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Podtypy Blastocystis u prasat / Blastocystis subtypes in pigs

LAKATOSOVÁ, Lucie January 2013 (has links)
Blastocystis is an anaerobic single-celled protozoan that commonly occurs in the intestinal tract of animals and humans. It is a genetically very variable organism. Blastocystis can be found both in healthy specimens and in patients with gastrointestinal disorders. In 2011/2012, I examinated already isolated DNA samples from domestic and wild pigs by molecular methods in the laboratory of the ASCR Parasitology Institute. In total, 110 samples were examined. The domestic pigs were positive in 91 % (51/56) and wild pigs in 67 % (36/54). The overall prevalence of domestic pigs was higher by 24 %. Several sequences of SSU rRNA gene obtained during the work suggest that pigs may serve as host for atypical Blastocystis subtypes.
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Mikrobiální profil modelových sýrů vybraného typu / Microbial profile of model cheese

Lavičková, Ivana January 2016 (has links)
This Diploma thesis deals with the identification of microorganisms in samples of experimentally produced cheese. Model samples of cheese were produced in association with a private manufacturer. Raw organic milk was used to make the cheese. The theoretical part provides an overview of the issues such as the characteristics of the cheese, its properties and compounds. A special chapter is dedicated to molecular diagnostic methods, which serve for identification of microorganisms. In the experimental part of the thesis were identified some microorganisms in the samples. A polymerase chain reaction was used. The DNA was isolated from coarse lysates using phenol extraction; it was amplified using specific primers and demonstrated by gel electrophoresis. DNA of lactic acid bacteria (Lactobacillus spp., Lactococcus spp.) and yeast was ascertained in the cheese. The samples do not contain DNA of pathogenic genera Bacillus and Salmonella.
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Comparação das técnicas micromorfológicas e moleculares na pesquisa e identificação de Malessezia spp em individuos sadios e com manifestações dermatológicas. / Comparison of the techniches micromorphological and molecular in the research and identification of Malassezia spp. in healthy individuals and with dermatological manifestations.

Arriagada, Giovana Leticia Hernández 27 January 2009 (has links)
Espécies de Malassezia fazem parte da microbiota de humanos e de animais. Essas leveduras lipofílicas são microrganismos oportunistas que estão associados com muitas doenças superficiais como: pitiriase versicolor, dermatite seborréica, foliculite, dermatite atópica e algumas infecções sistêmicas. As espécies de Malassezia têm sido identificadas através de procedimentos morfológicos e bioquímicos, no entanto, pequenas semelhanças entre algumas espécies estão presentes em algumas regiões do genoma. Foi avaliado o PCR-RFLP, método molecular para genotipar espécies de Malassezia obtidas de 55 amostras clinicas isoladas. Foram analisados 23 pacientes com dermatite seborréica, pitiriase versicolor e com a síndrome de Gourgerot- Carteaud. Encontramos quatro espécies diferentes: M. furfur, M. globosa, M. sympodialis and M. slooffiae. A identificação fisiológica e o PCR-RFPL foram compatíveis em 83% das amostras. M. furfur esteve presente em 52% dos casos, o que sugere que é o agente causador da pitiriase versicolor e da dermatite seborréica. Os resultados sugerem que a utilização do PCR-RFLP em amostras clínicas é importante no diagnóstico de algumas micoses causadas por esta levedura. / Malassezia species are part of the microbiota of humans and other animals. These lipophilic yeasts are opportunistic microorganisms that are associated with some dermatoses including pityriasis versicolor, seborrheic dermatitis, folliculitis ptirospórica, atopic dermatitis, some systemic infections among others. The species of Malassezia have been identified by morphological and biochemical and molecular techniques currently. We identify the species of Malassezia obtained from 55 clinical samples and 15 samples that formed the control group, by conventional techniques using a medium with not described in the literature, the mixture of media and Dixon Kimming, which was higher than each when used separately. Used the molecular method of PCR-RFLP to genotype 23 of the 55 clinical samples of Malassezia spp. from patients with seborrheic dermatitis, pityriasis versicolor and Gourgerot - Carteaud syndrome. Could the isolation of four species: M. furfur, M. globosa, M. Sympodialis and M. slooffiae. The physiological identification obtained with the PCRRFLP was consistent in 83% of the samples. M. furfur was present in 52% of cases, suggesting that is the main causative agent of pityriasis versicolor and perhaps the agent most frequently found in seborrheic dermatitis. The results suggest that the use of PCR-RFLP method in clinical samples is of great use for the identification of Malassezia species associated with diseases in humans.
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Comparação das técnicas micromorfológicas e moleculares na pesquisa e identificação de Malessezia spp em individuos sadios e com manifestações dermatológicas. / Comparison of the techniches micromorphological and molecular in the research and identification of Malassezia spp. in healthy individuals and with dermatological manifestations.

