In this thesis I develop and implement “antibody landscapes”, a method to profile immunity against a pathogen as a function of antigenic differences between a range of strains. Theoretically applicable to any antigenically variable pathogen and measurement of immunity, the work here focusses on antibody-mediated immunity against the A/H3N2 influenza subtype. Applying the methodology to study annual serum samples from individuals monitored for influenza infection over a period of six years, patterns of influenza immunity were found to be remarkably distinct and maintained almost unchanged over time in the absence of influenza exposure. Upon infection, the initial response is strikingly antigenically broad, including responses against viruses far beyond the extent of cross-reactivity observed after a primary infection. Analysis of two vaccination cohorts, one receiving an antigenically advanced vaccine strain and one a more typical vaccine strain choice, revealed many of the same patterns of response as seen with infection. Antigenically advanced vaccination generated greater responses against later strains but surprisingly, due to equivalent boosting of prior immunity, this came at no cost to responses generated against contemporary or older strains. Exploring in more detail the development of immunity over time, analysis of a cohort of children demonstrated that - in contrast to adults with diverse exposure histories - antibody responses to a first infections were remarkably similar in pattern and magnitude. Interestingly, for second infections, although post-infection antibody titres against circulating strains were comparable to those after first infections, overall cross-reactivity of the response against future antigenic variants appeared to be diminished. The findings here underline the significant role prior-immunity plays in affecting the response to new exposures and the importance of understanding it. An important conclusion is that by failing to account for it, current approaches to influenza vaccine strain selection may be suboptimal and pre-emptive vaccine strain updates may improve overall vaccine efficacy where immunity to current strains already exists in the population. Building on the work presented here should help to optimise strain choice and vaccine efficacy even further.

Os vírus da Influenza Equina (EIV) (H3N8 e H7N7) pertencem à família Orthomyxoviridae, gênero Influenza A. Apesar de existirem poucos relatos de infecção humana pelo EIV, é conhecido o risco zoonótico e infecção interespécies. Serviços de vigilância epidemiológica da OIE e WHO informam que o subtipo H3N8 é isolado de surtos que ocorrem mundialmente, enquanto o subtipo H7N7, menos patogênico, não é isolado desde 1980, sendo então considerado um vírus extinto. Embora o EIV seja endêmico em nosso meio, há poucos trabalhos nacionais que tenham versado sobre a avaliação atual de anticorpos (Ac) anti-EIV presentes nos equídeos do Estado de São Paulo, o que motivou a realização do presente estudo. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar a ação de diferentes tratamentos de soro descritos pela OIE e WHO para a remoção de inibidores inespecíficos da hemaglutinação em soros de 10 equinos vacinados (H3N8 A/Equi/Kentucky/1/1997), sendo eles: a) TPH: tripsina, metaperiodato de potássio seguido de adsorção de hemácias; b) KH: kaolin 20% seguido de adsorção de hemácias; e c) RDEH: RDE seguido de adsorção de hemácias; 2) avaliar a presença de Ac contra os vírus H3N8 e H7N7, em 84 equídeos não vacinados do Estado de São Paulo; 3) comparar a frequência de Ac contra H3N8 entre equídeos amostrados do estado de SP e de um painel de soros de equídeos do município de Mossoró - RN, região onde não há estudos sobre a circulação do EIV. Constatou-se que não houve diferença estatística entre os tratamentos de soro para a remoção de inibidores inespecíficos da hemaglutinação (p>0,05; confiança de 95%), todavia o tratamento RDEH apresentou resultados mais consistentes, corroborando a recomendação da OIE e da WHO de utilizar preferencialmente este tratamento. O perfil sorológico dos animais amostrados de SP sugere que circule o subtipo H3N8 e que o subtipo H7N7 circule de forma subclínica nos equídeos, o que é sustentado por outros trabalhos realizados no Brasil. Há evidências no Brasil sobre a detecção de anticorpos