Thesis (Ph.D. in Immunology) -- University of Colorado at Denver and Health Sciences Center, 2006. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 182-208). Free to UCDHSC affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

Dissertation (Ph.D.) -- University of Texas Southwestern Medical Center at Dallas, 2006. / Vita. Bibliography: p.148-174

Thesis (M.S.)--University of Missouri--Columbia, 2004. / "May 2004." Typescript. Includes bibliographical references (leaves 97-111). Also issued on the Internet.

Thesis (M.Sc.)--University of Alberta, 2010. / A thesis submitted to the Faculty of Graduate Studies and Research in partial fulfillment of the requirements for the degree of Master of Science in Physiology. Title from pdf file main screen (viewed on February 16, 2010). Includes bibliographical references.

Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2009. / Title from first page of PDF file. Includes vita. Includes bibliographical references (p. 139-156).

Thesis (Ph.D. in Neuroscience) -- University of Colorado at Denver and Health Sciences Center, 2005. / Typescript. Includes bibliographical references (leaves 110-128). Free to UCDHSC affiliates. Online version available via ProQuest Digital Dissertations;

TonEBP, la proteína que se une al elemento regulatorio que responde a tonicidad “TonE” es el único factor transcripcional conocido de eucariontes que responde a cambios de la osmolaridad extracelular. Este factor transcripcional pertenece a la familia Rel, al igual que NFAT1-5 y NFκB. TonEBP también se conoce como NFAT5 y se ha asociado al mecanismo de adaptación celular a condiciones de hiperosmolaridad, regulando la expresión de genes que codifican para aldosa reductasa y para los transportadores de taurina, mio-inositol y betaina. Todas estas proteínas regulan los niveles de osmolitos intracelulares compatibles asociados al control del volumen celular. El corazón es un órgano que normalmente no está sujeto a cambios osmóticos excepto durante isquemia-reperfusión, coma diabético y shock séptico. La capacidad de regular el volumen celular se ha vinculado a la sobrevida celular en condiciones de estrés hiperosmótico. Por lo tanto, la capacidad de las células cardíacas de regular el volumen celular, podría ser un factor de sobrevida en patologías como el infarto al miocardio. En nuestro Laboratorio, se describió previamente que TonEBP está presente en los cardiomiocitos y que responde al estrés hiperosmótico. Además, se demostró que el estrés hiperosmótico induce la masa y la actividad de aldosa reductasa con acumulación intracelular de sorbitol, y que la muerte inducida por estrés hiperosmótico es mediada por esta enzima. La activación de TonEBP induce un aumento de los niveles y actividad de aldosa reductasa que mediaría la muerte de los cardiomiocitos inducida por estrés hiperosmótico. Sin embargo, ratones knock out para TonEBP muestran una severa atrofia de su médula renal, incremento de la sensibilidad de sus timocitos al estrés hiperosmótico e incremento de la fragmentación del DNA en células de la fibra del lente, indicando que TonEBP tendría un efecto protector frente al daño inducido por estrés hiperosmótico. Por lo tanto, de estos resultados se deduce que existiría una contradicción entre los datos descritos en la literatura y nuestros hallazgos sobre el papel de TonEBP en la sobrevida celular. La hipótesis de la presente tesis es “TonEBP media la adaptación del cardiomiocito a la hiperosmolaridad generada por isquemia cardiaca”. Los objetivos específicos son: • Caracterizar el mecanismo de muerte inducida por estrés osmótico. • Determinar si el factor de transcripción TonEBP se activa bajo condiciones de isquemia cardiaca in vivo e in vitro. • Determinar el efecto directo de TonEBP en la viabilidad del cardiomiocito. • Evaluar si TonEBP protege a los cardiomiocitos de la muerte inducida por hiperosmolaridad Como modelo experimental se utilizaron cultivos primarios de cardiomiocitos de ratas neonatas expuestos a estrés hiperosmótico en presencia