FREITAS, Antonio Klingem Leite de. Efeito da suplementação com Alanil-Glutamina nas alterações da permeabilidade intestinal em ratos treinados submetidos a um exercício prolongado e exaustivo de natação. 2013. 80 f. Dissertação (Mestrado em Farmacologia) - Faculdade de Medicina, Universidade Federal do Ceará, Fortaleza, 2013. / Submitted by denise santos (denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T12:35:54Z No. of bitstreams: 1 2013_dis_aklfreitas.pdf: 1946144 bytes, checksum: bd57365cf190cbd10a2b25bf18f89d7f (MD5) / Approved for entry into archive by denise santos(denise.santos@ufc.br) on 2016-03-22T12:50:59Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2013_dis_aklfreitas.pdf: 1946144 bytes, checksum: bd57365cf190cbd10a2b25bf18f89d7f (MD5) / Made available in DSpace on 2016-03-22T12:50:59Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2013_dis_aklfreitas.pdf: 1946144 bytes, checksum: bd57365cf190cbd10a2b25bf18f89d7f (MD5) Previous issue date: 2013 / The prolonged and exhaustive exercise induces intestinal barrier dysfunction. Several studies show that supplementation with alanyl-glutamine (A/G) improves the cell proliferation intestinal and electrolyte absorption. The aim of our study was to investigate the effect of supplementation with A/G in the intestinal permeability in rats trained after prolonged exercise and exhaustive swimming. We used Wistar rats that were divided into seven groups: 1) Sedentary (S); 2) Sedentary A/G (S-A/G); 3) Trained (T); 4) Trained A/G (T-A/G); 5) Exhaustion (E); 6) Exhaustion A/G (E-A/G); 7) Recovered (R). The animal supplemented groups received the dipeptide A/G. The animals were trained for twelve weeks. In the methodology we performed biochemical analysis of pH, pCO2, pO2, SO2, and bases excess (BE), by the method of gas analysis and lactate and glucose. We analyzed the transcription of tight junctions: ZO-1, Occludin, Claudin-2 and PEPT-1 by RT-PCR. The analysis of intestinal permeability was performed by the method of the ingestion of lactulose/mannitol (L/M). We also performed histological analysis of the duodenum, jejunum and ileum. This study was approved by the CEPA-UFC on Protocol Nº 13/2013. Our results showed that SO2 and pCO2 were higher in groups E and E-A/G, but decreased the parameters pH and BE for these same groups. We found falling glucose levels and increased concentrations of lactate. A significant increase in the percentage of excretion of lactulose in groups E and E-A/G than in group S. There was, however, fall of excretion of lactulose with statistical difference between groups E and E-A/G, showing protection against the alanyl-glutamine increased intestinal permeability promoted by exhaustive exercise. The percentage of excretion of mannitol was increased in groups E and E-A/G than in group S. However, in the analysis of the excretion of both carbohydrates lactulose/mannitol we observed a significant increase in group E than in group S. However, there was significant difference between groups E and E-A/G showing that Ala/Gln was able to reverse the effects of exhaustive activity in intestinal permeability. We observed an increase in ZO-1 and occludin in groups S-A/G and T with respect to S. There was also an increase of ZO-1 in the E group compared to S. However, Ala/Gln reversed the transcription of these tight junctions in groups T-A/G and E-A/G. Transcription of claudin-2 was reduced in the S-A/G, but we obtained and increase in the E group compared to a decrease of S and E-A/G against E. Regarding the PET-1 we showed increased transcription in groups T and E in relation to S. However, the Ala/Gln reversed the transcript of this dipeptide in group E-A/G with respect to E. An analysis 72 hours after the exhaustion test values found for intestinal permeability similar to sedentary group. The prolonged and exhaustive exercise altered intestinal permeability and chronic supplementation with Ala/Gln was protective against the increase. The possible mechanism of Ala/Gln refers to mechanical processes of cell-to-cell interaction (occludin and ZO-1) and/or electrolytic (claudin-2). / O exercício prolongado e exaustivo induz uma disfunção da barreira intestinal. Vários estudos mostram que a suplementação com alanil-glutamina (A/G) melhora a proliferação das células intestinais e absorção de eletrólitos. O objetivo deste trabalho foi investigar o efeito da suplementação com A/G na permeabilidade intestinal em ratos treinados após um exercício prolongado e exaustivo de natação. Utilizamos ratos Wistar, divididos em sete grupos: 1) Sedentário (S); 2) Sedentário A/G (S-A/G); 3) Treinado (T); 4) Treinado A/G (T-A/G); 5) Exaustão (E); 6) Exaustão A/G (E-A/G) e 7) Recuperado (R). Os animais dos grupos suplementados receberam o dipeptídeo A/G. Os animais foram treinados durante 12 semanas de natação. Na metodologia realizamos análises bioquímicas de pH, pCO2, pO2, SO2, excesso de bases (BE), pelo método de gasometria e lactato e glicose. Analisamos a transcrição das junções firmes: ZO-1, Ocludina, Claudina-2 e PEPT-1 através de RT-PCR. A análise da permeabilidade intestinal foi realizada pelo método da ingestão de Lactulose/Manitol (L/M). Fizemos também análise histológica do duodeno, jejuno e íleo. O presente estudo foi aprovado pela CEPA-UFC, em protocolo de Nº 13/13. Nossos resultados mostraram que pCO2 e SO2 foram aumentados nos grupos E e E-A/G, mas houve queda nos parâmetros de pH e BE para estes mesmos grupos. Encontramos queda dos índices de glicose e aumento das concentrações de lactato. Houve aumento significativo no percentual de excreção de lactulose nos grupos E e E-A/G