em equinos contra o subtipo H7N7, mesmo não havendo o isolamento deste no mundo desde 1980. No painel de soros do RN, onde a espécie Equus asinus era maioria, verificou-se a igualdade estatística entre as frequências de Equus caballus e Equus asinus positivos no teste de HI para o subtipo H3N8 (p>0,05; confiança de 95%), dado inédito em nosso meio. A frequência dos equídeos positivos no teste de HI para o subtipo H3N8 foi estatisticamente maior (p<0,05; confiança de 95%) em SP do que em RN. / The Equine influenza Virus (EIV) (H3N8 and H7N7) belong to Orthomyxoviridae family and Influenza A genus. Although there are few reports of human infection with EIV zoonotic and interspecies infection risk is known. OIE and WHO services on epidemiological surveillance report that H3N8 subtypes are isolated and characterized from worldwide outbreaks while H7N7 subtype less pathogenic has not being isolated since 1980 considered an extinct virus. Although the EIV is endemic in our country there are few national studies that had versed on the current evaluation of horses antibodies (Ab) from São Paulo State which motivated the present study. The study objectives were: 1) to evaluate the effects of different serum treatments described by OIE and WHO for the removal of nonspecific inhibitors of hemagglutination in 10 vaccinated (H3N8 - A/Equi/Kentucky/1/1997) horses sera being: a) TPH: trypsin, potassium metaperiodate followed by adsorption of erythrocytes b) KH: kaolin 20% followed by adsorption of erythrocytes and c) RDEH: RDE followed by adsorption of erythrocytes; 2) investigate the presence of antibodies against H3N8 and H7N7 viruses in 84 unvaccinated equines in São Paulo State; 3) compare the frequency of antibodies against H3N8 sampled between São Paulo State and a panel of equines sera from Mossoró - RN where there are no studies on EIV circulation. There was no statistical difference between the treatments for serum nonspecific inhibitors of hemagglutination removal (p>0.05; 95% confidence) however RDEH treatment showed results more consistent confirming OIE and WHO recommendation to use this treatment with priority. The serological profile of SP samples suggests H3N8 subtype circulates in those animals and H7N7 subtype might circulate in a subclinical form in equines, which is supported by other studies conducted in Brazil. There is evidence of antibodies detection against equine H7N7 subtype in Brazil, even without since 1980 isolation in the world. In animals from RN State which had Equus asinus representing a major fraction there was statistical equal frequencies of Equus caballus and Equus asinus positivity in HI test against H3N8 subtype (p>0.05; 95% of confidence), as unprecedented in the world. The frequency of positive equine against H3N8 subtype on HI test in SP was statistically higher (p<0.05; 95% of confidence) than in RN.

<p>U radu je ispitana zastupljenost influenca A virusa, njihova antigenska i genetička svojstva i osetljivost na antivirotik oseltamivir.</p><p>Ispitivanje je sprovedeno u toku četiri uzastopne sezone, od 2010/2011 do 2013/2014 &nbsp;i obuhvatilo je 887 briseva nosa i grla pacijenata sa simptomima gripa, sa teritorije Južnobačkog okruga. Svi uzorci su&nbsp;testirani na prisustvo influenca A(H1N1)pdm09, A(H3N2), A(H1N1), A(H5) i A(H7) i influenca B virusa, real-time RT PCR testom. Pozitivni uzorci iz sezona 2012/2013 i 2013/2014, podvrgnuti su izolaciji na MDCK ćelijskim kulturama, a zatim je izvr&scaron;eno ispitivanje sposobnosti dobijenih izolata da aglutiniraju eritrocite koko&scaron;ke, čoveka i zamorca u reakciji virusne hemaglutinacije. Antigenska svojstva izolata sa hemaglutinacionim titrom &ge;40, ispitana su reakcijom inhibicije hemaglutinacije. Genetičkoj karakterizaciji, sekvenciranjem hemaglutinin i neuraminidaza gena, podvrgnuti su reprezentativni izolati iz sezona 2012/2013 i 2013/2014. Za ispitivanje osetljivosti odabranih izolata virusa na oseltamivir upotrebljen je hemiluminiscentni test inhibicije aktivnosti neuraminidaze.</p><p>Ukupno 46,3% (411/887) uzoraka bilo je influenca pozitivno, od čega je 73% (300/411) bilo influenca A pozitivno, a 27% (111/411)influenca B pozitivno (p&lt;0,0001). &nbsp;Influenca A(H1N1)pdm09 podtip je detektovan u 48% (144/300), a A(H3N2) podtip u&nbsp;52% (156/300) influenca Apozitivnih uzoraka. Najveći procenat influencaA pozitivnih zabeležen je u uzrastnoj grupi 5-14 godina (48,2%, 77/160) i kod pacijenata sa lak&scaron;im kliničkim manifestacijama gripa (43,7%, 153/350).