Les connaissances actuelles en pathologie hépatique suggèrent que HCV n'est pas directement oncogénique mais expose les patients au risque de cancer du foie dans un contexte inflammatoire associé à une réponse UPR (Unfolded Protein Response) et une régénération hépatique. La nétrine-1, le ligand canonique de la famille des DRs (Récepteurs à dépendance), est une protéine anti-apoptotique impliquée dans le développement, l'inflammation et la tumorigenèse. Les DRs induisent l'apoptose en absence de leurs ligands. A ce jour, il n'existe aucune donnée reliant le concept de DR et les virus oncogènes. Au cours de ma thèse, j'ai contribué à démontrer que la fonctionnalité des DRs était altérée au cours de l'infection par HCV in vitro et in vivo. Nous avons montré que la surexpression de la nétrine-1 augmente l'infectivité des virions et promeut leur entrée via l'activation et la diminution du recyclage de l'EGFR. De son coté, HCV augmente l'expression de la nétrine-1 suite à l'activation de l'épissage de son ARN pré-messager. Nous avons aussi montré que l'expression du récepteur à la nétrine-1, UNC5A, était diminuée au cours de l'infection suite à des diminutions transcriptionnelle et traductionnelle. Dans ce cadre, la nétrine-1 joue le rôle de facteur proviral en inhibant une potentielle voie de signalisation antivirale induite par le récepteur UNC5A non lié. Nous avons ensuite voulu savoir quelles conséquences cette surexpression de nétrine-1 pourrait avoir en physiopathologie hépatique en contexte non infectieux. Un stress du RE (Réticulum Endoplasmique) est observé au cours de l'infection par HCV. Le stress du RE entraîne l'activation de la réponse UPR qui induit l'apoptose médiée par la DAPK1 en cas de stress prolongé. Le fait que le récepteur UNC5B active aussi l'apoptose via l'activation de la DAPK1 nous a conduit à étudier l'implication de la nétrine-1 dans la survie cellulaire au cours de la réponse UPR en contexte hépatique. Nous avons démontré à la fois in vitro et in vivo que l'expression de la nétrine-1 pourrait protéger les cellules contre l'apoptose induite par la réponse UPR suite à sa liaison aux récepteurs UNC5A et C qui entraîne l'inhibition de la DAPK1. De nombreuses études ont également reporté des rôles de la nétrine-1 dans l'inflammation et la néoangiogenèse. Nous avons montré que la nétrine-1 inhibe la migration transendothéliale hépatique des PBMCs (Peripheral Blood Mononucleated Cells) et accélère la tubulogenèse des cellules endothéliales intrasinusoïdales hépatiques. Dans leur ensemble, mes travaux de thèse suggèrent que la nétrine-1 via ses récepteurs UNC5s joue des rôles délétères en pathophysiologie hépatique favorables à la persistance virale et à la résistance à la mort cellulaire / Current knowledge in hepatic pathology suggests that HCV is not directly oncogenic but puts patients at risk for liver cancer in a context associated with a chronic inflammation, UPR (Unfolded Protein Response) and liver regeneration. Netrin-1, the canonical ligand of the DR (Dependence Receptor) family, is an antiapoptotic secreted factor implicated in development, cancer and cancer-associated inflammatory diseases. DRs induce cell death when unbound. No data linking the DR system to oncogenic viruses are available to date. During the first part of my PhD, I contributed to demonstrate that HCV infection alters DR functionality both in vitro and in vivo. We found that Netrin-1 conditions HCV virion infectivity and promotes virion entry by increasing the activation and decreasing the recycling of the EGFR. In turn, HCV increases Netrin-1 expression through enhanced Netrin-1 pre-mRNA splicing. The Netrin-1 UNC5A receptor expression was decreased upon HCV infection through diminished transcription and translation. In this setting, Netrin-1 acts as a proviral factor by inhibiting a putative antiviral signaling pathway conveyed by the unbound UNC5A receptor. In this context, we wanted to determine what consequences such Netrin-1 up-regulation could induce in non-infectious hepatic pathophysiology. Chronic ER (endoplasmic