Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / The low solubility of griseofulvin in water (1.4 and 1.95 mg/dL at 25 and 37 ÂC, respectively) is a limiting factor for its administration. Despite of this, micellar solutions prepared with copolymers are being used to increase the solubility of these drugs. In addition, these mixtures of surfactants have low toxicity, are efficient in the dilution process and present high potential as carriers of insoluble drugs. These factors are the main reason for the interest in the research of these copolymers. This project proposes the investigation of the use of copolymers P123 (E21P67E21), E45S8 (denominated S8) and E45S17 (denominated S17) and their mixtures to obtain higher solubility of the drug griseofulvin through the method of direct dilution. The project also aims to investigate of the potential of these systems as a drug carrier model for griseofulvin through the study of cytotoxicity of these carriers through human neutrophil, the study of the gelation properties of the two diblocks S8 and S17 and its mixtures with triblock P123 in the proportion of 50/50 and 30/70. To determine the critical micelle concentration (cmc) the method of dye solubilisation was used to measure the fluorescence. The solubility of the drug griseofulvin in the micellar systems was quantified by UV-Vis spectrophotometer and by 1H NMR. The systems with pure S17 and with encapsulated griseofulvin were characterised by infrared spectroscopy and through x-ray diffraction. Experiments of drug release in vitro were carried out with the best encapsulating systems or carriers. The copolymers S8 and S17 and their mixtures with the P123 showed to be promising for the administration of hydrophobic drugs as they presented low toxicity and excellent values for solubilisation capacity (Scp). The mixtures P50/S8 and P50/S17 at 37 oC were the ones that presented the best results of Scp with equally low values of cmc, therefore showing the efficiency of these micellar systems as carriers of the drug griseofulvin. / A baixa solubilidade da griseofulvina em meio aquoso (1,4 e 1,95 mg/dL a 25 e 37 ÂC, respectivamente) Ã fator limitante para sua administraÃÃo. No entanto, soluÃÃes micelares preparadas com copolÃmeros vÃm sendo utilizadas para aumentar a solubilidade desses fÃrmacos. AlÃm disso, essas misturas de copolÃmeros apresentam baixa toxicidade, eficiÃncia no processo de dissoluÃÃo como tambÃm apresentam elevado potencial como nanocarreadores de fÃrmacos poucos solÃveis, sendo estes fatores determinantes para despertar interesse nas pesquisas com copolÃmeros. Esse trabalho propÃe investigar o uso dos copolÃmeros P123 (E21P67E21), E45S8 (denominado S8) e E45S17 (denominado S17) e suas misturas para serem utilizados como carreadores do fÃrmaco modelo griseofulvina, desenvolvendo estudos de liberaÃÃo, solubilizaÃÃo e citotoxicidade em neutrÃfilo humano, com o objetivo de se obter capacidades mais elevadas de solubilizaÃÃo do fÃrmaco griseofulvina. Utilizou-se a tÃcnica de inversÃo de tubo para o estudo das propriedades geleificantes dos diblocos S8 e S17 e suas misturas com o tribloco P123 nas proporÃÃes 50/50 e 30/70. A mistura P50/S8 foi a que melhor conservou as propriedades termorresponsivas do P123. Os sistemas com o S17 puro e com a griseofulvina encapsulada foram caracterizados por tÃcnicas de espectroscopia de absorÃÃo na regiÃo do infravermelho (FT-IR) e por difraÃÃo de raios-X. Os resultados de FT-IR nÃo apresentaram mudanÃas significativas para S17 e ele encapsulado com a griseofulvina. Entretanto, os resultados de raios-x confirmaram que o fÃrmaco encontra-se encapsulado no sistema polimÃrico na forma amorfa. Experimentos de liberaÃÃo in vitro foram realizados para os melhores sistemas encapsulantes ou carreadores. A mistura P50/S17 foi a que apresentou maior porcentagem de liberaÃÃo do fÃrmaco que foi de 48%. A citotoxicidade foi investigada atravÃs da atividade da LDH em neutrÃfilo humano (5 x 106 cÃlulas/mL). Em geral, os copolÃmeros nÃo mostraram citotoxicidade. A solubilidade do fÃrmaco griseofulvina nos sistemas micelares foi quantificada por espectrofotometria UV-Vis e por RMN de 1H. Para a determinaÃÃo da concentraÃÃo micelar crÃtica (cmc) utilizou-se o mÃtodo de solubilizaÃÃo de corante medida por fluorescÃncia. As misturas P50/S8 e P50/S17 a 37 ÂC foram as que apresentaram melhores resultados de Scp como tambÃm baixos valores de cmc, mostrando, portanto, a eficiÃncia desses sistemas micelares como carreadores do fÃrmaco griseofulvina.