</p><p>Influenca A(H1N1)pdm09 podtip preovladavao je u uzrastnoj grupi 15-29 godina (66%, 31/47, p=0,0400) i 30-64 godina (55,9%,71/127, p=0,0215), kao i kod pacijenata sa te&scaron;kom akutnom respiratornom bole&scaron;ću (63,5%, 80/126, p&lt;0,0001), fatalnih slučajeva (100%,9/9, p=0,0039) i pacijenata sa hroničnim bolestima i stanjima (68,8%, 84/122, p&lt;0,0001).&nbsp;</p><p>Influenca A(H3N2) podtip dominirao je kod dece uzrasta do 4 godine (72,2%,13/18, p=0,0381) i 5-14 godina (75,3%, 58/77, p&lt;0,0001), kod pacijenata sa lak&scaron;im oblikom bolesti (69,3%,106/153, p&lt;0,0001) i bez hroničnih bolesti ili stanja (66,3%, 118/178,&nbsp;p&lt;0,0001).</p><p>Najznačajniji predikcioni faktori komplikacija influence bili su: prisustvo hroničnih bolesti ili stanja i uzrast &ge;15 godina. Prisustvo hroničnih bolesti ili stanja nosilo je 34 puta, a uzrast &ge;15 godina 10 puta veći rizik od nastanka te&scaron;kih oblika bolesti.</p><p>Izolacija influenca virusa na MDCK ćelijskim kulturama, bila je uspe&scaron;na u 34,3% (70/204) slučajeva, pri čemu je u grupi uzoraka sa real-time RT-PCR Ct vrednostima &lt;30 ona iznosila 80,5% (62/77), kod uzoraka sa Ct vrednostima 30-34 svega 8,7% (8/92), a izolacija iz uzoraka sa Ct vrednostima &gt;34 nije bila moguća. U reakciji hemaglutinacije, najbolji rezultati su postignuti sa eritrocitima zamorca, koje je u titru &ge;40 aglutiniralo 56% (14/25) A(H1N1)pdm09 virusa i 62,5% (15/24) A(H3N2) virusa. Sa humanim eritrocitima dobar titar dalo je 16% (4/25) influenca A(H1N1)pdm09 i 8,3% (2/24) A(H3N2) virusa, a sa koko&scaron;ijim eritrocitima 8% (2/25) A(H1N1)pdm09 virusa i nijedan virus A(H3N2) podtipa.</p><p>Rezultati antigenske karakterizacije pokazali su da je svih 23 influenca virusa A(H1N1)pdm09 podtipa, iz sezona 2012/2013 i 2013/2014, antigenski bilo slično referentnom, vakcinalnom virusu A/California/7/2009. Nasuprot tome, samo 1 od 7 ispitanih A(H3N2) virusa iz sezone 2012/2013, antigenski je bio sličan vakcinalnom virusu A/Victoria/361/2011, a samo 2 od 20 iz sezone 2013/2014 antigenski je bilo slično vakcinalnom A/Texas /50/2012 virusu.</p><p>Filogenetska analiza hemaglutinin gena influenca A(H1N1)pdm09 virusa iz sezone 2012/2013, pokazala je da su u na&scaron;oj sredini, bili prisutni virusi iz dve različite genogrupe, 6C i 7, dok su naredne sezone svi analizirani virusi pripadali genogrupi 6B. Virusi iz na&scaron;e sredine bili su filogenetski srodni A(H1N1)pdm09 virusima iz drugih evropskih zemalja. Svi ispitani A(H3N2) virusi iz sezone 2012/2013 i2013/2014, pripadali su genetičkoj grupi&nbsp; 3C.3.Filogenetski su bili srodni sa virusima iz drugih gografskih regiona Evrope.</p><p>Svih 20 izolata influenca A(H1N1)pdm09 podtipa i 23 A(H3N2) podtipa pokazali su normalnu inhibiciju aktivnosti neuraminidaze pod dejstvom oseltamivira.ekvenciranje neuraminidaza gena jednog A(H3N2) virusa, koji je imao 8 puta redukovanu inhibiciju aktivnosti neuraminidaze oseltamivirom, ukazalo jena prisustvo retke mutacije Q391H, povezane sa rezistencijom na inhibitore neuraminidaze.</p><p>Rezultati ovog rada ukazali su na značaj influenca A virusa kao etiolo&scaron;kih uzročnika akutnih respiratornih obolenja u na&scaron;oj sredini, naročito za osobe sa hroničnim bolestima koje su pod povećanim rizikom od razvoja te&scaron;kih oblika gripa. U ovom istraživanju stečena su i saznanja koja imaju praktičnu primenu u postupku antigenske karakterizacije influenca A virusa, koja je jedna od ključnih faza u procesu pripreme vakcine protiv gripa. Značajna antigenska razlika A(H3N2) virusa koji su cirkulisali u sezonama 2012/2013 i 2013/2014 u odnosu na viruse koji su bili u sastavu vakcina u datim sezonama, ukazala je na neophodnost unapređenja proizvodnje vakcine protiv gripa. Dobijeni su i prvipodaci orezistenciji na antivirotik oseltamivir, kao i o filogenetskim odnosima i genetičkim grupama virusa koji su&nbsp; cirkulisali u na&scaron;oj sredini.