Made available in DSpace on 2014-06-11T19:26:02Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-08-28Bitstream added on 2014-06-13T20:33:36Z : No. of bitstreams: 1 marcon_hs_me_botib.pdf: 1524532 bytes, checksum: 73e3664d86fdbb7b69d358e0398f60ab (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Wolbachia é uma bactéria endossimbionte comumente encontrada nos tecidos reprodutores de invertebrados, sendo herdada vertical e horizontalmente. Esta bactéria é desencadeadora de inúmeras alterações reprodutivas, dentre elas a incompatibilidade citoplasmática. Bactéria Wolbachia apresenta oito diferentes tipos de genoma, identificados de A a H. Dentre os hospedeiros da Wolbachia estão as moscas-das-frutas do gênero Anastrepha, que são um importante inseto-praga causador de inúmeras perdas na fruticultura de vários países na América. Neste estudo, foram utilizados os primers 16S rDNA, ftsZ e wsp na detecção da Wolbachia e identificação do supergrupo em três populações de Anastrepha do complexo fraterculus, de diferentes regiões do estado de São Paulo. Em todas as amostras de moscas foi detectada a presença da Wolbachia do supergrupo A, através da utilização dos primers 16S rDNA e wsp, visto que o ftsZ apresentou baixa sensibilidade na detecção desta bactéria em Anastrepha. Comparações das sequências do gene wsp dos 62 indivíduos no Genebank possibilitaram a identificação de duas linhagens de Wolbachia, uma pertencente a Anastrepha sp. 2 (wAsp2B) e a outra ao nematóide Brugia pahangi (Bp-1-1001). Com isso, sugere-se a ocorrência de transferência horizontal da linhagem Bp-1-1001 em Anastrepha através das vespas parasitas de dípteros. A partir de comparações entre as sequências geradas com o gene wsp, observou-se a ocorrência de quatro diferentes sequências pertencentes a novas linhagens de Wolbachia, denominadas wAsc, wAnc, wBjc e wBsp. Essas linhagens estão distribuídas nas diferentes populações de moscas-das-frutas do gênero Anastrepha / Wolbachia is a endosymbiont bacteria commonly found in reproducer tissue of invertebrates, being vertically and horizontally inherited. This bacteria cause innumerable reproductive alterations, among them a cytoplasmic incompatibility. Wolbachia have eight different types of genome, designated from A to H. Among Wolbachia host there are the fruit flies of genus Anastrepha. These arthropods are important pest insect that causes many losses in fruit production of many countries of America. In this work, were used the primers 16S rDNA, ftsZ and wsp to detect Wolbachia and to identify the supergroups of three Anastrepha populations the different regions of São Paulo state, Brazil. In all fruit flies samples, it was detected the presence of Wolbachia of the A supergroup, through the use of primers 16S rDNA and wsp, since ftsZ has low sensitivity in detecting this bacteria in Anastrepha. Comparisons of the wsp gene sequences of 62 samples in GeneBank, allowed the identification of two Wolbachia lineages, one relating to Anastrepha sp. 2 (wAsp2B) and other in Brugia pahangi nematode (Bp-1-1001). Therefore it is propose the occurrence the horizontal transference of Wolbachia lineages Bp-1- 1001 into Anastrepha through the did parasite wasps of dipterous. The comparisons among the wsp gene sequences showed the occurrence of four different sequences, possibly belonging to the news lineages of Wolbachia, which were named wAsc, wAnc, wBjc and wBsp. These lineages are distributed in different fruit flies of populations of the Anastrepha genus

Na literatura científica encontra-se pouco informação sobre a situação das moscas-das-frutas no Equador. Assim, este trabalho teve por objetivo contribuir para o conhecimento desses tefritícios em duas provincias importantes na produção de frutos para exportação naquele país. Fez-se uma revisão minuciosa sobre a presença tefritícios no país e apresentat-se uma análise do monitoramento realizado durante dois anos (2004-2006) em áreas produtoras das províncias de Guayas e Santa Elena, utilizando aramdilhas do tipo McPhail e Jackson, com atrativos alimentares e sexuais, respectivamente. Os primeiros registros da ocorrência de moscas-das-frutas no Equador datam de 1925 e o últimos registros foram relaados em 2007 com a inclusão de cinco novas espécies de Anastrepha; perfazendo um total de 38 epécias deste gênero, mais a ocorrência de Ceratitis capitata, espécia introduzida, cuja frequencia nas áreas de produção de frutas vem aumentando nos últimos sete anos. Forma capturados 73.127 indivíduos de moscas-das-frutas sendo que 18.547 pertencem ao gênero Ceratitis e 54.579 à Anastrepha. Reporta-se pela primeira vez nesta região, A. macrura Hendel, 1914 e o gênero Hexachaeta sp. Observou-se um aumento poplacional das especias de Anastrepha, a partir do final do mês de janeiro até março, com a parição das chuvsa. As flutuações populacionais das espécies de moscas-das-frutas mantêm a mesma frequência de A. fraterculus, ainda que em menores porporções e flutuações. O número de moscas/armadilha/dia em janeiro correspondeu a, aproximadamente, cinco a 10 vezes ao verificado em junho-julho; a flutuação populacional de moscas-das-frutas correlacionou com a precipitação, parâmetro climático analisado. A fraterculus foi a espécie com maior frequência, dominância e abundância, seguida por A. obliqua, A. striata e A. serpentina. / Tese submetida à Câmara de Ensino de Pós- Graduação e Pesquisa da Universidade Federal do Recôncavo da Bahia como requisito para obtenção do Grau de Doutor em Ciências Agrárias.