Giovana Leticia Hernández Arriagada 27 January 2009 (has links)
Espécies de Malassezia fazem parte da microbiota de humanos e de animais. Essas leveduras lipofílicas são microrganismos oportunistas que estão associados com muitas doenças superficiais como: pitiriase versicolor, dermatite seborréica, foliculite, dermatite atópica e algumas infecções sistêmicas. As espécies de Malassezia têm sido identificadas através de procedimentos morfológicos e bioquímicos, no entanto, pequenas semelhanças entre algumas espécies estão presentes em algumas regiões do genoma. Foi avaliado o PCR-RFLP, método molecular para genotipar espécies de Malassezia obtidas de 55 amostras clinicas isoladas. Foram analisados 23 pacientes com dermatite seborréica, pitiriase versicolor e com a síndrome de Gourgerot- Carteaud. Encontramos quatro espécies diferentes: M. furfur, M. globosa, M. sympodialis and M. slooffiae. A identificação fisiológica e o PCR-RFPL foram compatíveis em 83% das amostras. M. furfur esteve presente em 52% dos casos, o que sugere que é o agente causador da pitiriase versicolor e da dermatite seborréica. Os resultados sugerem que a utilização do PCR-RFLP em amostras clínicas é importante no diagnóstico de algumas micoses causadas por esta levedura. / Malassezia species are part of the microbiota of humans and other animals. These lipophilic yeasts are opportunistic microorganisms that are associated with some dermatoses including pityriasis versicolor, seborrheic dermatitis, folliculitis ptirospórica, atopic dermatitis, some systemic infections among others. The species of Malassezia have been identified by morphological and biochemical and molecular techniques currently. We identify the species of Malassezia obtained from 55 clinical samples and 15 samples that formed the control group, by conventional techniques using a medium with not described in the literature, the mixture of media and Dixon Kimming, which was higher than each when used separately. Used the molecular method of PCR-RFLP to genotype 23 of the 55 clinical samples of Malassezia spp. from patients with seborrheic dermatitis, pityriasis versicolor and Gourgerot - Carteaud syndrome. Could the isolation of four species: M. furfur, M. globosa, M. Sympodialis and M. slooffiae. The physiological identification obtained with the PCRRFLP was consistent in 83% of the samples. M. furfur was present in 52% of cases, suggesting that is the main causative agent of pityriasis versicolor and perhaps the agent most frequently found in seborrheic dermatitis. The results suggest that the use of PCR-RFLP method in clinical samples is of great use for the identification of Malassezia species associated with diseases in humans.
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Estudo comparativo de métodos fenotípicos e biomoleculares para determinação de resistência a antibióticos em cepas de Salmonella spp isoladas de couro e carcaça de bovinos e produtos cárneos / Comparative study of phenotypic and biomolecular methods for determination of the antimicrobial resistance in Salmonella spp strains isolated from hides and carcasses of cattle and meat products