</p> / <p>In this study we investigated the representation, antigenic and genetic properties, and sensitivity to antiviral drug oseltamivir of influenza A viruses. The study was conducted&nbsp; during 4 consecutiveseasons 2010/2011 - 2013/2014, and included 887 nasal and throat swabs taken from patients with influenza-like symptoms from South&nbsp; Backa district. All samples were tested for influenza A(H1N1)pdm09, A(H3N2), A(H1N1), A(H5), A(H7) and influenza B viruses, by real-time RT-PCR. Isolation on MDCK cell culture was performed with positive samples from seasons 2012/2013 and 2013/2014, and virus isolates were tested for ability&nbsp; to agglutinate guinea pig, chicken and human red blood cells in reaction of virus hemagglutination. Antigenic properties of isolates with hemagglutination titre &ge;40, were investigated using reaction&nbsp; of hemagglutination inhibition. Genetic characterization was performed by sequencing of neuraminidase and hemagglutination genes of representative isolates from seasons 2012/2013 and 2013/2014. Testing for sensitivity to oseltamivir was done with chemiluminescent neuraminidase inhibition assay.</p><p>Total of 46,3% (411/887) of samples were influenza positive, out of which 73% (300/411) were influenza A positive and 27% (111/4111, p&lt;0,0001) were influenza&nbsp; B positive. Influenza A(H1N1)pdm09 subtype was detected in 48% (144/300), and A(H3N2) subtype in 52% (156/300) of influenza A positive samples. The highest proportion of influenza A positive samples wasfound in age group 5-14&nbsp; years (48,2%,&nbsp; 77/160) and among patients with uncomplicated influenza (43,7%, 153/350).</p><p>Influenza A(H1N1)pdm09 subtype predominated in age group 15-29 years (66%, 31/47, p=0,0400) and 30-64 years (55,9%,71/127, p=0,0215), in patients with severe acute respiratory illness (63,5%, 80/126, p&lt;0,0001), in fatal cases (100%, 9/9, p=0,0039), and among patients with underlying chronic diseases and conditions (68,8%,84/122, p&lt;0,0001).</p><p>Influenza A(H3N2) subtype predominated in age group &le;4 years (72,2%, 13/18, p=0,0381) and 5-14 years (75,3%,58/77, p&lt;0,0001), in patients with mild form of influenza (69,3%,106/153, p&lt;0,0001), and in group of patients without chronic diseases and conditions (66,3%,60/478, p&lt;0,0001).</p><p>The most significant risk factors for severe influenza were: the presence of underlying diseases and conditions and age &ge;15 years. Patients with chronic illnesses and conditions had 34 times higher and patients &ge;15 years of age 10 times higher risk from severe influenza.</p><p>Isolation rate of influenza A viruses in MDCK cell cultures was 34,3% (70/204). For samples with real time RT-PCR Ct values &lt;30 isolation rate was 80,5% (62/77), for samples with Ct values 30-34 it was 8,7% (8/92), while isolation of viruses from samples with Ct values &gt;34 was not successful. In the reaction of virus hemagglutination, the best results were achieved with guinea pig red blood cells which agglutinated in titre &ge;40, 56% (14/25) of influenza A(H1N1)pdm09 viruses and&nbsp; 62,5% (15/24) of A(H3N2) viruses. With human erythrocytes, good titre gave 16% (4/25) of influenza A(H1N1)pdm09 and 8,3% (2/24)of A(H3N2) viruses and with chicken erythrocytes 8% (2/25) A(H1N1)pdm09 viruses and none of the A(H3N2) viruses.</p><p>Results of the antigenic characterization of 23 influenza A(H1N1)pdm09 viruses, showed that they were antigenically similarto referent, vaccine virus A/California/7/2009. On the contrary, only 1 out of 7 influenza A(H3N2) viruses from season 2012/2013,was antigenically similar to A/Victoria/361/2011 vaccine virus, and only 2 out of 20 from season 2013/2014 were antigenically similar to A/Texas/50/2012&nbsp; vaccine virus.</p><p>Filogenetic analysis of hemagglutinin genes indicated co-circulation of 2 distinct genetic groups, 6C and 7, of A(H1N1)pdm09 viruses during the season 2012/2013, while during the season 2013/2014 all tested viruses were from genetic group 6B. Influenza A(H1N1)pdm09 viruses from our region, were closely related to viruses from other European countries. All influenza A(H3N2) viruses from season 2012/2013 and 2013/2014 belonged to genetic clade 3C.3 and were closely related to viruses from different European countries.</p><p>Total of 20 A(H1N1)pdm09 isolates and 23 A(H3N2) isolates were tested for sensitivity to oseltamivir, and all of them showed normal inhibition of neuraminidase activity with oseltamivir. Sequencing of&nbsp; neuraminidase gene of one A(H3N2) virus with 8-fold reduced inhibition by oseltamivir, revealed rare mutation Q391H associated with antiviral resistance.