Wolbachia é um gênero de bactérias endossimbiontes que são verticalmente transmitidas pelas fêmeas aos seus descendentes, embora transmissão entre táxons distintos também ocorra com certa freqüência. Entre os efeitos que essa bactéria causa nos sistemas de reprodutivos de seus hospedeiros destaca-se a incompatibilidade citoplasmática (IC). Wolbachia foi descrita em numerosas espécies de artrópodos, especialmente os insetos. Dentre os insetos, essa bactéria foi descrita em diversos gêneros das moscas-das-frutas da familia Tephritidae, tendo sido demonstrada a IC em Rhagoletis cerasi e Ceratitis capitata. Recentemente, essas bactérias foram identificadas nas moscas-das-frutas do gênero Anastrepha. No presente trabalho, procurou-se demonstrar se a Wolbachia estaria relacionada a IC entre Anastrepha sp.1 aff. fraterculus e Anastrepha obliqua. A amplificação e o seqüenciamento do gene wsp revelou que as populações das duas espécies, mantidas no laboratório, estavam infectadas por Wolbachia. A presença da bactéria foi, também, demonstrada citologicamente em embriões corados pelo DAPI, tendo-se, além disso, observado que elas se distribuem nos embriões em gradiente decrescente do pólo posterior para o anterior. Para testar a hipótese de que a bactéria é a causa da IC, foram estabelecidas populações das duas espécies onde a Wolbachia (e possivelmente outras bactérias não identificadas) foram eliminadas por tratamento térmico (30oC) aplicado às pupas. As taxas de eclosão de larvas nas progênies de cruzamentos entre indivíduos curados, foram menores que a eclosão nos cruzamentos entre indivíduos infectados, mas o tratamento não alterou a proporção sexual dos adultos. Cruzamentos intra-específicos entre indivíduos infectados e curados, produziu assimetria nas progênies dos cruzamentos recíprocos, ou seja, quando os fêmeas eram curadas e os machos infectados a taxa de eclosão foi significativamente menor que nos cruzamentos recíprocos demonstrando, assim, a existência de IC unidirecional nos cruzamentos dessas duas espécies de Anastrepha. Nesses cruzamentos, a proporção sexual das progênies adultas não divergiu significativamente do 1:1 esperado. Nas progênies híbridas de cruzamentos interespecíficos entre indivíduos infectados, observou-se um decréscimo significativo nas taxas de eclosão e alteração na proporção sexual entre os adultos, de acordo com a regra de Haldane. Quando as fêmeas eram de A. sp.1, as progênies eram constituídas apenas por fêmeas e quando eram de A. obliqua, machos também foram produzidos, mas em frequências menores que o esperado. Resultados similares foram obtidos quando indivíduos curados foram cruzados entre si. Cruzamentos interespecíficos de indivíduos infectados cruzados com indivíduos curados, produziram progênies com taxas de eclosão muito reduzidas e menores quando as fêmeas eram de A. sp.1 (infectadas ou curadas), do que nos cruzamentos onde as fêmeas eram de A. obliqua (infectadas ou não). Nestes últimos, quando a fêmea era infectada e os machos curados, a taxa de eclosão foi maior que no cruzamento recíproco, demonstrando a presença de IC entre as duas espécies. A proporção sexual também foi alterada nesses cruzamentos, segundo a regra de Haldane. Os resultados do presente trabalho demonstram, pela primeira vez, que a incompatibilidade citoplasmática mediada pela Wolbachia, ocorre nas duas espécies de Anastrepha e sugerem que deve existir uma interação entre a bactéria e os genomas das espécies hospedeiras. / The endosymbiont bacteria Wolbachia are vertically transmitted by the females to its progenies, although horizontal transmission between distinct taxa is also known. One of the most relevant effects caused by these bacteria in the reproductive behavior of its hosts is the cytoplasmic incompatibility (CI). Wolbachia was described in several groups of arthropods, in the insects including several genera of the tefritid fruit flies. Wolbachia-induced CI was reported in Rhagoletis cerasi and Ceratitis capitata. Recently, occurrence of these bacteria was described in several species of genus Anastrepha. Search for possible Wolbachia-induced CI in crosses of Anastrepha obliqua and A. sp.1 aff. fraterculus was the aim of the present study. Amplification and sequencing of the gene wsp of Wolbachia revealed that laboratory colonies of both species were infected with this bacteria. Cytological analysis of embryos stained with DAPI showed a multitude of bacteria distributed in decreasing gradients from the posterior to the anterior pole of the embryos. The hypothesis that there is CI between the two host species was tested using infected and cured individuals. The bacteria were removed by treating the pupae at the temperature of 30o C. Rate of egg hatch in progenies recovered from crosses of cured flies were lower than egg hatch in crosses of the infected strains, but no sex-ratio deviation from the expected 1:1 was observed. Intra-specific crosses between infected and cured individuals resulted in asymmetries in the progenies of reciprocal crosses. The egg hatch in crosses of cured obliqua females to infected sp.1 males was lower than in the reciprocal crosses, clearly indicating the presence of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. In these crosses, sex-ratio among the adults does not deviate from the 1:1 ratio. In the hybrid progenies of inter-specific crosses, it was observed a decrease in the egg hatch rate, and deviation from 1:1 in the adult sex-ratio according to the Haldanes rule. From crosses of sp.1 females to obliqua males, only females were recovered while in crosses of obliqua females to sp.1 males, males were also produced but in lower frequencies than expected. Similar results were obtained when cured individuals were crossed. Very low egg hatch rates were observed in inter-specific crosses of infected to cured individuals, when sp.1 females (infected or cured) were used. In crosses of obliqua females (infected or cured), higher egg hatch rate was observed. Egg hatch was larger in crosses of infected female to cured males than in the reciprocal crosses, indicating a Wolbachia-induced IC between the two species of Anastrepha. The sex-ratios were also according to the Haldanes rule. This is the first report of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. The existence of a possible interaction between the bacteria and the genomes of the host species is also suggested.

