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Impacto da depleção da co-chaperonina STIP1 no controle da pluripotência, proliferação e diferenciação de células-tronco embrionárias murinas. / Impact of STIP1 cochaperone depletion on the control of pluripotency, proliferation and differentiation of murine embryonic stem cells.Romero, Jenny Andrea Arévalo 07 November 2017 (has links)
Stress Inducible Protein 1 (STIP1) é uma co-chaperonina crucial no desenvolvimento murino. Nesse contexto, estudamos as funções reguladas por STIP1 usando células-tronco embrionárias murinas (CTEm). Nosso estudo mostrou um papel regulador para STIP1 na via JAK/STAT3, incluindo os fatores de transcrição NANOG, OCT4 e SOX2, caracterizando STIP1 como agente regulador na auto-renovação e pluripotência em CTEm. Adicionalmente, STIP1 modula a diferenciação em CTEm, uma vez sua expressão é requerida na formação de corpos embrioides (EBs) normais. Adicionalmente, ensaios de formação de teratoma mostraram inibição na formação do tumor e defeitos na diferenciação já que a formação de tecidos do mesoderma foi favorecida. Além disso, foi revelada a importância de STIP1 na proliferação celular já que sua ausência afetou a função, a qual foi parcialmente resgatada com tratamento de STIP1 exógena. Desse modo, nosso trabalho revela um papel crucial para STIP1 nas CTEm, caracterizando novas funções na compreensão do papel da co-chaperonina no desenvolvimento inicial em mamíferos. / Stress Inducible Phosphoprotein 1 (STIP1) is a crucial co-chaperonin in mice development. In this context, we studied the functions regulated by STIP1 using murine embryonic stem cells (CTEm). Our study shows a regulatory role for STIP1 in JAK/STAT3 pathway, including the transcription factors NANOG, OCT4 and SOX2, characterizing STIP1 as a regulatory agent in self-renewal and pluripotency in CTEm. In addition, an essential role of STIP1 in differentiation was demonstrated since its expression is required in embryoid bodies (EBs) formation with appropriate size and morphology. Moreover, teratoma formation assays showed inhibited tumor formation and defects in differentiation when formation of mesoderm was favored. Furthermore, were revealed the importance of STIP1 in cell proliferation, since its absence affects the function which was partially rescued after treatment with exogenous STIP1. Thus, our work reveals a central role for STIP1 in CTEm, characterizing new functions to understand the biological role of the co-chaperonin in early mammalian development.
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Efeitos da resposta imune no curso da infecção de BALB/c, BALB/c nude e C57BL/6 e na expressão de proteínas específicas em formas amastigotas de L. amazonensis isolados de BALB/c E BALB/c nude. / Effects of the immune response in the course of infection in BALB/c, C57BL/6 and BALB/C nude mice and in the expression of specific proteins in L. amazonenses amastigotes from BALB/c and BALB/c nude.Velasquez, Leonardo Garcia 29 January 2015 (has links)
A leishmaniose é uma doença causada por parasitos do gênero Leishmania e transmitida por insetos flebotomíneos. O objetivo deste trabalho foi comparar o perfil da infecção por L. amazonenses em BALB/c, BALB/c nude e C57BL/6, e avaliar a expressão das proteínas CP, LACK, LRR17, metacaspase, PDI e STI, em amastigotas isolados de BALB/c e BALB/c nude. Observamos em 13 semanas o aumento mais precoce da espessura da pata em BALB/c do que em BALB/c nude. A carga parasitária nos animais nude foi superior à dos demais. Por outro lado, animais C57BL/6 controlaram a infecção a partir da sexta semana. A análise da expressão gênica nas lesões mostrou um padrão misto Th1/Th2 em todos os animais, e maior expressão de IFN-g, IL-4, IL1b e iNOS em BALB/c. Em baço e linfonodo observamos baixa expressão de CD3e e elevada expressão de iNOS em BALB/c nude. A análise por FACs mostrou em baço e linfonodo a esperada baixa porcentagem de células TCD4 e T CD8 em BALB/c nude, no entanto com capacidade de produzir IFN-g e IL-4. A LACK e a metacaspase estão aumentadas nos parasitas isolados de BALB/c nude. A metacaspase apresentou maior atividade também em nude. Não observamos diferença na expressão da LACK e metacaspase em amastigotas isolados de macrófagos infectados na presença de IFN-g e IL-4. / Leishmaniasis is caused by parasites of Leishmania genus, transmitted by phlebotomine sandflies. The aim of this study was to compare the profile of the infection by L. amazonenses in BALB/c, BALB/c nude and C57BL/6 and to analyze the expression of CP, LACK, LRR17, metacaspase, PDI and STI proteins, in amastigotes isolated from BALB/c and BALB/c nude lesions. We observed during 13 weeks an early increase in footpad thickness in BALB/c compared to BALB/c nude. Parasite loads in nude mice were higher than the others. C57BL/6 mice controlled infection since the sixth week. Gene expression analysis of the lesions indicated a mixed Th1/Th2 pattern in all mice, and higher expression of IFN-g, IL-4, IL1b and iNOS in BALB/c. In spleens and lymph nodes we observed lower expression of CD3e and high expression of iNOS in BALB/c nude. FACs analysis of spleens and lymph nodes showed low percentages of TCD4 and T CD8 cells in BALB/c nude, but producing IFN-g and IL-4. LACK and metacaspase are increased in parasites isolated from BALB/c nude, and metacaspase had higher enzymatic activity in amastigotes from nude. No differences in LACK or metacaspase in amastigotes isolated from macrophages infected in the presence of IFN-g and IL-4 were observed.
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