O acidente ofídico há anos se tornou um problema de saúde pública no Brasil devido à alta prevalência e gravidade do quadro e o estado do Tocantins figura entre as maiores incidências do país neste agravo. Este estudo descritivo do perfil epidemiológico e levantamento dos dados clínicos das vítimas de acidente ofídico foi realizados no Hospital de Referência de Porto Nacional, Tocantins, que é referência para vários outros municípios na região central do estado. No triênio 2013 2015 houve um crescimento anual do número de casos, totalizando 149 vítimas de acidente ofídico. Os acidentes mais frequentes envolveram serpentes do gênero Bothrops, compreendendo 85,9% dos casos. Cerca de 80% das vítimas eram do sexo masculino, faixa etária prevalente entre 19 40 anos (34,9%) e o pé foi a região mais afetada (65,8%). Cabe ressaltar que em 98% dos casos houve infecção bacteriana secundária com uso de antibióticos, sendo a cefalosporina de primeira geração a mais utilizada. A maioria dos pacientes (75,2%) foi atendida durante as primeiras 3 horas, e classificados como casos moderados. O tratamento foi feito com uso médio de 6,6 ampolas de soro antibotrópico. O melhor conhecimento clínico e epidemiológico destes acidentes ofídicos pode levar a redução de gastos públicos com internações, diminuição do uso de antibiótico, diminuindo a resistência aos mesmos, afastamento laboral e possíveis sequelas, fatos que não vem ocorrendo nos últimos anos. A análise dos dados servirá como alerta para melhoria da prevenção primária com o objetivo de redução dos acidentes ofídicos e secundária, com rápido tratamento e prevenção de sequelas. / Snake bites have become a public health problem in Brazil due to the high prevalence and severity and the state of Tocantins is amongst the region of the country with highest incidence of this accident. This descriptive study of the epidemiological profile and survey of the clinical data of the victims of snake bites wase carried out in the Hospital of Reference of Porto Nacional, Tocantins, which is reference for several other municipalities in the central region of the state. In the triennium 2013 - 2015 there was an annual growth of the number of cases, totaling 149 victims of snake bites. The most frequent accidents involved snakes of the genus Bothrops, comprising 85.9% of the cases. About 80% of the victims were males, the prevalent age group was between 19-40 years old (34.9%) and the foot was the most affected region (65.8%). It is worth mentioning that in 98% of the cases there was secondary bacterial infection , treated with antibiotics, with first-generation cephalosporin being the most used. The majority of patients (75.2%) were treated during the first 3 hours, and classified as moderate cases. The treatment was done with an average of 6.6 ampoules of antibothropic serum. A best clinical and epidemiological knowledge of these snake bite accidents can lead to a reduction of public expenditures with hospitalizations, decrease in antibiotic use, reducing the incidence of resistance to antibiotics, the lack of employment and possible sequelae, which has not occurred in recent years. Data analysis will serve as an alert to improve primary prevention with the goal of reducing ophidian accidents and, also with fast treatment and prevention of sequelae.

