Thesis (Ph. D.)--Oregon State University, 2011. / Printout. Includes bibliographical references (leaves 205-227). Also available on the World Wide Web.

Orientador: Glaucia Maria Pastore / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-26T12:25:32Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Holschuh_HeinzJohann_D.pdf: 63368397 bytes, checksum: 174b6461d6ec437dbbd780136f1f3839 (MD5) Previous issue date: 2000 / Resumo: Peroxidases (POD, EC 1.11.7.1 doador: peróxido de hidrogênio oxidoredutase) são um grupo de isoenzimas responsabilizadas pelo surgimento de alterações da coloração natural dos alimentos e sabor desagradável; são usadas em análises de alimentos, clínicas, e em conjunto com outras enzimas, na conservação de certos alimentos. Muitas frutas como a carambola (Averhoa carambola, L.) ainda não tiveram suas peroxidases avaliadas quanto às suas propriedades bioquímicas. Esse trabalho teve como objetivo isolar, purificar e caracterizar bioquimicamente a peroxidase de carambola. A localização histoquímica da peroxidase realizou-se mergulhando fatias de carambolas verdes, verde-maturas e sobre-maduras em mistura de reação constituída de 1 % de guaiacol em tampão fosfato de potássio 0,1 M pH 6,0, e 0,1 M de peróxido de hidrogênio. A evolução do escurecimento foi acompanhada e fotografada. A localização em frutas verdes e verde-maturas restringiu-se às partes mais fibrosas: junto aos feixes vasculares que atravessam a polpa, ao talo central e gineceu e à casca. Em fatia de carambola sobre-madura a polpa adquiriu coloração do tetraguaiacol e houve extravasamento do composto colorido para o meio de reação, indicando a presença de maior quantidade de enzima solúvel. Partes de carambola, casca, polpa e talo central com gineceu foram analisadas separadamente, após extração da POD com tampão mais eficiente, fosfato de potássio 0,2 M pH 8,0. Os resultados encontrados na localização histoquímica foram confirmados. Talo central com gineceu apresentaram maior atividade por grama da parte da fruta, seguido pela casca; polpa apresentou atividade considerável. apenas em carambolas sobremaduras. Carambolas verdes renderam maior atividade POD por grama, na soma das partes. Foram testados o efeito da adição de 0,2 M de CaCI2,2% de PVP, 2% de PEG, 0,01 M de EDTA e 0,01 M de ácido L-ascórbico, isoladamente ou em combinação ao tampão de extrato fosfato de potássio 0,2 M ou à água destilada, na extração de peroxidase insolúvel de carambola, sendo que a melhor combinação foi tampão fosfato 0,2 M pH 8,0 contendo 0,2 M CaCI2, 2% PEG e 0,01 M de EDTA. O extrato total, obtido pela extração com os aditivos acima citados e 0,1% de Triton X-10O, rendeu 1,29 vezes mais POD que a soma das extrações em seqüência: 1) Enzima Livre: extraída em água destilada, contendo PEG e EDTA, ressuspendendo e extraindo o precipitado por duas vezes; 2) Enzima ionicamente ligada: ressuspendendo o último precipitado de (1) em tampão fosfato de