<p>UVOD: Tuberkuloza je odavno poznata bolest koja i danas u 21. veku jo&scaron; uvek predstavlja veliki javnozdravstveni problem, uprkos primeni moćnih antituberkuloznih lekova. Trećina svetske populacije inficirana je bacilom tuberkuloze. Svake godine oboli oko osam miliona, a umre oko dva miliona ljudi, zbog čega je tuberkuloza i dalje infektivno oboljenje sa najvećom stopom smrtnosti. Kasna dijagnoza, multirezistentna tuberkuloza i udruženost sa HIV infekcijom predstavljaju jednu od najvećih prepreka za efikasnu kontrolu ove bolesti u svetu. Rano otkrivanje se oslanja na kvalitetnu bakteriolo&scaron;ku dijagnostiku koja je kamen temeljac svakog nacionalnog programa za kontrolu tuberkuloze. Brza i tačna mikrobiolo&scaron;ka dijagnostika predstavlja osnovu programa kontrole tuberkuloze i zbog toga je uvođenje novih i brzih laboratorijskih testova od veoma velikog značaja. Razvijen je novi komercijalno dostupni imunohromatografski test koji se zasniva na detekciji antigena MPT64 glavnog sekretovanog proteina M. tuberculosis. Test je brz i pouzdan u identifikaciji izolovanih sojeva M. tuberculosis i jeftiniji je od konvencionalnih biohemijskih i molekularnih testova. CILJ: Ciljevi istraživanja su bili da se evaluiraju karakteristike novog brzog imunohromatografskog testa u identifikaciji mikobakterija izolovanih iz respiratornih uzoraka bolesnika sa tuberkulozom pluća i referentnih sojeva klinički značajnih vrsta netuberkuloznih mikobakterija (NTM). MATERIJAL I METODE: Istraživanje je sprovedeno u periodu od 1.1.2010. do 31.12.2013. i obuhvatilo je 43563 respiratornih uzoraka dobijenih od bolesnika hospitalizovanih u Institutu za plućne bolesti Vojvodine. Iz obrađenih respiratornih uzoraka izolovano je 3469 izolata mikobakterija. Identifikacija do nivoa vrste urađena je primenom standardnih biohemijskih testova, molekularnog testa (GenoType&reg; Mycobacterium) i imunohromatografskog testa (BDMGIT Tbc). U istraživanje je uključeno 100 sojeva Gram pozitivnih i Gram negativnih bakterija (n = 19 vrsta) izolovanih iz respiratornih kliničkih uzoraka. Identifikacija do nivoa vrste je potvrđena komercijalnim identifikacionim sistemima. REZULTATI: U toku četvorogodi&scaron;njeg istraživanja izolovano je 3469 izolata mikobakterija iz respiratornih uzoraka. U ispitivanom periodu ne postoji opadajući trend izolacije mikobakterija &scaron;to potvrđuje i koeficijent korelacije (r = 0,31). Svi izolati mikobakterija su identifikovani konvencionalnim biohemijskim ispitivanjima koja pokazuju da je 89% od svih izolata identifikovano kao Mycobacterium tuberculosis (M. tuberculosis), a 11% izolata kao NTM. Mycobacterium xenopi je bila najzastupljenija NTM vrsta identifikovana kod 55,3% izolata. Nakon biohemijske identifikacije kod 300 izolata M. tuberculosis i 100 izolata NTM, identifikacija je potvrđena komercijalno dostupnim molekularnim i imunohromatografskim testom. Na osnovu rezultata testiranja mikobakterija imunohromatografskim testom, senzitivnost, specifičnost, pozitivne i negativne prediktivne vrednosti bile su: 99,7%, 100%, 100% i 99%. U poređenju imunohromatografskog testa sa konvencionalnim biohemijskim ispitivanjima nije nađena statistički značajna razlika (p&gt; 0,5). Kappa vrednost testa je iznosila 0,993, a interval poverenja CI =0,98 &ndash; 1,00. U poređenju imunohromatografskog sa molekularnim testom vrednost kappa je iznosila 0,993, a interval poverenja CI = 0,98 &ndash; 1,00. Slaganje rezultata je potvrđeno i McNemar testom sa vredno&scaron;ću 0,99. Utvrđena je stabilnost sekretovanog antigena MPT64 i posle 5 godina od prvog testiranja. ZAKLJUČAK: Visoka senzitivnost i specifičnost imunohromatografskog testa omogućuju tačnu i preciznu identifikaciju M. tuberculosis kao i pouzdanu diferencijaciju M.tuberculosis od NTM &ndash; a. Imunohromatografski test može da predstavlja zamenu za konvencionalne biohemijske i molekularne testove u identifikaciji M. tuberculosis. Jeftiniji je, jednostavniji za izvođenje i brže se dobijaju rezultati čime seskraćuje vreme za postavljanje dijagnoze.