O acidente ofídico há anos se tornou um problema de saúde pública no Brasil devido à alta prevalência e gravidade do quadro e o estado do Tocantins figura entre as maiores incidências do país neste agravo. Este estudo descritivo do perfil epidemiológico e levantamento dos dados clínicos das vítimas de acidente ofídico foi realizados no Hospital de Referência de Porto Nacional, Tocantins, que é referência para vários outros municípios na região central do estado. No triênio 2013 2015 houve um crescimento anual do número de casos, totalizando 149 vítimas de acidente ofídico. Os acidentes mais frequentes envolveram serpentes do gênero Bothrops, compreendendo 85,9% dos casos. Cerca de 80% das vítimas eram do sexo masculino, faixa etária prevalente entre 19 40 anos (34,9%) e o pé foi a região mais afetada (65,8%). Cabe ressaltar que em 98% dos casos houve infecção bacteriana secundária com uso de antibióticos, sendo a cefalosporina de primeira geração a mais utilizada. A maioria dos pacientes (75,2%) foi atendida durante as primeiras 3 horas, e classificados como casos moderados. O tratamento foi feito com uso médio de 6,6 ampolas de soro antibotrópico. O melhor conhecimento clínico e epidemiológico destes acidentes ofídicos pode levar a redução de gastos públicos com internações, diminuição do uso de antibiótico, diminuindo a resistência aos mesmos, afastamento laboral e possíveis sequelas, fatos que não vem ocorrendo nos últimos anos. A análise dos dados servirá como alerta para melhoria da prevenção primária com o objetivo de redução dos acidentes ofídicos e secundária, com rápido tratamento e prevenção de sequelas. / Snake bites have become a public health problem in Brazil due to the high prevalence and severity and the state of Tocantins is amongst the region of the country with highest incidence of this accident. This descriptive study of the epidemiological profile and survey of the clinical data of the victims of snake bites wase carried out in the Hospital of Reference of Porto Nacional, Tocantins, which is reference for several other municipalities in the central region of the state. In the triennium 2013 - 2015 there was an annual growth of the number of cases, totaling 149 victims of snake bites. The most frequent accidents involved snakes of the genus Bothrops, comprising 85.9% of the cases. About 80% of the victims were males, the prevalent age group was between 19-40 years old (34.9%) and the foot was the most affected region (65.8%). It is worth mentioning that in 98% of the cases there was secondary bacterial infection , treated with antibiotics, with first-generation cephalosporin being the most used. The majority of patients (75.2%) were treated during the first 3 hours, and classified as moderate cases. The treatment was done with an average of 6.6 ampoules of antibothropic serum. A best clinical and epidemiological knowledge of these snake bite accidents can lead to a reduction of public expenditures with hospitalizations, decrease in antibiotic use, reducing the incidence of resistance to antibiotics, the lack of employment and possible sequelae, which has not occurred in recent years. Data analysis will serve as an alert to improve primary prevention with the goal of reducing ophidian accidents and, also with fast treatment and prevention of sequelae.

Células dendríticas (DCs) participam tanto da geração da resposta imune adaptativa como na manutenção da tolerância. O veneno da cascavel Crotalus durissus terrificus, sua principal toxina, crotoxina (CTX) e sua subunidade CB (fosfolipase A2), apresentam efeito supressor sobre o sistema imunológico. Neste trabalho foi avaliado o efeito da CTX e CB sobre a ativação/função das DCs e consequente indução de resposta adaptativa específica anti-Ovalbumina (OVA). Primeiramente, foi verificada a eficiência do processo de maturação das DCs incubadas com OVA associada ao LPS. Os resultados obtidos nesse modelo in vitro mostraram que a CTX e CB inibiram a maturação das DCs estimuladas com OVA + LPS, caracterizada por menor expressão de moléculas coestimuladoras, MHC-II e secreção de citocinas pró-inflamatórias. Em contraste, a CTX e CB induziram maior expressão de ICOS-L, PDL1/2 nas DCs incubadas com OVA + LPS assim como a expressão de RNAm para IL-10 e TGF-β. Além disso, ambas as toxinas foram capazes de aumentar a expressão de PDL1, mas não de ICOS-L ou PDL-2 em DCs. Com relação ao mecanismo envolvido no efeito da CTX e CB sobre as DCs, os resultados mostraram o envolvimento dos receptores peptídeo-formil (FPRs) e a via da 5-Lipoxigenase nesse processo. Sobre a imunidade adaptativa, os resultados mostraram menor proliferação de células TCD3+ ou TCD4+ obtidas de animais imunizados com OVA quando co-cultivadas com DCs incubadas com ConA ou OVA + LPS na presença de CTX ou CB. A diferenciação de células Th1 e Th2 foi inibida pela adição de CTX ou CB nas co-culturas com DCs estimuladas com LPS. No entanto, verificou-se aumento da população Treg nas co-culturas de células CD4+ e DCs incubadas com LPS + CTX ou CB em comparação com DCs estimuladas somente com LPS. A CTX e CB inibiram a diferenciação de células CD4+ Tbet+ e CD4+Gata3+ nas co-culturas de TCD4+ purificados de animais DO 11.10 com DCs estimuladas com OVA + LPS. No entanto, apenas a CTX foi capaz de induzir aumento da porcentagem de células CD4+CD25+FoxP3+. Em experimentos in vivo, foi observada menor proliferação e secreção de IL-2 e IFN nas culturas de células de camundongos imunizados com OVA que receberam CTX ou CB quando estimuladas com OVA em comparação com o observado nas culturas de células de camundongos imunizados com OVA. CTX e CB administradas in vivo em camundongos imunizados com OVA também inibiram a porcentagem de células CD4+IFN+, CD4+IL-4+ e promoveram aumento da população CD4+IL-10+ em comparação com o obtido em camundongos imunizados somente com a OVA. Em relação à imunidade humoral, a produção de anticorpos IgG1 e IgG2a anti-OVA também foi inibida em camundongos imunizados com OVA que receberam a CTX ou CB. Além disso, a reação de hipersensibilidade do tipo tardio foi suprimida somente em camundongos imunizados com OVA e que receberam a CTX. Estes dados demonstram que a CTX e CB exercem efeito regulador sobre o sistema imune inato e adaptativo e os FPRs bem como a via da 5-lipoxigenase estão envolvidos nessa ação imunomoduladora. / Dendritic cells (DCs) are involved in both the generation of the adaptive immune response and maintenance of the tolerance. The Crotalus durissus terrificus rattlesnake venom, its main toxin, crotoxin (CTX) and CB (phospholipase A2) subunit have suppressive effect on the immune system. In this work it was analyzed the effect of CTX and its CB subunit on the activation/function of DCs and consequent induction of anti-ovalbumin immune response. Firstly, the efficiency of the DCs maturation incubated with OVA associated with LPS was verified. Following, the results obtained in this in vitro model showed that CTX and CB inhibited the maturation of DCs stimulated with OVA + LPS, characterized by lower expression of costimulatory, MHC-II molecules on DCs as well as secretion of proinflammatory cytokines. In contrast, CTX and CB induced an enhancement of ICOS-L, PDL1/2 expression on DCs incubated with OVA, +LPS as well as the expression of IL-10 and TGF-ß RNAm. In addition, both toxins were able to increase the expression of PDL1, but not ICOS-L or PDL-2, on DCs. Regarding the mechanism involved in the effect of CTX and CB on DCs, the results showed the involvement of the formyl-peptide receptors (FPRs) and the 5-Lipoxygenase pathway in this process. On adaptive immunity, the results showed lower proliferation of TCD3+ or TCD4+ cells obtained from mice immunized with OVA when co-cultured with DCs incubated with ConA or OVA + LPS in the presence of CTX or CB. The differentiation of Th1 and Th2 cells were inhibited by the addition of CTX or CB in co-cultures with DCs stimulated with LPS. However, it was verified increased Treg population in co-culture of CD4+cells and DCs incubated with LPS plus CTX or CB compared with DCs LPS-stimulated. CTX and CB inhibited the differentiation of of CD4+Tbet+ and CD4+Gata 3+ cells in co-cultures of TCD4+ purified from DO11.10 mice with DCs stimulated with OVA + LPS. However, only CTX was able to increase the percentage of CD4+CD25+FoxP3+ cells. In in vivo experiments, it was observed lower proliferation and IL-2 and IFN secretions in cell cultures of mice immunized with OVA that received CTX or CB incubated with OVA compared with those observed in cell culture of OVA-immunized mice. The administration of CTX and CB in vivo in mice immunized with OVA also inhibited the percentage of CD4+IFN+, CD4+IL-4+ cells and increased the CD4+IL-10+ population compared with those observed in mice immunized with OVA. In relation to the humoral immunity, the production of anti-OVA IgG1 and IgG2a antibodies was also inhibited in mice immunized with OVA that received CTX or CB. In addition, the delayed hypersensitivity reaction (DTH) was also diminished in mice immunized with OVA that received the CTX. These data demonstrate that CTX and CB exert regulatory effect on innate and adaptive immune system and that FPRs as well as the 5-lipoxygenase pathway are involved in this immunomodulatory activity.