potássio 0,2 M pH 8,0, contendo CaCb, repetindo a operação por duas vezes e, 3) Enzima solúvel com Triton X-100: ressuspensão do último precipitado de (2) no tampão de extração (2), contendo 0,1% de Triton X-100. Nos ensaios de precipitação da peroxidase, sulfato de amônio a 90% de saturação preservou apenas 3% mais atividade por grama de carambola que a adição de 65% de acetona ¿Observação: O resumo, na íntegra poderá ser visualizado no texto completo da tese digital. / Abstract: Peroxidases (POD, EC 1.11.7.1 donor: hydrogen peroxide oxydoreductase) are a group of isoenzymes whose action results in discoloration and off-flavours in foods, but are also used in food and clinical analyses, as well as in food conservation, combined with the action of other enzymes. A lot of tropical fruits and vegetables have yet to be biochemically characterised with respect to their peroxidases. This study aimed at to isolating, purifying and characterising the peroxidase from carambola (Averrhoa carambola, L.) fruit. The histochemical localisation of peroxidase from carambola was carried out by immersing slices of green, green-mature and overripe carambolas in a reaction mixture of 1% guaiacol in 0.1 M potassium phosphate buffer, pH 6.0 and 0.1 M hydrogen peroxide. The development of browning was observed and photographed. In green and green-mature slices the POD was localised near the fibrous parts such as vascular bundles, internal stem, gynoecium and peel. In overripe slices the colouring of the pulp and the reaction medium could be seen, indicating the presence of greater amounts of soluble POD at this stage of maturation. Separate analysis of POD activity in the parts: internal stem with gynoecium, pulp and peel of carambola, confirmed the findings of the histochemical localisation. The internal stem with gynoecium had the highest activity per gram of fruit part, followed by the peel. The pulp showed appreciable activity only in overripe fruits. Green carambolas showed the highest POD activity in relation to the other maturation stages tested. The best extraction buffer was found to be 0.2 M potassium phosphate buffer, pH 8.0. The extraction of POD activity with the addition of other chemical substances, showed that the addition of 0.2 M CaCI2,2% PEG and 0.01 M EDTA in 0.2 M potassium phosphate buffer, pH 8.0, was the best medium for total extraction. The total extract yielded 1.29 times the amount of POD activity as the sum of sequential extractions: Soluble enzyme (three times), lonically bound enzyme (three times) and Triton X-100 soluble enzyme (an other three times). Precipitation studies using 65% solutions of ethanol or acetone and 90% saturation of ammonium sulphate showed that ammonium sulphate resulted in only 3% more activity per gram of fruit than acetone ...Note: The complete abstract is available with the full electronic digital thesis or dissertations. / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