</p> / <p>INTRODUCTION: Tuberculosis (TB) has been known as a disease for a long time, but nevertheless it represents a major public health issue even nowadays in the 21st century, despite potent antituberculous drugs applied. One third of the world population is infected by the TB bacillus. About eight million people get infected and two million die of tuberculosis in a year, so tuberculosis is still an infectious disease with the greatest mortality rate. Late diagnosis, multiresistant tuberculosis and concomitant HIV infection interfere mostly with an efficient control of the disease all over the world. Early TB detection largely depends on the high-quality bacteriological diagnostics, which is the corner stone of each national TB control programme. A fast and accurate microbiological TB diagnosis plays a crucial role in any TB control programme. It is therefore very important to introduce new and fast laboratory tests. A novel commercially available immunochromatographic test has been designed, based on the MPT64 antigen of the major M. tuberculosis &ndash; secreted protein. This is a rapid and reliable test to identify the isolated strains of M. tuberculosis, which is not expensive as conventional biochemical and molecular tests. OBJECTIVE: The objective of the investigation was to evaluate the new immunochromatographic rapid test to identify mycobacteria isolated from respiratory samples from pulmonary TB patients, and referential strains of clinically relevant species of nontuberculous mycobacteria (NTM). MATERIAL AND METHODS: The research was carried out in the period from 1st January, 2010 to 31st December, 2013. It included 43 563 respiratory samples obtained from the patients hospitalized in the Institute for Pulmonary Diseases of Vojvodina, Sremska Kamenica (Serbia). There were 3 469 mycobacterial isolates obtained from the processed respiratory samples. The species &ndash; level identification was performed by standard biochemical tests, the molecular test (GenoType&reg;Mycobacterium), and the immunochromatographic test (BD MGIT Tbc). The study included one hundred (100) of Gram positive and Gram negative bacteria (n = 19 species) isolated from respiratory clinical samples. The species &ndash; level identification was confirmed by commercial identification systems. RESULTS: During the four &ndash; year investigation, 3 469 mycobacterial isolates were obtained from respiratory samples. No declining tendency of mycobacterial isolation was registered in the examined period, as confirmed by the correlation coefficient (r = 0.31). All mycobacterial isolates were identified by conventional biochemical tests showing that 89% of all isolates were identified as M. tuberculosis, and 11% of the isolates as NTM. Mycobacterium xenopi was the most common NTM species identified in 55.3% of the isolates. Following the biochemical identification in 300 M. tuberculosis isolates and 100 NTM isolates, the identification was confirmed by commercially available molecular and immunochromatographic tests. Based on immunochromatographic testing of mycobacteria, the sensitivity, specificity, positive and negative predictive values of the test were 99.7%, 100%, 100% and 99% respectively. There is no statistically significant difference (p&gt; 0.5) when comparing features of immunochromatographic test with conventional biochemical assay. The kappa test value was 0.993, and the confidence interval CI = 0.98 &ndash; 1.00. Comparing the immunochromatographic with the molecular test, the kappa value was 0.993, and the confidence interval CI = 0.98 &ndash; 1.00. The congruence of the tests findings was also confirmed by the McNemar test, estimated to 0.99. The stability of the secreted MPT64 antigen was registered even five years after the first testing episode. CONCLUSION: The high sensitivity and specificity of the imunochromatographic test enable an accurate and precise identification of M. tuberculosis, as well as a reliable differentiation of M. tuberculosis from NTM. The immunochromatographic test may substitute conventional biochemical and molecular tests to identify M. tuberculosis. It is easier to perform and provides faster test results, thus reducing the time of establishing the diagnosis.</p>

