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According to the Canadian Cancer Statistics 2012 annual report, cancer remains a major cause of death, with an estimated 186 400 new cases, and 75 700 deaths. eIF4E is dysregulated in many cancers, including breast cancer. Our lab has considerable preliminary data to suggest that eIF4E, and specifically phosphorylated eIF4E, is involved in the Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT) and metastasis. Moreover, Borden, K.L.B., et al., and our lab have recently published that the drug Ribavirin targets eIF4E and inhibits breast cancer cell growth. The main objective of this thesis project is to determine the impact of Ribavirin on EMT. Our data demonstrate that Ribavirin attenuates TGF-β1-induced EMT in NMuMG cells. At the morphological level, cells appear to adopt less of a mesenchymal phenotype, and this is associated with a reduction in expression of the mesenchymal marker, Fibronectin. Importantly, phenotypic changes associated with a TGF-β1-induced EMT could be inhibited by Ribavirin. Specifically, Pro-MMP9 levels are reduced in the presence of Ribavirin, and Ribavirin inhibits wound closure ability by 15%. Ribavirin also attenuates the induction of Snail by TGF-β1 stimulation. Interestingly, Ribavirin also reverts mesenchymal characteristics of mouse MT2186 and human MDA-MB-231 breast cancer lines. As well, Ribavirin inhibits cell invasion by 30% in MT2186 and by 65% in MDA-MB-231 cells. At the molecular level, we provide evidence that Ribavirin may exert its anti-metastatic activity by attenuating the expression of Snail. Snail is a transcription factor and EMT regulator, leading to increased invasiveness and decreased cell proliferation. When we overexpress Snail in MDA-MB-231 cells, this reduces their cell proliferation by 50% and antagonizes Ribavirin's ability to decrease cell growth. Our preliminary data show that Ribavirin can inhibit invasion of MT2186 and MDA-MB-231 cells. However, Ribavirin's ability to inhibit Matrigel invasion is abrogated by overexpressing Snail in MDA-MB-231 cells. In addition, we also provide evidence that Snail is regulated by phosphorylated eIF4E using MEF cells with a non-phosphorylated form of eIF4E, derived from eIF4E Serine 209 Alanine knock-in mice. Together, the results presented in this thesis warrant further investigation into the anti-metastatic activity of Ribavirin in breast cancer. To this end, our lab is planning on testing the efficacy of Ribaivirin in in vivo models of breast cancer metastasis. / Selon le rapport annuel 2012 de Statistiques Canadiennes sur le Cancer, le cancer demeure une cause majeure de décès, avec 186 400 nouveaux diagnostics et 75 700 décès. Il y a perturbation de la fonction de la protéine eIF4E dans plusieurs de ces cas, incluant dans le cancer du sein. Notre laboratoire a accumulé un nombre considérable d'évidences préliminaires qui suggèrent qu'eIF4E, et spécialement sa protéine phosphorylée, joue un rôle dans la transition épithélio-mésenchymateuse (EMT) et dans la formation des métastases. De plus, nous avons récemment publié que le Ribavirin cible eIF4E et inhibe la croissance des cellules du cancer du sein. L'objectif principal de ce projet de thèse de maîtrise consistait à déterminer les effets du Ribavirin sur l'EMT. Nos données montrent que le Ribavirin atténue l'induction par le TGF- β1 de l'EMT dans les cellules NMuMG. La morphologie des cellules s'éloigne alors du phénotype mésenchymial, et une réduction de l'expression du marqueur mésenchymial Fibronectin est observé. D'une façon importante, les changements de phénotype normalement associé à l'EMT engendrée par le TGF- β1 sont inhibés par le Ribavirin. Les niveaux de pro-MMP9 sont notamment diminués en présence de Ribavirin, alors que celui-ci diminue aussi la capacité de guérison d'une plaie de 15%, telle que mesurée par la migration cellulaire. Par ailleurs, alors que TGF- β1 augmentent les niveaux d'ARNm de Snail, Ribavirin les diminue. Aussi, le Ribavirin réussi à modifier les caractéristiques mésenchymiales des cellules murines MT2186 et humaines MDA-MB-231 en les ramenant vers un phénotype similaire à celui d'une cellule épithéliale. Aussi, le Ribavirin inhibe de 30% et de 65% l'invasion cellulaire dans les cellules MT2186 et MDA-MB-231, respectivement. Pour ce qui est de l'effet du Ribavirin au niveau moléculaire, nos observations nous portent à croire que celui-ci diminue la formation de métastases en atténuant l'expression de Snail. Snail est un facteur de transcription qui module l'EMT en augmentant l'invasion et la prolifération cellulaire. La surexpression de Snail induit d'ailleurs une diminution de 50% de la prolifération cellulaire dans les cellules MDA-MB-231 et empêche le Ribavirin de diminuer la croissance cellulaire. Nos données préliminaires montrent que le Ribavirin peut inhiber l'invasion cellulaire des cellules MT2186 et MDA-MB-231. Cependant, la surexpression de Snail dans les cellules MDA-MB-231 empêche le Ribavirin d'inhiber l'invasion des ces cellules sur Matrigel. En plus, nous avons démontrés que Snail est régulé par la forme phosphorylée d'eIF4E en employant un modèle cellulaire de MEF présentant une forme non phosphorylée d'eIF4E. Ce modèle est dérivé d'une souris knock-in pour eIF4E (Serine 209 Alanine). En conclusion, l'ensemble des résultats présentés démontrent le besoin d'études supplémentaires pour éclaircir l'activité anti-métastasique du Ribavirin dans le cancer du sein. Notre laboratoire planifie d'ailleurs d'évaluer son efficacité in vivo chez un modèle murin de cancer du sein métastasique.

