Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / Os micro-organismos quando se apresentam em biofilme expressam propriedades distintas de quando estÃo na forma planctÃnica. Uma dessas propriedades à uma maior tolerÃncia aos agentes antimicrobianos. O objetivo deste estudo foi avaliar a formaÃÃo biofilmes de dermatÃfitos in vitro e ex vivo, em lamÃnulas de poliestireno e fragmentos de unha, respectivamente, bem como a sua sensibilidade a trÃs agentes antifÃngicos (itraconazol, voriconazol e griseofulvina) na forma plantÃnica e em biofilmes. Para tal, num primeiro momento, foram utilizadas 26 cepas isoladas de espÃcimes clÃnicos de origem humana e animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). Os biofilmes foram, inicialmente, formados em placas de microdiluiÃÃo, e as cepas foram classificadas, pela quantidade de biomassa, como nÃo formadoras (2/26), fracas (7/26), moderada (1/26) e fortes formadoras de biofilme (16/26). Em seguida, cepas fortes formadoras de biofilmes foram escolhidas, sendo uma de cada espÃcie, para formaÃÃo de biofilmes em lamÃnulas e fragmentos de unha, para anÃlises pela microscopia Ãptica, confocal e eletrÃnica de varredura, posteriormente. As anÃlises demonstraram que todas as espÃcies formaram biofilmes in vitro e ex vivo, com densidade e arquitetura distintas. M. gypseum e M. canis produziram biofilmes com maior e menor quantidade de biomassa, respectivamente. Em um segundo momento, conforme as preconizaÃÃes do documento M38-A2 do CLSI, foram determinadas as concentraÃÃes inibitÃria mÃnima (CIMs) das trÃs drogas contra as 26 cepas de dermatÃfitos, na forma plantÃnica. Os valores CIMs variaram entre 0,00195-0,25 Âg/ml para itraconazol; 0,00195-0,125 para voriconazol e <0,0039-4 Âg/ml para griseofulvina. Posteriormente foram formados biofilmes, em placas de microdiluiÃÃo, que foram tratados com as mesmas drogas, nos valores de CIM, 10 x CIM e 50 x CIM. A viabilidade celular dos biofilmes foi quantificada utilizando o ensaio colorimÃtrico XTT. Para reduzir de forma significativa a atividade metabÃlica dos biofilmes (P<0,05) foi necessÃrio usar 50 x CIM, para as trÃs drogas. Este estudo pode contribuir para melhorar a compreensÃo da fisiopatologia do microrganismo e tolerÃncia ou resistÃncia ao tratamento. / The microorganisms when presented in biofilm express properties different from when they are in the planktonic form. One of these properties is a higher resistance to antimicrobial agents. The aim of this study was to evaluate the formation of dermatophytesâ biofilms in in vitro and ex vivo assay performed in polystyrene coverslip and nail fragments, respectively, and their susceptibility to three antifungal agents (itraconazole, voriconazole and griseofulvin) in planktonics and biofilm forms. To this end, at first, they were used 26 strains isolated from clinical specimens of human and animal: Trichophyton rubrum (4) Trichophyton tonsurans (6), Trichophyton mentagrophytes (3), Microsporum gypseum (3) e Microsporum canis (10). The biofilms were initially formed in microdilution plates, and the strains were classified by the amount of biomass as non producers (2/26), weak (7/26), moderate (1/26) and strong biofilm producers (16/26). Then, strains, strong producers of biofilms, were chosen, one of each species, to biofilm formation in coverslip Thermanox and nail fragments for later analysis by optical, confocal and scanning electron microscopy. The analyzes demonstrated that all species formed biofilms in vitro and ex vivo, with different density and architecture. M. gypseum and M. canis produced biofilms with higher and lower amounts of biomass, respectively. At a second step, according to the recommendations of the CLSI M38-A2 protocol, the minimum inhibitory concentration (MIC) values for the three antifungal agents against these 26 strains were determined, in the planktonic form. MICs values ranged from 0.00195-0.25 &#956;g/ml for itraconazol, 0.00195-0.125 for voriconazole and <0.0039-4 &#956;g / ml for griseofulvin. Subsequently, biofilms were formed, in microdilution plates and treated with the same drugs, in MIC, 10 x MIC and 50 x MIC values. The cell viability of the biofilms was quantified using the XTT colorimetric assay. In order to significantly reduce the metabolic activity of biofilms (P <0.05), 50 x MIC was required, for the three drugs. This study may contribute to improve the understanding of the pathophysiology of the microorganism and tolerance or resistance to treatment.