reticulum) stress is observed during HCV infection. ER stress leads to UPR activation which triggers apoptosis via DAPK1 activation upon prolonged stress. The fact that the UNC5B receptor induces apoptosis through DAPK1 activation led us to investigate Netrin-1 implication in cell survival upon UPR in the liver. During the second part of my PhD, I have demonstrated both in vitro and in vivo in mice that Netrin-1 translation during UPR could protect cells against UPR-related cell death after binding to UNC5A and C, in a DAPK1-mediated fashion. Several studies have also identified Netrin-1 roles in inflammation and neo-angiogenesis. We found that Netrin-1 inhibits hepatic transendothelial migration of PBMCs (Peripheral Blood Mononucleated Cells) and accelerates tubulogenesis of liver sinusoidal endothelial cells. Netrin-1’s role in a hepatic inflammation and neoangiogenesis, both events being tightly associated with viral hepatitis, remains to be thoroughly elucidated. Altogether, our results suggest that Netrin-1 plays UNC5-dependent deleterious roles in hepatic pathophysiology, leading to viral persistence as well as resistance to cell death

L’Adénocarcinome Canalaire Pancréatique (ACP), la forme majeure de cancer du pancréas, est un des cancers les plus mortels du fait de son agressivité d’invasion locale et de dissémination vasculaire et de l’absence de méthode de détection précoce de la maladie. Nous avons développé un nouveau modèle d’invasion in vivo, sur la membrane chorio-allantoïdienne de l’embryon de poulet, permettant d’analyser les mécanismes d’interactions entre les cellules tumorales pancréatiques et leur microenvironnement. Nous avons montré que dans ce modèle les gènes codant pour les protéines sécrétées nétrine-1 et CXCL4L1/PF4v1 sont surexprimés dans les cellules tumorales au cours du processus d’invasion et que cette surexpression est également retrouvée dans les échantillons de patients humains. Nos études fonctionnelles ont indiqué que la nétrine-1 et CXCL4L1 pourrait jouer le rôle de régulateurs de la progression tumorale selon le modèle suivant : a) la chimiokine CXCL4L1 exercerait de façon paracrine une activité angiostatique sur les cellules endothéliales de l’ACP alors que b) la nétrine-1 aurait une activité pro-tumorale en agissant à la fois sur les cellules tumorales et sur les cellules endothéliales. Ces résultats ont permis d’une part de valider notre modèle en confirmant que les gènes surexprimés sélectionnés peuvent être impliqués dans la progression tumorale chez les patients. D’autre part, notre étude a permis de démontrer que les protéines CXCL4L1 et nétrine-1 constituent de nouvelles cibles thérapeutiques et/ou diagnostiques potentielles pour le cancer du pancréas. / Pancreatic Ductal Adenocarcinoma (PDAC), the major form of pancreatic cancer, is one of the deadliest cancers because of its propensity for local invasion and vascular dissemination and the lack of early diagnostic strategy. We have developed a new in vivo invasion model, on the chick embryo chorioallantoic membrane, allowing the analyze of mechanisms governing interactions between pancreatic tumor cells and their host microenvironment. We showed in its model that the genes encoding netrin-1 and CXCL4L1/PF4v1 secreted proteins are up-regulated in tumor cells in the course of the invasion process and we confirmed these up-regulation was also observed in human patients. Our functional studies indicated that netrin-1 and CXCL4L1 may play regulator roles in tumor progression according to the following model: a) CXCL4L1 chimiokine may have an angiostatic activity on endothelial cells by a paracrine mechanism of action whereas b) netrin-1 may have a pro-tumoral activity by acting on both endothelial and tumor cells. These results allowed in one hand to validate our model by showing that selected up-regulated genes may be involved in PDAC progression in human patients. On the other hand, our work provided evidence that CXCL4L1 and netrin-1 constitute new potential therapeutic and/or diagnostic targets for pancreatic cancer.