Micobactérias não tuberculosas (MNT) são microrganismos ubíquos e reconhecidos como contaminantes de sistemas de água em estabelecimentos de assistência à saúde, bem como, dispositivos cirúrgicos e medicamentos injetáveis. Sua ocorrência representa uma emergência epidemiológica e sanitária, especialmente em pacientes submetidos a procedimentos cirúrgicos. Frente ao exposto, objetivou-se avaliar a produção do conhecimento científico acerca da ocorrência de infecções por MNT em pacientes submetidos a procedimentos cirúrgicos. A prática baseada em evidências representou o referencial teórico-metodológico e, como recurso para obtenção destas evidências utilizou-se a revisão integrativa da literatura nas bases de dados Lilacs, Medline/Pubmed, ISI Web of Science e Biblioteca Cochrane. Totalizaram-se 24 publicações nos últimos trinta anos, com 15 (62,5%) no idioma inglês, os demais no português. No que se refere ao delineamento dos estudos, observou-se que os mais frequentes foram: 29,2% relatos de caso, 20,8% estudos transversais e 12,5% estudos metodológicos e quaseexperimentais. A análise dos estudos culminou em três categorias temáticas sendo 08 (33,3%) relacionadas aos tipos de cirurgias, 07 (29,2%) sobre identificação das espécies por métodos microbiológicos e/ou moleculares e 09 (37,5%) medidas de prevenção e controle. Ainda como subcategorias têm-se: a vigilância pós-alta, terapêutica com antibióticos e uso de glutaraldeído. Entre os microrganismos destacam-se com 37,5% Mycobacterium chelonae, 33,3%, M. abscessus e 25% M. fortuitum. Cirurgias oftalmológicas, estéticas, cardíacas e procedimentos laparoscópicos e artroscópicos foram as mais investigadas. Diante do contexto terapêutico, a indicação é realizada empiricamente ao longo prazo, podendo incluir desbridamento cirúrgico de tecidos infectados. Na panorâmica da identificação das espécies, a eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) é considerada padrão-ouro devido seu alto poder discriminatório de algumas cepas bacterianas, porém com limitações. Com base nas publicações analisadas, conclui-se que não se tem um panorama nacional talvez pela inoperância do sistema de vigilância pós-alta, inexistência de critérios clínicos e bacteriológicos uniformizados em todo o território e, também pela falta de integração entre a clínica e o laboratório. Adiciona-se que aplicação de metodologias moleculares possibilitaria definir a diversidade das espécies de micobactérias que não puderam ser identificadas pelos métodos clássicos. Uma publicação sobre a situação nacional das MNTs em cirurgias é fundamental para a uma conduta correta no diagnóstico e tratamento de micobacterioses. / Nontuberculous mycobacteria (NTM) are ubiquitous microorganisms recognized as contaminants of water systems in health care services, as well as surgical devices and injectable medications. Its occurrence represents an epidemiological and sanitary emergency, especially in patients subject to surgical procedures. This study aimed to evaluate the production of scientific knowledge on the occurrence of infections caused by NTM in patients subject to surgical procedures. Evidence-based practice was the theoreticalmethodological framework used, and integrative literature review was used to obtain evidences in the following databases: Lilacs, Medline/Pubmed, ISI Web of Science and Cochrane Library. In total, 24 publications were found in the last thirty years, being 15 (62.5%) in english and the others in portuguese. Regarding the design of the studies, most (29,2%) were case reports, (20,8%) cross-sectional studies and (12,5%) methodological and quasi-experimental studies. The analysis of the studies resulted in three thematic categories: 08 (33.3%) types of surgery, 07 (29.2%) identification of the species by microbiological and/or molecular methods and 09 (37.5%) prevention and control measures. The following subcategories were identified in prevention and control: vigilance after discharge, therapy with antibiotics and use of glutaral. The most researched surgeries were ophthalmologic, aesthetic, cardiac and laparoscopy and arthroscopy. The presence of the following microorganisms is highlighted: Mycobacterium chelonae (37.5%), M. abscessus (29.2%) and M. fortuitum (25%). Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) is considered gold-standard in the identification of certain bacterial strains. The use of molecular techniques permits to define the diversity of the species of mycobacteria that cannot be identified by the classical methods. Regarding the therapy, in general the indication is empirically determined in long-term, and can include surgical debridement of infected tissues. Based on the analyzed publications, it is concluded that there is not a national panorama, either due to the failure of the surveillance system after discharge, the lack of clinical and bacteriological criteria uniform for the entire country or the lack of integration between clinics and laboratories.