Wolbachia é uma bactéria intracelular encontrada tanto nos tecidos somáticos quanto nos reprodutivos de diversas espécies de artrópodes e nematódeos. Estudos filogenéticos baseados nos genes 16S e ftsZ indicaram que o gênero Wolbachia congrega seis supergrupos taxonômicos (\"A\" a \"F\"). Infecções por Wolbachia têm sido associadas a diversas alterações na reprodução de seus hospedeiros, p. exemplo, a incompatibilidade citoplasmática (IC), partenogênese, feminização de machos genéticos e morte dos machos. A identificação das diferentes cepas da bactéria é mais precisa quando a análise por locos múltiplos (MLST) é aplicada. Infecção por Wolbachia foi descrita em diversas espécies de moscas-das-frutas da familia Tephritidae, Bactrocera ascita, Rhagoletis cerasi, Ceratitis capitata, nas quais a bactéria induz a incompatibilidade citoplasmática. No gênero Anastrepha, endêmico do Continente Americano, infecção por Wolbachia foi descrita em várias espécies pela análise do gene wsp, existindo também a indicação de que IC mediada por Wolbachia ocorra em duas espécies do grupo fraterculus. A ocorrência de IC aliada à sugestão do emprego da Wolbachia em programas de controle populacional das moscas-das-frutas, impõem a necessidade de uma caracterização mais precisa das diferentes cepas da Wolbachia. No presente trabalho foram amplificados e sequenciados fragmentos dos genes gatB, coxA, hcpA, ftsZ e fbpA, que integram a metodologia de MLST (\"Multiloci Sequence Typing\") e do gene wsp da Wolbachia. Foram analisadas amostras populacionais do complexo de espécies crípticas de Anastrepha fraterculus do Brasil e da Argentina, Peru, Equador, Colômbia, Guatemala e México, além de amostras de Anastrepha obliqua do Brasil. Todas as amostras estavam infectadas com Wolbachia do supergrupo \"A\". Para os cinco genes, foram encontrados haplótipos únicos e outros já descritos anteriormente, determinando, assim, os alelos de cada um presentes nas amostras. O conjunto de cinco alelos de cada amostra determinou a linhagem da bactéria que estava presente. Comparação entre as análises filogenéticas das sequências de cada um dos genes isoladamente, mostrou discordância nas relações entre os alelos e amostras populacionais. As sequências dos cinco genes concatenadas, com 2079 pb, foram analisadas tendo sido encontrados 20 linhagens, com distâncias variando de 0,001 a 0,058. A análise filogenética isolou as linhagens de Wolbachia obtidas das amostras de Anastrepha em clados distintos, demonstrando que diferentes linhagens estão presentes nesses hospedeiros e regiões geográficas. Mostrou, também, que pode ocorrer mais que uma cepa de Wolbachia em uma mesma amostra populacional. Uma das linhagens foi detectada em duas espécies do complexo fraterculus e é, também, a mais comumente encontrada (ST1) em diferentes organismos. As sequências do wsp tinham cerca de 500 pb, tendo sido encontradas 22 sequências distintas. O nível de variabilidade de nucleotídeos não é uniforme ao longo do gene, formando um padrão com quatro regiões hipervariáveis, \"HVRs\". As distâncias genéticas entre os haplótipos de wsp mostrou uma variação de 0,001 a 0,235. Foram observadas evidências de recombinação intragência entre os haplótipos do gene wsp. A análise filogenética também isolou os haplótipos de Wolbachia em clados distintos, porém, em contraste com o MLST, a árvore do gene wsp, não suporta os grupos monofiléticos gerados pelo MLST. Os resultados mostram que linhagens similares de Wolbachia estão disseminadas por vasta extensão do Continente Americano, além da presença de linhagens específicas em determinadas áreas geográficas. Análises de ovários e testículos de indivíduos infectados e não infectados (curados por tratamento térmico) de A. sp. 1 e de A. obliqua foram feitas para avaliar possíveis efeitos da Wolbachia nesses hospedeiros. A análise das preparações dos ovários, coradas pelo DAPI, não mostrou diferenças perceptíveis nesta análise morfológica entre fêmeas infectadas e não infectadas, de ambas as espécies. A produção de espermatozoides aumenta progressivamente durante alguns dias, após a emergência das imagos, e cai nos dias seguintes. A análise da produção de espermatozoides pelos machos infectados e pelos curados mostrou que as diferenças entre eles não foram significativas, em ambas as espécies de hospedeiros. Foram feitas estimativas da fecundidade de fêmeas infectadas e não infectadas, de ambas as espécies. Mostrou-se que fêmeas infectadas são mais fecundas que as não infectadas em A. sp.1, mas mostram fecundidade similar em A. obliqua. As taxas de eclosão de larvas foram também estimadas em cruzamentos intraespecíficos compatíveis (fêmeas infectadas ou não cruzadas com machos não infectados) e cruzamentos incompatíveis (fêmeas não infectadas cruzadas com machos infectados) de ambas as espécies. A fertilidade foi significativamente mais elevada entre os ovos produzidos pelas fêmeas infectadas, de ambas as espécies. Foi observado que machos infectados, em ambas as espécies, estão relacionados com os cruzamentos onde ocorreram as taxas mais altas de eclosão. Analisando os cruzamentos incompatíveis, foi demonstrada a presença de incompatibilidade citoplasmática (IC), como seria esperado pela atuação da Wolbachia. Foi mostrado um alto valor para os índices de IC em A. sp,1 (IC= 54,01%) e em A. obliqua (IC = 66,2%). Os resultados sugerem que podem existir relações mutualísticas insipientes da Wolbachia com suas espécies de Anastrepha hospedeiras / Wolbachia is an intracellular bacteria found in somatic and in the reproductive tissues of various arthropods and nematodes. Phylogenetic studies based on 16S and ftsZ genes indicated the existence of six Wolbachia taxonomic supergroups (\"A\" through \"F\"). Infection of Wolbachia have been linked to several changes in the reproduction of their hosts, like cytoplasmic incompatibility (CI), parthenogenesis, feminization of genetic males and male killing. T Wolbachia infection has been described in several species of fruit flies of the family Tephritidae, like Bactrocera ascita, Rhagoletis cerasi, Ceratitis capitata, in which the bacteria induces cytoplasmic incompatibility. In Anastrepha, endemic to the American Continent, Wolbachia infection has been described in several species by analysis of the wsp gene, and there is also indications that Wolbachia-mediated CI occurs in two species of the fraterculus group. The occurrence of CI coupled with the suggestion of the use of Wolbachia in population supression programs, impose the need for a more precise characterization of the different strains of Wolbachia. The identification of the different strains of the bacteria is most accurate when the methodology of multiple loci (MLST) is applied. In this study fragments of genes gatB, coxA, hcpA, ftsZ and fbpA, integrating the methodology MLST, and of wsp gene were amplified and sequenced. Population samples of the Anastrepha fraterculus.complex of cryptic species from Brasil, Argentina, Peru, Ecuador, Colombia, Guatemala and Mexico, and samples of A. oblique from Basil were analysed. All samples were infected with supergroup \"A\" Wolbachia. For each of the five MLST genes, unique as well already known haplotypes were