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:34Z (GMT). No. of bitstreams: 1 LEANDRO DOBRACHINSKI.pdf: 1309361 bytes, checksum: 9ed7a6a6c3ff40cb207d958b59532e76 (MD5) Previous issue date: 2012-03-13 / Venomous snakes have a real cocktail of pharmacological active substances and drugs that act powerfully against microorganisms. The objective of the present study was to evaluate in vitro the potential cytotoxic activity of Caudisona durissa terrificus venom in mononuclear cells (MNC) of peripheral human blood. After obtaining MNC for cell culture, the cytotoxic effect of different concentrations of crude venom was evaluated. The peripheral blood MNC were separated using a density gradient and were incubated (2x105 cells/well) with different venom concentrations (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL) for different times (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) and in different substrates (PHA, IL lly examining the plates after 24, 48 and 72 hours. Was also observed with different concentrations of crude venom induced ADN fragmentation in MNC. We observed that the toxicity of crude C. d. terrificus venom varies proportionally with concentration, i.e., the higher the concentration, the higher its cytotoxicity. For this reason the 0.0005µg/mL concentration of crude Caudisona durissa terrificus venom presented the lowest cytotoxic activity in peripheral human blood MNC and that the fragmentation of cellular ADN was not seen in this study. Thus, it is suggested to employ two or more different assays to confirm the induction of cell death is occurring through apoptosis. / Serpentes peçonhentas produzem uma variedade de toxinas altamente citotóxicas. Possuem um verdadeiro coquetel de substâncias farmacológicas, tornando-se uma , que atualmente vem sendo utilizados por inúmeros pesquisadores, para o desenvolvimento de novos fármacos com potente ação contra microorganismos. O presente estudo visou avaliar a potencial atividade citotóxica da peçonha de Caudisona durissa terrificus em células mononucleares (CMN) do sangue periférico humano, in vitro. Após a padronização da obtenção de CMN para cultivo celular, foi realizada a avaliação do efeito citotóxico de diferentes concentrações do veneno bruto. As CMN do sangue periférico foram separadas por meio gradiente de densidade e incubadas (2x105 células/poço) com diferentes concentrações do veneno (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL), em diferentes tempos (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) e substratos (PHA, IL 2). A avaliação da atividade citotóxica do veneno foi realizada, por meio da leitura das células em câmara de neubauer, após 24, 48 e 72 horas. Em conclusão, foi possível identificar que a citotoxicidade do veneno bruto de C. d. terrificus varia de forma proporcional à concentração, ou seja, quanto maior a concentração do veneno, maior a sua citotoxicidade. Com isso, a concentração de 0,0005µg/mL do veneno bruto de Caudisona durissa terrificus, neste experimento, apresentou uma baixa atividade citotóxica em CMN de sangue periférico humano e que a fragmentação do DNA celular não foi visualizada neste estudo. Desta forma, sugere-se empregar dois ou mais ensaios distintos para confirmar se a indução da morte celular está ocorrendo por meio de apoptose.

Made available in DSpace on 2016-08-10T10:53:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 MARILISSA MACIEL MAINERI.pdf: 1118474 bytes, checksum: eb4934dbea4478c904915745c3e64da5 (MD5) Previous issue date: 2012-03-22 / Venomous snakes have a real cocktail of pharmacological active substances and drugs that act powerfully against microorganisms. The objective of the present study was to evaluate in vitro the potential cytotoxic activity of Caudisona durissa collilineata venom in mononuclear cells (MNC) of peripheral human blood. After obtaining MNC for cell culture, the cytotoxic effect of different concentrations of crude venom was evaluated. The peripheral blood MNC were separated using a density gradient and were incubated (2x105 cells/well) with different venom concentrations (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL) for different times (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) and in different substrates (PHA, IL visually examining the plates after 24, 48 and 72 hours. Was also observed with different concentrations of crude venom induced ADN fragmentation in MNC. We observed that the toxicity of crude C. d. collilineata venom varies proportionally with concentration, i.e., the higher the concentration, the higher its cytotoxicity. For this reason the 0.0005µg/mL concentration of crude Caudisona durissa collilineata venom presented the lowest cytotoxic activity in peripheral human blood MNC and that the fragmentation of cellular ADN was not seen in this study. Thus, it is suggested to employ two or more different assays to confirm the induction of cell death is occurring through apoptosis. / Serpentes peçonhentas produzem