</p><p>Results of this study indicate the significance of influenza A viruses as etiological factors of acute respiratory diseases in our area, especially for persons with chronic medical conditions who are at higher risk for severe influenza. Data gathered during&nbsp;the process of virus isolation and investigation of hemagglutination abilities of&nbsp; isolated viruses, have practical application in antigenic testing of influenza A viruses which is one of the key points of process of anti-flu vaccine production. Significant &nbsp;antigenic difference between influenza A(H3N2) viruses from seasons 2012/2013 and&nbsp; 2013/2014 and vaccine viruses, emphasis the importance of vaccine production improvement. During this study, the first data about antiviral resistance, filogenetic relationships and genetic groups of influenza viruses from our region, were obtained.</p>

Os vírus da Influenza Equina (EIV) (H3N8 e H7N7) pertencem à família Orthomyxoviridae, gênero Influenza A. Apesar de existirem poucos relatos de infecção humana pelo EIV, é conhecido o risco zoonótico e infecção interespécies. Serviços de vigilância epidemiológica da OIE e WHO informam que o subtipo H3N8 é isolado de surtos que ocorrem mundialmente, enquanto o subtipo H7N7, menos patogênico, não é isolado desde 1980, sendo então considerado um vírus extinto. Embora o EIV seja endêmico em nosso meio, há poucos trabalhos nacionais que tenham versado sobre a avaliação atual de anticorpos (Ac) anti-EIV presentes nos equídeos do Estado de São Paulo, o que motivou a realização do presente estudo. Os objetivos do presente trabalho foram: 1) avaliar a ação de diferentes tratamentos de soro descritos pela OIE e WHO para a remoção de inibidores inespecíficos da hemaglutinação em soros de 10 equinos vacinados (H3N8 A/Equi/Kentucky/1/1997), sendo eles: a) TPH: tripsina, metaperiodato de potássio seguido de adsorção de hemácias; b) KH: kaolin 20% seguido de adsorção de hemácias; e c) RDEH: RDE seguido de adsorção de hemácias; 2) avaliar a presença de Ac contra os vírus H3N8 e H7N7, em 84 equídeos não vacinados do Estado de São Paulo; 3) comparar a frequência de Ac contra H3N8 entre equídeos amostrados do estado de SP e de um painel de soros de equídeos do município de Mossoró - RN, região onde não há estudos sobre a circulação do EIV. Constatou-se que não houve diferença estatística entre os tratamentos de soro para a remoção de inibidores inespecíficos da hemaglutinação (p>0,05; confiança de 95%), todavia o tratamento RDEH apresentou resultados mais consistentes, corroborando a recomendação da OIE e da WHO de utilizar preferencialmente este tratamento. O perfil sorológico dos animais amostrados de SP sugere que circule o subtipo H3N8 e que o subtipo H7N7 circule de forma subclínica nos equídeos, o que é sustentado por outros trabalhos realizados no Brasil. Há evidências no Brasil sobre a detecção de anticorpos em equinos contra o subtipo H7N7, mesmo não havendo o isolamento deste no mundo desde 1980. No painel de soros do RN, onde a espécie Equus asinus era maioria, verificou-se a igualdade estatística entre as frequências de Equus caballus e Equus asinus positivos no teste de HI para o subtipo H3N8 (p>0,05; confiança de 95%), dado inédito em nosso meio. A frequência dos equídeos positivos no teste de HI para o subtipo H3N8 foi estatisticamente maior (p<0,05; confiança de 95%) em SP do que em RN. / The Equine influenza Virus (EIV) (H3N8 and H7N7) belong to Orthomyxoviridae family and Influenza A genus. Although there are few reports of human infection with EIV zoonotic and interspecies infection risk is known. OIE and WHO services on epidemiological surveillance report that H3N8 subtypes are isolated and characterized from worldwide outbreaks while H7N7 subtype less pathogenic has not being isolated since 1980 considered an extinct virus. Although the EIV is endemic in our country there are few national studies that had versed on the current evaluation of horses antibodies (Ab) from São Paulo State which motivated the present study. The study objectives were: 1) to evaluate the effects of different serum treatments described by OIE and WHO for the removal of nonspecific inhibitors of hemagglutination in 10 vaccinated (H3N8 - A/Equi/Kentucky/1/1997) horses sera being: a) TPH: trypsin, potassium metaperiodate followed by adsorption