found. Phylogenetic analyses of each gene isolated showed incongruences in the relationships among haplotypes and population samples. The concatenated sequences of the five genes, with 2079 bp, were analyzed and 20 haplotypes were found, with distances ranging from 0.001 to 0.058. Phylogenetic analysis of Wolbachia isolated haplotypes into distinct clades, demonstrating that different strains of Wolbachia were present in these hosts, and in distinct geographic areas. Hosts specific haplotypes were found as well as more than one strain of Wolbachia was found in given population samples. A haplotypes (ST1) was detected in two species of the complex and is also the most commonly found in different organisms. Twenty two different sequences of about 500 bp were found for the wsp gene. The level of nucleotide variability is not uniform along the gene, forming a pattern with four hypervariable regions, HVRs. Genetic distances between haplotypes showed a variation from 0.001 to 0.235. Phylogenetic analysis of the haplotypes also isolated Wolbachia into distinct clades, but in contrast to the MLST, the tree formed by wsp gene does not support the monophily of some groups. The data show that strains of Wolbachia are disseminated along the American Continent, and also that there are specific strains in determined geographic areas. Analyses of ovaries and testes from infected and non infected (cured by heat treatment) individuals of A. sp. 1 and A. obliqua were made in search of possible effects of Wolbachia on its hosts. Ovaries from infected and cured females of both species, stained by DAPI, showed no visible differences in this morphological analysis. The production of sperms increases during few days after ermergence and drops out later one. Analysis of infected and cured males showed that the production of sperms were not significant between them, for both the host species. Fecundity of infected females of A, sp.1 was significantly higher than that of cured females, but was similar in A. obliqua, Egg hatching was scored in compatible intraspecies crosses and also in incompatibles crosses, of both species. Fertility was significntly higher for infected females of both species. Infected males of both species were found associated to crosses in which the higher egg hatching was observed. Analyses of incompatible crosses showed that CI occurred at high rates in A. sp.1 (CI = 54.01%) and in A. obliqua (CI = 66.2%). The data suggest that an incipient mutualism may be present in the relationships of Wolbachia and its Anastrepha hosts

As moscas-das-frutas são pragas de importância quarentenária, entre as quais se destacam as espécies do gênero Anastrepha. Apesar de muito estudada, a taxonomia de alguns grupos do gênero ainda não está adequadamente resolvida. A correta identificação do grupo fraterculus exige prática/conhecimento e a utilização de uma série de técnicas. Assim, o presente estudo propõe testar a eficiência de duas técnicas na identificação de três espécies (A. fraterculus, A. obliqua e A. sororcula) e na identificação de espécimes de A. fraterculus em relação a três hospedeiros (goiaba, nêspera e pêssego). Foram testadas as técnicas de análises de imagens, pela primeira vez em moscas-das-frutas, e de morfometria (multivariada para os acúleos e geométrica para as asas). Pela análise de imagens, obtiveram-se acurácias bastante altas na identificação das espécies, tanto por meio das imagens de asas quanto dos acúleos, com médias de acerto de 87,8% e 90,6%, respectivamente. Em relação à associação de A. fraterculus com os hospedeiros, também foram obtidos resultados positivos com a análise de imagens (médias de 85,3% de acerto nas imagens de asas e de 88,3% nas imagens de acúleos). A morfometria geométrica das asas, utilizando 17 marcos, indicou diferenças na forma das asas dos indivíduos de cada espécie, separando-os com sucesso em grupos distintos. Em relação à associação de A. fraterculus com seus hospedeiros, os grupos formados não foram muito distintos, principalmente em relação aos indivíduos provenientes de pêssego. A análise de morfometria multivariada de sete medidas dos ápices dos acúleos, por meio da análise discriminante linear (ADL), também indicou diferenças entre as espécies, separando-as em três grupos. Por meio da análise de cluster (UPGMA), verificou-se que A. fraterculus e A. obliqua formam um grupo e A. sororcula fica isolada, indicando que as medidas que mais influenciaram o agrupamento das espécies, foram o comprimento da serra (L3 e L7). Na associação com hospedeiros, foram obtidos resultados positivos com a ADL, entretanto, não foi possível separar as populações de um mesmo hospedeiro por meio da UPGMA. As duas técnicas foram eficientes na separação das espécies e na associação de A. fraterculus com seus hospedeiros, mostrando que o fruto hospedeiro pode influenciar na coloração e forma da asa e no formato do acúleo nas três espécies do grupo fraterculus. / The fruit flies are pests of quarantine importance, among which stand out the genus Anastrepha. Despite of many study, the taxonomy of some groups of the genus is still not adequately resolved. The correct identification of fraterculus group requires practice/knowledge and the use of a number of techniques. Thus, this study proposes to test the efficiency of two techniques in the identification of three species (A. fraterculus, A. obliqua e A. sororcula) and in the identification of A. fraterculus specimens related to three hosts (guava, loquat and peach). Were tested the techniques of image analysis, for the fists time in fruit flies, and of morphometry (conventional for the aculeus and geometric for the wings). By image analysis, very high accuracies were obtained for species identification, both by the images of the wings and aculeus, with average accuracy of 87,8% and 90,6%, respectively. Regarding the association of A. fraterculus with the hosts, also were obtained positive results with image analysis (means of 85,3% of accuracy on images of wings and 88,3% on images of aculeus). The geometric morphometric of wings, using 17 landmarks, indicated differences in the wings shape of the individuals of each species, separating them into distinct groups successfully. Regarding the association of A. fraterculus with the hosts, the groups obtained were not very distinct, specially in relation to individuals from peach. The multivariate morphometric of seven measures of the aculeus tip, by linear discriminant analysis (LDA), also indicated differences in the species, separating them in three groups. By cluster analysis (UPGMA), was noted that A, fraterculus and A. obliqua form a group and A. soroscula is isolated, suggesting that the measures that most influenced the grouping of the species were the length of the serrate part (L3 and L7). In the host association, were obtained positives results with LDA, however, was not possible separate the populations of the same host by UPGMA. Both techniques were effectives in separating the species and in the association of A. fraterculus with their hosts, showing that the host fruit can influence in the color and shape of the wing and in the shape of the aculeus in the three species of the group fraterculus.