Pancreas cancer (PC) remains the fourth most common cancer-related mortality in men and women in the United States, and incidence rates are similar in the states and worldwide, although, lower in less developed countries. With surgery, its 5-year survival rate is less than 20%. Anorexia-Cachexia Syndrome (CACS) is a major symptomatic problem in patients with cancer. It's a wasting syndrome involving the loss of muscle and fat caused by tumor factors or indirectly caused by an aberrant host response to tumor presence. Rapid and acute loss of skeletal muscle is usually observed in the presence of cachexia. Sarcopenia alone, especially present in the elderly, is associated with a gradual and progressive loss of muscle mass. In this study, we determine if there are gender differences in patterns of total muscle mass with newly diagnosed pancreatic cancer patients using tomographic scans. The study of total muscle mass was performed using a mixed model trajectory analysis to understand this difference over time. This study was conducted as part of a retrospective study. A hundred and seventy six patients with pancreatic adenocarcinoma were included in this study: 85 women and 91 men. The average age was 68 and 66 respectively. There were no differences in demographic characteristics between the two groups. All third lumbar slices (L3) from the tomographic scans for each patient were included in Matlab Version 12a to determine the muscle surface. Mean L3 Muscle surface in men and women were respectively 98.28 cm2 and 146.63 cm2. The total average muscle mass per unit of weight for men was 27.5 cm2/g and 19.2 cm2/g for females. Three different trajectories of total muscle mass were identified in this cohort. Most men maintained a total muscle mass during the course of disease. A higher percentage of women were found in the group of loss or gain of total muscle mass. Age, sex and treatment (curative or palliative intent) seemed to predict the total muscle mass trajectory in the disease. Differences in sex hormones between men and women seem to explain this gender distribution amongst the trajectories. In addition, the difference in rates between systemic inflammation may contribute, in addition to hormonal differences, to the differences seen in the total muscle mass. More trajectories can be identified with a larger cohort and other conclusions can be drawn from these trajectories. It may help health care professionals to intervene with the right treatment at the right time. / Le cancer du pancréas demeure le quatrième taux de mortalité le plus fréquent chez les hommes et les femmes aux États-Unis, et le taux d'incidence est similaire dans le monde, bien plus faible dans les pays moins développés. Avec la chirurgie, le taux de survie de 5 ans est inférieur à 20%. Le syndrome anorexie-cachexie (CACS) est un symptôme majeur chez les patients atteints de cancer, et plus prédominant chez les patients atteints d'un cancer pancréatique. Il s'agit d'un syndrome de dépérissement impliquant la perte de muscle et de graisse provoqués par des facteurs tumorales ou indirectement causés par une réponse aberrante de l'hôte à la présence de tumeur. Une perte rapide et aigue du muscle squelettique est habituellement observée en présence de la cachexie. La sarcopénie seule, surtout présente chez les personnes âgées, est associée à une perte graduelle et progressive de la masse musculaire. Dans cette étude, nous déterminons s'il y a une différence de la masse musculaire total, entre les sexes, chez les patients atteints de cancer du pancréas, nouvellement diagnostiqués, en utilisant des scans tomographiques. L'étude des masses musculaires totales a été effectuée en utilisant une analyse de modèle de trajectoire mixte afin de comprendre cette différence avec le temps. Cette étude a été réalisée dans le cadre d'une étude rétrospective. Cent soixante seize patients atteints d'un adénocarcinome du pancréas ont été inclus dans cette étude, dont 85 femmes et 91 hommes. L'âge moyen était de 68 et 66 respectivement. Il n'y avait pas de différences dans les caractéristiques démographiques entre les deux sexes. Toutes les tranches lombaires 3 (L3) des scans tomographiques pour chaque patient étaient insérées dans Matlab Version 12a pour déterminer la surface musculaire. La surface musculaire moyenne, au diagnostique, chez les femmes et les hommes étaient respectivement de 98.28 cm2 et de 146.63 cm2. La