La piña (Ananas comosus (L.) Merril) es uno de los principales frutales a nivel mundial, por ello es cultivada a fin de satisfacer las necesidades alimentarias de la población. Además constituye un importante sustento para las economías locales. Por tanto, el presente trabajo fue realizado con la finalidad de mejorar y establecer un protocolo de propagación in vitro de piña (Ananas comosus (L.) Merril Var. MD2). Para la introducción de yemas se realizó 5 tratamientos de desinfección siendo más eficaz la concentración de lejía al 25 % por 15 min para la primera desinfección y 10 % por 10 min para la segunda desinfección. Para las etapas de introducción, multiplicación y el Sistema Automatizado de Inmersión Temporal (Biorreactores) se empleó el medio de cultivo que contiene sales y vitaminas Murashigue Skoog suplementado con Myo-inositol (100 mg. L -1), sacarosa (20 g L -1) como medio testigo y comparado en base a tratamientos hormonales de BAP-ANA y Kinetina-ANA-IBA. Se seleccionó la combinación de concentraciones BAP (2,1 mg L -1) - ANA (0,3 mgL-1), por presentar un índice de multiplicación mayor. En el Sistema Automatizado de Inmersión Temporal (Biorreactores) se aplicó frecuencias de inmersión de 3 min cada 3 horas por un periodo de seis a ocho meses, creciendo a una temperatura de 25 – 30 0C, con un fotoperiodo de 11 o 12 horas diarias bajo luz blanca fluorescente que junto con el medio seleccionado dio lugar a una tasa de multiplicación de 11.

Se desarrolló un protocolo adecuado para la obtención de tubérculos in-vitro de Oxalis tuberosa "oca". Las plantas estuvieron inicialmente en el medio de Micropropagación M-10 (Medio básico MS suplementado con vitaminas, myo-inositol, pantetonato de calcio, AG3, ANA y BAP). Después de 5 a 6 semanas se les sustituyó por medios inductores de la tuberización (Medio básico White y Medio básico White-diluido 13 veces suplementados con 8% de sucrosa, vitaminas, myo-inositol y diferentes concentraciones de BAP y CCC) y se incubaron en oscuridad. También se trabajó cortando las puntas al momento de inducir la tuberización. Las diferentes accesiones de Oxalis tuberosa tuvieron comportamientos diferentes ante un mismo medio de cultivo, pudiendo sin embargo encontrarse una tuberización mas uniforme entre 0.1 y 0.25 ppm de BAP suplementados con 200 ppm de CCC pudiendo estar el medio White diluido o no dependiendo de la accesión. Finalmente el corte de puntas resultó ser un buen sistema mecánico para la inducción de la tuberización por permitir un mayor número y peso en los tubérculos. / An adequate protocol was developed to obtain in vitro microtubers of Oxalis tuberosa "oca". At first the plantlets were grown in the micropopagation medium M-10 (MS medium containing vitamins, myo-inositol, pantothenic acid, GA, NAA and BAP). After 5 – 6 weeks the propagation medium was changed by the tuber induction media tested (White medium and 13 times diluted White medium containing both 8 % sucrose, vitamins, myo-inositol and several concentrations of BAP and CCC) and maintained in continuous darkness. It was also tested tuberization response when the apical buds were cutted. Different accessions of Oxalis tuberosa have had different behaviors for the same culture medium. The more uniform response was found in the medium containning BAP between 0.1 and 0.25 ppm supplied with CCC 200 ppm. Depending on the accession The White basic medium can be diluted or not. Finally, the buds excision resulted a good mechanic system to induce the tuberization, giving us higher weight and number of microtubers.

Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Forestal / En enero de 1998, se colectaron ramillas de 4 individuos de Atriplex halimus (procedencia CU-690, de la Cuenca del Mediterráneo), plantados en 1981 en el Centro Experimental “Las Cardas” (IV Región de Chile) y sometidos a una corta a 25 cm del suelo realizada en 1994. De las tres procedencias allí instaladas, CU-690 presenta los mejores rendimientos en fitomasa aérea y leñosa. Con el material colectado, se establecieron ensayos para determinar si la posición del “explante” en la ramilla y la aplicación de una citoquinina, afectan la producción de brotes, con vista a la propagación vegetativa in vitro. De las ramillas se cortaron segmentos apicales y nodales, de 0,5 a 1,5 cm (con 1-2 yemas axilares) se desinfectaron en alcohol, formaldehído e hipoclorito de calcio, y se cultivaron 30 días, a 22°C y 12 hr de luz, con los macro y microelementos del medio MS, las vitaminas de Morel, 20 g de sacarosa, 8 g de agar, un pH 5,8, con o sin regulador de crecimiento (BAP 0,1 mg/l). Posteriormente, cada 4 semanas, fueron repicados sobre medio MS sin BAP.