y en ausencia de la sobreexpresión adenoviral de TonEBP tipo silvestre (wtTonEBP) o TonEBP dominante negativo (dnTonEBP). Además se utilizaron modelos experimentales de infarto al miocardio por ligación de la arteria coronaria descendente anterior y de sobreexpresión in vivo de wtTonEBP y dnTonEBP por transducción intracardíaca de adenovirus. El estrés hiperosmótico indujo muerte de los cardiomiocitos por un mecanismo que involucra aumento entrada de Ca2+ a través de un canal de Ca2+ tipo L, aumento de los niveles citoplasmáticos y mitocondriales de Ca2+, depolarización de la mitocondria y reducción de los niveles intracelulares de ATP. Además se detectó liberación de citocromo c pero no del factor inductor de apoptosis (AIF), desde la mitocondria, con activación secuencial de procaspasa 9 y procaspasa 3. Sin embargo, se determinó que la muerte de los cardiomiocitos inducida por sorbitol 600 mOsm correspondía a una apoptosis independiente de caspasas, ya que el pretratamiento con el inhibidor general de caspasas Z VAD fmk, no previno la muerte inducida por estrés hiperosmótico. En un modelo de infarto al miocardio se detectó un aumento de los niveles proteicos de TonEBP en el sitio vecino al infarto a los 2 días post cirugía. Este mismo aumento se detectó en cultivos in vitro de cardiomiocitos sometidos a 30 o 60 min de isquemia simulada seguida de 4 u 8 h de reperfusión. Estos resultados sugieren que la isquemia induce a TonEBP. Debido a que no existen inhibidores y/o activadores farmacológicos para TonEBP se construyeron adenovirus que sobrexpresaban wtTonEBP (Ad wtTonEBP) y dnTonEBP (Ad dnTonEBP). Determinando los niveles proteicos de aldosa reductasa, un blanco transcripcional de TonEBP, se demostró que ambos adenovirus eran funcionales en cardiomiocitos. Estos experimentos demostraron que la sobreexpresión de wtTonEBP aumentó los niveles proteicos de â-actina en forma dependiente de la dosis viral mientras que disminuyó los niveles de la cadena pesada de la β-miosina (β-MHC). La sobreexpresión del dnTonEBP tuvo un efecto contrario al wtTonEBP en los niveles proteicos de β-actina y β-MHC. El aumento de los niveles proteicos de βctina inducida por la sobreexpresión de wtTonEBP se acompañó de una reorganización del citoesqueleto de actina, visualizada por inmunocitoquímica usando faloidina-rodamina. La sobreexpresión de wtTonEBP, pero no de dnTonEBP, indujo muerte de los cardiomiocitos, principalmente por necrosis. Los niveles de necrosis dependieron del nivel de sobreexpresión de wtTonEBP y del tiempo de transducción adenoviral. La transducción adenoviral por inoculación intracardíaca de Ad wtTonEBP y Ad dnTonEBP mostró que Ad dnTonEBP indujo mortalidad en 3 de los 8 animales transducidos, efecto que no se detectó en ratas transducidas con Ad wtTonEBP y Ad LacZ (control). Este resultado sugiere que TonEBP cumpliría alguna función importante en el corazón. Utilizando una multiplicidad de infección de 1000, dosis viral que no inducía muerte celular, se mostró que la sobreexpresión de tanto de wtTonEBP como del dnTonEBP no protegieron a los cardiomiocitos de la muerte inducida por estrés hiperosmótico. La sobreexpresión de ambas proteínas tampoco indujo un cambio en el mecanismo de muerte, apoptosis o necrosis, inducida por estrés hiperosmótico. Se determinó que la muerte inducida por sobreexpresión de wtTonEBP no dependía de la sobreactivación de aldosa reductasa, ya que un inhibidor específico de aldosa reductasa, zopolrestat, no atenuó la muerte inducida por Ad wtTonEBP. Esta muerte tampoco se asemejó al colapso metabólico detectado al someter a los cardiomiocitos a sorbitol 600 mOsm, ya que no se observó disminución de los niveles intracelulares de ATP. Finalmente, los datos obtenidos en esta tesis permiten concluir que el infarto o la isquemia/reperfusión in vitro induce a TonEBP, pero la sobreexpresión de este factor transcripción no está asociada con la protección de los cardiomiocitos al estrés hiperosmótico, sino más bien es un inductor de muerte celular por necrosis.