A tuberculose é uma doença crônica granulomatosa caracterizada por um déficit de imunidade antígeno específica do hospedeiro, cuja resposta imune é ativamente regulada por citocinas. No Brasil há mais de 50 milhões de habitantes infectados pelo Mycobacterium tuberculosis. O objetivo foi avaliar a linfoproliferação e a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico (PBMC) estimuladas por quatro diferentes antígenos do M. tuberculosis, um complexo, o antígeno sonicado, e três purificados, ESAT-6, antígeno 85B e antígeno HBHA, eventuais candidatos à vacina anti-tuberculose. Para avaliação da produção de IFN-g e IL-10 foram utilizados dois métodos: Elispot e Elisa à partir de sobrenadante de cultura de PBMC. Para essas avaliações, os pacientes com tuberculose ativa (TB-A) foram comparados a dois subgrupos de indivíduos controles. O primeiro subgrupo foi constituído por indivíduos saudáveis PPD+ e o segundo por indivíduos curados de um episódio de tuberculose (TB-C). Nossos resultados de linfoproliferação e de Elisa revelaram diminuição da resposta linfoproliferativa e da produção de IFN-g dos pacientes em comparação com os indivíduos PPD+, enquanto os indivíduos TB-C apresentaram em geral resultados intermediários. Observou-se também que as respostas à PHA não diferiam significativamente entre os grupos, ressaltando a natureza antígeno específica da hiporreatividade na tuberculose. Adicionalmente, verificamos maior reatividade ao antígeno complexo, sonicado, que aos antígenos purificados, e entre estes, a reatividade foi maior para ESAT-6 e 85B que para HBHA, A resposta ao HBHA pode ter sido eventualmente subestimada por razões técnicas, como utilização de dose sub-ótima ou perda da atividade biológica. Em relação ao Elispot para IFN-g, não pudemos observar diferenças entre os grupos, tanto quando se considerou o número total de spots, como quando se contou apenas spots com diâmetro > 65 mm, apresentando portanto uma sensibilidade aparentemente menor comparado aos outros 2 métodos. A comparação entre os métodos revelou pouca correlação entre seus resultados, que pode ser eventualmente explicado pela diferente contribuição das populações celulares (T CD4+ e T CD8+) para cada uma das provas munológicas. Finalmente, a análise da produção de IL-10 medida por Elisa no sobrenadante de cultura e por spots de IL10, também não revelou diferenças entre os grupos. Convém notar que o Elisa detectou baixas concentrações de IL-10 nos sobrenadantes, porém o Elispot demonstrou número elevado de spots e boa correlação entre as resposta aos antígenos. Em conclusão, nossos resultados sugerem que métodos \'clássicos\', e já estabelecidos, como linfoproliferação e Elisa, persistem válidos para se avaliar a imunidade celular, e que em nossas condições laboratoriais, a técnica de Elispot não representou, até o momento, uma melhora na qualidade da avaliação imunológica. / Tuberculosis is a chronic granulomatous disease characterized by a deficit of the antigen-specific immunity of the host, whose immune response is actively regulated by cytokines. In Brazil there are 50 million people infected with Mycobacterium tuberculosis. The objective of the present work was to evaluate the lymphoproliferative response e the IFN-g response by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) indiced with 4 different antigens isolated from Mycobacterium tuberculosis: a complex, crude, the sonicate antigen, and 3 other, purified ones, Esat-6, 85B, and HBHA, the last 3 eventual candidates to the design of a vaccine against tuberculosis. We used 2 methods to evaluate the IFN-g and IL-10 productions, namely Elispot and Elisa of supernatant of PBMC cultures. We studied a group of active tuberculosis patients (TB-A), and compared them with controls individuals comprising 2 groups, one made of healthy PPD+ individuals and the second one of individuals who have been cured from an episode of tuberculosis in the past (TB-C). Our results of lymphoproliferation and Elisa revealed decrease in the lymphoproliferative and IFN-g responses by patients\' PBMC as compared to the PPD+ group, with the TB-C group in general presenting intermediate