Orientador: João Carlos Pinheiro Ferreira / Resumo: O presente estudo teve como objetivo isolar, cultivar e caracterizar as células tronco mesenquimais de tecido adiposo (CTM-TA) bovino, obtenção de vesículas extracelulares e meio condicionado do cultivo celular (MC) e avaliação do seu potencial imunomodulador em cultivo de explantes endometriais bovinos. Para isso, as CTM-TA foram coletadas (n=3) de tecido adiposo e sofreram isolamento, processamento e cultivo. As amostras foram submetidas à análise citogenética, imunofenotípica (CD44, CD29, vimentina, CD34 e MHCII), de viabilidade e de diferenciação (adipogênica, osteogênica e condrogênica), e então criopreservadas. Após descongelamento e expansão, o meio condicionado do cultivo celular foi submetido à ultracentrifugações para obtenção das vesículas extracelulares que foram caracterizadas por microscopia eletrônica de transmissão e Western Blot (Alix e CD9). Explantes de endométrios bovinos (n=7) provenientes de abatedouro foram submetidos a cultivo e desafio com LPS (3μg/mL) por 48 horas. Os grupos experimentais foram CN (controle negativo, sem desafio com LPS), CP (controle positivo, apenas desafio com LPS), V (desafio com LPS e adição de vesículas extracelulares) e MC (desafio com LPS e adição de meio condicionado). Avaliou-se secreção de PGF2α e IL-1β por Elisa, morfologia do tecido através de histopatologia, expressão tecidual de Fas-L, TLR-4, PGDH e PGF2α-R por Imunoistoquímica. No cultivo celular das CTM-TA foi obtida uma população celular homogênea e fibroblastóide, ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Doutor

A L. (L.) amazonensis é capaz de evadir a resposta imune do macrófago hospedeiro induzindo a expressão de CD200 na célula. Porém, ainda não se sabe como ocorre este mecanismo. O objetivo deste trabalho foi avaliar a participação dos TLRs na indução de CD200 em macrófagos infectados por L. (L.) amazonensis. Os resultados mostraram que a indução de CD200 por L. (L.) amazonensis é dependente de TLR9 e das proteínas adaptadoras MyD88 e TRIF. Além disso, observamos que CD200 pode ser induzida pelo DNA do parasito, assim como por vesículas extracelulares (VEs) contendo DNA liberadas por ele. Os resultados in vivo mostraram que a ausência de TLR9 não altera o tamanho da lesão e nem a expressão de CD200 nos macrófagos presentes. Contudo, a carga parasitária foi maior nos camundongos selvagens. A partir dos resultados obtidos podemos concluir que a L. (L.) amazonensis induz CD200 de maneira dependente da via de TLRs e que esta indução pode ser estimulada pelo DNA do parasito. / L. (L.) amazonensis evades the immune response of host macrophage inducing the CD200 expression in the cell. However, it is not yet known how this mechanism occurs. The objective of this work was to evaluate the participation of TLRs in CD200 induction in infected macrophages by L. (L.) amazonensis. The results showed that the CD200 induction by the parasite is dependent on TLR9 and the adaptor proteins MyD88 and TRIF. In addition, we observed that the CD200 can be induced by the parasite DNA, as well as by extracellular vesicles (EVs) containing DNA released by it. In vivo results showed that the absence of TLR9 does not alter the lesion size nor the CD200 expression in macrophages present in the lesion. However, the parasite load was higher in wild type mice. Therefore, we can conclude that the CD200 induction by L. (L.) amazonensis amastigotes is TLR dependent and this can be stimulated by the parasite DNA.

Submitted by Angela Maria de Oliveira (amolivei@uepg.br) on 2018-11-27T13:38:37Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Felipe Biscaia.pdf: 705544 bytes, checksum: d29d4058c2971e1453c934610a2e4d2b (MD5) / Made available in DSpace on 2018-11-27T13:38:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 811 bytes, checksum: e39d27027a6cc9cb039ad269a5db8e34 (MD5) Felipe Biscaia.pdf: 705544 bytes, checksum: d29d4058c2971e1453c934610a2e4d2b (MD5) Previous issue date: 2018-08-22 / Câncer é um conjunto de doenças causadas por uma lesão gênica associada a uma expansão clonal com crescimento desproporcional. O melanoma é o câncer de pele com menor perspectiva de sobrevida e com alta capacidade de metástase. O câncer de mama é um dos mais abundantes entre as mulheres, com alta incidência de morte. Estudos relatam que todas as células do corpo humano são capazes de secretar microvesículas e, que os tecidos tumorais secretam micropartículas com mais abundancia. Essas micelas desempenham um papel importante na comunicação celular. Assim, a comunicação entre as células tumorais possui uma função essencial para o desenvolvimento do câncer. Neste trabalho, as linhagens de melanoma B16F10 e adenocarcinoma 4T1 foram cultivadas e submetidas ao tratamento dos fármacos Dexametasona e tamoxifeno, bem como microvesículas extraídas dos sobrenadante de B16F10 tratado com dexametasona. Como resultados, observamos redução da viabilidade celular de ambas as linhagens ocasionada pelos três tratamentos isolados, assim como pelos tratamentos combinados do compostos utilizados. Os fármacos e as microvesículas desencadearam efeitos citotóxicos sobre as linhagens tumorais, mostrando-se potenciais alternativas para tratamento. / Cancer is a set of diseases caused by a simple gene injury associated with a clonal expansion with disproportionate growth. Melanoma is a skin cancer with a lower survival prospect and high metastatic capacity. Breast cancer is one of the most abundant among women, with a high incidence of death. Several studies report that all human cells are able to secrete microvesicles, and that tumor tissues secrete microparticles with high abundance. These micelles play an important role in cellular communication. Thus, communication between tumor cells has an essential function for the development of cancer. In this work, the B16F10 melanoma and 4T1 adenocarcinoma cell lines were cultured and treated with the drugs Dexamethasone and tamoxifen, as well as microvesicles extracted from the B16F10 supernatant treated with dexamethasone. The results shows a reduction in the cell viability of both strains caused by the three isolated treatments, as well as by the combined treatments of the compounds used. Drugs and microvesicles triggered cytotoxic effects on tumor lines, showing potential treatment alternatives.