masse musculaire moyenne totale par unité de poids pour les hommes était 27.5 cm2/g et les femmes 19,2 cm2/g. Trois différentes trajectoires de masse musculaire totale ont été identifiés dans cette cohorte. La plupart des hommes entretenaient une masse musculaire totale au cours de la maladie. Un pourcentage plus élevé de femmes se retrouve dans le groupe de perte ou de gain de la masse totale musculaire. En outre, l'âge, le sexe et le traitement (curatif ou palliatif intention) semble prédire la trajectoire de cette masse musculaire totale au cours de la maladie. Les différences au niveau des hormones sexuelles entre les hommes et les femmes semblent expliquer cette répartition des sexes dans les différentes trajectoires musculaires. De plus, la différence du taux d'inflammation systémique entre les sexes peut contribuer, en plus des différences hormonales, à cette différence de masse musculaire totale au cours de la maladie. Plus de trajectoires peuvent être identifiés avec une plus grande cohorte. De plus, d'autres conclusions peuvent être tirées de ces trajectoires et aider les professionnels de la santé à intervenir avec les bons traitements aux bons moments.

Skin cancer is the most common type of cancer worldwide, with an annual occurrence of almost 3 million cases. The most lethal skin cancer is cutaneous melanoma, which accounts for 75 percent of skin cancer related deaths. Over the past 50 years, the incidence of melanoma in most developed countries has increased faster than any other cancer. Although most patients have localized disease at the time of diagnosis and are cured by surgical excision of the primary tumor, melanoma can be highly malignant and form metastases to almost any organ of the body. Melanoma diagnosis at later stages of tumor progression is associated with a poor prognosis. Indeed, the fifteen-year survival for advanced melanoma is only 5 percent. It is therefore crucial to elucidate the molecular events underlying melanoma progression. The transforming growth factor beta (TGFb) family of growth factors represents a large group of plurifunctional polypeptides that contribute to the orchestration and modulation of the developmental program, growth, differentiation, and functional homeostasis of almost all cell types and tissues. TGFb and its receptors are expressed in all tissues and the regulatory role played by this growth factor is of central importance in human diseases. In human cancers, TGFb is generally considered to exert a dual role. In the normal and premalignant states, TGFb maintains tissue homeostasis and acts as a tumor suppressor. These activities can be lost during tumorigenesis because of alterations of the TGFb pathway molecules and other responses then prevail, favoring tumor progression and metastasis. However, these effects might be tissue-specific and they have not been well characterized in cutaneous melanoma, where they remain controversial. The present thesis aimed at elucidating the role of TGFb in cutaneous melanoma progression. The first goal of this work was to determine the effects of TGFb in multiple cutaneous melanoma cell lines originating from various clinical backgrounds. Firstly, this study showed that TGFb exerts variable growth inhibitory effects on melanoma cells, and specifically highlighted that this inhibition results from the induction of both cell cycle arrest in the G1 phase and apoptosis. In addition, this work surprisingly showed that TGFb inhibits both melanoma cell migration and invasion, thus acting as an anti-metastatic factor. The second objective was to identify downstream TGFb targets mediating these effects. As such, this work highlighted a novel tumor suppressive pathway in melanoma, in which TGFb regulates the cell cycle inhibitor p21, through a cascade involving the leukemia inhibitory factor (LIF) and the signal transducer and activator of transcription 3 (STAT3) to modulate cell cycle arrest and apoptosis. Also, the plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) was shown to be an important protagonist in the anti-metastatic activities of TGFb, through its TGFb-mediated strong upregulation and the subsequent decrease in plasmin generation and activity, a key enzyme in the migratory and invasive processes. Finally, the pro-migratory transcription factor neurogenin2 (NGN2) was demonstrated to be a key player in the TGFb-induced inhibition of migration, through regulation