of erythrocytes b) KH: kaolin 20% followed by adsorption of erythrocytes and c) RDEH: RDE followed by adsorption of erythrocytes; 2) investigate the presence of antibodies against H3N8 and H7N7 viruses in 84 unvaccinated equines in São Paulo State; 3) compare the frequency of antibodies against H3N8 sampled between São Paulo State and a panel of equines sera from Mossoró - RN where there are no studies on EIV circulation. There was no statistical difference between the treatments for serum nonspecific inhibitors of hemagglutination removal (p>0.05; 95% confidence) however RDEH treatment showed results more consistent confirming OIE and WHO recommendation to use this treatment with priority. The serological profile of SP samples suggests H3N8 subtype circulates in those animals and H7N7 subtype might circulate in a subclinical form in equines, which is supported by other studies conducted in Brazil. There is evidence of antibodies detection against equine H7N7 subtype in Brazil, even without since 1980 isolation in the world. In animals from RN State which had Equus asinus representing a major fraction there was statistical equal frequencies of Equus caballus and Equus asinus positivity in HI test against H3N8 subtype (p>0.05; 95% of confidence), as unprecedented in the world. The frequency of positive equine against H3N8 subtype on HI test in SP was statistically higher (p<0.05; 95% of confidence) than in RN.

Thesis (M.Sc. (Clinical Pathology))--Mahidol University, 1978.

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

Este trabalho teve como objetivo geral estabelecer critérios de maior precisão para a interpretação de resultados do diagnóstico sorológico para a Doença de Newcastle realizadas através do teste de HI (inibição da hemaglutinação). A fonte dos dados foram resultados de ensaios sorológicos realizados para monitoria da doença no estado de Santa Catarina, Brasil, no período de 2000 à 2010, sendo estas, cedidas pela CIDASC (Companhia Integrada de Desenvolvimento Agrícola de Santa Catarina). Como metodologia, foram ulitizadas técnicas de geoprocessamento com auxílio do aplicativo Capeiro 7, para estudo de caso, métodos estatísticos para estudo das GMTs (médias geométricas dos títulos) e métodos geoestatísticos, com auxilio do aplicavo ArcGis, com desígnio de avaliar q dependência espacial exercida entre os títulos. Estes métodos permitiram a análise espacial dos títulos sorológicos e correlacionar com os vizinhos mais próximos (unidades de produção integradas de frangos de corte) através de mapeamentos. Diante das informações repassadas para o desenvolvimento da presente pesquisa, no estudo de caso observou-se que os títulos sorológicos não exerciam influência sobre os vizinhos. Em um segundo momento, através das análises estatísticas observou-se um declínio das GMTs ao longo to tempo, podendo ser vizualizado um patamar de estabilização, que se fixou entre 1,14 e 1,60. Por fim, no estudo geoestatístico, pode-se constatar que os títulos sorológicos apresentaram dependência espacial nos dez anos analisados, sendo que, em ensaios de HI realizados com 4 UHA (unidades hemaglutinantes), os títulos 1/2 e 1/4 apresentaram dependência espacial de 12km, quando estudados em raios de 10 km a partir de granjas reprodutoras, as quais recebem vacinação para Doença de Newcastle. Os títulos 1/8 apresentaram dependência espacial de aproximadamente 8 km e os 1/16 de 5 km. Desta forma, foi detectado que, a medida que os títulos aumentavam, a dependência espacial entre eles diminuía, mas ainda sim, exercendo forte influencia sobre os vizinhos. / This study aimed to establish more precise criteria for the interpretation of results of serological diagnosis for Newcastle disease carried through the test of HI (hemagglutination inhibition). The source of the data were performed serologic test results for monitoring of the disease in the state of Santa Catarina, Brazil, from 2000 to 2010, these being provided by CIDASC (Integrated Agricultural Development Company of Santa Catarina). The methodology were used geoprocessing techniques to aid application Capeiro 7 for case study, statistical methods to the study of GMTs (geometric mean titers) and geostatistical methods with the aid of ArcGis software, with design to assess spatial dependence q exercised between titles. These methods allowed the spatial