prepared herbal of essential oil of oregano to 3% in cows with mastitis. The survey was conducted in 1499 samples from milk reacting to the California Mastitis Test (CMT). The extraction of oregano was performed by hydrodistillation and the essential oil was analyzed by gas chromatography. In vitro tests followed the CLSI document M7-A6 (2005) and CLSI-M27A3 (2008) adapted for fitoterapic. The evaluation of the minimum bactericidal concentration (MBC) was carried out against 71 bacteria isolated from milk of the genera Staphylococcus sp., Streptococcus sp. and Corynebacterium sp. and three strains standards. To determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) tests were performed against 35 yeasts, and one Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii and Kodamaea ohmeri and 32 of Candida spp. We performed histological analysis of two udders of cows treated with herbal medicine and control to gentamicin 1,35%, toxicity evaluation and tests of dermal irritation and ocular mucosa in rabbits according to OECD 404 and OECD 405, respectively. Six rabbits were tested with vehicle used in herbal formulation and six with vehicle plus 3% oil of oregano. This herbal formulation was tested in 15 mammary quarters that had reactions to CMT. The control group was treated with gentamicin at 1.35%, consisting of 14 quarters with breast assessment of CMT, Somatic Cell Count (SCC) and microbiological cure by bacterial isolation. Fungi were isolated in 116 (7.74%) milk samples with total of 121 fungal isolates. Of these, 94 were yeasts and 27 filamentous fungi. Among the yeasts, the majority was of the genus Candida spp.(64). The essential oil of oregano presented as main constituent α-terpinene, 4-terpineol and thymol. CBM average ranged from 0.23% to 2% to strains isolated from milk and 3.17% and 0.35% to the standards S. aureus and Escherichia coli and showed no effect for Pseudomonas aeruginosa. All yeast strains were sensitive to oil of oregano in concentrations, where the MIC and MFC ranged from 0.0625% to 1%. The changes found in the histology were compatible udders with mastitis. In tests of skin and eye irritation in rabbits, there was reversal of the lesions in up to 72 hours. There was no significant difference (p> 0.05) between treatment groups with respect to the CMT and SCC on days 7, 14 and 21 after treatment. However, there was statistical difference for the microbiological cure in all days analyzed (p <0.05) better for the control group. It can be concluded that the fungi are present in mastitic milk, the essential oil of oregano tested showed antibacterial and antifungal activity in vitro tests and produced no persistent toxic effects, but was not effective in the treatment of subclinical mastitis.

Objetivou-se verificar a relação entre a contagem de células somáticas do leite bovino ordenhado separadamente de quartos mamários com a qualidade físico-química do leite, em especial com o leite instável não ácido (LINA). Foram utilizadas 21 vacas das raças Holandês e Jersey, sendo selecionados a partir do teste do CMT os animais que apresentaram pelo menos um quarto mamário normal e os demais quartos com mastite subclínica. Realizou-se análise microbiológica, identificação dos agentes e, durante quatro dias consecutivos, as vacas foram ordenhadas com uma ordenhadeira especial de quartos individuais avaliando a produção, composição química, contagem de células somáticas (CCS) e análise física do leite. O principal agente isolado no leite foi o Corynebacterium sp. (27,38%). Ocorreu diminuição de 21,65% na produção de leite dos quartos com CCS acima de 750.000cél/mL. A instabilidade do leite não apresentou variação significativa dos quartos saudáveis em comparação com os quartos mastíticos. Dentre os componentes químicos do leite, o teor de lactose diminuiu à medida que ocorreu o aumento da CCS e não houve variação significativa nos teores de gordura, proteína bruta, sólidos totais e sólidos desengordurados. Houve variação significativa dos componentes do leite nas diferentes raças. Não houve relação entre a mastite subclínica e o LINA. / This study assessed the relationship between milk somatic cell count from different mammary quarters of cows with subclinical mastitis with physical and chemical milk quality, especially unestable non acid milk (UNAM). Twenty-one Holstein and Jersey cows were used which had at least one healthy quarter and the others with subclinical mastitis. Microbiological analysis was performed and the agents were identified. Cows were milked with a special milking machine which separate milk from each quarter for four consecutive days. Milk samples were collected to evaluate production, chemical composition, somatic cell count (SCC) and physical characteristics. The main agent identified in the milk was Corynebacterium sp. (27,38%). There was a decrease of 21,65% in quarter milk production of cows with SCC above 750.000cél/mL. Milk instability did not vary significantly from healthy quarters compared with mastitis. Among milk chemical components, lactose decreased as the SCC increased and there were no significant variation in levels of fat, protein, total solids and non-fat solids. There were significant variations in the components of milk in different breeds. There was no relationship between subclinical mastitis and UNAM.