The H. Pylori strains demonstrate a high level of phenotypic and genotypic diversity, the expression of various genes, which confer greater pathogenicity to the bacteria. Most studies have found that the cagE gene is strongly associated with peptic ulcer disease and sites of tyrosine phosphorylation of CagA protei - EPIYA, has not been fully elucidated existing geographical differences. This study aimed to characterize the strains of H. pylori for the sites of tyrosine phosphorylation of CagA protein EPIYA and presence of genes cagE in patients with gastritis and peptic ulcer disease, and to correlate the presence of these genotypes with gastric disorder. Genotyping of H. pylori strains was performed by PCR and sequencing of phosphorylation sites EPIYA. 137 dyspeptic patients from H. pylori-positive, 72 with peptic ulcer and 65 with gastritis were evaluated. Of the 137 strains genotyped 68.6 % were cagA positive, strains cagA studied , 96.8 % had at least 1 C phosphorylation site EPIYA , while 53.2 % of these had only one site , 43.6 % had two or more sites C and 3.2 % had no place C. the mixed strains with two EPIYA patterns were present in 23.4 % of the studied samples . The group of patients with gastritis showed higher prevalence of genotype EPIYA ABCCC , the same was not observed in patients with peptic ulcer disease and this association with gastrics disorders studied significant ( p = 0.001 ). Of the 137 patients studied, 65 were positive for CAGE (47.4%). There was a significant inverse association between genotype and cage group of patients with gastritis (OR = 0.345, p = 0.002). There was a significant association between genotype cagE with peptic ulcer disease (OR = 2.898, p = 0.002) and the subgroup of patients with duodenal ulcer (OR = 3.839, p = 0.001). This study suggests that the population sample studied the presence of genotype Epiya three sites C was associated with gastritis and absent in patients with peptic ulcer. We found association of the cagE gene duodenal ulcer. / As cepas de H. pylori demonstram um alto nÃvel de diversidade fenotÃpica e genotÃpica, pela expressÃo de vÃrios genes, que conferem maior patogenicidade à bactÃria. A maioria dos estudos evidenciou forte associaÃÃo do gene cagE com doenÃa ulcerosa pÃptica e do aumento dos sÃtios de fosforilaÃÃo EPIYA C com doenÃas gÃstricas mais graves. No entanto, a associaÃÃo clÃnica e a funÃÃo dos sÃtios de fosforilaÃÃo de tirosina da proteÃna CagA â EPIYA e do gene cagE, ainda nÃo foi completamente elucidada, existindo diferenÃas geogrÃficas. O objetivo do presente estudo foi caracterizar as cepas de H. pylori quanto à presenÃa dos sÃtios de fosforilaÃÃo de tirosina da proteÃna CagA â EPIYA e do gene cagE em pacientes com gastrite e Ãlcera pÃptica, e correlacionar a presenÃa desses genÃtipos com as afecÃÃes gÃstricas. A genotipagem das cepas de H. pylori foi realizada atravÃs da tÃcnica de PCR e do sequenciamento dos sÃtios de fosforilaÃÃo EPIYA. Foram avaliados 137 pacientes dispÃpticos H. pylori positivo, 72 com Ãlcera pÃptica e 65 com gastrite. Das 137 cepas genotipadas 68,6% foram cagA positivas. Das cepas cagA estudadas, 96,8% apresentaram pelo menos 1 sÃtio C de fosforilaÃÃo EPIYA, sendo que 53,2% destas apresentaram somente um sitio, 43,6% tinham dois ou mais sÃtios C e 3,2% nÃo apresentaram sitio C. As cepas mistas com dois padrÃes EPIYA estavam presentes em 23,4% das amostras estudadas. O grupo de pacientes com gastrite apresentou maior prevalÃncia do genÃtipo EPIYA ABCCC; o mesmo nÃo foi observado no grupo de pacientes com Ãlcera pÃptica, sendo essa associaÃÃo com as afecÃÃes gÃstricas estudadas significante (p= 0,001). Dos 137 pacientes estudados, 65 foram positivos para cagE (47,4%). Houve associaÃÃo inversa significativa entre o genÃtipo cagE e o grupo de pacientes com gastrite (O.R=0,345; p=0,002). Houve associaÃÃo significativa entre o genÃtipo cagE com doenÃa ulcerosa pÃptica (O.R=2,898; p=0,002) e com o subgrupo de pacientes com Ãlcera duodenal (O.R=3,839; p=0,001). Esse estudo sugere que na amostra populacional estudada a presenÃa do genÃtipo EPIYA com trÃs sÃtios C estava associada à gastrite e ausente nos pacientes com ulcera pÃptica. Encontrou-se associaÃÃo do gene cagE a Ãlcera duodenal.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / O adenovÃrus humano (ADVh) à um agente viral comumente relacionado a infecÃÃes do trato respiratÃrio, tanto superior quanto inferior, principalmente em crianÃas com idade inferior a cinco anos. Os ADVh sÃo classificados em sete espÃcie (A-G) e divididos em 54 tipos. A proteÃna hexon à a principal responsÃvel pela variaÃÃo antigÃnica inter e intragrupos desse vÃrus. O objetivo desse estudo foi caracterizar os perÃodos de circulaÃÃo e a diversidade de espÃcie e tipos de ADVh encontrados em Fortaleza, Cearà â Brasil, durante 150 meses consecutivos (janeiro de 2001 a junho de 2013). A imunofluorescÃncia indireta (IFI) foi utilizada para a detecÃÃo dos ADVh, vÃrus sincicial respiratÃrio, influenza A e B, parainfluenza 1, 2 e 3, jà a imunofluorescÃncia direta (IFD) foi utilizado na detecÃÃo do metapneumovÃrus humano (MPVh) . A PCR e Nested-PCR seguida do sequenciamento das seis primeiras regiÃes hipervariÃvel do gene Hexon foram utilizadas para caracterizar as espÃcies e tipos dos ADVh. Os ADVh foram detectados 290 (3,41%) das 8.517 amostras, sendo 60 (20,69%) destas encontradas em coinfecÃÃo com um, dois ou trÃs vÃrus. Um total de 190 (65,52%) ADVh foram molecularmente caracterizados, sendo 162 pertencente à espÃcie ADVh-B (85,72%), 21 à ADVh-C (11,11%) e 6 à ADVh-E (3,17%), ficando um cepa sem identificaÃÃo. As espÃcies circularam durante todo o perÃodo analisados sendo observado o predomÃnio da espÃcie B em quase todos os anos. Sete diferentes tipos foram identificados circulando em Fortaleza durante o perÃodo analisado. Os tipos predominantes foram o 3 (67,73%) e o 7 (17,80%). O ADVh-3 foi encontrado em todos os anos, jà o ADVh-7 nÃo foi observado nos anos de 2006, 2010 e 2011. Somente em 2011 todos os tipos identificados da espÃcie C circularam, e o Ãnico representante da espÃcie E, o ADVh-4, comeÃou a ser identificado na nossa populaÃÃo apenas a partir de 2007. O melhor conhecimento da circulaÃÃo de ADVh poderà ser alcanÃado se a vigilÃncia for contÃnua e associada ao uso de mÃtodos de maior sensibilidade na detecÃÃo desses vÃrus.

