Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal.

Memoria para optar al Título Profesional de Médico Veterinario / La Paratuberculosis o Enfermedad de Johne es una enteritis granulomatosa crónica de los rumiantes, causada por Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis, comunmente conocido como Mycobacterium paratuberculosis. Esta enfermedad se caracteriza por poseer un período de incubación de más de dos años, infectándose el animal en los primeros meses de vida, principalmente en el período neonatal. La gran mayoría de los animales infectados la cursan en forma subclínica, lo que dificulta inmensamente su diagnóstico, debido a la baja sensibilidad de los métodos existentes. El objetivo de este trabajo fue comparar y relacionar dos métodos diagnósticos, uno bacteriológico y otro serológico, en animales de predios infectados de la Región Metropolitana, con el fin de aportar con información para la implementación de un adecuado método de control de esta enfermedad en el país. Es así como se recolectó muestras de sangre y de deposiciones de 136 animales sintomáticos y asintomáticos procedentes de 2 rebaños lecheros infectados. Las muestras de suero fueron sometidas a una prueba de ELISA comercial y las muestras de deposiciones fueron cultivadas en medio de cultivo Herrold modificado con yema de huevo con y sin Micobactina J. Las muestras de deposiciones fueron procesadas previamente utilizando como decontaminante fecal el cloruro de hexadecilpiridinium y luego se realizó una incubación con los antibióticos, vancomicina, amphotericina B y ácido nalidíxico según el protocolo descrito por Whitlock y Rosenberger (1990). El 10,29% de las muestras de deposiciones resultaron positivas al cultivo, siendo confirmadas como tal, por su lento crecimiento sólo en el medio con Micobactina J (a partir de la octava semana) y mediante la técnica de tinción de Ziehl Neelsen. El diagnóstico serológico mediante la prueba de ELISA detectó un 83,8% de animales positivos. En este estudio hubo un alto porcentaje de muestras de cultivo contaminadas con hongos (44,85%), lo que resultó en una falta de asociación entre la prueba del cultivo fecal y la prueba de ELISA. El análisis estadístico mostró que no existe asociación entre las técnicas empleadas (P < 0,0001; kappa = 0,029). La alta tasa de contaminación de los cultivos se debió principalmente a que en algunas muestras se utilizó tubos, que en vez de tapa rosca, poseían un tapón de algodón cardé y que estaban además sellados con cinta “Parafilm”. El 90% de las muestras contaminadas correspondió a este tipo de tubos. Además un grado alto de contaminación siempre es esperable, debido a que se trabaja con material fecal. Para mejorar la técnica, se sugiere probar el método propuesto por Stabel (1997), quien propone el uso de antibióticos (vancomicina y ácido nalidíxico) en el medio de cultivo

