In the present study using zebrafish as the model organism, we have investigated the function of UII/UII-receptor (UIIR) signaling pathway during early embryogenesis. Herein we presented five lines of evidence supporting the hypothesis that UII/ UIIR signaling pathway is required for normal determination of asymmetric axis during early embryogenesis. First, function-loss of UII results in a concordant randomization of viscus asymmetries in embryos, including abnormalities in cardiac looping and positioning of visceral organs. Second, knockdown of UII randomizes the left-sided expression of asymmetrical genes including lefty2, spaw and pitx2c in the lateral plate mesoderm (LPM) and bmp4 in the developing heart domain and the LPM. Third, reduced UII levels interfere with the normal organogenesis of Kupffer's vesicle (KV), an organ implicated in the early steps of left-right (L-R) patterning of embryos. Fourth, repression of UII function perturbs the asymmetrical distribution of free Ca2+ (intracellular Ca2+) at the region surrounding embryo KV during early somitogenesis, which is one of the signaling mechanisms that propagandize and amplify the early clue of left-right (L-R) asymmetry. Fifth, depressing UII levels alters the normal pattern of Bmp and Nodal signaling, which modulate the establishment of L-R axis of developmental embryo. Collectively, these observations support a model in which UII/UIIR signal system takes part in the early molecular events of L-R asymmetry patterning of embryo by modulating Bmp and Nodal signaling, regulating KV normal morphogenesis, so then, maintaining the asymmetrical distribution of free intracellular Ca2+ at the peripheral region surrounding embryo KV. This study documents a role of UII/UIIR signaling pathway in the establishment of L-R axis of embryos which promises to reveal the molecular mechanisms responsible for human congenital diseases with heterotaxy. / Urotensin II (UII) is the most potent vasoconstrictor identified so far. This cyclic peptide stimulates its G protein-coupled receptor (GPR) to modulate cardiovascular system function in humans and in other animal species. / Li, Jun. / Advisers: Christopher HK Cheng; Mingliang He. / Source: Dissertation Abstracts International, Volume: 73-02, Section: B, page: . / Thesis (Ph.D.)--Chinese University of Hong Kong, 2010. / Includes bibliographical references (leaves 143-168). / Electronic reproduction. Hong Kong : Chinese University of Hong Kong, [2012] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Electronic reproduction. [Ann Arbor, MI] : ProQuest Information and Learning, [201-] System requirements: Adobe Acrobat Reader. Available via World Wide Web. / Abstract also in Chinese.

O estradiol (E2) exerce papel fundamental no desencadeamento da luteólise nos ruminantes. A redução das concentrações de E2 que se segue a ablação dos folículos retarda a luteólise enquanto que aplicações de E2 no final da fase luteínica estimulam a secreção de prostaglandina-F2α (PGF2α), induzindo a luteólise. O E2 pode preparar bioquimicamente o endométrio de forma que a progesterona (P4) possa estimular a secreção de PGF2α. Para esse trabalho foi utilizado um antagonista de P4 (RU486) no intuito de se estudar efeitos da P4 em associação com o E2 na produção de PGF2α. Foram conduzidos 2 experimentos com vacas holandesas em final da fase luteínica. No primeiro experimento, 2 grupos (n=4) receberam respectivamente RU486 (3mg/kg)+E2 (3mg) e placebo+E2. O uso do RU486 não inibiu a produção de PGFM (metabólito da PGF2α) e sim aumentou-a. O E2 estimulou a produção de PGFM. Verificou-se também que o etanol (ETOH) utilizado como solvente para o RU486 provocou forte pico de liberação de PGFM. No experimento 2 fez-se necessário checar a efetividade da ação do ETOH nos resultados obtidos. Animais foram divididos em 3 grupos (n=3) que receberam 0,00; 0,03 e 0,06mL de ETOH/kg de peso vivo. Uma hora após a aplicação do ETOH todos receberam E2 (3mg). O ETOH e o E2 voltaram a estimular a produção de PGFM. A baixa especificidade do RU486, a possível ativação de receptores de P4 pelo próprio RU486 e/ou ação do LH associado ao E2 podem ter estimulado a liberação de PGFM. Porém pouco pôde-se concluir sobre o pico de PGFM ocasionado pelo ETOH. / Estradiol (E2) is essential for triggering luteolysis in ruminants. The low E2 concentrations after follicular ablation prolongs luteolysis instead of E2 injections in late luteal phase stimulate prostaglandin F2α (PGF2α) and luteolysis. The E2 could act in endometrium avoiding progesterone (P4 ) to stimulate PGF 2α secretion. A P4 antagonist (RU486) was used for it. Holstein cows in late luteal phase where used for those 2 experiments. First experiment, 2 groups (n=4) received respectively RU486 (3mg/kg)+E2 (3mg) and placebo+E2 Ru486 increased PGFM (PGF2α metabolite). E2 stimulated PGFM production. Ethanol (ETOH) used as a RU486 vehicle strongly stimulated PGFM. In experiment 2 the effectivity of ETOH was studied. Animals were share into 3 groups (n=3) receiving 0,00; 0,03 e 0,06mL of ETOH/kg. All animals received E2 (3mg) 1hour after ETOH injection. Once more, both ETOH and E2 stimulated PGFM releasing. The low RU486 specificity, the possible P4 receptor activation by the RU486 itself and/or the LH/E2 association could be able to stimulate PGFM release. The PGFM stimulus by the ETOH injection is not well understood.