of actin cytoskeleton reorganization. Together, the results in the present thesis shed some light on the so far controversial role of TGFb in cutaneous melanoma and indicate that TGFb signaling is a potent suppressive pathway in cutaneous melanoma, not only inhibiting cell growth but also altering cell migration and invasion. Thus, targeting this pathway to mimic its effects may provide insights into the development of new therapeutic tools. / Le cancer de la peau est le plus fréquent dans le monde avec presque trois millions de cas par an. Les mélanomes cutanés sont les cancers de la peau les plus mortels, puisqu'ils sont responsables de 75 pour cent des morts liées aux cancers cutanés. Au cours des cinquante dernières années, le taux d'incidence des mélanomes dans les pays développés a augmenté plus vite que pour les autres cancers. Bien que la plupart des patients présentent une tumeur localisée au moment du diagnostic et sont soignés par excision de la tumeur primaire, les mélanomes cutanés peuvent former des métastases dans presque n'importe quel autre organe. Le diagnostic à un stade avancé est alors associé à un prognostic faible : la survie à 15 ans n'est alors que de 5 pour cent. Ainsi, il est crucial d'élucider les mécanismes sous-jacents à la progression des mélanomes cutanés. La famille des facteurs de croissance TGFb (Transforming Growth Factor beta) représente un vaste groupe de polypeptides plurifonctionnels qui contribuent à l'orchestration et la modulation du développement, à la croissance, à la différentiation, ainsi qu'à l'homéostasie de presque tous les types cellulaires et tissulaires. Le TGFb et ses récepteurs sont exprimés par tous les tissus et il joue un rôle important dans les maladies humaines. Dans les cancers chez l'humain, le TGFb joue généralement un double rôle. Dans les stades normaux et pré-malins, il maintient l'homéostasie des tissus et agit comme un suppresseur de tumeur. Cependant, ces effets sont perdus au cours de la tumorigenèse à cause d'altérations dans les molécules de la voie de signalisation, donnant alors lieu à des réponses qui favorisent la progression tumorale. Il semble néanmoins que ces effets soient spécifiques à chaque type tissulaire. Dans les mélanomes cutanés, ils sont encore mal caractérisés et sont controversés. Ce travail de doctorat avait pour but d'élucider le rôle du TGFb dans la progression des mélanomes cutanés. Le premier objectif était de déterminer les effets du TGFb sur de multiples lignées cellulaires de mélanome aux origines cliniques très variées. Cette étude a tout d'abord montré que le TGFb inhibe la croissance des cellules de mélanome à différents degrés et a mis en évidence que ces effets sont dus à l'induction de l'arrêt du cycle cellulaire en phase G1 et à l'induction de l'apoptose. Ensuite, de manière surprenante, ce travail a démontré que le TGFb inhibe les propriétés migratoires et invasives des cellules de mélanome, agissant ainsi comme un facteur anti-métastatique. Le second objectif était d'identifier des molécules en aval du TGFb qui transmettent ses effets. Ainsi, ce travail a mis en lumière une nouvelle voie suppressive de tumeur dans les mélanomes, dans laquelle le TGFb régule l'expression de l'inhibiteur du cycle cellulaire p21, par une cascade impliquant le facteur inhibiteur des leucémies (LIF) et son effecteur STAT3, et régulant l'arrêt du cycle cellulaire et l'apopose. Par ailleurs, l'inhibiteur de l'activateur du plasminogène (PAI-1) a été démontré comme étant un protagoniste important des effets anti-métastatiques du TGFb, son expression étant fortement augmentée par le TGFb, entraînant une diminution de la formation de la plasmine, une enzyme clé dans la migration et l'invasion. Enfin, le facteur de transcription pro-migratoire neurogenin2 (NGN2) a également été identifié comme un intermédiaire des effets inhibiteurs du TGFb sur la migration des cellules de mélanome, via la régulation de la réorganisation du cytosquelette d'actine. En conclusion, les résultats de ce doctorat ont clarifié les effets jusque-là mal connus du TGFb dans les mélanomes cutanés et ont montré que la voie de signalisation du TGFb agit comme un puissant suppresseur de tumeur dans les mélanomes cutanés, inhibant non seulement la croissance mais également la migration et l'invasion des cellules cancéreuses. En conséquence, favoriser les effets du TGFb serait une stratégie thérapeutique intéressante.