uma variedade de toxinas altamente citotóxicas. Possuem um verdadeiro coquetel de substâncias farmacológicas, tornando-se uma , que atualmente vem sendo utilizados por inúmeros pesquisadores, para o desenvolvimento de novos fármacos com potente ação contra microorganismos. O presente estudo visou avaliar a potencial atividade citotóxica da peçonha de Caudisona durissa collilineata em células mononucleares (CMN) do sangue periférico humano, in vitro. Após a padronização da obtenção de CMN para cultivo celular, foi realizada a avaliação do efeito citotóxico de diferentes concentrações do veneno bruto. As CMN do sangue periférico foram separadas por meio gradiente de densidade e incubadas (2x105 células/poço) com diferentes concentrações do veneno (50, 5, 0,5, 0,05, 0,005 e 0,0005 µg/mL), em diferentes tempos (1, 3, 6, 24, 48 e 72h) e substratos (PHA, IL 2). A avaliação da atividade citotóxica do veneno foi realizada, por meio da leitura das células em câmara de neubauer, após 24, 48 e 72 horas. Em conclusão, foi possível identificar que a citotoxicidade do veneno bruto de C. d. collilineata varia de forma proporcional à concentração, ou seja, quanto maior a concentração do veneno, maior a sua citotoxicidade. Com isso, a concentração de 0,0005µg/mL do veneno bruto de Caudisona durissa collilineata, neste experimento, apresentou uma baixa atividade citotóxica em CMN de sangue periférico humano e que a fragmentação do DNA celular não foi visualizada neste estudo. Desta forma, sugere-se empregar dois ou mais ensaios distintos para confirmar se a indução da morte celular está ocorrendo por meio de apoptose.

Orientador: Lucilene Delazari Santos / Resumo: O veneno de serpente tem sido utilizado para diversas finalidades terapêuticas; portanto, desde o início do século XX, a criação de serpentes em cativeiro tornou-se uma atividade cada vez mais relevante. Os principais motivos da existência e permanência destes cativeiros se atribuem à produção dos soros antiofídicos, e o uso de seus venenos e seus componentes isolados com potenciais aplicações à saúde animal e humana. Porém, a vida em cativeiro pode resultar na síndrome da má adaptação, a qual o animal sob estresse desenvolve inapetência e, consequentemente há o acometimento da imunidade, podendo desenvolver infecções por micro-organismos como fungos, bactérias e vírus. Desta forma, o controle e prevenção de infecções em serpentes mantidas em cativeiro tornaram-se assuntos muito importantes. Dentre as doenças infecciosas virais, têm-se a infecção pelo Paramixovírus ofídico, atualmente, denominado Ferlavirus reptiliano. Este vírus é altamente devastador em serpentes, pois atua no sistema nervoso central e respiratório, podendo levar à morte e/ou morbidade na fase aguda da doença, sendo que na fase crônica, o animal pode atuar como reservatório do vírus, e disseminar a doença no plantel. Atualmente, não há tratamento específico nem vacinas disponíveis para esta virose. Porém, testes sorológicos estão emergindo para a detecção de anticorpos. Dentre estes testes, encontram-se o ensaio de Inibição de Hemaglutinação (HI) e o ensaio de ELISA de Bloqueio de Fase Líquida (BFL-ELISA), ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Snake venom has been used for several therapeutic purposes. Therefore, breeding snakes in captivity has become an increasingly relevant activity since early20th century. The main reasons for the existence and permanence of these captivities are the production of snake antivenom and the use of venom and its isolate compounds with potential applications in human and animal health. However, living in captivity may result in the maladaptation syndrome, in which the animal under stress develops inappetence and, consequently, a decrease in immunity, becoming more likely to develop infections caused by microorganisms as fungi, bacteria and viruses. Thus, the control and prevention of infections in snakes kept in captivity became very important subjects. The infection by the ophidian paramyxovirus named reptilian ferlavirus is among the viral infectious diseases. This virus is highly devastating in snakes because its action in central and respiratory nervous system and may lead to death and/or morbidity in the acute stage of the disease, consideringthat the animal may act as a reservoir of the virus in the chronic stage and spread the disease in the breeding stock. Nowadays, there isn’t a specific treatment or vaccines available for strike this viral infection, however, serological tests are emerging for antibodies detection. Hemagglutination Inhibition (HI) and Liquid Phase Blocking ELISA (LPB-ELISA) are among these tests, which differs from each other in sensitivity and analytical ... (Complete abstract click electronic access below) / Mestre