Orientador: Marcelo Diniz Vitorino. / Dissertação (mestrado) - Universidade Regional de Blumenau, Centro de Ciências Tecnológicas, Programa de Pós-Graduação em Engenharia Ambiental.

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Dissertação (Mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2012. / Submitted by Alaíde Gonçalves dos Santos (alaide@unb.br) on 2012-06-01T11:13:33Z No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Approved for entry into archive by Elzi Bittencourt(elzi@bce.unb.br) on 2012-06-02T12:15:10Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Made available in DSpace on 2012-06-02T12:15:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2012_DanielMendesPereiraArdissondeAraujo.pdf: 1831896 bytes, checksum: b70d1a421b0235fc55aca44a22aab16f (MD5) / Baculovírus são vírus de DNA dupla-fita circular que infectam insetos principalmente da ordem Lepidoptera. O problema de seu uso como inseticida é o tempo que este leva para matar o inseto hospedeiro. A fim de resolver este problema, inserção de genes inseticidas no genoma viral pode ser requerida. Uma importante fonte de proteínas inseticidas é o veneno de aracnídeos, cujo alvo e ação permanecem pouco elucidados. Assim, promopos o uso de baculovírus como ferramenta para entender mecanismo de ação de peptídeos tóxicos em células de inseto. Diante disso, diferentes versões da toxina putativa BaTx derivada de biblioteca de cDNA da glândula de veneno da aranha caranguejeira Brachypelma albiceps foram obtidas por PCR e usadas para construção de baculovírus recombinantes. Os recombinantes foram usados para infecção de duas linhagens de lepidópteros, IPLB-Sf1-AE e BTI-Tn5B1-4 e a viabilidade celular foi avaliada durante a infecção. As diferentes versões da toxina causaram morte celular precoce por necrose em níveis diferenciados. Análise estrutural e ultraestrutural mostraram clara mudança citomorfológica em células, corroborando perda de integridade da membrana plasmática e do conteúdo citoplasmático, permanência do núcleo com carioteca intacta e associada a restos de membranas circundantes. Esta característica criou um aspecto rugoso quando observado em microscopia de luz. Além disso, o gene da toxina BaTx foi expresso em sistema procariótico para obtenção de antisoro policlonal murino. Entretanto, quando testado contra extratos de células infectadas com recombinantes, não houve marcação. Fato este esperado, uma vez que a toxina não foi observada em gel SDS-PAGE. Não há relatos de genes de toxinas de aranha com ação citotóxica clonadas em baculovírus, provavelmente esta característica não permitiu que houvesse acúmulo da toxina em níveis diagnosticáveis por imunomarcação ou pode ter promovido instabilidade peptídica. Peptídeos formadores de canais apresentam alto conteúdo de resíduos básicos (arginina e lisina), de cisteínas e conformação em folha-beta. BaTx apresenta todas estas características, porém alvo e ação permanecem obscuros. Canais tipo-TRP são encontrados em insetos e há indícios da presença desses transportadores na membrana plasmática e em membranas intracelulares. Talvez estes canais possam ser o alvo de ação da toxina BaTx. _______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Baculoviruses are dsDNA circular virus infectives to insects mainly from the Order Lepidoptera. Its biopesticide use problem is the time of death during insect infection. To solve this problem, insecticide genes can be inserted into the viral genome. An important insectice protein source is the venom of arachinids. However, the target and action of many peptides remain unclear. Baculoviruses can be used as a tool to udersatand the toxic peptides playing in insect cells. Thus, different vesions of a putative toxin were obtained from cDNA library of the tarantula Brachypelma albiceps venom gland by PCR and used to construct recombinant baculoviruses. The recombinants were used to infect two lepidopteran cell lines, IPLB-Sf1-AE and BTITn5B1- 4, and cell viability was evaluated during infection. The toxin versions caused wide and early cell death by necrosis in different levels. Structural and ultrastructural analyses showed clear cytomorphological changes, corroborating loss of the plasma membrane integrity and cytoplasmic contents, and nucleus with intact karyotheca linked with surrounding plasma membrane remains. The features created a rough aspect when those infected cells were observed by light microscopy. Furthermore, the BaTx toxin gene was expressed by a prokaryotic system to obtain murine polyclonal antiserum. However, when the antiserum was tested against infected cells extract with recombinant virus carrying the BaTx toxin no reaction was detected. This observation was expected since the toxin was not observed by SDS-PAGE. There are no reports of spider toxin genes with necrotic action cloned into baculovirus, probably this feature did not allowed toxin accumulation in detectable levels by immunoblot or it could have promoted protein instability. Channel former peptides show high content of basic amino acid residues (lysine and arginine), cystein residues, and beta-sheet conformation. BaTx presents all those features, but its target and mode of action remain unknown. TRP-like channels are found in insects and there is evidence of the presence of these iontransporters in intracellular membranes as well as in plasma membrane. Perhaps TRPlike channels can be the BaTx toxin target of action.