La paratuberculose est une maladie enzootique contagieuse des ruminants due à Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis (Map). La longue période d'incubation et les faibles performances diagnostiques des tests limitent l'efficacité des plans de maîtrise. Les grands effectifs des troupeaux ovins limitent l'approche par dépistage individuel exhaustif, et les plans de maîtrise s'orientent vers la vaccination, dont les effets n'ont pas été évalués dans les troupeaux français. Á partir d'échantillons de sérum et de fèces de près de 4000 brebis issues de 30 élevages du Lot, les performances diagnostiques de deux trousses sérologiques ELISA et d'une qPCR sur fèces ont été estimées par des modèles à classes latentes bayésiens et fréquentistes. Nos résultats confirment la faible sensibilité et le défaut de spécificité des sérologies ELISA pour la détection des ovins infectés ; la qPCR présentant de meilleures performances diagnostiques. Par ailleurs nous avons évalué les performances diagnostiques relatives des ELISA et de la qPCR appliquées à des mélanges d'échantillons. Dans les deux cas les animaux forts répondeurs étaient détectés de façon systématique, les animaux faiblement positifs étant détectés de façon moins constante. Sur la base de simulations, nous avons évalué les performances des stratégies de dépistage et de suivi basées sur les analyses de mélanges d'échantillons à l'échelle des troupeaux. Alors que la sérologie ELISA est apparue insuffisamment spécifique, l'analyse de mélange de fèces par qPCR semble être une approche prometteuse, permettant de détecter des faibles prévalences d'infection. Enfin les travaux menés dans les troupeaux vaccinés ont précisé dans quelles mesures leur situation épidémiologique pouvait être approchée par l'emploi d'analyses en mélanges. / Paratuberculosis is a contagious enzootic disease in ruminants caused byMycobacteriumavium ssp. paratuberculosis (Map). The long incubation period and the low informative values of antemortem diagnostic tests limit the effectiveness of control plans. In large sheep flocks, exhaustive individual testing is unfeasible and control plansmainly focus on vaccination, the effects of which have not yet been evaluated in French flocks. Using blood and feces samples from nearly 4000 ewes in 30 sheep flocks from the French department of Lot, the diagnostic performances of two serum ELISA and one fecal qPCR kits were estimated using bayesian and frequentist latent class modeling. Our results confirm the low sensitivity and non-perfect specificity of serum ELISA for the detection of subclinically infected animals, while the diagnostic performances of fecal qPCR were better. We also evaluated the relative diagnostic performances of pooled-sample analysis for both tests. Highly qPCR/ELISA positive samples were invariously detected while low positive ones were associated with lower detection rates. The flock-level epidemiological performances of screening strategies based on pooled-sample analysis were evaluated by simulation studies. Pooled serum ELISA appeared lowly specific. Conversely, pooled fecal qPCR appeared promising, allowing the detection of low infection prevalence. Finally, the work carried out in the vaccinated flocks made it possible to better know their epidemiological status and to specify to what extent it could be approached using pooled-sample analysis.

This thesis was to determine the prevalence and distribution of paratuberculosis in the Ontario dairy sheep and dairy goat industries, identify potential risk factors for herds which tested positive, evaluate the accuracy of seven commercially available individual and two bulk tank diagnostic tests in these two populations, and determine the circulating strains of Mycobacterium avium ssp. paratuberculosis in faecal isolates obtained. A cross-sectional study was conducted between October 2010 and August 2011 in 29 goat herds and 21 sheep flocks located in Ontario. On each farm, 20 lactating animals over the age of two years were randomly selected and faeces, blood, and milk were sampled from each animal, and a bulk milk sample from each herd. A questionnaire inquiring about herd management and biosecurity behaviours was also completed. The seven individual animal tests evaluated were: faecal culture using the BACTEC® MGIT™ 960 liquid culture system, direct faecal PCR (Tetracore®, Rockville, MD) based on the hspX gene, the Prionics® ELISA on serum and milk, the IDEXX® ELISA on serum and milk, and the agar gel immunodiffusion (AGID) test on serum. The test evaluations used both frequentist (faecal culture - reference test) and Latent Class Analysis/Bayesian (LCA/BM) methods (no reference test). In goat herds, faecal culture demonstrated the highest sensitivity (Se), 81.1% (LCA/BM). In sheep, while faecal culture demonstrated the highest Se, 49.5%, there was a small probability it was higher than faecal PCR Se at 42.4%. The bulk tank tests evaluated were the 'Hyper-ELISA' test and real-time PCR test based on IS900 (AntelBio®). While PCR did not demonstrate sufficiently high Se to be used as a herd-level test, the Hyper-ELISA performed well as a herd-level test identifying farms with high prevalence when the cut-off was reduced to 0.05. Overall herd-level apparent prevalence was 79.3% in goat herds and 57.1% in sheep flocks when faecal culture was the reference standard and true herd-level prevalence (LCA/BM) was 83.0% and 66.8% in each population respectively. This high prevalence reveals a need for the implementation of a small ruminant paratuberculosis control program in Ontario, Canada based on testing, improving youngstock management, and strengthening biosecurity practices. / AHSI, OMAF

Mémoire numérisé par la Division de la gestion de documents et des archives de l'Université de Montréal

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Diss. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniv., 2002. / Härtill 5 uppsatser.

Lic.-avh. (sammanfattning) Uppsala : Sveriges lantbruksuniversitet, 2006. / Härtill 2 uppsatser.

Thesis (Ph.D.). / Written for the Dept. of Microbiology and Immunology. Title from title page of PDF (viewed 2009/06/11). Includes bibliographical references.