Background: Human papillomavirus (HPV) infection is recognized as an independent risk factor for squamous cell carcinomas (SCCs) of the head and neck, and the presence of HPV DNA is associated with a better prognosis. Recent evidence indicates a broader role for erythropoietin via binding and activation of its receptor (EpoR), which is present in many neoplastic non-hematopoietic cells. The expression of EpoR in cancer may represent a selection process that permits cancer cells to survive in an unfavorable microenvironment and may indicate aggressive cancer cell behavior. EpoR is variably expressed in head and neck cancer cells and could independently predict a poorer treatment response. Objectives: 1. To determine HPV status and the frequency of EpoR expression in archived biopsy specimens obtained from patients with oropharyngeal SCCs. 2. To evaluate whether the EpoR status affects survival and whether this putative effect is influenced by HPV status. Methods: A retrospective cohort study was conducted by reviewing the charts of 97 patients with oropharyngeal SCCs treated with primary curative intent radiation therapy at the McGill University Health Center, from 2000 to 2009. Eligible patients had to have archived tissue samples available for HPV and EpoR analysis. HPV DNA testing and typing was done using a standard polymerase chain reaction (PCR) protocol. EpoR status was determined by immunohistochemistry using rabbit polyclonal anti-EpoR staining. Stained sections were analyzed by 2 independent examiners by conventional light microscopy. A score product of 0-300 was determined for each patient by multiplying the percentage of neoplastic cells staining for EpoR (0-100%) and the intensity of the EpoR staining expressed from 0 to 3. Results: The median age was 62 years (range: 43–83). HPV status was positive in 74% of patients and this was significantly higher in patients aged ≤65 years, p=0.023. Patients with a significant smoking history (>10 pack-years) and drinking history (>4 drinks/week) were significantly more likely to be HPV negative, p= 0.041 and 0.0001 respectively. On Cox regression analysis, HPV positivity was associated with a 29% reduction in risk of death (Hazard Ratio (HR)=0.71; 95% Confidence Interval (CI): 0.34-1.49), albeit non-significantly. EpoR status was positive in 27% of patients and was associated with a non-significant 23% increase in risk of death (HR=1.23; 95%CI: 0.59-2.56). Patients who were HPV positive and EpoR negative had a non-significant 33% reduction in risk of death (HR=0.67; 95%CI: 0.29-1.56).Conclusion: This study demonstrates a trend indicating that HPV and EpoR status correlate with survival. This trend persists when patients are divided into low, intermediate and high-risk groups based on their HPV/EpoR status. The lowest risk group appears to consist of patients, which are HPV positive and EpoR negative. To the best of our knowledge this is the first study to discuss the relation of EpoR and survival in head and neck cancer. / Contexte: Le virus du papillome humain (VPH) est reconnu comme un facteur de risque indépendant pour les carcinomes épidermoïdes (CE) de la tête et du cou. De plus, la présence de l'ADN du VPH est associée à un meilleur pronostic. Des recherches récentes indiquent un plus grand rôle de l'érythropoïétine via une une activation de son récepteur (EpoR), qui est présent dans de nombreuses cellules non-hématopoïétiques néoplasiques. L'expression de EpoR dans un cancer peut représenter un processus de sélection qui permet aux cellules cancéreuses de survivre dans un environnement défavorable et peut aussi indiquer un comportement agressif des cellules cancéreuses. EpoR est variablement exprimé dans les cancers de la tête et du cou et pourrait prédire de façon indépendante une réponse plus faible aux traitements offerts aux patients. Objectifs: 1. Pour déterminer le statut VPH des cellules et la fréquence de l'expression du récepteur EpoR dans des biopsies obtenues de patients atteints du cancer épidermoïde oropharyngé. 2. Pour évaluer si la présence d'EpoR affecte la survie et si cet effet négatif est influencé par le statut VPH des cellules. Méthodes: Une étude rétrospective a été menée en examinant les dossiers de 97 patients atteints du cancer épidermoïde oropharyngé traités par radiothérapie comme intention curative au Centre universitaire de santé McGill, de 2000 à 2009. Les patients éligibles devaient avoir archivé des échantillons de tissus disponibles pour l'analyse VPH et EpoR. L'analyse de la présence du VPH a été effectuée en utilisant une réaction standard en chaîne par polymérase (PCR). La présence du récepteur EpoR a été déterminée par immunohistochimie en utilisant des marqueurs polyclonaux colorants anti-EpoR obtenus chez les lapins. Les sections de pathologie ont été analysées par 2 examinateurs indépendants par la microscopie optique conventionnelle. Un score de 0 à 300 a été déterminé pour chaque patient en multipliant le pourcentage de cellules néoplasiques contenant l'EpoR (0 à 100%) et l'intensité de la coloration de l'EpoR exprimée de 0 à 3. Résultats: L'âge médian était de 62 ans (extrêmes: 43-83). Le statut VPH a été positif chez 74% des patients. Ceci était significativement plus élevé chez les patients âgés ≤ 65 ans, p = 0,023. Les patients ayant des antécédents de tabagisme importants (> 10 paquet-années) et d'alcoolisme (> 4 verres / semaine) étaient significativement plus susceptibles d'être VPH négatif, p = 0,041 et 0,0001 respectivement. En analyse de régression de Cox, la présence de VPH était associé à une réduction de 29% du risque de décès (Hazard Ratio (HR) = 0,71, Intervalle de confiance (IC) 95%: 0,34 à 1,49), mais de façon non significative (p >0.05). Le statut EpoR était positif chez 27% des patients et a été associé à une augmentation non significative de 23% du risque de décès (RR = 1,23, IC 95%: 0,59 à 2,56). Les patients qui étaient positifs pour le VPH et négatifs pour l'EpoR avaient une réduction non significative de 33% du risque de décès (RR = 0,67, IC 95%: 0,29 à 1,56).Conclusion: Cette étude démontre une tendance qui indique que le VPH et le statut EpoR ont une corrélation avec la survie. Cette tendance persiste lorsque les patients sont divisés en sous-groupes (faible, intermédiaire et haut risque) en fonction de leur statut VPH / EpoR. Le groupe avec le plus faible risque de décès sont les patients avec le statut de VPH positif et EpoR négatif. Au meilleur de nos connaissances, cette étude est la première à examiner la relation entre l'EpoR et la survie chez les patients avec le cancer de la tête et du cou.