O estudo objetivou identificar a presença de fungos no leite mastítico; avaliar a ação in vitro do óleo essencial de O. vulgare frente a microrganismos isolados de leite; estudar a toxicidade deste óleo e realizar ensaio clínico de preparado fitoterápico a base de óleo essencial de orégano à 3% em vacas com mastite. O levantamento fúngico foi realizado em 1499 amostras de leite de quartos mamários reagentes ao California Mastitis Test (CMT). A extração do orégano foi realizada por hidrodestilação e o óleo essencial foi analisado por cromatografia gasosa. Os testes in vitro seguiram as normas do documento CLSI M7-A6 (2005) e CLSI- M27A3 (2008) adaptadas a fitofármaco. A avaliação da Concentração Bactericida Mínima (CBM) foi realizada frente a 71 bactérias isoladas de leite, dos gêneros Staphylococcus sp., Streptococcus sp. e Corynebacterium sp. e três cepas padrões. Para determinar a Concentração Inibitória Mínima (CIM) e Concentração Fungicida Mínima (CFM) foram realizados testes frente a 35 leveduras, sendo um Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii e Kodamaea ohmeri e 32 do gênero Candida spp. Foi realizada análise histológica de úberes de duas vacas tratadas com produto fitoterápico e como controle gentamicina a 1,35% para avaliação da toxicidade e testes de irritação dérmica e de mucosa ocular em coelhos de acordo com OECD 404 e OECD 405, respectivamente. Seis coelhos foram testados com veículo utilizado na formulação fitoterápica e seis com veículo acrescido de 3% de óleo de orégano. Essa formulação fitoterápica foi testada em 15 quartos mamários que apresentaram reação ao CMT. O grupo controle foi tratado com gentamicina a 1,35%, constituído de 14 quartos mamários com avaliação de CMT, Contagem de Células Somáticas (CCS) e cura microbiológica através de isolamento bacteriano. Foram isolados fungos em 116 (7,74%) amostras de leite com total de 121 fungos isolados. Destes, 94 eram leveduras e 27 fungos filamentosos. Dentre as leveduras, a maioria foi do gênero Candida spp. (64). O óleo essencial de orégano apresentou como principais constituintes α-terpineno, 4-terpineol e timol. A CBM média variou de 0,23% a 2% frente a cepas isoladas de leite e de 3,17% e 0,35% frente aos padrões S. aureus e Escherichia coli e não apresentou efeito para Pseudomonas aeruginosas. Todas as amostras de leveduras foram sensíveis ao óleo de orégano nas concentrações testadas, onde a CIM e a CFM variaram de 0,0625% a 1%. As alterações encontradas na histologia dos úberes foram compatíveis com mastite. Nos testes de irritação dérmica e ocular em coelhos, houve reversão das lesões em no máximo 72h. Não houve diferença significativa (p>0,05) entre os grupos de tratamento com relação ao CMT e CCS nos dias 7, 14 e 21 após tratamento. Entretanto, houve diferença estatística para a cura microbiológica em todos os dias analisados (p<0,05), em favor do grupo controle. Pode-se concluir que os fungos estão presentes no leite mastítico, que o óleo essencial de orégano testado apresentou atividade antibacteriana e antifúngica em testes in vitro e não produziu efeito toxicológico persistente, porém não foi eficiente no tratamento da mastite subclínica. / The study aimed to identify the presence of fungi in mastitic milk and to evaluate the in vitro action of essential oil of O. vulgare against microorganisms isolated from milk and to study the toxicity of the oil and perform clinical trial of prepared herbal of essential oil of oregano to 3% in cows with mastitis. The survey was conducted in 1499 samples from milk reacting to the California Mastitis Test (CMT). The extraction of oregano was performed by hydrodistillation and the essential oil was analyzed by gas chromatography. In vitro tests followed the CLSI document M7-A6 (2005) and CLSI-M27A3 (2008) adapted for fitoterapic. The evaluation of the minimum bactericidal concentration (MBC) was carried out against 71 bacteria isolated from milk of the genera Staphylococcus sp., Streptococcus sp. and Corynebacterium sp. and three strains standards. To determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and minimal fungicidal concentration (MFC) tests were performed against 35 yeasts, and one Trichosporon asahii, Cryptococcus laurentii and Kodamaea