nÃo hà / Pacientes com doenÃa de Parkinson (DP) foram estudados quanto as alteraÃÃes clÃnicas, o ciclo vigÃlia sono, as alucinaÃÃes visuais, as discinesias, os sintomas depressivos e a anÃlise morfomÃtrica voxel-a-voxel atravÃs de RessonÃncia MagnÃtica (RM). Os pacientes (N=100, 67% masculinos), com idade entre 45 e 80 anos foram avaliados quanto as alteraÃÃes do sono (Parkinsonâs Disease Sleep Scale, PDSS), a qualidade do sono (Pittsburgh Sleep Quality Index, PSQI), o grau de sonolÃncia diurna (Epworth Sleepiness Scale, ESS) e a gravidade dos sintomas (Unified Parkinsonâs Disease Scale, UPDRS partes I, II, III e IV). Os sintomas depressivos foram avaliados atravÃs das escalas de Beck Depression Inventory (BDI) e Hospital Anxiety Depression (HAD) e a funÃÃo cognitiva atravÃs do Mini Exame do Estado Mental (MEEM). A dose equivalente de levodopa (DEL) foi avaliada. AlucinaÃÃes visuais (AVs) foram observadas em 28% dos pacientes e nÃo houve diferenÃa estatisticamente significativa quanto ao sexo, idade, idade de inÃcio dos sintomas e duraÃÃo da doenÃa. Relatos de sonhos vÃvidos foram mais comuns em pacientes com DP e AVs. Os pacientes com AVs apresentavam mais alteraÃÃes das funÃÃes mentais (UPDRS I), mais distÃrbios do sono (PDSS) e pior qualidade do sono (PSQI). A anÃlise de regressÃo logÃstica mostrou que a presenÃa de sonhos vÃvidos e o grau de alteraÃÃes cognitivas associaram-se de forma independente com a presenÃa de alucinaÃÃes visuais. A anÃlise entre os grupos com e sem discinesia mostrou que os pacientes com discinesia (%) eram mais jovens no inÃcio dos sintomas). Pacientes com DP e discinesias tendiam a apresentar maior comprometimento das atividades da vida diÃria (UPDRS II) e da atividade motora (UPDRS III). Pacientes com sintomas depressivos (24%) tendiam a ser pior quanto as atividades da vida diÃria (UPDRS II) e quanto a atividade motora (UPDRS III). Na anÃlise morfomÃtrica atravÃs de estudo de ressonÃncia magnÃtica em pacientes com DP (N=39) e controles (N=10) e foi estudada a sua associaÃÃo com alucinaÃÃes visuais, discinesias e depressÃo. As imagens de RM foram processadas de acordo com o protocolo para estudo de volumÃtrica baseada em voxel (VBM). A variÃvel de desfecho usada foi o volume de substÃncia cinzenta. Em relaÃÃo aos controles, pacientes com DP sem AVs mostraram reduÃÃo do volume de substÃncia cinzenta no giro frontal superior esquerdo e no giro frontal opercular esquerdo. Pacientes com DP e com AVs mostraram reduÃÃo do volume de substÃncia cinzenta no giro frontal superior esquerdo (p=0,02) quando comparados aos com DP e sem AVs. Quanto à presenÃa/ausÃncia de disfunÃÃo cognitiva, pacientes com AVs e disfunÃÃo cognitiva apresentavam reduÃÃo do volume de substÃncia cinzenta no giro opercular esquerdo. Casos sem disfunÃÃo cognitiva apresentavam reduÃÃo da substÃncia cinzenta na Ãnsula esquerda e giro frontal trigonal esquerdo. O subgrupo de pacientes com DP com discinesias mostrou reduÃÃo da massa cinzenta no pulvinar do tÃlamo direito em relaÃÃo aos pacientes com DP sem discinesia. Na anÃlise VBM, a comparaÃÃo de pacientes com DP com depressÃo em relaÃÃo ao grupo DP sem depressÃo mostrou uma tendÃncia de reduÃÃo de massa cinzenta no giro frontal medial direito e na comparaÃÃo com controles observou-se uma reduÃÃo de massa cinzenta na Ãnsula esquerda, insula direita e giro frontal superior esquerdo. Nossos resultados mostram que as AVs associam-se de forma independente com a presenÃa de sonhos vÃvidos, disfunÃÃo mental, alteraÃÃes do comportamento e alteraÃÃes do humor (UPDRS I). Esse estudo confirma que o opÃrculo à importante na rede de circuitos cerebrais envolvidos na manifestaÃÃo de alucinaÃÃes e disfunÃÃes cognitivas na DP. Mostrou-se ainda que alteraÃÃes no nÃcleo pulvinar do tÃlamo associam-se com a presenÃa de discinesias. A Ãnsula direita e o giro frontal medial sÃo demonstrados como importantes locais de comprometimento cerebral em associaÃÃo com os sintomas depressivos na DP. Portanto, os pacientes com DP e AVs, discinesias e sintomas depressivos apresentam alteraÃÃes clÃnicas e alteraÃÃes cerebrais que sÃo especÃficas. Os resultados atuais contribuem para um melhor conhecimento sobre a patogenia da doenÃa e podem direcionar para alvos especÃficos terapias atualmente usadas como a estimulaÃÃo cerebral profunda.