Capuano, Verena Sant\' Anna Cabral 13 November 2012 (has links)
Esse estudo comparou diferentes métodos fenotípicos e biomoleculares para avaliação da resistência antimicrobiana de 107 cepas de Salmonella spp. Isoladas de carcaças e couro de bovinos e de produtos cárneos. Os antimicrobianos testados foram ampicilina, cefotaxima, cloranfenicol, ciprofloxacina, gentamicina, imipenem, tetraciclina e trimetoprima. Os testes fenotípicos empregados foram: difusão do disco em ágar, utilizando discos produzidos por duas empresas diferentes e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), realizada em placas de microtitulação e empregando tiras comerciais de antibióticos. O método biomolecular (PCR) objetivou a pesquisa de genes de resistência a antimicrobianos (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) , localizados no cromossomo, plasmídeos e integrons classe 1, e foi aplicado para as cepas que apresentaram resistência a pelo menos um dos antibióticos testados por algum dos testes fenotípicos e para as cepas que apresentaram resultados contraditórios nos testes fenotípicos. Todos os métodos foram executados de acordo com as normas do ClinicaI and Laboratory Standards Institute. Foi detectada resistência a pelo menos um antibiótico em 26 cepas (24%), sendo que 20 (77%) dessas foram multirresistentes. A correlação de resultados obtidos pelo método de difusão de discos empregando os discos de duas marcas diferentes foi de 99,7%, enquanto a correlação dos resultados obtidos pelos dois métodos de determinação da CIM foi de 98,6%. Para os resultados obtidos pelos métodos de difusão de discos e determinação da CIM a correlação foi de 98,4%. Não foi observada uma boa correlação entre a presença dos genes detectados e o resultado apresentado pelos métodos fenotípicos. / This study compared different phenotypic and molecular methods for the evaluation of antimicrobial resistance of 107 strains of Salmonella spp. isolated from hides and carcasses of cattle and meat products. The antimicrobials tested were ampicillin, cefotaxime, chloramphenicol, ciprofloxacin, gentamicin, imipenem, tetracycline and trimethoprim. Phenotypic tests included agar disk diffusion, using disks produced by two different companies and determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) conducted in microtiter plates and commercial antibiotic strips. The biomolecular method (PCR) focused antimicrobial resistance genes (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) located on chromosomes, plasmids and class 1 integrons, and was applied to the strains that were resistant to at least one of the antibiotics tested as detected by the phenotypic tests and to strains that showed contradictory results in the phenotypic tests. All methods were performed according to the standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Resistance to at least one antibiotic was detected in 26 strains (24%), and 20 (77%) of these were multidrug-resistant. The correlation between results obtained by disk diffusion method using discs of two different brands was 99.7%, while the correlation of the results obtained by the two methods of determining the MIC was 98.6 %. For the results of the methods of disc diffusion and MIC determination the correlation was 98.4%. There was no good correlation between the presence of genes detected and the result presented by phenotypic methods.
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Estudo crítico dos métodos moleculares utilizando iniciadores universais na identificação da microbiota endodôntica e da desinfecção do sistema de canais radiculares / Critical study of the molecular methods using universal primers for the identification of endodontic microbiota and disinfection the root canal system

Shin, Regina Célia Furukava 11 September 2012 (has links)
No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.
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Identificação de populações de Biomphalaria (Gastropoda:Planorbidae) na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil / Identificação de populações de Biomphalaria (Gastropoda:Planorbidae) na região sul do Rio Grande do Sul, Brasil