ohmeri and 32 of Candida spp. We performed histological analysis of two udders of cows treated with herbal medicine and control to gentamicin 1,35%, toxicity evaluation and tests of dermal irritation and ocular mucosa in rabbits according to OECD 404 and OECD 405, respectively. Six rabbits were tested with vehicle used in herbal formulation and six with vehicle plus 3% oil of oregano. This herbal formulation was tested in 15 mammary quarters that had reactions to CMT. The control group was treated with gentamicin at 1.35%, consisting of 14 quarters with breast assessment of CMT, Somatic Cell Count (SCC) and microbiological cure by bacterial isolation. Fungi were isolated in 116 (7.74%) milk samples with total of 121 fungal isolates. Of these, 94 were yeasts and 27 filamentous fungi. Among the yeasts, the majority was of the genus Candida spp.(64). The essential oil of oregano presented as main constituent α-terpinene, 4-terpineol and thymol. CBM average ranged from 0.23% to 2% to strains isolated from milk and 3.17% and 0.35% to the standards S. aureus and Escherichia coli and showed no effect for Pseudomonas aeruginosa. All yeast strains were sensitive to oil of oregano in concentrations, where the MIC and MFC ranged from 0.0625% to 1%. The changes found in the histology were compatible udders with mastitis. In tests of skin and eye irritation in rabbits, there was reversal of the lesions in up to 72 hours. There was no significant difference (p> 0.05) between treatment groups with respect to the CMT and SCC on days 7, 14 and 21 after treatment. However, there was statistical difference for the microbiological cure in all days analyzed (p <0.05) better for the control group. It can be concluded that the fungi are present in mastitic milk, the essential oil of oregano tested showed antibacterial and antifungal activity in vitro tests and produced no persistent toxic effects, but was not effective in the treatment of subclinical mastitis.

A mastite bovina é comprovadamente um dos maiores problemas atuais da pecuária leiteira no Brasil e no mundo, acarretando ônus aos produtores, à indústria e ao consumidor final. Numa propriedade leiteira do município de Taquara, Rio Grande do Sul, Brasil, diversas medidas terapêuticas e higiênico-sanitárias foram introduzidas com o objetivo de monitorar sua influência sobre a produção leiteira e a etiopatogenia dos agentes envolvidos nos casos de mastite. No início dos trabalhos, em 1990, mais de 70% dos animais apresentavam pelo menos um quarto mamário com mamite clínica, sendo que ao final do estudo, em 2002, nenhum caso clínico da enfermidade foi relatado, tendo sido eliminado completamente agentes como Streptococcus agalactiae, Arcanobacterium pyogenes e Nocardia spp. O conjunto de medidas introduzidas elevou a produção/dia da propriedade em mais de 600%, melhorando a qualidade genética e sanitária do rebanho. Apesar de ainda existirem casos esporádicos de mamite subclínica, as mudanças favoreceram na identificação de problemas ou falhas no processo, possibilitando medidas rápidas e eficazes de controle e tratamento. / The bovine mastite is one of the largest problems of dairy herds in Brazil and all over the world, resulting in losses to producers, to industry and the final consumer. In a dairy herd of the district of Taquara, Rio Grande do Sul, Brazil, several therapeutic and hygienicsanitary measures were introduced with the objective of monitoring the influence on the milking process and the etiopatogeny of the agents involved in cases of mastitis. In the beginning of the study, in 1990, more than 70% of the animals presented at least one mammary quarter with clinical mastitis, and at the end of the study, in 2002, no clinical cases of the illness was related, having been completely eliminated agents as Streptococcus agalactiae, Arcanobacterium pyogenes and Nocardia spp. The group of introduced measures elevated the production of the property, per day, in more than 600%, improving the genetic and sanitary quality of the flock. In spite of sporadic cases of subclinical mamitis that still exist, the measures provided a support in the identification of problems or flaws in the process, making possible fast and effective action of control and treatment.