Cisplatin is a commonly used chemotherapeutic agent. Unfortunately, serious side effects limit its clinical use such as ototoxicity, which presents as bilateral and progressive sensorineural hearing loss. Regrettably, there is currently no treatment for cisplatin-induced ototoxicity. The pathophysiology remains unclear, however, it is believed that inflammation and oxidative stress are the main mechanisms leading to cell death. In the present thesis, various aspects of cisplatin-induced ototoxicity and potential treatment strategies are evaluated. We begin with a review of the literature in what concerns the entrance and egress of cisplatin from cochlear cells. Cisplatin has a predilection for the inner ear tissues and the reason for such an occurrence is unknown. We describe the receptors that may play a role in cisplatin-induced ototoxicity and that are present in cochlear cells. Understanding the circulating pathways of cisplatin within the inner ear can provide some insight into the mechanisms of cisplatin-induced ototoxicity. Once inside the cell, cisplatin can elicit an inflammatory response. For this reason, we decided to evaluate the potential of dexamethasone as a protective agent against cisplatin's toxic effects in vivo. It was observed that a central regulator of inflammation was decreased as a result of the therapy; however, the hearing was not preserved. An anti-inflammatory did not provide sufficient protection to preserve hearing following the cisplatin treatment. ROS have also been implicated in cisplatin-induced cytotoxicity. It appears that cisplatin can lead to an increased expression of ROS that can overwhelm the natural antioxidant response of the cochlea. Thus, the potential of an exogenous antioxidant as a protective agent was evaluated in vivo. Erdosteine, a derivative of methionine, provided protection against cisplatin-induced ototoxicity at high frequencies of hearing as well as partially prevented OHC loss. Because these two compounds provided only but partial benefits, we decided to evaluate a more specific and targeted approach, gene therapy for cisplatin-induced ototoxicity. We performed a systematic review of the literature in order to evaluate the potential of genetic manipulation in experimental animal and in vitro studies. Interestingly, a variety of genes have been evaluated as potential targets for inhibiting cisplatin-induced cytotoxicity such as apoptotic suppressors, copper transporters, regulators of the antioxidant response and neural growth factors. Consequences of genetic manipulation in the inner ear tissues remain to be assessed in order for gene therapy to become a conventional therapeutic option. Because the cochlea is embedded in bone, is fluid filled and contains various cell types, it has been a challenge to detect the expression of manipulated genes in a particular cell type of interest. While homogenization of a whole cochlea and posterior RNA extraction can provide us with the general expression levels of a certain gene, it does not allow for the determination in a cellular subpopulation of the cochlea. One possibility is the use of laser capture microdissection of cells of interest from a histological section. With this approach, the cells of interest are obtained and RNA can then be extracted and gene expression levels determined. However, the process of obtaining histological sections from cochlear samples requires fixation and decalcification steps which are known to cause RNA degradation. Hence, we decided to evaluate combinations of fixatives and decalcifying agents in order to determine which protocol would yield the greatest quantity of RNA from the cochlea and also preserve the morphology. The resulting protocol with methacarn fixation and decalcification in Morse's solution can therefore be used in future studies that aim to determine genetic expression, a regularly performed experiment, in a specific cellular subtype of interest in the cochlea. / Le