FundaÃÃo Cearense de Apoio ao Desenvolvimento Cientifico e TecnolÃgico / O Streptococcus (S.) pneumoniae à considerado como o principal agente causador de morbidade e mortalidade em crianÃas menores de cinco anos de idade. As doenÃas pneumocÃcicas comeÃam com o estabelecimento da colonizaÃÃo do S. pneumoniae na nasofaringe. O principal fator de risco para colonizaÃÃo à o confinamento, como em crianÃas que frequentam creches. Nas Ãltimas dÃcadas, o aumento do nÃmero de cepas de S. pneumoniae resistentes à antibiÃticos &#946;-lactÃmicos e a outras classes de antimicrobianos tem dificultado o tratamento da infecÃÃo pneumocÃcica. Atualmente cerca de 13 sorotipos de S. pneumoniae respondem por mais de 85% dos isolados invasivos. A vacina pneumocÃcica polissacarÃdica conjugada 10-valente (VPC-10) foi recentemente incluÃda no calendÃrio de vacinaÃÃo nacional. Os objetivos desse estudo foram determinar a prevalÃncia, a resistÃncia antimicrobiana, os genÃtipos de S. pneumoniae que colonizam a nasofaringe de crianÃas usuÃrias de creches em Fortaleza, Brasil, bem como para avaliar a cobertura potencial da VPC-10. Entre janeiro e dezembro de 2011, os isolados de crianÃas portadores foram recuperados a partir de swabs de nasofaringe. Foram determinadas as sensibilidades para penicilina, ceftriaxona, sulfametoxazol/trimetoprim, amoxilina, clindamicina e eritromicina, das cepas isoladas utilizando-se o mÃtodo de e-test.. A detecÃÃo dos genes de resistÃncia à penicilina foi realizada por PCR. A genotipagem capsular dos isolados de portadores foi realizada pela tÃcnica de multiplex PCR. Foram isolados S. pneumoniae em 165 (56,7%) das 291 crianÃas saudÃveis usuÃrias de creches. Dos 162 isolados de portadores, submetidos à determinaÃÃo da concentraÃÃo inibitÃria mÃnima, foi encontrada uma taxa resistÃncia de 27,8% para penicilina, 75,3% para sulfametoxazol/trimetoprim, 13,6% para eritromicina e 10,5% para clindamicina. NÃo foi detectada resistÃncia à ceftriaxona e à amoxicilina. A porcentagem de isolados de S. pneumoniae com mutaÃÃo em pelo menos um dos genes que determinam resistÃncia à penicilina foi de 68,2%. Os genÃtipos capsulares de 115 isolados foram identificados em 129 viÃveis. Os genÃtipos mais comuns foram 6A/6B, 14, 15B/15C, 19F e 23F, com os sorotipos 6A/6B, 14, 19F e 23F mais associados com a resistÃncia. A cobertura estimada para VPC-10 foi de 74.4%. O presente estudo verificou que a taxa de portadores de S. pneumoniae à alta, assim como a resistÃncia aos antimicrobianos penicilina e sulfametoxazol/trimetoprima, e que a cobertura potencial da VPC-10 à elevada frente aos genÃtipos de S. pneumoniae identificados, isolados de crianÃas usuÃrias de creches em Fortaleza.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de NÃvel Superior / Gastric cancer is associated with H. pylori infection, environmental factors and genetic predisposition. Relatives of gastric cancer patients are at increased risk to develop cancer, possibly, due to infection by more virulent H. pylori strains and genetic predisposition associated with pro-inflammatory cytokines, which may, in turn, result in an exaggerated inflammatory response and oxidative stress. The aim of this study was to: 1) evaluate the oxidative stress in dispeptic patients without family history of gastric cancer (NRC), patients with gastric cancer (GC) and relatives of gastric cancer (RC); 2) evaluate the prevalence of the H. pylori genotypes homA, homB and cagE in RC and NRC and determine if the cagE gene is associated with GC as well as the pattern of cagA EPYIA phosphorylation in GC. This study was performed at the Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdeo (HUWC) in Fortaleza. Blood samples were collected and centrifuged to obtain serum, in order to measure the concentration of reduced glutathione (GSH), an anti-oxidant, and Malondealdehyde (MDA), a product of lipid peroxidation. DNA extraction was performed in gastric biopsies, followed