Objetivou-se verificar a relação entre a contagem de células somáticas do leite bovino ordenhado separadamente de quartos mamários com a qualidade físico-química do leite, em especial com o leite instável não ácido (LINA). Foram utilizadas 21 vacas das raças Holandês e Jersey, sendo selecionados a partir do teste do CMT os animais que apresentaram pelo menos um quarto mamário normal e os demais quartos com mastite subclínica. Realizou-se análise microbiológica, identificação dos agentes e, durante quatro dias consecutivos, as vacas foram ordenhadas com uma ordenhadeira especial de quartos individuais avaliando a produção, composição química, contagem de células somáticas (CCS) e análise física do leite. O principal agente isolado no leite foi o Corynebacterium sp. (27,38%). Ocorreu diminuição de 21,65% na produção de leite dos quartos com CCS acima de 750.000cél/mL. A instabilidade do leite não apresentou variação significativa dos quartos saudáveis em comparação com os quartos mastíticos. Dentre os componentes químicos do leite, o teor de lactose diminuiu à medida que ocorreu o aumento da CCS e não houve variação significativa nos teores de gordura, proteína bruta, sólidos totais e sólidos desengordurados. Houve variação significativa dos componentes do leite nas diferentes raças. Não houve relação entre a mastite subclínica e o LINA. / This study assessed the relationship between milk somatic cell count from different mammary quarters of cows with subclinical mastitis with physical and chemical milk quality, especially unestable non acid milk (UNAM). Twenty-one Holstein and Jersey cows were used which had at least one healthy quarter and the others with subclinical mastitis. Microbiological analysis was performed and the agents were identified. Cows were milked with a special milking machine which separate milk from each quarter for four consecutive days. Milk samples were collected to evaluate production, chemical composition, somatic cell count (SCC) and physical characteristics. The main agent identified in the milk was Corynebacterium sp. (27,38%). There was a decrease of 21,65% in quarter milk production of cows with SCC above 750.000cél/mL. Milk instability did not vary significantly from healthy quarters compared with mastitis. Among milk chemical components, lactose decreased as the SCC increased and there were no significant variation in levels of fat, protein, total solids and non-fat solids. There were significant variations in the components of milk in different breeds. There was no relationship between subclinical mastitis and UNAM.