As moscas-das-frutas são pragas de importância quarentenária, entre as quais se destacam as espécies do gênero Anastrepha. Apesar de muito estudada, a taxonomia de alguns grupos do gênero ainda não está adequadamente resolvida. A correta identificação do grupo fraterculus exige prática/conhecimento e a utilização de uma série de técnicas. Assim, o presente estudo propõe testar a eficiência de duas técnicas na identificação de três espécies (A. fraterculus, A. obliqua e A. sororcula) e na identificação de espécimes de A. fraterculus em relação a três hospedeiros (goiaba, nêspera e pêssego). Foram testadas as técnicas de análises de imagens, pela primeira vez em moscas-das-frutas, e de morfometria (multivariada para os acúleos e geométrica para as asas). Pela análise de imagens, obtiveram-se acurácias bastante altas na identificação das espécies, tanto por meio das imagens de asas quanto dos acúleos, com médias de acerto de 87,8% e 90,6%, respectivamente. Em relação à associação de A. fraterculus com os hospedeiros, também foram obtidos resultados positivos com a análise de imagens (médias de 85,3% de acerto nas imagens de asas e de 88,3% nas imagens de acúleos). A morfometria geométrica das asas, utilizando 17 marcos, indicou diferenças na forma das asas dos indivíduos de cada espécie, separando-os com sucesso em grupos distintos. Em relação à associação de A. fraterculus com seus hospedeiros, os grupos formados não foram muito distintos, principalmente em relação aos indivíduos provenientes de pêssego. A análise de morfometria multivariada de sete medidas dos ápices dos acúleos, por meio da análise discriminante linear (ADL), também indicou diferenças entre as espécies, separando-as em três grupos. Por meio da análise de cluster (UPGMA), verificou-se que A. fraterculus e A. obliqua formam um grupo e A. sororcula fica isolada, indicando que as medidas que mais influenciaram o agrupamento das espécies, foram o comprimento da serra (L3 e L7). Na associação com hospedeiros, foram obtidos resultados positivos com a ADL, entretanto, não foi possível separar as populações de um mesmo hospedeiro por meio da UPGMA. As duas técnicas foram eficientes na separação das espécies e na associação de A. fraterculus com seus hospedeiros, mostrando que o fruto hospedeiro pode influenciar na coloração e forma da asa e no formato do acúleo nas três espécies do grupo fraterculus. / The fruit flies are pests of quarantine importance, among which stand out the genus Anastrepha. Despite of many study, the taxonomy of some groups of the genus is still not adequately resolved. The correct identification of fraterculus group requires practice/knowledge and the use of a number of techniques. Thus, this study proposes to test the efficiency of two techniques in the identification of three species (A. fraterculus, A. obliqua e A. sororcula) and in the identification of A. fraterculus specimens related to three hosts (guava, loquat and peach). Were tested the techniques of image analysis, for the fists time in fruit flies, and of morphometry (conventional for the aculeus and geometric for the wings). By image analysis, very high accuracies were obtained for species identification, both by the images of the wings and aculeus, with average accuracy of 87,8% and 90,6%, respectively. Regarding the association of A. fraterculus with the hosts, also were obtained positive results with image analysis (means of 85,3% of accuracy on images of wings and 88,3% on images of aculeus). The geometric morphometric of wings, using 17 landmarks, indicated differences in the wings shape of the individuals of each species, separating them into distinct groups successfully. Regarding the association of A. fraterculus with the hosts, the groups obtained were not very distinct, specially in relation to individuals from peach. The multivariate morphometric of seven measures of the aculeus tip, by linear discriminant analysis (LDA), also indicated differences in the species, separating them in three groups. By cluster analysis (UPGMA), was noted that A, fraterculus and A. obliqua form a group and A. soroscula is isolated, suggesting that the measures that most influenced the grouping of the species were the length of the serrate part (L3 and L7). In the host association, were obtained positives results with LDA, however, was not possible separate the populations of the same host by UPGMA. Both techniques were effectives in separating the species and in the association of A. fraterculus with their hosts, showing that the host fruit can influence in the color and shape of the wing and in the shape of the aculeus in the three species of the group fraterculus.