Conselho Nacional de Desenvolvimento CientÃfico e TecnolÃgico / C. difficile toxin A (TxA) plays an important pathogenic role in antibiotic-induced diarrhea and pseudomembranous colitis, a condition characterized by intense mucosal inflammation and secretion. Agonist activity at A2A adenosine receptors (A2A ARs) attenuates inflammation and damage in many tissues. This study evaluated the effect of a new selective A2A AR agonist (4-{3-[6-amino-9-(5-cyclopropylcarbamoyl-3,4-dihydroxytetrahydrofuran-2-yl)-9H-purin-2-yl]prop-2-ynyl}piperidine-1-carboxylic acid methyl ester; ATL313) on TxA-induced enteritis in murine ileal loops. ATL313 (0.05-5 nM) and/or the A2A AR antagonist (ZM241385; 5 nM) or PBS were injected inside ileal loops immediately prior to challenge with TxA (1-10 mg/loop) or PBS. Intestinal fluid volume/length and weight/length ratios were calculated 3 h later. Ileal tissue samples were collected for measurement of myeloperoxidase (MPO) content, evaluation of ADA activity, for histopathology and apoptotic immunohistochemistry (ApopTagÃ) and for assessment of TNF-&#945; levels by ELISA. TxA (1-10 Âg/loop) significantly (p<0.05) increased volume/length and weight/length, reaching maximum values at 5Âg/loop dosage. ATL313 (5 nM) treatment significantly (p<0.05) reduced TxA-induced volume/length and weight/length, as well as prevented mucosal disruption and TxA-induced apoptosis. These protective effects were reversed by ZM241385 (5 nM), the A2A AR antagonist. ATL313 (5 nM) also reduced neutrophil infiltration, as measured by MPO content; reduced the toxin A-induced increase in ADA activity. Prior to the challenge with TxA, a systemic injection of fucoidin, but not PBS, also reduced tissue destruction and toxin A-induced increase in ADA activity. In conclusion, the A2A AR agonist ATL313 has a great antiinflammatory effect in TxA-induced mice enteritis, significantly reducing tissue destruction and ADA activity. In addition, our data suggested that TxA-induced increase in ADA activity and tissue damage in murine ileal loops are related to the neutrophil infiltration induced by this toxin. / A toxina A do Clostridium difficile (TxA) desempenha um importante papel na patogÃnese da diarrÃia induzida por antibiÃticos e na colite pseudomembranosa, uma condiÃÃo caracterizada por intensa secreÃÃo e inflamaÃÃo da mucosa. A estimulaÃÃo de receptores A2A da adenosina reduz a inflamaÃÃo e o dano tecidual. Neste estudo, avaliou-se o efeito de um novo agonista seletivo para receptores A2A da adenosina (metil Ãster do Ãcido 4-{3-[6-amino-9-(5-ciclopropilcarbamoil-3,4- dihidroxitetrahidrofuran-2-il)-9H-purin-2-il]prop-2-inil}piperidina-1-carboxÃlico; ATL313) na enterite induzida pela TxA em alÃas ileais de camundongos. O ATL313 (0,05-5 nM) e/ou o antagonista dos receptores A2A da adenosina (ZM241385; 5 nM) ou PBS foram injetados em alÃas ileais imediatamente antes da injeÃÃo de TxA (1-10 Âg/alÃa) ou PBS. As razÃes volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa e peso/comprimento da alÃa foram calculadas 3h depois. Amostras de tecido foram coletadas para dosagem de atividade de mieloperoxidade (MPO), atividade de ADA, histopatologia, imunohistoquÃmica para apoptose (ApopTag_) e dosagem de TNF-a_ por ELISA. A injeÃÃo de TxA (1-10 Âg) nas alÃas ileais aumentou significativamente (p<0,05) as razÃes volume de secreÃÃo/comprimento da alÃa e peso/comprimento da alÃa com pico em 5Âg. O tratamento das alÃas com ATL313 (5 nM) reduziu significativamente (p<0,05) a secreÃÃo e o edema, preveniu a destruiÃÃo da mucosa e a apoptose induzidos por TxA. Tais efeitos protetores foram revertidos pelo antagonista dos receptores A2A de adenosina, o ZM241385 (5 nM). O tratamento com ATL313 (5 nM), reduziu ainda a infiltraÃÃo neutrofÃlica, avaliada pela dosagem de MPO, e reduziu o aumento da atividade de ADA induzidos pela TxA, bem como a dosagem de TNF-a no tecido das alÃas ileais. O prÃ-tratamento sistÃmico com fucoidina, mas nÃo com PBS, tambÃm reduziu o dano na mucosa e atividade de ADA no tecido das alÃas ileais tratadas com TxA. Assim, conclui-se que na enterite induzida pela TxA em camundongos, o agonista dos receptores A2A da adenosina (ATL313) possui um potente efeito antiinflamatÃrio, reduzindo consideravelmente a lesÃo tecidual e a atividade de ADA. Nossos resultados tambÃm indicam que o aumento da atividade de ADA e o dano tecidual induzido pela TxA em alÃa ileal de camundongos està relacionado com a infiltraÃÃo neutrofÃlica induzida por esta toxina.