Orientador: Helia Harumi Sato / Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-08-02T22:37:56Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Pereira_AnaMaria_D.pdf: 3544438 bytes, checksum: b74e28e9dd71d41466fc01eddf43ab8a (MD5) Previous issue date: 2003 / Resumo: A peroxidase (EC 1.11. 7.1, doador: peróxido de hidrogênio oxidoredutase) do taperebá (Spondias lutea L.), um fruto nativo da Amazônia com aroma bem caracteristico e de grande uso na fabricação de sucos, geléias, néctar e sorvete, foi purificada e caracterizada. A extração da peroxidase ionicamente ligada da polpa do taperebá foi obtida pelo uso do tampão fosfato de sódio 0,2 M, pH 8,0 contendo lOmM EDTA, 0,2M CaCb and 2% PEG na proporção 1: 1 (polpa:tampão) (v/v). A peroxidase foi purificada por meio de precipitação com acetona seguida pela filtração em gel em coluna Sephacryl S-200 em sistema FPLC. A eletroforese da peroxidase purificada em gel de poliacrilamida mostrou uma banda de atividade peroxidativa. A peroxidase bruta do taperebá apresentou atividade ótima em pH 4,5 e 35°C e mostrou estabilidade numa ampla faixa de pH (2,6-10) e em temperaturas inferiores a 50°C. A peroxidase purificada foi caracterizada como uma glicoproteína e mostrou atividade específica igual a 514.320 D/mg, massa molecular 28,5 kDa e ponto isoelétrico 4,8. A peroxidase purificada apresentou atividade ótima a 35°C e pH 5,5. A enzima seguiu a cinética de Michaelis-Menten e o valor de Km foi igual a 20,3 mM para o substrato guaiacol. A enzima purificada mostrou-se estável numa ampla faixa de pH (pH 2,6-10). A estabilidade térmica da peroxidase purificada foi analisada na faixa 10°C-90°C. A enzima mostrou ser estável ao calor, sendo que após aquecimento a 70°C durante 60 min, aproximadamente 65% da atividade enzimática foi mantida. A inativação térmica da peroxidase purificada apresentou um perfil não linear com o tempo de aquecimento. A isoperoxidase foi totalmente inativada depois do aquecimento a 90°C por 2 min e a atividade enzimática da peroxidase purificada não regenerou quando foi mantida a 30°C durante 24 h e a 5°C por 24h, depois da inativação térmica. A peroxidase purificada foi completamente inibida pelo ácido ascórbico na concentração final 1 mM, metabissulfito de sódio e bissulfito de sódio na concentração final 10 mM, inibidores freqüentemente usados no processamento de alimentos. A atividade da peroxidase foi ativada pelo CaCb (1 OmM) e NaCI (1mM), mas foi fortemente inibida pelo CUSO4 (10 mM), Fe2(SO4)3 (lmM) e completamente inibida pelo KCN (lmM). A isoenzima purificada foi parcialmente afetada pelos sais MnSO4, MgSO4, KCl e Na2S04 e pelos compostos químicos SDS, EDTA, Nbromosuccinimida, iodoacetamida. A atividade da enzima foi totalmente inibida pelo mercaptoetanol na concentração final 10mM / Abstract: Peroxidase (EC 1.11. 7.1, donor: hydrogen peroxide oxidoreductase) ITom the "taperebá" :fi-uit (Spondias /utea L.), a native Amazonian fruit with a typical flavour and widely used for making juice, jellies, nectars and ice cream, was purified and characterized. Extraction ofthe ionically bound peroxidase was achieved using O.2M potassium phosphate buffer at pH 8.0 containing 10mM EDTA, 0.2M CaCh and 2% (w/v) PEG in a 1: 1 ratio of :fi-uit to buffer. The peroxidase was purified by means of acetone precipitation followed by gel filtration on a Sephacryl S-200 column using the FPLC system. One peroxidase isoenzyme was detected in "taperebá" :fi-uit. Electrophoresis of the purified enzyme using polyacrilamide gel, showed a single staining band for peroxidase activity. The crude peroxidase showed maximum activity at 3SoC and pH 4.5, and was stable over a wide range pH (2.6-10), showing great thermostability below at 50°C. The purified peroxidase was characterized as a glycoprotein and showed a specific activity of 514,320 -U/mg, molecular weight of 28.5 kDa and isoelectric point of 4.8. The effect oftemperature and pH on the enzymatic activity was analysed for the purified isoenzyme. The peroxidase showed maximum enzymatic activity at 3 SOC and pH 5. S. The enzyme followed the Michaelis-Menten kinetics and presented a Km value of 20.3 mM with guaiacol substrate. The enzyme was stable over a wide range pH (pH 2.6-10). The thermostability of the purified peroxidase was analysed in the 10°C-90°C temperature range and showed great thermostability. After heating at 70°C for 60 min, approximately 65% of the activity was retained. The heat inactivation of the purified peroxidase was found to be non-linear with heating time. The purified peroxidase was totally inactivated after heating at 90°C for 2 min and its enzymic activity did not regenerate when held at 30°C or SOC for 24h after heat inactivation. The purified peroxidase was completely inhibited by 1 mM ascorbic acid, 10mM sodium metabisulphite and 10mM sodium bisulphite, inhibitors often used in food processing. The peroxidase activity was activated by 10mM CaCh and lmM NaCl, but was strongly inhibited by 10mM CUSO4, 1 mM Fe2(SO4)3 and completely by 1 mM KCN. The purified enzyme was partially affected by the salts MnSO4, MgSO4, KCl and Na2S04 and by the compounds SDS, EDT A, N-bromosuccinimide and iodoacetamide. The enzymic activity was totally inhibited by 10 mM ß-mercaptoethanol / Doutorado / Doutor em Ciência de Alimentos