Pepe, Michele Soares 15 March 2006 (has links)
Submitted by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-04-13T19:25:29Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Michele Soares Pepe.pdf: 1691013 bytes, checksum: 46a4c001f79a5e191356a869dbd3de81 (MD5) / Approved for entry into archive by Aline Batista (alinehb.ufpel@gmail.com) on 2017-04-13T19:42:28Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Michele Soares Pepe.pdf: 1691013 bytes, checksum: 46a4c001f79a5e191356a869dbd3de81 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-04-13T19:42:28Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 0 bytes, checksum: d41d8cd98f00b204e9800998ecf8427e (MD5) Michele Soares Pepe.pdf: 1691013 bytes, checksum: 46a4c001f79a5e191356a869dbd3de81 (MD5) Previous issue date: 2006-03-15 / Sem bolsa / A esquistossomose mansônica é uma doença condicionada a presença de moluscos, do gênero Biomphalaria (Preston, 1910), de hábitos aquáticos suscetíveis ao Schistosoma mansoni (Sambon, 1907). O conhecimento sobre a distribuição geográfica das espécies de Biomphalaria é importante para o controle e vigilância epidemiológica da esquistossomose. A expansão dessa parasitose para a região sul do país foi evidenciada pela ocorrência de moluscos vetores, com destaque para B. glabrata (Say, 1818), bem como presença de portadores desse trematódeo, já que as condições ambientais são plenamente atendidas para desenvolvimento completo de seu ciclo biológico. O objetivo deste trabalho foi caracterizar as espécies de Biomphalaria na região sul do Rio Grande do Sul. Durante o ano de 2005 foram realizadas coletas de moluscos em 15 localidades de 12 municípios do Estado, sendo essas populações mantidas em condições de laboratório e analisadas as características dos habitats. A identificação morfológica dos moluscos foi realizada através de características das conchas e do tubo renal e anatomia dos órgãos reprodutivos. Complementar a isso foi realizada a identificação molecular através do PCR-RFLP com amplificação das regiões ITS, que incluem o gene da subunidade 5.8S do rDNA e os espaços transcritos ITS1 e ITS2. Foi testada a suscetibilidade de duas populações potencialmente vetoras de S. mansoni com a cepa LE. Foram identificadas sete populações de B. tenagophila guaibensis (Paraense, 1984), cinco de B. peregrina (Orbigny, 1835) e três de B. oligoza (Paraense, 1975) no diagnóstico morfológico e no molecular. Dentre todas as populações mantidas em laboratório, quatro populações de B. tenagophila guaibensis e todas as populações de B. peregrina reproduziram em laboratório, produzindo a geração F1. Duas populações de B. peregrina (Dom Pedrito e Rio Grande) infectadas experimentalmente apresentaram-se resistentes à infecção por S. mansoni. O diagnóstico específico por técnicas moleculares mostrou-se eficiente quando comparado com o resultado morfológico, portanto uma ferramenta útil em estudos epidemiológicos desses moluscos. É necessária a continuidade nas pesquisas malacológicas e epidemiológicas de diferentes populações de Biomphalaria spp. representativas de todo Estado, pois o conhecimento sobre as características destas populações permitirá traçar estratégias para evitar o estabelecimento e expansão da esquistossomose no Rio Grande do Sul. / Mansonic schistosomiasis is a disease related to the presence of the snail, belonging to the genus Biomphalaria (Preston, 1910), which presents aquatic habit susceptible to the Schistosoma mansoni (Sambon, 1907). The knowledge about the geographic distribution of the Biomphalaria species is important to the control and epidemiological monitoring of the schistosomiasis. The expansion of this parasitosis to the Southern region of Brazil was evidenced by the occurrence of the vector snail, especially B. glabrata (Say, 1818), the presence of the host of this trematod, as well as the environmental conditions which provide the settings to the development of the complete biological cycle. The aim of this work was characterize Biomphalaria species in the Southern of Rio Grande do Sul state, Brazil. The snails were collected during the year 2005, from 15 places of 12 municipalities of the state, these populations were maintained in laboratory conditions and the habitat characteristics analyzed. The morphological identification of the snails was realized trough the shelves characteristics, renal rid and reproductive organs anatomy. To complement this analyzes a molecular identification was carried out trough the PCR-RFLP with amplification of the ITS regions, which includes the gene of subunit 5.8S of the rDNA and the transcriptions spaces ITS1 and ITS2. The susceptibility of two populations potentially vectors were tested using the LE strain. Seven populations of B. tenagophila guaibensis (Paraense, 1984), five of B. peregrine (Orbigny, 1835) and three of B. oligoza (Paraense, 1975) were identified in the morphological and molecular diagnosis. Amongst the populations maintained in laboratory, four populations of B. tenagophila guaibensis and all populations of B. peregrina reproduced in these conditions, producing the F1 generation. Two populations of B. peregrina (from Dom Pedrito and Rio Grande counties) were experimentally infected and showing resistance to the infection by S. mansoni. The specific diagnosis performed by molecular techniques presents more efficiency when compared to the morphological diagnosis, became an important tool in epidemiological studies of this snail. The continuing of the malacology 12 and epidemiological research in different populations of Biomphalaria spp., which represents all the state is necessary, the knowledge of the characteristics of these populations permit to trace strategies to avoid the establishment and expansion of the schistosomiasis in Rio Grande do Sul state.
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Listeria monocytogenes padermių, išskirtų iš mažmeninėje rinkoje parduodamų žuvų produktų, identifikavimas ir serotipavimas molekuliniais tyrimo metodais / The molecular research methods in the identification and serotyping of Listeria monocytogenes strains in fish products in retail