Orientador: Celso Luis Marino / Banca: Maoel Victor Franco Lemos / Banca: Carlos Frederico Wilcken / Resumo: Wolbachia é uma bactéria endossimbionte comumente encontrada nos tecidos reprodutores de invertebrados, sendo herdada vertical e horizontalmente. Esta bactéria é desencadeadora de inúmeras alterações reprodutivas, dentre elas a incompatibilidade citoplasmática. Bactéria Wolbachia apresenta oito diferentes tipos de genoma, identificados de A a H. Dentre os hospedeiros da Wolbachia estão as moscas-das-frutas do gênero Anastrepha, que são um importante inseto-praga causador de inúmeras perdas na fruticultura de vários países na América. Neste estudo, foram utilizados os primers 16S rDNA, ftsZ e wsp na detecção da Wolbachia e identificação do supergrupo em três populações de Anastrepha do complexo fraterculus, de diferentes regiões do estado de São Paulo. Em todas as amostras de moscas foi detectada a presença da Wolbachia do supergrupo A, através da utilização dos primers 16S rDNA e wsp, visto que o ftsZ apresentou baixa sensibilidade na detecção desta bactéria em Anastrepha. Comparações das sequências do gene wsp dos 62 indivíduos no Genebank possibilitaram a identificação de duas linhagens de Wolbachia, uma pertencente a Anastrepha sp. 2 (wAsp2B) e a outra ao nematóide Brugia pahangi (Bp-1-1001). Com isso, sugere-se a ocorrência de transferência horizontal da linhagem Bp-1-1001 em Anastrepha através das vespas parasitas de dípteros. A partir de comparações entre as sequências geradas com o gene wsp, observou-se a ocorrência de quatro diferentes sequências pertencentes a novas linhagens de Wolbachia, denominadas wAsc, wAnc, wBjc e wBsp. Essas linhagens estão distribuídas nas diferentes populações de moscas-das-frutas do gênero Anastrepha / Abstract: Wolbachia is a endosymbiont bacteria commonly found in reproducer tissue of invertebrates, being vertically and horizontally inherited. This bacteria cause innumerable reproductive alterations, among them a cytoplasmic incompatibility. Wolbachia have eight different types of genome, designated from A to H. Among Wolbachia host there are the fruit flies of genus Anastrepha. These arthropods are important pest insect that causes many losses in fruit production of many countries of America. In this work, were used the primers 16S rDNA, ftsZ and wsp to detect Wolbachia and to identify the supergroups of three Anastrepha populations the different regions of São Paulo state, Brazil. In all fruit flies samples, it was detected the presence of Wolbachia of the A supergroup, through the use of primers 16S rDNA and wsp, since ftsZ has low sensitivity in detecting this bacteria in Anastrepha. Comparisons of the wsp gene sequences of 62 samples in GeneBank, allowed the identification of two Wolbachia lineages, one relating to Anastrepha sp. 2 (wAsp2B) and other in Brugia pahangi nematode (Bp-1-1001). Therefore it is propose the occurrence the horizontal transference of Wolbachia lineages Bp-1- 1001 into Anastrepha through the did parasite wasps of dipterous. The comparisons among the wsp gene sequences showed the occurrence of four different sequences, possibly belonging to the news lineages of Wolbachia, which were named wAsc, wAnc, wBjc and wBsp. These lineages are distributed in different fruit flies of populations of the Anastrepha genus / Mestre

Wolbachia é um gênero de bactérias endossimbiontes que são verticalmente transmitidas pelas fêmeas aos seus descendentes, embora transmissão entre táxons distintos também ocorra com certa freqüência. Entre os efeitos que essa bactéria causa nos sistemas de reprodutivos de seus hospedeiros destaca-se a incompatibilidade citoplasmática (IC). Wolbachia foi descrita em numerosas espécies de artrópodos, especialmente os insetos. Dentre os insetos, essa bactéria foi descrita em diversos gêneros das moscas-das-frutas da familia Tephritidae, tendo sido demonstrada a IC em Rhagoletis cerasi e Ceratitis capitata. Recentemente, essas bactérias foram identificadas nas moscas-das-frutas do gênero Anastrepha. No presente trabalho, procurou-se demonstrar se a Wolbachia estaria relacionada a IC entre Anastrepha sp.1 aff. fraterculus e Anastrepha obliqua. A amplificação e o seqüenciamento do gene wsp revelou que as populações das duas espécies, mantidas no laboratório, estavam infectadas por Wolbachia. A presença da bactéria foi, também, demonstrada citologicamente em embriões corados pelo DAPI, tendo-se, além disso, observado que elas se distribuem nos embriões em gradiente decrescente do pólo posterior para o anterior. Para testar a hipótese de que a bactéria é a causa da IC, foram estabelecidas populações das duas espécies onde a Wolbachia (e possivelmente outras bactérias não identificadas) foram eliminadas por tratamento térmico (30oC) aplicado às pupas. As taxas de eclosão de larvas nas progênies de cruzamentos entre indivíduos curados, foram menores que a eclosão nos cruzamentos entre indivíduos infectados, mas o tratamento não alterou a proporção sexual dos adultos. Cruzamentos intra-específicos entre indivíduos infectados e curados, produziu assimetria nas progênies dos cruzamentos recíprocos, ou seja, quando os fêmeas eram curadas e os machos infectados a taxa de eclosão foi significativamente menor que nos cruzamentos recíprocos demonstrando, assim, a existência de IC unidirecional nos cruzamentos dessas duas espécies de Anastrepha. Nesses cruzamentos, a proporção sexual das progênies adultas não divergiu significativamente do 1:1 esperado. Nas progênies híbridas de cruzamentos interespecíficos entre indivíduos infectados, observou-se um decréscimo significativo nas taxas de eclosão e alteração na proporção sexual entre os adultos, de acordo com a regra de Haldane. Quando as fêmeas eram de A. sp.1, as progênies eram constituídas apenas por fêmeas e quando eram de A. obliqua, machos também foram produzidos, mas em frequências menores que o esperado. Resultados similares foram obtidos quando indivíduos curados foram cruzados entre si. Cruzamentos interespecíficos de indivíduos infectados cruzados com indivíduos curados, produziram progênies com taxas de