by PCR and electrophoresis for ureA, vacA, homA, homB, cagA e cagE genes. The concentrations of MDA and GSH were evaluated in 213 patients (54 CG, 91 RC e 68 NRC). The group of CG had higher MDA and lower GSH concentrations when compared to the groups without cancer (p=0.001 and p=0.005, respectively). The H. pylori genotypes were evaluated in 186 patients (48 CG, 74 RC and 64 NRC). The overall cagE prevalence was 54.3% (101/186), 70% (52/74) in the RC group, 52% (25/48) in the GC group and 36% (24/87) in the NRC group. A significant and independent association was found between the cagE genotype and the RC group (OR 3,357; IC 2,026 - 9,476 95%: p=0,001) and between the homB genotype and the RC group (OR (OR 2,357; IC 95%: 1,401 â 3,961; p=0,001). Forty six cagA positive samples from the GC group were included for gene sequencing to evaluate the EPIYA phosphorylation sites of the CagA protein. All of the strains studied had an EPIYA-C pattern and approximately 50% of the strains were mixed. This study demonstrates that patients with gastric cancer are under higher levels of oxidative stress. The group of RC have a higher prevalence of cagE and homB. The group of GC patients had a high prevalence of mixed strains regarding CagA EPIYA-C phosphorylation pattern. Decreasing the lipid peroxidation, increasing the antioxidant reserve and identifying groups at risk of infection with more virulent strains of H. pylori may be important to prevent gastric cancer. / O cÃncer gÃstrico està relacionado a infecÃÃo por H. pylori, fatores ambientais e predisposiÃÃo genÃtica. Familiares de pacientes com cÃncer gÃstrico (FC) tÃm maior risco de desenvolvimento da doenÃa, possivelmente, em decorrÃncia da infecÃÃo por cepas mais virulentas de H. pylori e predisposiÃÃo genÃtica relacionado a citocinas prÃ-inflamatÃriase o stress oxidativo. O objetivo do estudo foi: 1) avaliar o estresse oxidativo em pacientes portadores de cÃncer gÃstrico (CG), dispÃpticos sem histÃria familiar de cÃncer gÃstrico (NFC), e familiares de cÃncer gÃstrico de primeiro grau (FC); 2) averiguar em FC e NFC a prevalÃncia dos genÃtipos de H. pylori homA, homB, cagE e, em pacientes portadores de CG, avaliar se o gene cagE està associado a essa neoplasia e o padrÃo dos sÃtios de fosforilaÃÃo EPYIA da proteÃna cagA. Estudo foi realizado no Hospital UniversitÃrio Walter CantÃdio. O estresse oxidativo foi avaliado no soro atravÃs da dosagem de glutationa reduzida (GSH), antioxidante, e malondialdeÃdo (MDA), produto da peroxidaÃÃo lipÃdica. Realizou-se extraÃÃo de DNA da biÃpsia gÃstrica, seguida de PCR e eletroforese para os genes ureA, vacA, homA, homB, cagA e cagE. Foi avaliado a concentraÃÃo sÃrica de MDA e GSH em 213 indivÃduos (54 CG, 91 FC e 68 NFC). O grupo CG apresentou concentraÃÃes de MDA mais elevado e de GSH mais baixo quando comparado com o grupo sem neoplasia (p=0.001 e p=0.005, respectivamente). Os genÃtipos de H. pylori foram avaliados em 186 pacientes (48 CG, 74 FC e 64 NFC). A prevalÃncia geral de cagE na amostra foi de 54,3% (101/186), sendo 70% (52/74) no grupo FC, 52% (25/48) no grupo de CG e 36% (24/87) no grupo NFC. Houve associaÃÃo significante, mesmo apÃs anÃlise multivariada, entre o genÃtipo cagE e o grupo de FC (OR 3,357; IC 2,026 - 9,476 95%: p=0,001) e entre homB e o grupo FC (OR 2,357; IC 95%: 1,401 â 3,961; p=0,001). Foram incluÃdas 46 amostras de CG cagA positivas para avaliaÃÃo dos sÃtios EPIYA da proteÃna CagA. Todas as cepas avaliadas apresentaram padrÃo EPYIA-C, e aproximadamente 50% de cepas mistas. O presente estudo mostra que pacientes portadores de cÃncer gÃstrico possuem estresse oxidativo aumentado. Os indivÃduos FC estÃo infectados com maior prevalÃncia por cepas virulentas de H. pylori, cagE e homB. AlÃm disso, os pacientes portadores de cÃncer gÃstrico apresentaram prevalÃncia elevada de cepas mistas de H. pylori quanto ao segmentos EPIYA C da proteÃna CagA. Possivelmente, diminuir a peroxidaÃÃo lipÃdica, aumentar a reserva de antioxidantes e identificar grupos de maior risco quanto ao perfil de cepas de H. pylori poderà ser importante para a prevenÃÃo do cÃncer gÃstrico.