em relação ao grupo S. Houve, no entanto, queda da excreção de lactulose com diferença estatística entre os grupos E e E-A/G, mostrando proteção da A/G frente ao aumento da permeabilidade intestinal promovida pelo exercício exaustivo. O percentual de excreção do manitol foi aumentado nos grupos E e E-A/G em relação ao grupo S. Entretanto, na análise da relação da permeabilidade dos dois carboidratos L/M observamos um aumento significativo no grupo E em relação ao grupo S. Contudo, houve diferença significativa entre os grupos E e E-A/G mostrando que a A/G conseguiu reverter os efeitos da atividade exaustiva na permeabilidade intestinal. Observamos aumento da ZO-1 e ocludina nos grupos S-A/G e T em relação a S. Houve também aumento de ZO-1 no grupo E em relação ao S. Porém, a A/G reverteu à transcrição destas junções firmes nos grupos T-A/G e E-A/G. A transcrição de claudina-2 foi reduzida no grupo S-A/G, mas obtivemos um aumento no grupo E em relação ao S e uma diminuição de E-A/G em relação ao E. Em relação ao PEPT-1, observamos aumento da transcrição nos grupos T e E em relação ao S. Contudo, a A/G reverteu à transcrição deste peptídeo no grupo E-A/G em relação ao E. Numa análise de 72 horas após o teste de exaustão encontramos valores para a permeabilidade intestinal similares aos grupos sedentários. Concluímos que o exercício prolongado e exaustivo alterou a permeabilidade intestinal e a suplementação crônica com alanil-glutamina teve efeito protetor contra este aumento. O possível mecanismo da A/G no processo estudado refere-se a processos mecânicos de interação célula-célula (ZO-1 e ocludina) e/ou eletrolíticos (claudina-2).

Made available in DSpace on 2014-07-29T14:46:49Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Aline Machado Rapello do Nascimento.pdf: 1403008 bytes, checksum: d5736b2cde9e7188a689131927c1127c (MD5) Previous issue date: 2007-12-31 / To evaluate whether complete arteriovenous ischemia followed by reperfusion of mesenteric blood flow aggravates lesions involving small intestine of horses, β--catenin and occludin expressions were measured in jejune epithelia of seven equines, without definite breed. The animals had been submitted to aseptic ventral midline celiotomy and five jejune segments collected corresponding to a baseline segment, a five minutes segment subjected to ischemia, and three segments collected after being subjected to five, sixty and one hundred and twenty minutes of tecidual reperfusion, respectively. Experimentally induced lesions created by total arteriovenous occlusion followed by reperfusion were similar to naturally acquired lesions, as much in the period of ischemia as in the aggravation of the injuries observed during reperfusion. Changes that occur when ischemic intestine is reperfused are progressive, and include mucosal, submucosal, and serosal edema; polymorphonuclear and mononuclear cell infiltrates; and alterations in vascular patterns. Imunohistochemistry analyses have shown strong staining baseline segments for β-catenin in all animals and its progressive lack of staining during ischemia and reperfusion treatments. That indicates progressive lack of intercellular adherence. Similar results of specific decreases of total expression of Occludin, a tight junction protein, were observed. This protein is involved in regulating the movement of solutes in the paracellular pathway and also plays an important role in the maintenance of cell polarity. The reduction of expressions of both intercellular proteins measured directly demonstrates β-catenin injury due to progression of edema during ischemia and its aggravation during reperfusion and also shows an increase of the permeability of paracelular pathways and its related consequences to degradation of Ocludina. / Realizou-se o estudo da patogenia da lesão por isquemia arteriovenosa completa dos vasos mesentéricos e reperfusão jejunal em eqüinos por meio da avaliação da expressão das proteínas β-catenina e ocludina presentes neste epitélio, em sete eqüinos, sem raça definida. Os animais foram submetidos á celiotomia asséptica na linha alba e coleta de cinco segmentos jejunais correspondestes á um segmento controle, um segmento tratado com isquemia por cinco minutos, e três segmentos coletados durante o período de reperfusão tecidual aos cinco, sessenta e cento e vinte minutos, respectivamente. As lesões induzidas experimentalmente por oclusão arteriovenosa total seguida por reperfusão foram similares às lesões adquiridas naturalmente tanto no período de isquemia quanto no agravamento das lesões observado nos tempos de reperfusão. As mudanças que ocorrem quando um intestino isquêmico sofre reperfusão são progressivas e incluem edema de mucosa, submucosa e serosa, infiltração polimorfonuclear e mononuclear e alterações nos padrões vasculares. A análise imunoistoquímica revelou forte expressão da β- catenina em todos os animais e a sua progressiva perda da expressão quando submetidos à isquemia e reperfusão. Isso indica perda progressiva da adesividade intercelular. Resultados similares de redução do total da expressão da Ocludina, uma proteína de junção de oclusão, foram observados. Esta proteína está envolvida na regulação dos movimentos dos solutos na via paracelular e também desempenha um importante papel na manutenção da polaridade celular. A diminuição da expressão de ambas as proteínas intercelulares demonstra a lesão à β-catenina devido à progressão do edema durante isquemia e o agravamento durante a reperfusão tecidual e também mostra um aumento na permeabilidade da via paracelular e suas conseqüências relacionadas à degradação da Ocludina.