Submitted by Marco Antônio de Ramos Chagas (mchagas@ufv.br) on 2017-04-27T11:34:04Z No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 589394 bytes, checksum: a51b7716ef15e4adbbdcd4469c379e41 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-27T11:34:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 texto completo.pdf: 589394 bytes, checksum: a51b7716ef15e4adbbdcd4469c379e41 (MD5) Previous issue date: 2004-02-16 / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / Isolados pré-selecionados de rizobactérias foram empregados para microbiolização de diferentes substratos. A compatibilidade entre isolados foi determinada pelo método do antibiograma, enquanto o possível efeito sinérgico foi investigado pelo tratamento do substrato com os isolados de rizobactérias aplicados individualmente ou em misturas, empregando-se a mesma proporção de inóculo dos co- inoculantes. Considerando-se os clones de eucalipto responsivos ao tratamento do substrato com rizobactérias, o ganho médio para enraizamento e biomassa radicular foi de 20,4 e 73,0%, respectivamente. No entanto, levando-se em consideração a interação entre o(s) melhor(es) isolado(s) de rizobactéria e clone(s) de eucalipto, observou-se incremento médio de 21,4% e 78,0%, respectivamente para índice de enraizamento e biomassa de raízes. Os isolados mais promissores foram o VC2 e Ca para enraizamento e o VC2 e 3918 para biomassa radicular. Nos estudos envolvendo mistura de isolados não foram observados efeitos significativos de incremento de misturas sabidamente compatíveis e vice-versa. Além disso, constatou-se especificidade da interação entre isolados de rizobactérias e clones de eucalipto. Quanto à forma de veiculação, os resultados variaram de acordo com o clone, forma de aplicação e isolado empregado. Em uma última etapa, avaliou se in vitro e em casa de enraizamento o efeito de rizobactérias sobre o controle biológico de Cylindrocladium candelabrum e Rhizoctonia solani. Considerando o efeito dos meios de cultivo e para os dois patógenos, os isolados FL2, 3918, S1 e S2 foram os mais efetivos. Ao final de 25 dias, constatou-se ao observar as miniestacas mantidas em casa de enraizamento maior incidência de podridão (71%) causada por C. candelabrum em relação à mela de miniestacas causada por R. solani. Para o primeiro patógeno, o tratamento do substrato com a rizobactéria Ca foi responsável pela redução de 33 e 26,7% em termos médios, quando comparado aos tratamentos testemunha e imersão de miniestacas em calda fungicida (epoxyconazole + pyraclostrobin 0,6 mL/L do i.a.), respectivamente. Em relação à mela de miniestacas, não foram constatadas reduções significativas, embora para o isolado Ca observou-se tendência de menor intensidade da doença. O monitoramento periódico da população dos patógenos em substrato artificialmente infestado evidenciou para C. candelabrum diferenças significativas no tempo necessário para estabilização da população e no nível populacional atingido ao longo do tempo de incubação. A partir de 10 dias, notou-se maior população do patógeno no tratamento testemunha. Entre os tratamentos com rizobactérias, a partir de 15 dias de incubação, o isolado Ca destacou-se dos demais por suprimir a população do patógeno. Ao final de 30 dias, a diferença entre a população do patógeno no substrato rizobacterizado com este isolado em relação ao tratamento testemunha foi de 26,7%. No ensaio realizado in vitro, quando se avaliou a sensibilidade de isolados de rizobactérias a fungicidas, tebuconazole inibiu 80% dos isolados e a mistura dos fungicidas epoxyconazole e pyraclostrobin inibiu apenas o crescimento do isolado S1. O isolado mais sensível aos princípios ativos foi o S1, e os menos afetados, o 3918 e MF2. Verifica-se, diante desses resultados, que é necessário realizar estudos que viabilizem a produção e formulação do produto biológico à base de rizobactérias para seu emprego em escala comercial para o eucalipto. Os depósitos de patente foram feitos junto ao INPI (PI 0101400-5 e 001409). / Pre-selected rhizobacteria isolates were used for microbiolization of different substrates. The compatibility