Novel, rationally-designed acrylate analogs of various known dipeptide substrates were found to be mechanism-based inactivators of the enzyme peptidylglycine alpha-amidating monooxygenase (PAM, EC 1.14.17.3). This enzyme is responsible for the rate-limiting and final bioactivation step, a C-terminal amidation of glycine-extended peptides, of a variety of peptide hormones including the potent pro-inflammatory compound Substance P. Protein-ligand docking studies, in tandem with in vitro kinetic analysis of these inactivators, indicated that the rational design of this class of compounds was successful in creating potent competitive inactivators of this enzyme. Pharmacological evaluation, via both acute and chronic models of inflammation in Sprague-Dawley rats, of these compounds indicates that they are highly potent anti-inflammatory agents which ameliorate both acute carrageenan-induced edema and the deleterious effects of chronic adjuvant-induced polyarthritis. Furthermore, these compounds were also able to induce a return toward a more normal phenotype in cancerous WB-Ras epithelial cells, via the interruption of the growth factor-stimulated pathway precipitated by Substance P. Finally, our modeling studies provide a structural basis for both the reaction and subsite stereospecificity of PAM toward its substrates, competitive inhibitors, and mechanism-based inactivators.

published_or_final_version / abstract / toc / Zoology / Master / Master of Philosophy

Diss. (sammanfattning) Stockholm : Karol. inst., 2006. / Härtill 4 uppsatser.

Thesis (Ph. D.)--Ohio State University, 2007. / Full text release at OhioLINK's ETD Center delayed at author's request

Made available in DSpace on 2014-10-09T12:32:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T13:57:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 11289.pdf: 2851934 bytes, checksum: 328e6c9804dcaae490bbe9287fd55516 (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IPEN/D / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP

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Submitted by Claudinei Pracidelli (cpracide@ipen.br) on 2015-11-12T10:39:15Z No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2015-11-12T10:39:15Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / O sistema de expressão baseado nos promotores PL ou PR do fago lambda que usualmente é regulado pelo repressor termo lábil (cIts) é amplamente utilizado para produzir proteínas recombinantes em células procarióticas. No entanto, o aumento da temperatura requerido neste sistema para promover a inativação do repressor apresenta algumas limitações, como o aumento da expressão de proteínas de HSP (Heat Shock Proteins), por exemplo, proteases, que dependendo da natureza da proteína expressa podem ser prejudiciais ou não. Uma outra limitação é a ativação da resposta SOS, resultando na parada da replicação do DNA celular ou dependendo da cepa pode ocorrer lise celular. Nesse trabalho nós descrevemos o uso do promotor λPL para expressão constitutiva, isto é, sem a regulação do repressor. Nós otimizamos diferentes condições de cultura para aumentar a secreção no espaço periplásmico de Escherichia coli de cinco proteínas: o hormônio do crescimento humano (hGH), que tem sido amplamente utilizado no tratamento de crianças com deficiência e/ou resistência ao hGH, síndrome de Turner, entre outras desordens; prolactina humana (hPRL), um hormônio polipeptídico conhecido por estimular a lactação e por exercer ação regulatória no crescimento e na diferenciação da glândula mamária, dois antagonistas de hPRL, estudados como potenciais fármacos para o tratamento de alguns tipos de cânceres e por fim o interferon α2a (IFN-α2a), que é uma citocina produzida pelas células, em resposta a diferentes estímulos, incluindo ácidos nucléicos virais, células estranhas (particularmente as neoplásicas), antígenos de bactérias, protozoários e vírus. No caso do IFN-α2a, essa citocina de alto valor agregado e de importante aplicação terapêutica, foi desenvolvida em nosso laboratório como parte desse trabalho, incluindo o desenvolvimento e a validação da metodologia de análise por HPLC de fase reversa para determinação do IFN presente no fluído periplásmico bacteriano ou na sua forma pura. As principais estratégias utilizadas para melhorar a expressão foram iniciar a indução junto à densidade óptica máxima do crescimento bacteriano e otimizar a temperatura de indução para controlar a expressão da proteína heteróloga. Essa metodologia pode ser utilizada nos casos onde o produto não será tóxico para a célula hospedeira ou quando a instabilidade do plasmídeo não é problema. A possibilidade de cultivo em temperaturas mais baixas, já que o repressor termo-sensível não se encontra presente, colaborou para o aumento significativo da expressão, mesmo para proteínas menos sensíveis à temperatura de cultivo, como o hGH. / Tese (Doutorado em Tecnologia Nuclear) / IPEN/T / Instituto de Pesquisas Energeticas e Nucleares - IPEN-CNEN/SP