analysis of bonds and serological correlate with the nearest neighbors (production units integrated broiler) via mappings. Given the information passed to the development of this research, the case study showed that the serological not exerted influence on the neighbors. In a second step, through statistical analysis we observed a decline in GMTs over to time and can be visualized a level of stabilization, which was set between 1.14 and 1.60. Finally, the geostatistical study, it can be seen that the serological spatial dependence in ten years, and, in HI assays performed with 4 UHA (hemagglutinating units), securities 1/2 and 1/4 showed dependence space 12km, when studied in radius of 10 km from reproduction farms, which receive vaccination for Newcastle disease. The titres eighth spatial dependence of approximately 8 km and 1/16 of 5 km. Thus, it was detected that, as the titres increased, the spatial dependence between them lessened, but still exerting a strong influence on the neighbors.

Le titre sérique d'anticorps anti-hémagglutinine (HA) est reconnu comme corrélat de la protection à l'infection grippale. Cette thèse examine le rôle du titre d'anticorps HA comme corrélat de protection dans le contexte d'une seule infection, puis considère l'effet des expositions répétées sur la réponse immunitaire.Premièrement, l'association entre l'infection grippale par le virus A(H1N1)pdm09 et 167 variables a été explorée. Cette étude montre l'interaction complexe de facteurs qui influent sur le risque d'infection: les titres d'anticorps pré-épidémiques sont protecteurs, mais des facteurs tels que les comportements collectifs peuvent avoir un rôle important. Deux travaux réalisés dans le cadre de ce projet de thèse se basent sur les sérologies d'une cohorte française. Nous avons trouvé un association entre le titre d'anticorps dirigés contre le virus circulant 2007 A(H1N1) et le risque d'infection, la protection associée à ce titre variant avec l'âge. Une étude sur l'évolution du titre d'anticorps montre que celui-ci peut rester élevé jusqu'à deux ans après l'infection. Afin d'étudier les conséquences des expositions aux virus grippaux, nous avons modélisé les titres d'anticorps en fonction de l'âge des sujets lors de la circulation initiale de virus: la réponse immunitaire la plus importante concernant les souches A(H1N1) auxquelles les sujets ont été exposés pendant l'enfance. Ces études soutiennent l'utilisation du titre d’anticorps comme corrélat immunitaire de protection et suggèrent que d'autres facteurs peuvent influencer l'immunité anti-grippale. L'interprétation de la sérologie et les sérologiques d'homologation du vaccin devraient être indépendants de l'âge. / Hemagglutination inhibition (HI) antibody titer is widely recognized as the main immune correlate of protection against influenza infection. This thesis examines the role of HI titer as a correlate of protection in the context of a single infection, and then considers the effect of repeated exposures on the immune response.HI titer was first studied among 167 covariates in an exploratory analysis to identify determinants of A(H1N1)pdm09 infection using data from a cohort of 601 households representative of the general population. This study shows the complex interaction of factors influencing risk of infection; results suggest that pre-epidemic HI titers are protective and factors such as collective behaviors may also have an important role.Two studies were based on data from a cohort investigating determinants of recurrent influenza infection. The relationship between HI titer and protection against natural seasonal 2007 A(H1N1) infection was explored; the age-adjusted model suggests differences in the HI protection curve according to age group. Longitudinal analysis suggests that recent seasonal infection may have protected against A(H1N1)pdm09 infection. We also investigated the effects of repeated influenza exposures on HI titer: our results show evidence of a strong immune response to A(H1N1) strains circulating in early childhood. These studies support the use of HI titer as the main immune correlate of protection against influenza infection and suggest that other factors may have influence on immunity to infection. Age should be considered in interpretation of serology and serological criteria for influenza vaccine licensure.