Made available in DSpace on 2015-07-22T20:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2009-03-25 / O retalho cutâneo é um procedimento cirúrgico freqüente na cirurgia plástica, essencialmente nas perdas de substâncias, sendo fundamental na reconstrução funcional e estética de deformidades traumáticas, congênitas ou de origem neoplásica. A insuficiência arterial do retalho é a principal complicação que, se duradoura, pode levar à necrose. O laser de baixa intensidade tem merecido destaque por promover aumento da microcirculação, aceleração do processo cicatricial de feridas e neoformação vascular. Objetivo: Investigar a Potência do laser de baixa intensidade na viabilidade do retalho cutâneo randômico, em ratos. Métodos: Trinta e seis animais foram distribuídos aleatoriamente em grupo controle; grupo tratado com potência de 30mW e grupo tratado com potência de 60mW. Em ambos os grupos tratados foram utilizados a fluência de 3J/cm2. O retalho cutâneo foi realizado nos animais com uma barreira plástica interposta entre o retalho e o leito doador. A irradiação laser foi aplicada imediatamente após a operação e nos dias 1, 2, 3 e 4 após a operação. As porcentagens das áreas de necroses dos retalhos foram calculadas no 7º dia pós-operatório. Adicionalmente, 4 fragmentos de cada retalho foram coletados para calcular a densidade vascular segundo método bidimensional. Resultados: Os animais tratados mostraram a área de necrose estatisticamente menor do que o grupo controle (53 por cento). A necrose nos grupos tratados foi 24 por cento (grupo 30mW) e 25 por cento (grupo 60mW). Quanto à densidade vascular, os animais tratados demonstraram aumento estatisticamente significante em relação ao grupo controle (37 por cento), O grupo 30mW apresentou 57 por cento de densidade vascular e o grupo 60mW apresentou 59 por cento. Conclusão: O laser de baixa intensidade foi eficaz no aumento da viabilidade do retalho cutâneo randômico, não havendo diferenças entre as potências utilizadas / Background and Objectives: Potency values in low level laser therapy (LLLT) are not well defined. This present study was designed to assess the effects of LLLT with output power of 30 and 60mW, in the viability of a random skin flap in rats. Methods: Thirty six wistar rats were randomically divided in three groups: control (CG), was not irradiated; 30 mW potency (30mW) and 60 mW potency (60mW). In both treated groups a fluency of 3J/cm2 was used. Two minutes after elevation of a random pattern, cranially based, dorsal flap (4 x 10 cm), laser irradiation was applied and repeated on the first, second, third and fourth postoperative days. Percentages of flap necrosis were calculated on the seventh postoperative day. Also, four fragments of each flap were collected in order to allow determination of the percentages of vascular density, according to bidimensional method the blood vessels morphometric analysis. Statistical analysis included Wilcoxon’s test and Kruskal Wallis’ variance analysis. A significance level of 5 % was elected (p ≤ 0.005). Results: Laser treated animals presented significantly less necrosis than control rats (CG = 53 % x 30G = 24 %; p <0.05) (CG x 60G = 25 %; p < 0.05). No difference was found between laser treated animals. Also, laser treated animals presented significantly more vascular density than control rats (CG = 37 % x 30G = 57 %; p <0.05) (CG x 60G = 59 %; p < 0.05). No difference was found between laser treated animals. Conclusion: Low level laser with potency of 30 and 60mW, increased the viability of a random skin flap in rats. / TEDE / BV UNIFESP: Teses e dissertações