Memoria para optar al título profesional de Ingeniero Agrónomo / Alstroemeria (L.) es uno de los géneros más diversificados de la flora vascular chilena. Alstroemeria exserens Meyen resulta atractiva por el color de sus flores y la resistencia al frío que posee. Comúnmente estas especies se propagan por división de rizomas pero al ser este un método poco eficiente y con alta posibilidad de contaminación, es que se optó por la micropropagación ya que es un método prolijo. Considerando que el agar y los reguladores de crecimiento son los componentes más determinantes en los medios de cultivos in vitro, el objetivo de este estudio fue determinar si existe un efecto combinado de 6-bencilaminopurina (BAP) (0,0; 0,5; 1,0 y 2,0 mg•L-1) y agar (0,1; 3,5 y 7,0 g• L-1) sobre la micropropagación de A. exserens. Cada 4 semanas se evaluó el peso de la planta (g), longitud de rizoma (cm), longitud de brotes (cm) y número de brotes. En la primera etapa se calculó una tasa de prolificidad considerando las 24 semanas previas al ensayo, partiendo con 12 explantes iniciales y llegando a 111 rizomas con un brote, se obtiene una tasa de 1,54 nuevos explantes cada 4 semanas. En la segunda etapa ocurre una contaminación que ocasiona pérdidas del 75% al final del ensayo (8 semanas), haciendo inviable los análisis finales, por tanto se discutió con lo obtenido hasta la semana 4. El análisis estadístico arrojó que no existe interacción entre los factores. Al no existir un efecto combinado, se analizó por separado cada factor. La concentración de 3,5 g L-1agar presenta la mejor respuesta con medias de 1,06 cm y 3,16 g, en largo de rizoma y peso de explante respectivamente. Respecto al efecto del BAP, en todas las concentraciones (0,5, 1,0 y 2,0 mg• L-1) se observó un efecto en el control de la longitud de brotes mediante la inhibición de la dominancia apical. En este experimento se concluyó que el medio semi-sólido (3,5 g• L-1) es la mejor concentración de agar, al presentar explantes sanos con mayor aumento de peso y largo del rizoma. De esta manera, este estudio colabora con el avance hacia un protocolo de propagación in vitro de forma masiva para A. exserens.

Se desarrolló un protocolo adecuado para la obtención de tubérculos in-vitro de Oxalis tuberosa "oca". Las plantas estuvieron inicialmente en el medio de Micropropagación M-10 (Medio básico MS suplementado con vitaminas, myo-inositol, pantetonato de calcio, AG3, ANA y BAP). Después de 5 a 6 semanas se les sustituyó por medios inductores de la tuberización (Medio básico White y Medio básico White-diluido 13 veces suplementados con 8% de sucrosa, vitaminas, myo-inositol y diferentes concentraciones de BAP y CCC) y se incubaron en oscuridad. También se trabajó cortando las puntas al momento de inducir la tuberización. Las diferentes accesiones de Oxalis tuberosa tuvieron comportamientos diferentes ante un mismo medio de cultivo, pudiendo sin embargo encontrarse una tuberización mas uniforme entre 0.1 y 0.25 ppm de BAP suplementados con 200 ppm de CCC pudiendo estar el medio White diluido o no dependiendo de la accesión. Finalmente el corte de puntas resultó ser un buen sistema mecánico para la inducción de la tuberización por permitir un mayor número y peso en los tubérculos. / An adequate protocol was developed to obtain in vitro microtubers of Oxalis tuberosa "oca". At first the plantlets were grown in the micropopagation medium M-10 (MS medium containing vitamins, myo-inositol, pantothenic acid, GA, NAA and BAP). After 5 – 6 weeks the propagation medium was changed by the tuber induction media tested (White medium and 13 times diluted White medium containing both 8 % sucrose, vitamins, myo-inositol and several concentrations of BAP and CCC) and maintained in continuous darkness. It was also tested tuberization response when the apical buds were cutted. Different accessions of Oxalis tuberosa have had different behaviors for the same culture medium. The more uniform response was found in the medium containning BAP between 0.1 and 0.25 ppm supplied with CCC 200 ppm. Depending on the accession The White basic medium can be diluted or not. Finally, the buds excision resulted a good mechanic system to induce the tuberization, giving us higher weight and number of microtubers.