results. We also observed that the responses to the mitogen PHA were not statisically different among the groups, denoting the antigen-specific nature of the immune deficit in tuberculosis. In addition, we verified that stronger reactivity to the complex antigen than with the purified antigens, and, among the latter, the reactivity was stronger with Esat-6 and 85B as compared to HBHA, Reactivity to HBHA may have been understimated due to technical reasons, such as loss of .the biological activity of the molecule or use of a sub-optimal dose. By using the Elispot for IFN-g we were not able to detect differences among the groups, even when we counted all spots formed or spots with more than > 65 mm in diameter. Thus our Elispot for IFN-g apparently showed lower sensitivity than the other 2 methods. Furthermore, comparisons between the methods revealed low correlation between their results, a finding that may be explained by the differning contribution of different subpopulations (T CD4+ and T CD8+) to each of the results. Finally, analysis of the production of IL-10 as measured by Elisa in the culture supernatants as well as by Elispot revealed no differences among the groups. It is noteworthy that the levels of IL-10 detected by Elisa were low, but the Elispot revealed high number of spots and a good correlation between the antigen responses. In conclusion, we may say that our well standardized \'classical\' methods Elisa and lymphoproliferation persist useful to evaluate cellular immunity responses, and that the Elispot technique, up to now and in our laboratorial conditions, did not represent an improvement in the quality of the immunological evaluation.

Micobactérias não tuberculosas (MNT) são microrganismos ubíquos e reconhecidos como contaminantes de sistemas de água em estabelecimentos de assistência à saúde, bem como, dispositivos cirúrgicos e medicamentos injetáveis. Sua ocorrência representa uma emergência epidemiológica e sanitária, especialmente em pacientes submetidos a procedimentos cirúrgicos. Frente ao exposto, objetivou-se avaliar a produção do conhecimento científico acerca da ocorrência de infecções por MNT em pacientes submetidos a procedimentos cirúrgicos. A prática baseada em evidências representou o referencial teórico-metodológico e, como recurso para obtenção destas evidências utilizou-se a revisão integrativa da literatura nas bases de dados Lilacs, Medline/Pubmed, ISI Web of Science e Biblioteca Cochrane. Totalizaram-se 24 publicações nos últimos trinta anos, com 15 (62,5%) no idioma inglês, os demais no português. No que se refere ao delineamento dos estudos, observou-se que os mais frequentes foram: 29,2% relatos de caso, 20,8% estudos transversais e 12,5% estudos metodológicos e quaseexperimentais. A análise dos estudos culminou em três categorias temáticas sendo 08 (33,3%) relacionadas aos tipos de cirurgias, 07 (29,2%) sobre identificação das espécies por métodos microbiológicos e/ou moleculares e 09 (37,5%) medidas de prevenção e controle. Ainda como subcategorias têm-se: a vigilância pós-alta, terapêutica com antibióticos e uso de glutaraldeído. Entre os microrganismos destacam-se com 37,5% Mycobacterium chelonae, 33,3%, M. abscessus e 25% M. fortuitum. Cirurgias oftalmológicas, estéticas, cardíacas e procedimentos laparoscópicos e artroscópicos foram as mais investigadas. Diante do contexto terapêutico, a indicação é realizada empiricamente ao longo prazo, podendo incluir desbridamento cirúrgico de tecidos infectados. Na panorâmica da identificação das espécies, a eletroforese em gel de campo pulsado (PFGE) é considerada padrão-ouro devido seu alto poder discriminatório de algumas cepas bacterianas, porém com limitações. Com base nas publicações analisadas, conclui-se que não se tem um panorama nacional talvez pela inoperância do sistema de vigilância pós-alta, inexistência de critérios clínicos e bacteriológicos uniformizados em todo o território e, também pela falta de integração entre a clínica e o laboratório. Adiciona-se que aplicação de metodologias moleculares possibilitaria definir a diversidade das espécies de micobactérias que não puderam ser identificadas