Submitted by Ana Maria Fiscina Sampaio (fiscina@bahia.fiocruz.br) on 2012-09-04T17:32:14Z No. of bitstreams: 1 Vanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf: 1637760 bytes, checksum: 53a0a5f0c495bc04a29d54e8f4415870 (MD5) / Made available in DSpace on 2012-09-04T17:32:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Vanessa Investigacao do efeito cititóxico....pdf: 1637760 bytes, checksum: 53a0a5f0c495bc04a29d54e8f4415870 (MD5) Previous issue date: 2011 / Fundação Oswaldo Cruz. Centro de Pesquisas Gonçalo Moniz. Salvador, Bahia, Brasil / Investigar a capacidade antitumoral do extrato metanólico de Bixa orellana em células neoplásicas de Glioblastoma multiforme (GL-15) e Glioma murino (C6), sem toxicidadade para as células astrocitárias normais in vitro. Métodos e resultados: Caracterização do extrato por espectrofotometria por absorção de luz visível apresentou picos em 286, 363 e 435 nm. Determinou-se os teores de bixina e compostos fenólicos – 0,17 mg/mg e 0,05 mg por equivalência de pirogalol/mg de extrato seco, respectivamente. A citoxicidade foi investigada pelo teste de Brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolium. A Mínima Concentração Citotóxica (MCC) para GL-15 foi 180 e 80 μg/mL para C6, para astrócitos foi 240 μg/mL, após 48 horas de tratamento. O teste de exclusão com azul tripan confirmou a EC50 para GL-15 após 24 horas. A análise morfológica foi realizada por microscopia de contrataste de fase e fluorescência. Comprovou-se a diminuição de células neoplásicas e alterações celulares na MCC em astrócitos. A capacidade de fluorescência foi comprovada em GL-15. A citotoxicidade não depletou GSH. Investigou-se alterações de ciclo celular e morte celular por citometria de fluxo. Alterações de ciclo celular não foram evidenciadas. O tipo de morte celular foi investigado com marcação para anexina V e Iodeto de Propídio comprovou morte por necrose em GL-15 e por apoptose tardia em C6, os astrócitos apresentaram valores pequenos de morte por apoptose tardia e necrose. Conclusão: Os dados indicam um potencial antitumoral das substâncias presentes neste extrato para células neoplásicas sem ser tóxico para células normais. / This work investigated the hypothesis that the methanol extract of Bixa orellana decreases the viability of GL-15 and C6 cells, without being toxic to normal astrocytes in vitro. Methods: The methanol extract of B. orellana seeds was obtained and characterized by UV-Vis spectrophotometry. The cytotoxic effects were assayed in vitro using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)- 2,5-diphenyltetrazolium bromide method. The cell morphology was investigated by phase contrast and fluorescence microscopy. The depletion of reduced glutathione (GSH) was observed by fluorescence microscopy. The effects on cell cycle and the mode of cell death was studied by flow cytometry. Results: The contents of bixin and phenol were 0.17 mg/mg of extract and 0.05 mg of pyrogallol equivalent/mg of extract, respectively. Three peaks were observed at 286, 363, and 435 nm. The extract killed cells in a dose-dependent manner. The minimum cytotoxic concentrations in the two tumoral cells (GL-15 and C6) were respectively: 180 μg/mL and 80 μg/mL, meanwhile in astrocytes it was 240 μg/mL after 48 hours. The trypan blue assay confirmed the cytotoxic effect to GL-15 cells. Morphological degeneration of treated glioma cells was observed. The same was observed with astrocytes, but at a higher concentration. Treated cells became fluorescent, probably due to incorporation of bixin. The treatment neither depleted GSH, nor interfered on the cell cycle. The main kind of cell death was necrosis. Conclusions: Compounds present in B. orellana seeds are potentially cytotoxic to glioma cells, meanwhile primary astrocytes are more resistant.