CoordenaÃÃo de AperfeÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / EspÃcies do gÃnero Aeromonas, encontradas com frequÃncia em ambientes aquÃticos, sÃo importantes patÃgenos humanos. Este estudo teve como objetivo geral isolar cepas clÃnicas e ambientais de Aeromonas spp., assim como, investigar a presenÃa de genes de virulÃncia e avaliar a sensibilidade a antimicrobianos in vitro, bem como, o mecanismo de resistÃncia. As amostras clÃnicas e ambientais foram identificadas por meio de testes bioquÃmicos e metodologia automatizada Vitek2Â (bioMeriÃux). A detecÃÃo de genes de virulÃncia para enterotoxina citotÃxica (act), hemolisina (asa1) e sistema de secreÃÃo III (ascV) foi feita por PCR simples. A sensibilidade aos antimicrobianos seguiu recomendaÃÃes dos documentos M7-A9 e M45-A2 do CLSI. A caracterizaÃÃo do mecanismo de resistÃncia foi realizada mediante testes fenotÃpicos para detecÃÃo de Ã-lactamases. Dos isolados clÃnicos foram identificados dezenove A. hydrophila, trÃs A. veronii bv. sobria e uma A. caviae. As 35 cepas ambientais foram identificadas como A. hydrophila (n=11), A. veronii bv. sobria (n=22), A. veronii bv. veronii (n=1) e A. caviae (n=1). Em relaÃÃo aos genes de virulÃncia das cepas clÃnicas, foram detectados os genes act, asa1 e ascV nas proporÃÃes 69,5; 8,6 e 34,7%, respectivamente. Enquanto nas cepas ambientais foram encontrados os percentuais de 51,4; 45,7 e 54,2%, respectivamente. Observou-se resistÃncia a piperacilina-tazobactam e a amoxicilina-clavulanato, em 3 e 15 cepas clÃnicas, respectivamente. Ademais, houve resistÃncia a ceftazidima, meropenem, imipenem, ciprofloxacina e trimetoprim-sulfametoxazol, com uma cepa resistente a cada antimicrobiano. Quanto Ãs cepas ambientais, detectou-se resistÃncia somente a piperacilina-tazobactam e amoxicilina-clavulanato em 1 e 17 cepas, respectivamente. Em relaÃÃo a detecÃÃo de Ã-lactamases, foi detectada AmpC em doze cepas clÃnicas e sete ambientais. Em suma, apesar de ter sido obtido um maior percentual de resistÃncia em cepas de origem humana, as cepas ambientais tambÃm apresentaram este fenÃmeno e em ambas foram detectados genes de virulÃncia. Portanto, Ã importante realizar o monitoramento do potencial patogÃnico e sensibilidade de isolados ambientais. / Aeromonas spp., frequently found in aquatic environments, are important human pathogens. This study had the main objectives of isolating clinical and environmental strains of Aeromonas spp. and investigating the presence of virulence genes, antimicrobial susceptibility in vitro and resistance mechanism. Clinical and environmental samples were identified by biochemical tests and the automated Vitek2Â (bioMeriÃux) method. The virulence genes cytotoxic enterotoxin (act), haemolysin (asa1) and type III secretion system (ascV) were detected by simple PCR. The antimicrobial susceptibility was determined according to the recommendations of M7-A9 and M45-A2 do CLSI. The characterization of resistance mechanism was performed by detection of Ã-lactamases phenotypic tests. From the clinical isolates, 19 A. hydrophila, 3 A. veronii bv. sobria and 1 A. caviae were identified The 35 environmental strains were identified as A. hydrophila (n= 11), A. veronii bv. sobria (n= 22), A. veronii bv. veronii (n= 1) and A. caviae (n= 1). Regarding the virulence genes of clinical strains, the act, asa1 and ascV genes were detected in the proportions 69.5, 8.6 and 34.7%, respectively. The respective percentages for the environmental strains were 51.4, 45.7% and 54.2%. Resistance was observed to piperacillin-tazobactam and amoxicillin-clavulanate in 3 and 15 clinical strains, respectively. Moreover, there was resistance to ceftazidime, meropenem, imipenem, ciprofloxacin and trimethoprim-sulfamethoxazole, with one strain resistant to each antimicrobial agent. As for the environmental strains, resistance was detected only to piperacillin-tazobactam and amoxicillin-clavulanate and, in 1 and 17 strains, respectively. Regarding the detection of Ãâlactamases, AmpC was detected in clinical (n= 12) and environmental strains (n= 7). In short, despite having observing higher percentage of resistance in strains of human origin, environmental strains also showed this phenomenon and virulence genes were detected in both strains. Thus, it is important to monitor the antimicrobial susceptibility and pathogenic potential of the environmental isolates.