Lozoraitytė, Aušra 18 June 2014 (has links)
Autorius: Aušra Lozoraitytė Tema: Listeria monocytogenes padermių, išskirtų iš mažmeninėje rinkoje parduodamų žuvų produktų, identifikavimas ir serotipavimas molekuliniais tyrimo metodais Darbo vadovas: prof. dr. Artūras Stimbirys Atlikimo vieta: Darbas 2012-2014 metais atliktas Lietuvos sveikatos mokslų universitete, Veterinarijos akademijoje, Maisto saugos ir kokybės katedroje. Darbo dydis: 52 puslapiai, 10 lentelių, 17 paveikslų. Darbo tikslas: palyginti Listeria monocytogenes identifikavimui naudotus standartinį ir molekulinį metodus. Atlikto darbo tyrimų objektas yra Listeria monocytogenes, kuri buvo išskiriama iš mažmeninėje rinkoje parduodamų šaltai rūkytų žuvų (lašišų) produktų. Tyrimai atlikti tarpusavyje derinant standartinius mikroorganizmų kultivavimo metodus ir molekulinius DNR analizės metodus. Tyrimų metu buvo ištirta 160 šaltai rūkytų žuvų produktų, t. y. lašišų papilvės, lašišų gabalėliai, lašišų file ir lašišų nugarėlės. Tyrimo metu nustatyta, kad šaltai rūkytų žuvų užkrėstumas listerijomis priklauso nuo produkto rūšies. Šaltai rūkytų lašišų papilvėse užkrėstumas listerijomis yra 7,5 karto didesnis nei lašišų nugarėlėse (p<0,05), 1,8 karto nei lašišų gabalėliuose (p<0,05) ir 30 kartų didesnis nei lašišų file (p<0,05). Mikrobiologinių tyrimų metu nustatyta, kad 32,5 % (p<0,05) žuvų produktų mėginių buvo užkrėsti L. monocytogenes, o atlikus dauginę PGR nustatyta, kad L. monocytogenes buvo užkrėsti 23,13 % mėginių (p<0,01). Tai įrodo, kad molekuliniai tyrimo... [toliau žr. visą tekstą] / Author: Ausra Lozoraityte Subject: The molecular research methods in the identification and serotyping of Listeria monocytogenes strains in fish products in retail Supervisor of the work: prof. dr. Arturas Stimbirys Location: The study was conducted in the Food Safety and Quality Department of Veterinary Academy of the Lithuanian University of Health Sciences, in 2012-2014. Scope of the work: 52 pages, 10 tables, 17 figures. The aim of the work: Identification of the Listeria monocytogenes by comparing molecular and standard methods. The study object is Listeria monocytogenes, which is found in the cold smoked fish (salmon) products, sold in the retail market. The study has been carried out combining standard micro-culture cultivation and molecular DNA analysis methods. 160 cold-smoked fish products, i. e. underbellies of the salmon, salmon pieces, salmon fillet and backs of the salmon was investigated during in the study. Also it was found that contamination of the cold smoked fish products with listeria depends on the type of the product. Contamination with listeria in the underbellies of the salmon is 7.5 times higher, than in the backs of the salmon (p<0.05), 1.8 times higher, than in the pieces of salmon (p<0.05) and 30 times higher, than in the salmon fillet (p<0.05). Microbiological researches showed that 32.5 % (p<0.05) of the fish products samples were infected with L. monocytogenes, and after the multiplex PCR was found that 23.13 % of samples (p<0.01) were... [to full text]
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Estudo crítico dos métodos moleculares utilizando iniciadores universais na identificação da microbiota endodôntica e da desinfecção do sistema de canais radiculares / Critical study of the molecular methods using universal primers for the identification of endodontic microbiota and disinfection the root canal system