eclosão muito reduzidas e menores quando as fêmeas eram de A. sp.1 (infectadas ou curadas), do que nos cruzamentos onde as fêmeas eram de A. obliqua (infectadas ou não). Nestes últimos, quando a fêmea era infectada e os machos curados, a taxa de eclosão foi maior que no cruzamento recíproco, demonstrando a presença de IC entre as duas espécies. A proporção sexual também foi alterada nesses cruzamentos, segundo a regra de Haldane. Os resultados do presente trabalho demonstram, pela primeira vez, que a incompatibilidade citoplasmática mediada pela Wolbachia, ocorre nas duas espécies de Anastrepha e sugerem que deve existir uma interação entre a bactéria e os genomas das espécies hospedeiras. / The endosymbiont bacteria Wolbachia are vertically transmitted by the females to its progenies, although horizontal transmission between distinct taxa is also known. One of the most relevant effects caused by these bacteria in the reproductive behavior of its hosts is the cytoplasmic incompatibility (CI). Wolbachia was described in several groups of arthropods, in the insects including several genera of the tefritid fruit flies. Wolbachia-induced CI was reported in Rhagoletis cerasi and Ceratitis capitata. Recently, occurrence of these bacteria was described in several species of genus Anastrepha. Search for possible Wolbachia-induced CI in crosses of Anastrepha obliqua and A. sp.1 aff. fraterculus was the aim of the present study. Amplification and sequencing of the gene wsp of Wolbachia revealed that laboratory colonies of both species were infected with this bacteria. Cytological analysis of embryos stained with DAPI showed a multitude of bacteria distributed in decreasing gradients from the posterior to the anterior pole of the embryos. The hypothesis that there is CI between the two host species was tested using infected and cured individuals. The bacteria were removed by treating the pupae at the temperature of 30o C. Rate of egg hatch in progenies recovered from crosses of cured flies were lower than egg hatch in crosses of the infected strains, but no sex-ratio deviation from the expected 1:1 was observed. Intra-specific crosses between infected and cured individuals resulted in asymmetries in the progenies of reciprocal crosses. The egg hatch in crosses of cured obliqua females to infected sp.1 males was lower than in the reciprocal crosses, clearly indicating the presence of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. In these crosses, sex-ratio among the adults does not deviate from the 1:1 ratio. In the hybrid progenies of inter-specific crosses, it was observed a decrease in the egg hatch rate, and deviation from 1:1 in the adult sex-ratio according to the Haldanes rule. From crosses of sp.1 females to obliqua males, only females were recovered while in crosses of obliqua females to sp.1 males, males were also produced but in lower frequencies than expected. Similar results were obtained when cured individuals were crossed. Very low egg hatch rates were observed in inter-specific crosses of infected to cured individuals, when sp.1 females (infected or cured) were used. In crosses of obliqua females (infected or cured), higher egg hatch rate was observed. Egg hatch was larger in crosses of infected female to cured males than in the reciprocal crosses, indicating a Wolbachia-induced IC between the two species of Anastrepha. The sex-ratios were also according to the Haldanes rule. This is the first report of Wolbachia-induced CI in Anastrepha. The existence of a possible interaction between the bacteria and the genomes of the host species is also suggested.

A capacidade de dispersão e parasitismo de D. longicaudata, proveniente de larvas de Ceratitis capitata (linhagem Ceratitis) e de Anastrepha fraterculus (linhagem Anastrepha) foi avaliada após liberação em pomar de goiaba. Onze liberações de cerca de 3.000 parasitoides foram realizadas entre março de 2014 e abril de 2015 no centro de um talhão de 15 ha de goiaba localizado no Projeto de Irrigação do Jaíba (15°14\'03.7\"S 43°56\'54.0\"W), em Jaíba, MG, Brasil. A dispersão foi monitorada, a partir de um ponto central de liberação, nas direções cardeais e colaterais, a uma distância de 6 m até 272 m, distantes 12 m entre si nas direções cardeais e 17 m nas colaterais. Em cada ponto uma \"unidade de parasitismo\", ou seja, um sache com cerca de 20 larvas de terceiro instar do hospedeiro mais dieta envoltos em tecido voile, foi pendurada. Larvas de C. capitata e de A. fraterculus foram oferecidas para recuperar os parasitoides em cinco liberações onde os parasitoides não tiveram escolha pelo hospedeiro e outras seis onde tiveram escolha. As \"unidades de parasitismo\" permaneceram 24 h no pomar quando foram substituídas por novas, também retiradas após 24h. Após sete e 15 dias novas \"unidades de parasitismo\" foram distribuídas e mantidas por 24 h. Foram verificadas a porcentagem de parasitismo, razão sexual, mortalidade das larvas hospedeiras e a direção de dispersão. Os dados foram analisados utilizando modelos lineares generalizados de efeito misto através do sistema estatístico R. A distância média de dispersão (DM) e a área de dispersão (S²) de D. longicaudata foram determinadas utilizando-se o modelo proposto por Dobzhansky e Wright. O total de 10.351 parasitoides foi recuperado, todos pertencentes à espécie D. longicaudata, 769 provenientes do hospedeiro A. fraterculus e 9.582 de C. capitata. A mortalidade das larvas foi maior para o hospedeiro A. fraterculus. A razão sexual foi preferencialmente (ou tendeu) para machos e diferiu apenas entre os hospedeiros, sendo maior em parasitoides recuperados de A. fraterculus (0,34), independente da linhagem liberada. Nenhuma variável climática analisada influenciou o parasitismo ou a mortalidade das larvas. A linhagem Ceratitis foi a que mais se dispersou e parasitou larvas até a distância máxima de 173 m e atingiu uma área de dispersão de até 34.067,17m². As duas linhagens do parasitoide se dispersaram em todas as direções, mas demonstraram uma tendência a se dispersar para a direção leste. As duas linhagens foram capazes de