cisplatine est un agent chimiothérapeutique couramment utilisé. Malheureusement, de graves effets secondaires limitent son utilisation clinique telle que l'ototoxicité qui se présente comme une perte auditive neurosensorielle bilatérale et progressive. Il n'existe actuellement aucun traitement pour l'ototoxicité du cisplatine. La physiopathologie reste obscure, cependant, on croit que l'inflammation et le stress oxydant sont les principaux mécanismes conduisant à la mort des cellules. Dans cette thèse, différents aspects de l'ototoxicité du cisplatine et des stratégies thérapeutiques potentielles sont évaluées. Nous commençons par une revue générale de la littérature en ce qui concerne l'entrée et la sortie du cisplatine des cellules cochléaires. Nous décrivons les récepteurs qui peuvent jouer un rôle dans l'ototoxicité du cisplatine et qui sont présents dans les cellules cochléaires. Une fois à l'intérieur de la cellule, le cisplatine peut provoquer une réaction inflammatoire. Pour cette raison, nous avons décidé d'évaluer le potentiel de la dexaméthasone comme agent protecteur contre les effets toxiques du cisplatine in vivo. Il a été observé qu'un régulateur important de l'inflammation a été réduit, cependant, l'audition n'a pas été préservée. Un anti-inflammatoire n'a pas fourni une protection suffisante pour préserver l'audition après le traitement avec le cisplatine. Les dérivés réactifs de l'oxygène ont également été impliqués dans la cytotoxicité induite par le cisplatine. Le cisplatine peut conduire à une expression accrue des dérivés réactifs de l'oxygène et peut compromettre la réponse antioxydante naturelle de la cochlée. Ainsi, le potentiel d'un antioxydant exogène comme agent de protection a été évalué in vivo. Erdosteine, un dérivé de la méthionine, a diminué la perte d'audition au niveau des hautes fréquences ainsi qu'empêché partiellement la perte de cellules ciliées externes. Étant donné que ces deux produits ont générés uniquement une protection partielle, nous avons décidé d'évaluer une approche plus spécifique et ciblée, la thérapie génique. Puisque la thérapie génique est en phase expérimentale et n'est pas encore disponible en tant que modalité de traitement traditionnel, nous avons effectué une revue systématique de la littérature afin d'évaluer le potentiel de la manipulation génétique chez les animaux de laboratoire et les expériences in vitro. Fait intéressant, plusieurs gènes ont été évalués comme des cibles potentielles pour inhiber la cytotoxicité induite par le cisplatine. Les conséquences des manipulations génétiques doivent encore être évaluées dans le but que la thérapie génique puisse devenir une option thérapeutique conventionnelle. Parce que la cochlée est ancrée dans l'os, est remplie de fluide et contient divers types de cellules, il a été difficile de détecter l'expression des gènes manipulés dans un type cellulaire d'intérêt. Alors que l'homogénéisation de la cochlée entière et l'extraction subséquente de l'ARN peut nous fournir une idée générale des niveaux d'expression d'un gène, ceci ne permet pas la détermination dans une sous-population cellulaire de la cochlée. Une possibilité est l'utilisation de la microdissection par capture laser des cellules d'intérêt à partir d'une coupe histologique. Avec cette approche, les cellules d'intérêt sont obtenues et l'ARN peut ensuite être extrait. Cependant, le processus d'obtention de coupes histologiques à partir d'un échantillon cochléaire nécessite des étapes de fixation et de décalcification qui sont connues pour causer une dégradation de l'ARN. Donc, nous avons décidé d'évaluer des combinaisons de fixateurs et réactifs de décalcification afin de déterminer quel protocole engendrerait la quantité d'ARN la plus élevée et qui, également, préserverait la morphologie. Le protocole établi peut donc être utilisé dans de futures études visant à déterminer l'expression génétique dans un sous-type cellulaire spécifique d'intérêt dans la cochlée.