Regina Célia Furukava Shin 11 September 2012 (has links)
No sentido de colaborar com o estudo da redução de microrganismos em Endodontia, foi realizada uma análise crítica dos modelos metodológicos in vivo sobre as técnicas moleculares utilizadas na avaliação da microbiota endodôntica e na capacidade de medir a antissepsia que o tratamento endodôntico proporciona. Desta maneira, os trabalhos foram agrupados de acordo com a proposta do presente estudo. Na análise critica e comparativa, pode-se observar uma grande variedade de métodos moleculares aplicados nos estudos, sendo que o mais utilizado nos ensaios para avaliação da microbiota foi o PCR. Havia estudos que utilizavam uma combinação de vários métodos onde foi possível identificar microrganismos ainda não conhecidos. Nos ensaios que utilizam iniciadores universais e que se valem da identificação de microrganismos através do DNA, foram listados de maneira a poder observar que o iniciador universal formado pela seguinte cadeia de oligonucleotídeos: F: 5- AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3/R: 5-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3 foi o mais descrito pela literatura. / In order to collaborate with the study of disinfection in Endodontics, was performed a study of critical methodological models in vivo on the molecular techniques used in the evaluation of endodontic microbiota and the ability to measure the disinfection capacity of endodontic treatment. Thus, the studies were grouped according to the purpose of this study. Under in critical and comparative analysis its can be seen a wide variety of molecular techniques used in the studies, and as used in the tests was to evaluate the microbial PCR studies using a combination of various methods which could be identified microorganisms has not known. In assays using universal primers which rely on the identification of microorganisms using the DNA, were listed as to be able to observe that the universal primer chain formed by the following primers: F: 5\'-AGA GTT TGA TCC TGG CTC AG-3 \'/ R: 5\'-ACG GCT ACC TTG TTA CGA CTT-3\' was as described in the literature.
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Estudo comparativo de métodos fenotípicos e biomoleculares para determinação de resistência a antibióticos em cepas de Salmonella spp isoladas de couro e carcaça de bovinos e produtos cárneos / Comparative study of phenotypic and biomolecular methods for determination of the antimicrobial resistance in Salmonella spp strains isolated from hides and carcasses of cattle and meat products

Verena Sant\' Anna Cabral Capuano 13 November 2012 (has links)
Esse estudo comparou diferentes métodos fenotípicos e biomoleculares para avaliação da resistência antimicrobiana de 107 cepas de Salmonella spp. Isoladas de carcaças e couro de bovinos e de produtos cárneos. Os antimicrobianos testados foram ampicilina, cefotaxima, cloranfenicol, ciprofloxacina, gentamicina, imipenem, tetraciclina e trimetoprima. Os testes fenotípicos empregados foram: difusão do disco em ágar, utilizando discos produzidos por duas empresas diferentes e determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), realizada em placas de microtitulação e empregando tiras comerciais de antibióticos. O método biomolecular (PCR) objetivou a pesquisa de genes de resistência a antimicrobianos (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) , localizados no cromossomo, plasmídeos e integrons classe 1, e foi aplicado para as cepas que apresentaram resistência a pelo menos um dos antibióticos testados por algum dos testes fenotípicos e para as cepas que apresentaram resultados contraditórios nos testes fenotípicos. Todos os métodos foram executados de acordo com as normas do ClinicaI and Laboratory Standards Institute. Foi detectada resistência a pelo menos um antibiótico em 26 cepas (24%), sendo que 20 (77%) dessas foram multirresistentes. A correlação de resultados obtidos pelo método de difusão de discos empregando os discos de duas marcas diferentes foi de 99,7%, enquanto a correlação dos resultados obtidos pelos dois métodos de determinação da CIM foi de 98,6%. Para os resultados obtidos pelos métodos de difusão de discos e determinação da CIM a correlação foi de 98,4%. Não foi observada uma boa correlação entre a presença dos genes detectados e o resultado apresentado pelos métodos fenotípicos. / This study compared different phenotypic and molecular methods for the evaluation of antimicrobial resistance of 107 strains of Salmonella spp. isolated from hides and carcasses of cattle and meat products. The antimicrobials tested were ampicillin, cefotaxime, chloramphenicol, ciprofloxacin, gentamicin, imipenem, tetracycline and trimethoprim. Phenotypic tests included agar disk diffusion, using disks produced by two different companies and determination of the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) conducted in microtiter plates and commercial antibiotic strips. The biomolecular method (PCR) focused antimicrobial resistance genes (blaTEM, blaOXA-1, blaPSE-1, cat1, cat2, floR, cmlA, cmlB, aac(3)IVa, aadB, aadD, aphA1, tetA, tetB, tetC, tetD, tetE, tetG e dhfrI) located on chromosomes, plasmids and class 1 integrons, and was applied to the strains that were resistant to at least one of the antibiotics tested as detected by the phenotypic tests and to strains that showed contradictory results in the phenotypic tests. All methods were performed according to the standards of the Clinical and Laboratory Standards Institute. Resistance to at least one antibiotic was detected in 26 strains (24%), and 20 (77%) of these were multidrug-resistant. The correlation between results obtained by disk diffusion method using discs of two different brands was 99.7%, while the correlation of the results obtained by the two methods of determining the MIC was 98.6 %. For the results of the methods of disc diffusion and MIC determination the correlation was 98.4%. There was no good correlation between the presence of genes detected and the result presented by phenotypic methods.

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