pelos métodos clássicos. Uma publicação sobre a situação nacional das MNTs em cirurgias é fundamental para a uma conduta correta no diagnóstico e tratamento de micobacterioses. / Nontuberculous mycobacteria (NTM) are ubiquitous microorganisms recognized as contaminants of water systems in health care services, as well as surgical devices and injectable medications. Its occurrence represents an epidemiological and sanitary emergency, especially in patients subject to surgical procedures. This study aimed to evaluate the production of scientific knowledge on the occurrence of infections caused by NTM in patients subject to surgical procedures. Evidence-based practice was the theoreticalmethodological framework used, and integrative literature review was used to obtain evidences in the following databases: Lilacs, Medline/Pubmed, ISI Web of Science and Cochrane Library. In total, 24 publications were found in the last thirty years, being 15 (62.5%) in english and the others in portuguese. Regarding the design of the studies, most (29,2%) were case reports, (20,8%) cross-sectional studies and (12,5%) methodological and quasi-experimental studies. The analysis of the studies resulted in three thematic categories: 08 (33.3%) types of surgery, 07 (29.2%) identification of the species by microbiological and/or molecular methods and 09 (37.5%) prevention and control measures. The following subcategories were identified in prevention and control: vigilance after discharge, therapy with antibiotics and use of glutaral. The most researched surgeries were ophthalmologic, aesthetic, cardiac and laparoscopy and arthroscopy. The presence of the following microorganisms is highlighted: Mycobacterium chelonae (37.5%), M. abscessus (29.2%) and M. fortuitum (25%). Pulsed-field gel electrophoresis (PFGE) is considered gold-standard in the identification of certain bacterial strains. The use of molecular techniques permits to define the diversity of the species of mycobacteria that cannot be identified by the classical methods. Regarding the therapy, in general the indication is empirically determined in long-term, and can include surgical debridement of infected tissues. Based on the analyzed publications, it is concluded that there is not a national panorama, either due to the failure of the surveillance system after discharge, the lack of clinical and bacteriological criteria uniform for the entire country or the lack of integration between clinics and laboratories.

A tuberculose é uma doença crônica granulomatosa caracterizada por um déficit de imunidade antígeno específica do hospedeiro, cuja resposta imune é ativamente regulada por citocinas. No Brasil há mais de 50 milhões de habitantes infectados pelo Mycobacterium tuberculosis. O objetivo foi avaliar a linfoproliferação e a produção de citocinas por células mononucleares do sangue periférico (PBMC) estimuladas por quatro diferentes antígenos do M. tuberculosis, um complexo, o antígeno sonicado, e três purificados, ESAT-6, antígeno 85B e antígeno HBHA, eventuais candidatos à vacina anti-tuberculose. Para avaliação da produção de IFN-g e IL-10 foram utilizados dois métodos: Elispot e Elisa à partir de sobrenadante de cultura de PBMC. Para essas avaliações, os pacientes com tuberculose ativa (TB-A) foram comparados a dois subgrupos de indivíduos controles. O primeiro subgrupo foi constituído por indivíduos saudáveis PPD+ e o segundo por indivíduos curados de um episódio de tuberculose (TB-C). Nossos resultados de linfoproliferação e de Elisa revelaram diminuição da resposta linfoproliferativa e da produção de IFN-g dos pacientes em comparação com os indivíduos PPD+, enquanto os indivíduos TB-C apresentaram em geral resultados intermediários. Observou-se também que as respostas à PHA não diferiam significativamente entre os grupos, ressaltando a natureza antígeno específica da hiporreatividade na tuberculose. Adicionalmente, verificamos maior reatividade ao antígeno complexo, sonicado, que aos antígenos purificados, e entre estes, a reatividade foi maior para ESAT-6 e 85B que para HBHA, A resposta ao HBHA pode ter sido eventualmente subestimada por razões técnicas, como