Tesis para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo y al Grado de Magíster en Ciencias Agropecuarias, Mención Producción de Cultivos / Alstroemeria se propaga in vitro principalmente a través de rizomas, método que presenta altos niveles de contaminación pese a ser sometida a una laboriosa desinfección, además de ser una técnica destructiva con la planta madre. Por otro lado, el cultivo in vitro de explantes aéreos presenta bajos niveles de contaminación al proveer una simple desinfección. Alstroemeria caryophyllaea es la única especie aromática del género, y Alstroemeria ‘Sweet Laura’ corresponde a un híbrido con carácter aromático. Ambos genotipos no poseen protocolos establecidos que permitan su propagación in vitro. Se evaluó eficiencia y efectividad de regeneración en explantes aéreos de alstroemeria, variando tipo de explante, concentración de citoquinina y genotipo. Se aplicó un diseño completamente aleatorizado, con arreglo factorial 3 x 4 x 2, desarrollado en dos etapas. La primera fase consideró el desarrollo de explantes en un medio para inducir brotación, y la segunda fase permitió finalizar su regeneración aérea. Para ambos genotipos estudiados, la concentración correspondiente a 1 mg L -1 de BAP fue suficiente para desarrollar organogénesis directa a partir de brotes utilizados como explantes, siendo más eficiente en el caso de Alstroemeria ‘Sweet Laura’. Finalmente, se generó un protocolo efectivo y eficiente en regeneración in vitro de Alstroemeria caryophyllaea y Alstroemeria ‘Sweet Laura’. / Alstroemeria in vitro propagation is mainly performed using rhizomes, method with high levels of pollution despite the application of a laborious disinfection. Furthermore is a destructive technique with the mother plant. On the other hand the in vitro culture of aerial explants shows lower pollution by providing a simple disinfection. Alstroemeria caryophyllaea is the only aromatic species in the genus and Alstroemeria ‘Sweet Laura’ corresponds to an hybrid with aromatic character. Both genotypes have no described protocols for their in vitro propagation. Efficiency and effectiveness of regeneration in aerial explants of Alstroemeria was assessed varying type of explant, concentration of cytokinin and genotype. A completely randomized design was used with a factorial arrangement 3 x 4 x 2 developed in two stages. The first stage considered the development of explants in a medium to induce sprouting and in the second phase aerial regeneration was induced. For both genotypes studied the concentration of 1 mg L -1 BAP was enough to develop direct organogenesis from buds used as explants, where Alstroemeria ‘Sweet Laura’ was more efficient. Finally a protocol was generated for effective and efficient in vitro regeneration of Alstroemeria caryophyllaea and Alstroemeria ‘Sweet Laura’.

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Leontopodium alpinum (Edelweiss, Flor de las nieves, Estrella alpina) es una planta herbácea perenne de la familia de las Asteráceas. Se trata de una especie protegida que en España se localiza en áreas del sistema pirenaico de Aragón y Cataluña, en altitudes entre 1.500 y 2.800 m. La planta de edelweiss tiene un gran atractivo ornamental gracias a su característica flor en forma de estrella. Su carácter emblemático hace que sea una flor muy apreciada, por lo que sus poblaciones se han visto amenazadas por recolecciones indiscriminadas. En la tradición alpina, además se ha venido utilizando como planta medicinal como remedio frente a diversas enfermedades. Los extractos de la planta son, de hecho, una importante fuente de principios activos tales como antioxidantes y otras sustancias con propiedades anti-inflamatorias y citoprotectoras que confieren a edelweiss un gran interés farmacológico y biotecnológico. Las principales limitaciones para poder comercializar las plantas de edelweiss con un propósito ornamental se encuentran en las necesidades de localización de cultivo en altitudes elevadas de montaña para asegurar la calidad de la flor y en la estacionalidad de la producción. Asimismo, su condición de planta protegida limita la disponibilidad de materiales para la extracción de compuestos fitoquímicos de interés. En el presente trabajo se han desarrollado dos protocolos de micropropagación de plantas de L. alpinum pertenecientes a la población española de esta especie. En el primero de ellos, se partió de flores maduras aisladas de plantas silvestres recolectadas en campo. Estas flores se implantaron en cultivo in vitro y se indujo, mediante regeneración organogénica indirecta, la formación de brotes adventicios que se incorporaron posteriormente a un proceso de multiplicación y enraizamiento de gran eficiencia. Mediante este protocolo se garantiza la producción de un gran número de plantas clonales que pueden utilizarse con un fin comercial o como material de partida para la extracción y purificación de metabolitos de interés, sin amenazar a las poblaciones naturales. Asimismo, puede plantearse como herramienta complementaria para los proyectos de conservación de esta especie. En el segundo de los protocolos establecidos, se utilizó como material de partida hojas de plantas micropropagadas cultivadas in vitro. Este tipo de explante, cuya utilización no ha sido descrita con anterioridad en edelweiss, mostró una elevada capacidad organogénica en medios de cultivo con tidiazurón (TDZ). A la vista de los resultados, este protocolo proporciona un método de regeneración de plantas in vitro eficaz y reproducible que puede suponer un primer paso para el abordaje de la transformación genética de plantas de L. alpinum Por otro lado, se ha estudiado la floración de las plantas micropropagadas y cultivadas en condiciones de invernadero a nivel del mar, mediante la aplicación de distintas condiciones de inducción basadas en la temperatura de cultivo, el fotoperíodo y la aplicación exógena de giberelinas. Como resultado de estos estudios se plantea un sistema alternativo de obtención de flores de edelweiss basado en el tratamiento de plantas micropropagadas con giberelinas, que permite la obtención de inflorescencias en invernadero de manera sincronizada y sin restricciones estacionales. / Mondéjar Canet, RJ. (2014). Micropropagación de Leontopodium alpinum Cass (Edelweiss) e inducción de la floración en condiciones de invernadero [Tesis doctoral]. Editorial Universitat Politècnica de València. https://doi.org/10.4995/Thesis/10251/36958

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Memoria para optar al Título Profesional de Ingeniero Agrónomo Mención: Fitotecnia