Background Sedentarism or prolonged sitting time is an emerging risk factor for obesity, independent of physical activity (PA). Bariatric surgery seems to be most effective form of treatment that works for severely obese individuals (Body Mass Index (BMI) of >40 kg/m2). Objectives The purpose of this investigation was to characterize with the use of accelerometers, daily steps/day and sedentary behavior (SB) by measuring time-spent sitting/lying in severely obese patients before and after bariatric surgery. Setting McGill University Health Center (MUHC). Methods Seventeen patients (58.5% of the patients were female) with a mean age of 46.5 ± 10.1 years, and a Body Mass Index (BMI) of 48.8 ± 6.2 kg/m2 scheduled for bariatric surgery took part in this study. ActivPal™ accelerometers were attached to the patient's upper leg and worn 24 hours a day for seven consecutive days. Mean steps, transitions from sitting to standing and hours of sitting/lying per day were measured before, and 3 and 6 months following post bariatric surgery. Results Prior to bariatric surgery, participants spent 18.6 ± 1.5 hours/day sitting/lying, representing over 75 % of their day. Patterns in total sitting/lying time did not significantly change at three or six months after surgery. Baseline accumulated steps/day averaged 6139 ± 2720 and did not increase across time periods. PA patterns did not increase on either weekdays or weekend days. Conclusions Given that PA and SB are believed to independently contribute to energy balance and health outcomes, clinician's and health professionals should intervene more rigorously to simultaneously reduce sedentarism and increase levels of PA to help bariatric surgery patients successfully manage their weight. / Contexte La sédentarité ou l'adoption de comportements passifs, tels que la position assise prolongée, ont récemment été associés comme facteur de risque de l'obésité, et ce, indépendamment du niveau d'activité physique. L'obésité morbide (IMC ≥ 40 kg/m²) implique plusieurs répercussions pour le système de santé et, présentement, la chirurgie bariatrique semble être le traitement le plus efficace. L'objectif de cette étude est de quantifier, à l'aide d'un accéléromètre, le volume d'activité physique (pas/jour) et les comportements sédentaires avant et après la chirurgie bariatrique chez des obèses morbides. Méthodes Dix- sept participants devant subir une opération au « McGill University Health Center » ont pris part à cette étude. L'accéléromètre ActivPal ™ fut attaché sur la cuisse du patient et a été porté 24 h/jour pendant 7 jours consécutifs. La moyenne de pas, les transitions de la position assise à debout et les heures passées aux positions assises ou couchées par jour ont été mesurées avant, à 3 mois et à 6 mois après la chirurgie bariatrique. Résultats À priori, 58.5 % des participants étaient des femmes, l'âge moyen étant de 46.5 ± 10.1 ans et l'IMC, à 48.8 ± 6.2 kg/m2. Les participants avant la chirurgie, en moyenne, ont accumulé 18.6 ± 1.5 h/jour aux positions assises/couchées, ce qui représente plus de 75 % de leur journée. Le montant total de temps passé à ces positions sédentaires n'a pas changé de façon significative à 3 et 6 mois suite à la chirurgie bariatrique. Le nombre de pas/jour total accumulé avant la chirurgie était 6139 ± 2720 et n'a pas augmenté à aucune des périodes de temps. De plus, leur niveau d'activité physique n'a pas augmenté en semaine ou en fin de semaine et ce durant la durée de l'étude. Conclusion En utilisant le port d'un accéléromètre basé sur l'inclinomètre tel que l'ActivPALTM, nous constatons que les comportements sédentaires et le volume d'activité physique n'ont pas changé suite à la chirurgie bariatrique. Comme l'activité physique et les comportements sédentaires contribuent chacun de façon indépendante à l'équilibre énergétique et aux paramètres de santé métabolique, les professionnels de la santé devraient intervenir plus rigoureusement afin de réduire la sédentarité et encourager des niveaux d'activité physique plus élevés dans le but d'aider les patients de chirurgie bariatrique à mieux gérer leur poids corporel.

Varicose veins are among the most prevalent medical conditions in western populations, with a prevalence estimated at 25--35% in women and 10--20% in men. Until now, few studies have regarded varicose veins as a distinct clinical entity and have investigated specific risk factors. Their consequences for the patients have not been adequately investigated. The main objective of this thesis was to examine the association between varicose veins and specific risk indicators and outcomes, taking into account the effects of more severe venous disorders often found in combination with varicose veins. This work is based on the VEnous INsufficiency Epidemiological and economical Study (VEINES), a one-year cohort study on venous disorders carried out in Belgium, France, Italy and Quebec. It included 1531 patients sampled among 5688 consecutive patients consulting a physician for a venous disorder. A sub-sample of 150 patients were referred to specialists for clinical examination and duplex investigation of venous incompetence. This study illustrated the problems of the diagnosis and classification of varicose veins, with a specificity of 45% for the diagnosis made by general practitioners. In a case-control analysis, the strongest risk indicators of varicose veins were pregnancy, age and family history. No association was found with other hypothesised determinants (obesity, smoking, history of thrombophlebitis, blood group A). Results of duplex studies support the hypothesis of a distal onset of venous reflux and varicose veins. / Using a classification of varicose veins proposed to take account the concomitant presence of other signs of venous disease, varicose veins alone had no impact on a symptom score and on generic (SF-36) and disease-specific quality of life scores. The results suggest that symptoms and presence of varicose veins are independent outcomes, which has implications for clinical practice. A detailed analysis of health service utilisation performed in Belgium also showed that both are independent predictors of resource use.