utilização de dose sub-ótima ou perda da atividade biológica. Em relação ao Elispot para IFN-g, não pudemos observar diferenças entre os grupos, tanto quando se considerou o número total de spots, como quando se contou apenas spots com diâmetro > 65 mm, apresentando portanto uma sensibilidade aparentemente menor comparado aos outros 2 métodos. A comparação entre os métodos revelou pouca correlação entre seus resultados, que pode ser eventualmente explicado pela diferente contribuição das populações celulares (T CD4+ e T CD8+) para cada uma das provas munológicas. Finalmente, a análise da produção de IL-10 medida por Elisa no sobrenadante de cultura e por spots de IL10, também não revelou diferenças entre os grupos. Convém notar que o Elisa detectou baixas concentrações de IL-10 nos sobrenadantes, porém o Elispot demonstrou número elevado de spots e boa correlação entre as resposta aos antígenos. Em conclusão, nossos resultados sugerem que métodos \'clássicos\', e já estabelecidos, como linfoproliferação e Elisa, persistem válidos para se avaliar a imunidade celular, e que em nossas condições laboratoriais, a técnica de Elispot não representou, até o momento, uma melhora na qualidade da avaliação imunológica. / Tuberculosis is a chronic granulomatous disease characterized by a deficit of the antigen-specific immunity of the host, whose immune response is actively regulated by cytokines. In Brazil there are 50 million people infected with Mycobacterium tuberculosis. The objective of the present work was to evaluate the lymphoproliferative response e the IFN-g response by peripheral blood mononuclear cells (PBMC) indiced with 4 different antigens isolated from Mycobacterium tuberculosis: a complex, crude, the sonicate antigen, and 3 other, purified ones, Esat-6, 85B, and HBHA, the last 3 eventual candidates to the design of a vaccine against tuberculosis. We used 2 methods to evaluate the IFN-g and IL-10 productions, namely Elispot and Elisa of supernatant of PBMC cultures. We studied a group of active tuberculosis patients (TB-A), and compared them with controls individuals comprising 2 groups, one made of healthy PPD+ individuals and the second one of individuals who have been cured from an episode of tuberculosis in the past (TB-C). Our results of lymphoproliferation and Elisa revealed decrease in the lymphoproliferative and IFN-g responses by patients\' PBMC as compared to the PPD+ group, with the TB-C group in general presenting intermediate results. We also observed that the responses to the mitogen PHA were not statisically different among the groups, denoting the antigen-specific nature of the immune deficit in tuberculosis. In addition, we verified that stronger reactivity to the complex antigen than with the purified antigens, and, among the latter, the reactivity was stronger with Esat-6 and 85B as compared to HBHA, Reactivity to HBHA may have been understimated due to technical reasons, such as loss of .the biological activity of the molecule or use of a sub-optimal dose. By using the Elispot for IFN-g we were not able to detect differences among the groups, even when we counted all spots formed or spots with more than > 65 mm in diameter. Thus our Elispot for IFN-g apparently showed lower sensitivity than the other 2 methods. Furthermore, comparisons between the methods revealed low correlation between their results, a finding that may be explained by the differning contribution of different subpopulations (T CD4+ and T CD8+) to each of the results. Finally, analysis of the production of IL-10 as measured by Elisa in the culture supernatants as well as by Elispot revealed no differences among the groups. It is noteworthy that the levels of IL-10 detected by Elisa were low, but the Elispot revealed high number of spots and a good correlation between the antigen responses. In conclusion, we may say that our well standardized \'classical\' methods Elisa and lymphoproliferation persist useful to evaluate cellular immunity responses, and that the Elispot technique, up to now and in our laboratorial conditions, did not represent an improvement in the quality of the immunological evaluation.