none

Thesis (Ph. D.)--University of Wisconsin--Madison, 1930. / Typescript. Includes bibliographical references.

Orientador : Helia Harumi Sato / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos / Made available in DSpace on 2018-07-31T19:19:55Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Santos_ElenResende_M.pdf: 4836043 bytes, checksum: b66fb40022284bb44753681a42b8cc26 (MD5) Previous issue date: 2001 / Mestrado

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:30:59Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2010-08-26Bitstream added on 2014-06-13T20:21:35Z : No. of bitstreams: 1 santos_mc_dr_araiq.pdf: 1124332 bytes, checksum: 1e349d4a6fad699f76e186f17e5de53c (MD5) / Outros / As peroxidases são hemeproteínas que catalisam a oxidação de vários xenobióticos na presença de peróxido. A soja é um dos principais produtos de exportação do Brasil e sua manufatura gera subprodutos em grande escala. Um destes, a casca, é uma fonte rica em peroxidase (SBP). Para a otimização da extração da SBP de casca de soja, e condições de ensaio, foi utilizado um planejamento fatorial com metodologia de superfície de resposta, resultando em 128 experimentos. Os dados definiram o meio reacional da SBP: pH 4,5 (transgênicas) e pH 7,0 (tradicionais); temperatura 500C; tratamento do tegumento com obtenção do pó cetonico; NaCl 0,1 mol/L; volume de amostra da enzima 330mL, guaiacol 30mmol/L, H2O2 46 mmol/L, em tampão 50mmol/L. Após, iniciou-se os estudos da SBP de diferentes cultivares: convencionais (BRS 258, BRS 260, BRS 262) e transgênicas (BRS 255 RR, BRS Charrua RR e BRS Pampa RR) de cascas de soja fornecidas pela EMBRAPA, visando estudo comparativo sobre o conteúdo de peroxidase (SBP), e posterior seleção para isolamento da enzima e estudos de seus parâmetros cinéticos. Para isso, a amostra, em pó cetônico, de cada cultivar foi ressuspensa em tampão extrator, a proteína precipitada com sulfato de amônio 70%, o precipitado ressuspenso em tampão extrator e eluído em coluna Sephadex G-25, para dessanilização. Nas frações (eluatos) foram realizados os spots test para identificação de SBP. As cultivares BRS 258, BRS 262, BRS 260 e BRS 255 RR foram selecionadas com maior conteúdo de enzima SBP. Assim, volumes (5mL) de tais cultivares foram eluídos em coluna Sephadex G-100 para purificação parcial e determinação da massa molecular. Com as frações (eluatos) obteve-se “pool” de enzima, onde se efetuou os estudos cinéticos: efeito de cátions mono e divalentes, determinação dos parâmetros cinéticos - kM, vmax, pH ótimo, temperatura ótima... / The peroxidases are hemeproteins that catalyze the oxidation of various xenobiotics in the presence of peroxide. Soybean is a major export products from Brazil and its manufacture creates byproducts in large scale. One of these, the bark is a rich source of peroxidase (SBP). To optimize the extraction of the SBP of soybean seed coat, and test conditions, we used a factorial planning with response surface methodology, resulting in 128 experiments. The data defined the reaction medium SBP pH 4.5 (transgenic) and pH 7.0 (traditional), temperature 500C; treatment of sample to obtain the “acetone powder”, NaCl 0.1 mol / L, sample volume of the enzyme 330 mL, guaiacol 30 mmol / L, H2O2 46 mmol / L in buffer 50mmol / L. After he began the studies of SBP from different cultivars: Conventional (BRS 258, BRS 260, BRS 262) and transgenic (BRS 255 RR, BRS and BRS Pampa RR) soybean seeds coat supplied by EMBRAPA, doing comparative study on the content of peroxidase (SBP), and subsequent selection to isolate the enzyme and studies of its kinetic parameters. For this, the sample in “acetone powder” of each cultivar was re-suspended in extraction buffer, the protein precipitated with ammonium sulfate 70%, the precipitate resuspended in extraction buffer and eluted in Sephadex G-25 column, for desalination. In the fractions (eluates) were performed to identify test spots SBP. BRS 258, BRS 262, BRS 260 and BRS 255 RR were selected with the highest content of enzyme SBP. Thus, volumes (5mL) of these cultivars were eluted in Sephadex G-100 column for partial purification and determination of molecular weight. With the fractions (eluate) obtained a pool of enzyme, which has made the kinetic studies: effects of mono-and divalent cations, determination of kinetic parameters - kM, vmax, optimum pH, optimum temperature. The data showed: i) optimum pH 4.5, ii) the optimum temperature, BRS 260... (Complete abstract click electronic access below)

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by Sham Mai-har. / Bibliography: leaves 149-176 / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 1983