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A intrÃnseca resistÃncia apresentada pela bactÃria Burkholderia pseudomallei à um grave empecilho para o tratamento da melioidose. Muitas pesquisas focam na busca de adjuvantes que aumentem a sensibilidade desta bactÃria aos antimicrobianos. Nesse contexto, a aÃÃo inibitÃria do farnesol frente Ãs cepas de B. pseudomallei, na forma planctÃnica, jà foi relatada em estudo prÃvio. Diante disso, esse estudo objetivou analisar a atividade in vitro do farnesol contra cepas de B. pseudomallei na forma de biofilme. Aliado à anÃlise da aÃÃo do farnesol isoladamente, foi investigada a combinaÃÃo desse composto com os antimicrobianos amoxicilina, ceftazidima, doxiciclina, imipenem e sulfametoxazol/trimetoprim frente ao biofilme. A sensibilidade foi avaliada por meio do teste de microdiluiÃÃo em caldo e a leitura da viabilidade celular feita com a resazurina. A concentraÃÃo inibitÃria mÃnima em biofilme (CEMB) para o farnesol foi de 75 a 2400 mM. Ademais, o farnesol reduziu em atà 256, 16, 4 e 4 vezes os valores de CEMB para ceftazidima, amoxicilina, doxiciclina e sulfametoxazol/trimetoprim, respectivamente (P<0.05). Por meio de tÃcnicas de microscopia, tais como Ãptica, confocal e eletrÃnica, observou-se que o farnesol foi capaz de causar danos na matriz do biofilme, facilitando assim, a penetraÃÃo dos antibiÃticos. Deste modo, o presente estudo mostrou a eficÃcia do farnesol contra biofilmes de B. pseudomallei e seu efeito potenciador, em especial com ceftazidima, amoxicilina, doxiciclina e sulfametoxazol/trimetoprim / The intrinsic antimicrobial resistance of Burkholderia pseudomallei is a serious challenge to the treatment of melioidosis. Many studies have searched for adjuvants that increase susceptibility bacteria to antimicrobials. In this context, the antimicrobial activity of farnesol against B. pseudomallei in planktonic growth has been reported. Thus, the aim of this study was to analyze the in vitro activity of farnesol alone against Burkholderia pseudomallei biofilms, as well as its combination with the antibacterials amoxicillin, doxycycline, ceftazidime and sulfamethoxazole-trimethoprim. Susceptibility was assessed by the broth microdilution test and cell viability was read with the oxidation-reduction indicator dye resazurin. The interaction between farnesol and antibacterial drugs against B. pseudomallei biofilms was evaluated through the calculation of the fractional inhibitory concentration index. The minimum biofilm erradication concentration (MBEC) for farnesol was 75 to 2400 mM. In addition, farnesol significantly reduced the MBEC values for ceftazidime,amoxicillin, doxycycline and sulfamethoxazole-trimethoprim by 256, 16, 4 and 4 times respectively (P<0.05). Optical, confocal and electronic microscopic analyses of farnesol treated B. pseudomallei biofilms demonstrated that this compound damages biofilm matrix,facilitating antimicrobial penetration in the biofilm structure. This study demonstrated the effectiveness of farnesol against B. pseudomallei biofilms and its potentiating effect on the activity of antibacterial drugs, in particular ceftazidime, amoxicillin, doxycycline and sulfamethoxazole-trimethoprim

FundaÃÃo de Amparo à Pesquisa do Estado do Cearà / A infecÃÃo respiratÃria aguda (IRA) à uma sÃndrome clÃnica, em que cerca de 80% das mortes sÃo atribuÃdas à pneumonia, uma doenÃa grave que atinge o trato respiratÃrio inferior. O agente etiolÃgico comumente isolado na pneumonia adquirida na comunidade (PAC) à o Streptococcus pneumoniae (S. pneumoniae). As doenÃas pneumocÃcicas comeÃam com a colonizaÃÃo do S. pneumoniae na nasofaringe, podendo progredir para doenÃa invasiva. Nas Ãltimas dÃcadas, o aumento do nÃmero de cepas de S. pneumoniae resistentes a antibiÃticos &#946;-lactÃmicos e a macrolÃdeos tem dificultado o tratamento das infecÃÃes pneumocÃcicas. Os objetivos desse estudo foram determinar à prevalÃncia de portadores de S. pneumoniae em crianÃas com PAC, o perfil de sensibilidade a antimicrobianos e distribuiÃÃo dos sorotipos, em Fortaleza, Brasil. As cepas de S. pneumoniae foram isoladas de aspirados de nasofaringe de crianÃas com PAC atendidas no Hospital Infantil Albert Sabin (HIAS). Para a determinaÃÃo das ConcentraÃÃes InibitÃrias MÃnimas (CIM) foi utilizado o mÃtodo de E-test para os seguintes antimicrobianos: penicilina, ceftriaxona, sulfametoxazol/trimetoprim, amoxicilina, clindamicina e eritromicina. A genotipagem das cepas de S. pneumoniae foi realizada pela tÃcnica de multiplex PCR. De 527 amostras de crianÃas com PAC, foram isolados S. pneumoniae em 30,17%. De 126 isolados de portadores foi encontrada uma taxa resistÃncia de 25,8% para penicilina, de 81,2% para sulfametoxazol/trimetoprim, de 21,4% para eritromicina, de 19% para clindamicina e de 0,8% para ceftriaxona e amoxicilina. Das 102 cepas genotipadas, os sorotipos mais comumente encontrados foram 6A/6B, seguido do 14, 19A e 19F. Foram selecionadas 29 cepas resistentes à penicilina para detecÃÃo das alteraÃÃes proteÃnas de ligaÃÃo a penicilina (PBP). Foi encontrada alteraÃÃo na PBP 1a em 69%, jà para as PBP 2b e PBP 2x todas as cepas testadas apresentaram alteraÃÃo. Jà para clindamicina e eritromicina, foram selecionados 24 cepas para detecÃÃo do gene ermB. Das 24 cepas testadas, 79,2% possuÃam o gene ermB. O presente trabalho gerou dados sobre a prevalÃncia de crianÃas portadoras com PAC de S. pneumoniae, revelou dados fenotÃpicos e genotÃpicos acerca da resistÃncia dos isolados frente aos antimicrobianos utilizados na clÃnica e a distribuiÃÃo dos sorotipos do pneumococo de crianÃas com PAC atendidas no HIAS.