A contagem de células somáticas (CCS) é o padrão ouro de avaliação da integridade da glândula mamária e da qualidade do leite. A haptoglobina (Hp) é uma das principais proteínas de fase aguda que se eleva em processos inflamatórios, infecciosos e de estresse em ruminantes. Este estudo avaliou a relação entre os níveis séricos de Hp e a CCS, através de coletas de amostras de leite e sangue de vacas leiteiras de rebanhos do Noroeste do estado do Rio Grande do Sul. As amostras foram obtidas, entre fevereiro e outubro de 2008 de 150 animais da raça Holandesa, sem distinção de idade e número de lactação, divididos em três grupos de 50 animais separados conforme o valor da CCS. O grupo 1 (G1) incluiu vacas com CCS abaixo de 600.000 cel/mL; o grupo 2 (G2), vacas com CCS superior a 600.000 cel/mL e, o grupo 3 (G3), vacas que apresentavam sinais clínicos de mastite. Para cada amostra de leite, foi determinada a CCS, a contagem bacteriana total (CBT) e os níveis de proteína, gordura, lactose e sólidos totais. Coletouse 5 mL de sangue através de punção da veia coccígea para avaliar contagem total e diferencial de leucócitos, fibrinogênio, hematócrito, proteínas plasmáticas totais e haptoglobina. A análise estatística demonstrou diferença significativa entre os três grupos quanto à CCS, CBT e lactose. A proteína apresentou diferença significativa entre G1 para G2 e G3. Nos sólidos totais, G1 e G2 apresentaram diferença significativa para G3. A gordura não apresentou diferença significativa entre os grupos. Análises não paramétricas demonstraram forte correlação positiva entre CCS e CBT (r=0,852, P<0,005). Quanto às análises hematológicas, o leucograma e as proteínas plasmáticas totais não apresentaram diferença significativa entre os grupos. Fibrinogênio e hematócrito se diferenciaram estatisticamente nos grupos 1 e 3. Na análise do diferencial, os monócitos do G1 e G3 apresentaram diferença estatística para G2. Além disso, o fibrinogênio apresentou correlação leve, mas significativa (r= 0,270, P<0,001), em relação ao valor de CCS. Análises não paramétricas apresentaram correlação média entre CCS e concentração de Hp (r= 0,357, P<0,001), demonstrando associação entre as variáveis. Quanto à concentração de Hp, houve diferença significativa do G1 (0,41 g/L) e G2 (0,41 g/L) para G3 (0,70 g/L), ou seja, se comprovou a elevação dos níveis séricos de Hp em vacas com processo inflamatório instalado; entretanto, a Hp não se mostrou sensível para detecção de mastite subclínica. Sugere-se que estudos adicionais possam elucidar tais associações. / Somatic cell count (SCC) is the gold standard of both the mammalian gland and milk quality evaluation. The haptoglobin (Hp) is one of the main acute phase proteins, which increase in inflammation, infectious and stress processes of ruminants. This work evaluated the relation between Hp serum level and SCC, through the analysis of milk and blood samples from dairy cows from herds in the northwest Rio Grande do Sul state. Samples were obtainned, between February and October 2008, from 150 Holstein cows, without age or milking number discrimination and that were separate in three different groups with 50 animals each, according SCC value. Group 1 (G1) included cows with SCC below 600.000 cells/mL; group 2 (G2), cows with SCC above 600.000 cells/mL and group 3 (G3), cows with signs of clinical mastitis. For each milk sample, it was determined SCC, total bacteria count (TBC), and the protein, fat, lactose, and total solid contents. A 5 mL blood sample was collected by puncturing coccigeal vein to evaluate total and differential leucocytes counts, fibrinogen, hematocrit, total serum protein, and haptoglobin. Statistic analysis showed significant differences among the three groups for SCC, TBC, and lactose. The protein average showed significant difference among G1 to G2 and G3. Total solid contents from G1 and G2 were significantly different to that from G3. Fat content had not significant differences among groups. Not parametric analysis demonstrated strong positive association between SCC and TBC (r= 0,852, P< 0,005). For the hematological analysis, leucograma and total serum protein had no significant differences among groups. Both, fibrinogen and hematocrit showed statistical differences in G1 and G3. Regarding the differential analysis, the monocytes of G1 and G3 showed statistical differences to that of G2. Moreover, although short, there was significant correlation (r= 0,270, P<0,001) between fibrinogen and SCC. Not parametric analysis displayed mean correlation between SCC and Hp concentration (r= 0,357, P<0,001), demonstrating association between the variables. For the concentration of Hp, there was significant differences between G1 (0,41 g/L) and G2 (0,41 g/L) to G3 (0,70 g/L) proving the Hp increase in cows affected by clinical mastitis; nevertheless, the Hp was not a sensible marker to subclinical mastitis. It is suggested that further studies may elucidate those associations.