among isolates was determined by the antibiogram method, and the synergic effect was investigated by treating the substrate with isolates individually or mixed. The average increase in rooting and root biomass production were 20.4% and 73.0%, respectively, considering the clones responsive to the treatment with rhizobacteria. However, taking into consideration the interaction among the best isolates and eucalyptus clones, it was observed an increase of 21.4% and 78.0% on rooting and dry root biomass production, respectively. The most promising isolates were VC2 and Ca for rooting and VC2 and 3918 for root biomass production. In studies involving mixing of compatibles and non-compatibles isolates it was not observed any significant effect on increment, but it was observed a specificity of interaction among rhizobacteria isolates and eucalyptus clones. The response to the inoculation method varied according to the clone, the method of application and the isolate used. Finally, the effect of the rhizobacteria on the biological control of Cylindrocladium candelabrum and Rhizoctonia solani was evaluated in vitro and in greenhouse. Considering the effect of culture media for these pathogens, the isolates FL2, 3918, S1 and S2 were the most effective. After 25 days, the rotting caused by C. candelabrum (71%) on minicuttings grown in nurseries was higher than the web blight caused by R. solani. The treatment of minicuttings with the isolate Ca promoted an average reduction of 33% and 26.7% when compared to the non-inoculated treatment and to the treatment with immersion of the minicutting in fungicide broth (epoxyconazole + pyraclostrobin 0.6 mL/L of a.i.), respectively. It was not observed significant reduction on minicuttings web blight, although the isolate Ca have showed a tendency to reduce the disease intensity. The periodic monitoring of pathogen populations in artificially infested substrate showed significant differences in the time needed for stabilization of the population and in the population level of C. candelabrum along the incubation time. It was observed a greater pathogen population on the control treatment from 10 days after inoculation. After 15 days of incubation, the isolate Ca was the most effective in suppressing the pathogen population. After 30 days, the difference between the pathogen population in the substrate infested with C. candelabrum and the control treatment was 26.7%. In the in vitro assay, tebuconazole (Folicur) inhibited 80% of the isolates and the mixture of the fungicides epoxyconazole and pyraclostrobin (Opera) only inhibited the isolate S1. This isolate (S1) was the most sensitive to the active ingredients tested and 3918 and MF2 the least affected ones. These results indicate the need of studies to produce and formulate the bioproduct based on rhizobacteria at a commercial scale. Patent deposits were made at INPI (PI 0101400-5 e 001409). / Dissertação importada do Alexandria

The rescue of selected adult plants and the renewing of explants constitute the greatest challenge to enable the clonal propagation of mate (Ilex paraguariensis St. Hil.). The objectives of this study were to identify and separate clones of the clonal garden by RAPD markers and to evaluate the effect of different doses of indol butyric acid (IBA) on rooting of cuttings and minicuttings of different clones of mate. Three experiments were carried out. The first, young leaves of ten clones had the DNA extracted for testing RAPD markers. The second, new shoots of stump of four clones were used to set up one bud cuttings with one half leaf. The third experiment, rooted cuttings of 20 year-old-trees were used to set up a clonal minigarden to collect minicuttings of one bud and one half leaf. All cuttings and minicuttings were treated with different doses of IBA. The RAPD technique is successful for clone separation and identification, being the primers OPP-03, OPP-06, OPP-15 and OPP-16 the most polymorphic. Single bud cuttings of new sprouts from stumps of some mate clones are capable of rooting, without the need of indole butyric acid. The clones FO10 and FO52 have different