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:31:23Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-01-19Bitstream added on 2014-06-13T20:01:50Z : No. of bitstreams: 1 cunha_phj_dr_botfmvz.pdf: 906459 bytes, checksum: 1c46d15a3567c37751ba16d75a76cb82 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / O objetivo da tese foi de verificar os achados clínicos e laboratoriais da polioencefalomalacia (PEM) em bovinos ocasionada pela ingestão de dieta com alto teor de enxofre ou pelo herpesvírus bovino 5 (BoHV-5). No primeiro estudo realizouse indução de PEM pelo consumo excessivo de enxofre. Foram utilizados 10 bezerros, sendo que quatro bovinos ingeriram ração sem sulfato de sódio (G1), enquanto seis consumiram ração com sulfato de sódio (G2). Exames físicos e laboratoriais (hemograma, fibrinogênio plasmático e proteína plasmática, pH fluido ruminal, concentração do sulfeto de hidrogênio ruminal, líquido cerebrospinal e histopatológico) foram realizados. Um bezerro do grupo G2 apresentou sinais neurológicos e em todos do mesmo grupo detectou-se elevados valores de sulfeto de hidrogênio ruminal. Histologicamente as principais alterações observadas foram necrose neuronal cortical e lesões hemorrágicas nos núcleos basais, tálamo, mesencéfalo, ponte e bulbo. A ingestão de dieta com alto teor de enxofre (0,52%) induziu PEM nos bezerros. No segundo estudo foi realizada inoculação experimental em seis bezerros com o BoHV-5 pela via intranasal com instilação de 0,5mL do inóculo em cada narina, totalizando a dose viral de 107,2 DICT50/mL. Durante 30 dias pós-infecção foram realizados exames físicos e os mesmos testes laboratoriais descritos no primeiro artigo. Foi investigada a presença do vírus em seis porções do encéfalo, no gânglio do trigêmeo e no líquido cefalorraquidiano (LCR) pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Um bezerro apresentou sinais de encefalopatia. Pleocitose foi identificada no bezerro sintomático e nos assintomáticos. No exame histopalógico notou-se necrose cerebrocortical, encefalite e meningite não supurativa. A infecção experimental com o BoHV-5 ocasionou PEM nos bezerros, podendo ser assintomática. / The aim of this thesis was to verify clinical and laboratorial aspects of polioencephalomalacia (PEM) in cattle caused by excess sulphur intake or by bovine herpesvirus 5 (BoHV-5). The first paper describes an experimental model to induced PEM with high sulphur intake. Ten calves were fed an experimental diet, four without sodium sulfate (G1) and six with (G2). The calves were clinically evaluated and laboratorial tests were performed (hematology, plasma fibrinogen, plasma protein, ruminal fluid pH, ruminal hydrogen sulfide concentration, cerebrospinal fluid, gross and histopathological). High ruminal hydrogen sulfide concentration was detected in calves consuming sodium sulfate diet (G2). One out of six calves fed with highsulfate diet developed neurological signs. Cortical neuronal necrosis and hemorrhagic lesions in basal nuclei, thalamus, midbrain, pons and medulla oblongata were detected in calves from group G2. PEM in calves can result from excess sulphur intake (0.52% dry matter). In the second paper, six calves were experimentally infected with BoHV- 5 with 0.5 mL of virus suspension (107,2 TCID50) in each nasal cavity. During the 30 days of experimental postinfection (p.i.) calves were clinically evaluated. Laboratorial tests were performed as described for the first study. Virus detection was investigated in six brain regions, trigeminal ganglia and cerebrospinal fluid (CSF) by polimerase chain reaction (PCR) assay. One out of the six calves developed signs of neurological disease. It was possible to detect CSF pleocytosis in all symptomatic and asymptomatic calves. The histology revealed cerebrocortical necrosis and non suppurative encephalitis and meningitis. PEM was induced in calves by experimental infection with BoHV-5 and can remain asymptomatic.