La sclérose en plaques (SEP) est une maladie auto-immune du système nerveux central (SNC) caractérisée par de l’infiltration leucocytaire et de la démyélinisation axonale. Les cellules présentatrices d’antigènes (APC) jouent un rôle primordial dans ce processus en activant dans la périphérie les lymphocytes T réactifs contre la myéline. Les lymphocytes activés peuvent traverser la barrière hémo-encéphalique (BHE) et infiltrer le SNC. Les lymphocytes sont ensuite réactivés dans l’espace périvasculaire par les APC, suite à quoi ils contribuent à la démyélinisation et aux dommages axonaux. Nétrine-1 (N1) est une protéine de guidance axonale possédant d’importantes propriétés anti-inflammatoires. L’importance de N1 dans le maintien de la BHE et l’inhibition de l’infiltration leucocytaire dans le SNC a été bien démontrée, mais son implication dans la présentation antigénique et la régulation de l’activation lymphocytaire n’a jamais été étudiée. Le présent ouvrage propose l’hypothèse que N1 est produite par les APC afin de réguler la neuro-inflammation. Il cherche à caractériser l’expression de N1 par les APC, déterminer l’influence de N1 sur l’activation lymphocytaire et explorer le rôle de la production de N1 par les APC dans la neuro-inflammation. Les expériences menées à terme dans le cadre de ce projet démontrent que N1 est exprimée par les cellules dendritiques matures et les macrophages de type M1. De plus, N1 a pour effet de stimuler la prolifération des lymphocytes TH1, TH17 et CD8+. N1 inhibe également la production de cytokines par les lymphocytes TH17 et diminue l’expression de perforine par les lymphocytes T CD8+. N1 n’a toutefois pas d’influence sur l’expression des molécules d’adhérence par les lymphocytes T. Enfin, les cellules dendritiques, macrophages et cellules microgliales n’expriment pas N1 dans le SNC des souris dans le cadre de l’encéphalomyélite auto-immune expérimentale, un modèle animal de SEP. En somme, les résultats ici présentés suggèrent que N1 est produite par les APC afin d’influencer le fonctionnement des lymphocytes T. / Multiple Sclerosis (MS) is an autoimmune disorder of the central nervous system (CNS) characterized by leukocytic infiltration and axonal demyelination. Antigen presenting cells (APCs) play a crucial role in this process by activating myelin-reactive lymphocytes in the periphery. Activated lymphocytes subsequently cross the blood-brain barrier (BBB) and infiltrate the CNS. These lymphocytes are reactivated in the perivascular space by APCs, following which they contribute to demyelination and axonal damage. Netrin-1 (N1) is an axonal guidance protein with considerable anti-inflammatory properties. The relevance of N1 in maintaining BBB function has been thoroughly established, but its involvement in antigen presentation and T cell activation has yet to be studied. This project investigates the hypothesis that N1 is produced by APCs to regulate neuroinflammation and aims to characterize N1 production by APCs, delineate the impact of N1 on T cell activation and clarify the role of APC-derived N1 in neuroinflammation. The results presented in this thesis demonstrate that N1 is produced by mature dendritic cells and M1 macrophages. Furthermore, N1 is shown to increase T cell proliferation, decrease TH17 cell cytokine production and decrease CD8+ T cell perforin expression. N1 does not alter T cell expression of adhesion molecules. Finally, N1 is not expressed by the CNS dendritic cells, macrophages or microglial cells of mice undergoing experimental autoimmune encephalomyelitis, an animal model for MS. In summary, these results suggest that N1 is produced by APCs to modulate T cell function.

PFOS (pluorooctane sulfonic acid) and PCB 180 (2,2′,3,4,4′,5,5′-heptachlorobiphenyl) are endocrine-disrupting chemicals (EDCs) ubiquitously found throughout the environment, given their persistence and extreme long biological half-life. PFOS and PCB 180 are predicted to disrupt retinoic acid receptor (Rar) signaling, interfering with important events of brain development, including neural differentiation and proliferation. Despite accumulating reports on the adversities of these EDCs, studies on the underlying mechanism continue to be largely unknown. The aim of this study was to validate transcriptional markers predictive of Rar disruption and to assess whether the same effects are induced by PFOS and PCB 180 exposure. Murine neural progenitor C17.2 cells were employed to mimic the developing brain. The cells were exposed to increasing nanomolar concentrations (nM) of Rar (ant)agonist, PFOS, and PCB 180. Interestingly, of all the transcriptional markers investigated, Ccn2 (cellular communication network factor 2), Il18 (Interleukin -18), and Ntn1(Netrin 1) were significantly altered by the Rar agonist (P< 0.05). Likewise, the expression of Il18 and Ntn1 was also altered by developmental exposure to PFOS and PCB 180. Altogether, these findings indicate that Il18 and Ntn1 may be promising markers for studying developmental neurotoxicity induced by disruption of the retinoic acid pathway.