A avicultura brasileira é atualmente uma atividade de grande sucesso. A utilização de sistemas de planejamento associados a novas tecnologias, reflete-se no extraordinário crescimento da atividade. A produção brasileira de frango ultrapassou a marca anual de 11 milhões de toneladas, em 2009. O Brasil está entre os três maiores produtores de frango no ranking mundial, junto com Estados Unidos e China. Haja vista a importância que a avicultura representa para o país, pela geração de benefícios sociais e econômicos, o risco que a Influenza aviaria constitui para a avicultura brasileira é enorme. Um surto desta doença em um centro de produção avícola representaria um risco à economia e incidiria de forma negativa nos níveis de consumo de proteína de qualidade e economicamente acessível à população. A fim de estabelecermos um monitoramento do vírus da Influenza A em aves domésticas não vacinadas, residentes em regiões de elevada confluência migratória aviária no Brasil a região amazônica, para a realização deste trabalho se fez necessário a colheita de sangue para o teste sorológico indicado como padrão em todo o mundo para detectar anticorpos contra o vírus da influenza, tendo como objetivos maiores, contribuir para o fortalecimento dos serviços de defesa sanitária animal, aumentar a capacidade de investigação, e finalmente, atualizar e harmonizar normas e procedimentos para a prevenção e controle da Influenza A, referenciando-se nas recomendações da Organização Mundial de Sanidade Animal (Office International des Epizooties - OIE). Das 1051 aves amostradas em diferentes localidades da região norte do Brasil, 1010 soros foram testados para seis diferentes subtipos virais: H2;H3;H5;H6;H7 e H9, pela técnica sorológica da Inibição da Hemaglutinação (HI). Destas, MAIS DE 50% apresentaram positividade para um subtipo viral testado, no entanto todos os soros apresentaram negatividade no centro de referência mundial em sorologia de Influenza, St. Jude Childrens Research Hospital localizado em Memphis, EUA. O antagonismo dos resultados levantam a discussão da metodologia adotada como padrão em todo mundo, o que nos levou a otimizar a técnica, vislumbramos a diferença ao compararmos os resultados do ano de 2005 e do ano de 2006, o primeiro ano obtivemos 50% de positividade nas amostras, já no ano seguinte esta positividade cai para aproximadamente 0,2%. Com este resultado podemos inferir que a técnica foi adequadamente otimizada, corroborando as informações de que o Brasil é livre de Influenza aviaria em patos domésticos na região amazônica. / The Brazilian poultry industry is currently a very successful activity. The use of planning systems associated with new technologies, reflected in the extraordinary growth in activity. The Brazilian production of chicken surpassed the annual 11 million tonnes in 2009. Brazil is among the three largest poultry producers in the world ranking, along with the United States and China. Given the importance of poultry production for the country, the generation of social and economic benefits, the risk that avian influenza poses to the Brazilian poultry industry is huge. An outbreak of this disease in a poultry-production pose a risk to the economy and impinge negatively on levels of consumption of protein quality and affordable to the population. In order to establish a monitoring of influenza A viruses in poultry unvaccinated residents in regions of high avian migratory confluence in Brazil the Amazon region, for this work was required the collection of blood for serological testing indicated as standard worldwide to detect antibodies against influenza viruses, with the larger goals, contribute to the strengthening of animal health protection services, increase research capacity, and finally, update and harmonize standards and procedures for the prevention and control Influenza A, referencing the recommendations of the World Organization for Animal Health (Office International des Epizooties - OIE). From 1051 birds sampled in different localities of northern Brazil, 1010 sera were tested for six different viral subtypes: H2, H3, H5, H6, H7 and H9, the serological technique the hemagglutination inhibition (HI). Of these, over 50% were positive for one viral strain tested, but all sera were negative in the center of world reference serology Influenza, St. Jude Children\'s Research Hospital located in Memphis, USA. The antagonism of the results raise the discussion of the methodology adopted as standard throughout the world, which has led us to optimize the technique, we can see the difference when comparing the results of 2005 and 2006, the first year we had 50% positivity in the samples, in the following year this positive drops to about 0.2%. With this result we infer that the technique was properly optimized, corroborating the information that Brazil is free from avian influenza in domestic ducks in the Amazon region.