capability for rooting. Minicuttings of the clone FO10 root without indol butyric acid. / O resgate de plantas adultas selecionadas e o rejuvenescimento dos propágulos se constituem no maior desafio para viabilizar a clonagem massal da erva-mate (Ilex paraguariensis St. Hil.). Os objetivos deste trabalho foram identificar e separar clones que compõem o jardim clonal por meio de marcadores RAPD e avaliar o efeito de diferentes doses de ácido indol butírico (AIB) no enraizamento de estacas e miniestacas de diferentes clones de erva-mate. Para tanto foram realizados três experimentos. No primeiro, folhas jovens de dez clones tiveram o DNA extraído para testar marcadores RAPD. No segundo, brotações de cepas de quatro clones foram utilizadas para preparar estacas de gema única, com folha cortada pela metade. No terceiro experimento, estacas enraizadas de árvores com 20 anos de idade foram utilizadas para a formação de um minijardim clonal e produção de miniestacas com gema única e uma folha cortada pela metade. Para o enraizamento, tanto as estacas quanto as miniestacas foram tratadas com diferentes doses de AIB. A técnica RAPD é eficaz para a separação de clones de erva-mate, sendo que os iniciadores OPP-03, OPP-06, OPP-15 e OPP-16 foram os mais polimórficos. Estacas de gema única de brotações oriundas da decepa de alguns clones de erva-mate são competentes para o enraizamento, o que dispensa o uso de ácido indol butírico. Os clones FO10 e FO52 diferem quanto a competência ao enraizamento das miniestacas. O enraizamento de miniestacas do clone FO10 ocorre sem a aplicação de ácido indol butírico.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Seedling production of canjerana has been limited by difficulty in germination, caused by recalcitrant behavior of their seeds. The objective of this study was to develop micropropagation to auxiliate preserving and multiplication of superior genotypes, to study the plantlet production by micro-cutting and mini-cutting, and to evaluate the genetic diversity of canjerana. In micropropagation, seeds of canjerana were disinfected with 0, 2.5, 5.0, 7.5 and 10% of NaOCl solution to produce aseptic seedlings, which were cultivated on MS and WPM media. Nodal segments were treated with 0 and 2.5 μM of BAP, KIN and TDZ and with 0, 1, 3, 6, 9 and 12 μM of BAP, which were cultivated on WPM media. Micro-cuttings, were cultivated on MS and WPM media with either 0 or 5.0 μM of IBA and NAA. The rooted micro-cuttings were acclimatizated in a humid chamber in a greenhouse. The highest percentage of decontaminated seeds was produced using a solution of 7.5% of NaOCl and immersion times of 10, 20 and 30 minutes. The same concentrations of BAP, KIN and TDZ and increasing concentrations of BAP in the WPM media did not increase shoot number and length. Neither the base medium nor the auxin had a significant effect on the survival of micro-cuttings after 60 days of cultivation, but the addition of 5.0 μM of NAA did increase the percentage of rooting and survival during the acclimatization. Both nodal segments and microstumps of canjerana have a low rate of multiplication. Shoots produced from microstumps may be rooted in WPM or MS medium added with 5.0 μM of NAA. These complete plantlets can be mantained in vitro or acclimatized as a source of stock plants for the microclonal hedge. For production of canjerana plantlets by mini-cutting, different concentrations of indolbutyric acid (IBA) and substrate combinations were evaluated. Mini-cuttings were treated with 2000 mg L-1 of IBA and planted in commercial substrate; coarse sand; carbonized rice husks; and a combination of the three. Apical and nodal minicuttings were treated with 0, 1000, 2000 and 3000 mg L-1 of IBA and planted in a combination of commercial substrate, coarse sand and carbonized rice husks. The productivity of microstumps and mini-cutting rooting were evaluated in three clones of canjerana. The combination of commercial substrate, coarse sand and carbonized rice husks maximized mini-cuttings rooting. Nodal mini-cuttings had higher rooting capability than apical ones. The application of 3000 