sobreviver e parasitar larvas de A. fraterculus e C. capitata por até 15 dias após sua liberação, mas, número maior de exemplares da linhagem Anastrepha foi recuperado após 15 dias parasitando larvas dos dois hospedeiros. A linhagem Anastrepha proporcionou os mais altos índices de parasitismo nas maiores distâncias do ponto de liberação e a linhagem Ceratitis em pontos mais próximos. Com base na maior capacidade de sobrevivência em condição de semiárido, maior capacidade de parasitismo em distâncias maiores do ponto de liberação e na área de dispersão média obtida (27.368,24 m²) recomenda-se a liberação de 3.000 parasitoides da linhagem Anastrepha a cada 2,7 ha de goiaba / The ability of dispersal and parasitism of Diachasmimorpha longicaudata reared with the larval host of Ceratitis capitata (Ceratitis strain) and Anastrepha fraterculus (Anastrepha strain) was evaluated in a guava orchard. Eleven releases of approximately 3,000 parasitoids were conducted between March 2014 and April 2015 at the center of a 15-ha guava orchard located in the Jaíba Irrigation Project area (15°14?03.7?S, 43°56?54.0?W) in Jaíba, State of Minas Gerais, Brazil. The dispersal of Diachasmimorpha longicaudata was monitored within a distance of 6 m to 272 m from a central point of release to the cardinal and collateral directions; each cardinal and collateral direction point was located at a distance of 12 m and 17 m from each other, respectively. At each point, a \"parasitism unit\", that comprised a sachet made of voile fabric containing 20 third instar larval host more diet was hung. Larvae of C. capitata and A. fraterculus were offered to recover the parasitoids into five releases where the parasitoids had no choice by the host and six where they had choice. The \"parasitism units\" remained for 24 hours in the orchard when they were replaced with new ones, also remained for 24 hours. After 7 and 15 days others \"parasitism units\" were distributed and maintained for 24 h. Observations on parasitism, sex ratio, mortality of host larvae, and the direction of dispersal were made for each time point. Data were analyzed using the general linear models and mixed effect models by the R statistical system. The average distance dispersion (DM) and the dispersion area (S²) of D. longicaudata were determined using the model proposed by Dobzhansky and Wright. A total of 10,351 parasitoids was recovered, all belonging to D. longicaudata, 769 from the host A. fraterculus and 9,582 from C. capitata. Larval mortality was higher in A. fraterculus. The sex ratio showed a tendency for males and differed between the hosts; the number of males was higher in the parasitoids recovered from A. fraterculus (0.34), regardless of the strain of D. longicaudata released. Parasitism or larval mortality was not influenced by any of the climatic variables analyzed. The Ceratitis strain was most dispersed and parasitized larvae up to a maximum distance of 173 m and scattering area of up to 34,067.17 m². Both parasitoid strains scattered in all directions, but showed a tendency to disperse toward the east. The two strains were able to survive and parasitize the larvae of A. fraterculus and C. capitata for up to 15 days after its release, but more number of the Anastrepha strain were recovered after 15 days of parasitizing the larvae of the two hosts. The Anastrepha strain showed the highest parasitism rate over larger distances from the point of release, while the Ceratitis strain parasitized the larval hosts close to the release points. Based on the highest survival in semiarid conditions, the higher parasitism capacity at greater distances from the point of release, and the average obtained dispersion area (27,368.24 m²), we recommend the release of 3,000 parasitoids of Anastrepha strain in every 2.7 ha of guava orchards

Orientador: Hebe Myrina Laghi de Souza / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-15T03:57:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 DelVecchio_MariaCecilia_M.pdf: 3207687 bytes, checksum: a40ad66883431b0295da0566a9c2f077 (MD5) Previous issue date: 1981 / Resumo: No presente trabalho foi analisada a ocorrência de insetos da família Lonchaeidae em diferentes plantas hospedeiras, de diversas localidades. Foram identificados três gêneros: Silba Macquart, 1851, em várias espécies de frutos e em brotos terminais de mandioca (Manihot esculenta); Lonchaea Fallen, 1820, em frutos de pimenta (Capsicum sp) e brotos de híbridos interespecíficos de Manihot; Dasiops Rondani, 1856, em frutos e flores de mandioca. O gênero Silba foi o mais comumente encontrado tendo-se constatado neste gênero onze espécies. Destas, apenas duas encontram-se descritas: Silba pseudopendula Korytkowski, 1971 e Silba pendula (Bezzi, 1919). S. pseudopendula foi a espécie mais freqüentemente encontrada em frutos, registrando-se pela primeira vez sua ocorrência no Brasil. Para a identificação e descrição das demais espécies é necessária uma revisão do gênero. A única espécie de Silba encontrada em brotos terminais de mandioca parece apresentar especificidade para esse hospedeiro, uma vez que não ocorreu em nenhuma espécie de fruto analisada / Abstract: A variety of fruit species, cassava (Manihot esculenta) flowers, fruit, and shoots from diffetent localities were analyzed as to the occurrence of flies belonging to the family Lonchaeidae. Lonchaeids pertaining to the following three genera were detected: Silba Macquart, 1851, infesting various fruit species and terminal cassava shoots; Dasiops Rondani, 1856, infesting cassava flowers and fruit, and Lonchaea Fallen, 1820, infesting pepper (Capsicum sp.) and shoots of Mnihot hybrids. Silba were the most commonly found flies. Based on the morphology of male genitalia eleven Silba species were distinguished, of which, only two, Silba pseudopendula Korytkowski, 1971 and Silba pendula (Bezzi, 1919) are described in the literature. S. pseudopendula, not previously known to occur in fruits. The sole Silba species which did not occur ion any fruit was the only one to infest cassava terminal shoots / Mestrado / Mestre em Ciências Biológicas