CoordenaÃÃo de AperfeiÃoamento de Pessoal de NÃvel Superior / A melioidose à uma doenÃa infeciosa emergente, notadamente no nordeste do Brasil, com sÃrias implicaÃÃes internacionais, assim como um problema de saÃde pÃblica. Causada pelo bacilo Burkholderia pseudomallei, esta infecÃÃo se apresenta desde quadros assintomÃticos a quadros graves e frequentemente fatais. As altas taxas de mortalidade da doenÃa (20 a 50%) a tornam uma prioridade para orgÃos globais de saÃde. No Brasil, casos de melioidose foram relatados pela primeira vez em 2003, no municÃpio de TejuÃuoca no CearÃ. Desde entÃo, novos casos de melioidose foram diagnosticados em outros seis municÃpios cearenses. B. pseudomallei à intrinsecamente resistente a muitos antibiÃticos e estudos recentes jà descrevem casos resistÃncia aos antimicrobianos utilizados no tratamento da melioidose. A investigaÃÃo da capacidade de formaÃÃo de biofilme por B. pseudomallei parece ser fundamental, jà que o biofilme permite o desenvolvimento de microcolÃnias dentro de um ambiente protegido, o qual se relaciona com a proteÃÃo ambiental, adesÃo, colonizaÃÃo, evasÃo do sistema imune e ligaÃÃo a cÃlulas ambientais. Portanto, o desenvolvimento de alternativas terapÃuticas antibiofilme, incluindo novas drogas, à necessÃrio. Com efeito, este estudo teve como objetivo caracterizar as cepas de B. pseudomallei da coleÃÃo do LAPERE quanto à capacidade de produÃÃo de biofilme e sensibilidade em crescimento planctÃnico e em biofilme. As drogas selecionadas foram: ceftazidima (CAZ), doxiciclina (DOX), imipenem (IPM), amoxicilina/clavulanato (AMC) e sulfametoxazol/trimetoprim (SXT); e farnesol (FNS). Todas as cepas foram classificadas como produtoras de biofilme, sendo divididas em: forte (5 cepas), moderada (3 cepas), e fraca (1 cepa). Valores mÃdios de concentraÃÃo inibitÃria mÃnima (MIC), concentraÃÃo inibitÃria mÃnima em biofilme (MBIC) e concentraÃÃo de erradicaÃÃo mÃnima em biofilme (MBEC) para estas cepas foram determinados para AMC (MIC 10,2/5,1 mg/L, MBIC 21,3/10,6 mg/L e MBEC 27,6/13,8 mg/L), para CAZ (MIC 5,6 mg/L, MBIC 120,4 mg/L e MBEC 419,6 mg/L), para DOX (MIC 0,28 mg/L, MBIC 1,3 mg/L e MBEC 3,8 mg/L), para IPM (MIC 0,597 mg/L, MBIC &#8805; 256 mg/L e MBEC > 256 mg/L), para SXT (MIC 1,25/23,75 mg/L, MBIC &#8804; 0,5/9,5 mg/L e MBEC < 0,72/13,72 mg/L), e para FNS (MIC e MBIC iguais a 150 ÂM/L). Os dados obtidos apontam especialmente para o potencial inibitÃrio de trÃs dos antibiÃticos estudados - AMC, DOX e SXT, e farnesol contra cepas de B. pseudomallei associadas a biofilme. Todavia, sÃo necessÃrios novos estudos para investigar os mecanismos de aÃÃo dessas drogas sobre o biofilme, bem como o delineamento de experimentos in vivo para confirmar a significÃncia desses achados clinicamente. Ademais, o crescimento dessas cepas em condiÃÃes de formaÃÃo de melanina e biofilme evidenciou que esta associaÃÃo torna as cepas mais resistentes à aÃÃo de imipenem e farnesol.