mg L-1 of IBA improved rooting differentiation and growth of canjerana mini-cuttings. Canjerana clones differ in rooting capability and survival rates. The genetic diversity of canjerana, within and among progenies of three stock plants, was assessed with previously defined species-specific SSR markers. The allele frequency was calculated for each band and the heterozygosity and the polymorphic information content were calculated for each SSR pair of primers, progeny and for the combination of the 32 canjerana genotypes. The results showed high level of genetic diversity, both within and among progenies, making possible that genotypes from different stock plants grouped together. Based upon these results, high level of genetic diversity can be maintained in clones from progenies of selected stock plants. / A produção seminal de mudas de canjerana tem sido limitada pela dificuldade de germinação, ocasionada pelo comportamento recalcitrante das sementes. O objetivo deste trabalho foi desenvolver a micropropagação para auxiliar a conservação e multiplicação de genótipos superiores, estudar a microestaquia e miniestaquia para a produção massal de mudas, e avaliar a diversidade genética da canjerana. Na micropropagação, sementes de canjerana foram desinfetadas com 0; 2,5; 5,0; 7,5 e 10,0% de hipoclorito de sódio para a produção de plantas assépticas e cultivadas em meios MS e WPM. Segmentos nodais das plântulas foram inoculados em meio WPM acrescido de 0 ou 2,5 μM de BAP, KIN ou TDZ, bem como acrescido de 0; 1; 3; 6; 9 e 12 μM de BAP. Microestacas foram cultivados nos meios MS e WPM acrescido de 0 ou 5,0 μM de AIB e ANA. As microestacas enraizadas foram aclimatizadas em câmara úmida e em casa de vegetação. O maior percentual de sementes descontaminadas foi produzido usando uma solução de 7,5% de NaOCl por 10, 20 e 30 minutos. Tanto BAP, KIN e TDZ em iguais concentrações quanto o aumento das concentrações de BAP no meio WPM não aumentaram o número e nem comprimento das brotações. O meio de cultura e a auxina não afetaram a sobrevivência de microestacas, mas a adição de 5,0 μM de ANA aumentou a porcentagem de enraizamento e sobrevivência durante a aclimatização. Segmentos nodais e microcepas tiveram baixa taxa de multiplicação. Microestacas enraizaram em meio WPM ou MS acrescido de 5,0 μM de ANA. As mudas produzidas podem ser mantidas in vitro ou aclimatizadas para serem utilizadas como plantas matrizes do microjardim clonal. Para a produção de mudas de canjerana por miniestaquia foram avaliadas as concentrações de AIB e diferentes substratos. Miniestacas foram tratadas com 2000 mg L-1 de AIB e plantadas em substrato comercial; areia grossa; casca de arroz carbonizada; e a combinação em iguais proporções de substrado comercial, areia grossa e casca de arroz carbonizada. Miniestacas apicais e nodais foram tratados com 0; 1000; 2000 e 3000 mg L-1 de AIB e plantadas em uma combinação de substrato comercial, areia grossa e casca de arroz carbonizada. Além disso, a produtividade de minicepas e o enraizamento de miniestacas foram avaliados em três clones de canjerana. A combinação de substrato comercial, areia grossa e casca de arroz carbonizada maximizaram o enraizamento das miniestacas. Miniestacas nodais tiveram maior capacidade de enraizamento do que as apicais. A aplicação de 3000 mg L-1 de AIB aumentou o enraizamento e o crescimento de miniestacas de canjerana. Clones de canjerana diferem na porcentagem de enraizamento e na sobrevivência das miniestacas. A diversidade genética entre e dentro de progênies de três matrizes de canjerana foi avaliada por microsatélites. A frequência alélica foi calculada para cada banda e a heterozigose e o conteúdo de informação polimórfica foram obtidos para cada par de primers, cada progênie e para a combinação dos 32 genótipos de canjerana. Os resultados indicam a existência de alta variabilidade genética, tanto entre quanto dentro das progênies avaliadas, possibilitando a formação de grupos com genótipos oriundos de diferentes progênies. Assim, alta variabilidade genética pode ser mantida a partir de clones de progênies de matrizes selecionadas.