O gênero Spodoptera, Guenée 1852, (Lepidoptera: Noctuidae) é representado por 30 espécies de importância por incluir grande parte dos insetos que causam danos significat ivos a diversas culturas de interesse econômico cult ivada pelo homem. Entretanto, existem poucos estudos detalhados de biologia, especialmente relacionados a aspectos reprodutivos. Este estudo objet ivou desenvolver e validar uma metodologia que permita detalhar os parâmetros biológicos de representantes de Lepidoptera, para permit ir comparações intra e interespecíficas em condições controladas (25 ± 1ºC, 70 ± 10% UR e fotofase de 14 horas) e reunir informações sobre as plantas hospedeiras de suas lagartas. Para tanto foram empregadas e validadas novas metodologias de criação e dieta artificial. Nas fases imaturas observou-se que a viabilidade das fases de ovo, larva, pré-pupa e pupa foram de 94,54; 97,33; 93,84 e 92,34%, para S. albula, e de 97,82; 93,62; 96,42 e 97,03% para S. eridania, respectivamente. A duração média das fases de ovo, larva, pré-pupa e pupa foi de 4,14; 16,37; 1,69; e 9,34 dias, para S. albula e de 4,00; 16,18; 1,58; e 9,17 dias, para S. eridania. Na fase de larva observou-se que para ambas as espécies a maioria dos espécimes passaram por seis instares, com protandria larval significat iva. Foram relacionadas 55 plantas hospedeiras para S.albula e 202 para S. eridania. A longevidade das fêmeas foi significativamente maior que a dos machos para ambas as espécies. Os períodos médios de pré, pós e oviposição foram de 2,615; 1,769 e 9,385 dias, respectivamente para S. albula e 2,067; 0,600 e 8,133 para S. eridania. A fecundidade média foi de 1.417,69 ovos e a fertilidade 1.340,401 lagartas por fêmea para S. albula e 1.398.00 e 1.367.50 para S. eridania. Em média as fêmeas copularam 1,2 vezes. Observou-se forte correlação posit iva entre o número de cópulas e a fecundidade e, forte correlação negativa, entre o número de cópulas e a duração do período de pré-oviposição e a longevidade. O potencial biótico de S. albula e S. eridania foi estimado em 8,768 x 1022 e 1,894 x 1025 indivíduos/fêmea/ano respectivamente. A taxa líquida de reprodução (Ro), o tempo médio de geração, e a taxa intrínseca de aumento (rm) para S. albula e S.eridania foram respectivamente, 353,904; 560,531 vezes por geração, 37,187; 35,807 dias e 1,105; 0,177, com uma razão finita de aumento de (λ) 3,019 e (λ) de 1,193. Tanto a metodologia de criação quanto a dieta larval mostraram-se adequadas, pois permit iram alta sobrevivência, fertilidade e um melhor detalhamento das observações relacionadas ao ciclo biológico, especialmente do estágio larval. / Submitted by Marcelo Teixeira (mvteixeira@ucs.br) on 2014-06-12T11:38:04Z No. of bitstreams: 1 Dissertacao Debora Goulart Montezano.pdf: 2988963 bytes, checksum: cc4905da590ba9141c3bfa39949e880b (MD5) / Made available in DSpace on 2014-06-12T11:38:04Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Dissertacao Debora Goulart Montezano.pdf: 2988963 bytes, checksum: cc4905da590ba9141c3bfa39949e880b (MD5) / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The genus Spodoptera, Guenée 1852, (Lepidoptera: Noctuidae) is represented by 30 species of great importance to encompass most of the insects that cause significant damage to several economically important crops cult ivated by man. However, there are few detailed studies of biology, especially related to reproductive aspects. This study aimed to develop and validate a methodology to detail the biological parameters of representatives of Lepidoptera, particularly S. eridania and S. albula to allow comparisons intra and interspecific under controlled condit ions (25 ± 1 º C, 70 ± 10% RH and 14h photophase) and gather informat ion about the host plants for their larvae. For both were employed and validated new methods of creation and artificial diet. In the immature stages was observed that the viability of the egg, larva, pupa and pre-pupae were 94.54, 97.33, 93.84 and 92.34% for S. albula, and 97.82, 93.62, 96.42 and 97.03% for S. eridania, respectively. The average duration of the stages of egg, larva, pupa and pre-pupa was 4.14, 16.37, 1.69, and 9.34 days for S. albula and 4.00, 16.18, 1.58, and 9.17 days for S. eridania. At the stage of larvae was observed that for both species passed through six instar, with significant larval protandry. 55 host plants were related for S. albula and 202 for S. eridania. The longevity of females was significant ly higher than in males for both species. The average periods of pre, post and oviposit ion were 2.615, 1.769 and 9.385 days, respectively for S. albula and 2.067, 0.600 and 8.133 for S. eridania. The average fecundity was 1.417,69 egss 1.340,401 larvae per female for S. albula and 1.398.00 and 1.367.50 to S. eridania. On average females mated 1.2 times. There was a strong posit ive correlation between the number of mat ings and fecundity, and a strong negat ive correlat ion between the number of copulations and duration of pre-oviposit ion and longevity. The biot ic potential of S. albula and S. eridania was estimated at 8,768 x 1022 and 1,894 x 1025 individuals / female / year respectively. The net reproductive rate (Ro), mean generat ion time and intrinsic rate o f increase (rm) for S. albula and S.eridania were respectively 353.904, 560.531 times per generation, 37.187, 35.807 days and 1.105, 0.177, with a finite rate of increase (λ) and 3.019 (λ) of 1.193. Both the methodology of creation as the larval diet were suitable, because they enabled high survival, fert ility and much more detail of the observat ions related to the biological cycle, especially the larval stage.

O gênero Spodoptera, Guenée 1852, (Lepidoptera: Noctuidae) é representado por 30 espécies de importância por incluir grande parte dos insetos que causam danos significat ivos a diversas culturas de interesse econômico cult ivada pelo homem. Entretanto, existem poucos estudos detalhados de biologia, especialmente relacionados a aspectos reprodutivos. Este estudo objet ivou desenvolver e validar uma metodologia que permita detalhar os parâmetros biológicos de representantes de Lepidoptera, para permit ir comparações intra e interespecíficas em condições controladas (25 ± 1ºC, 70 ± 10% UR e fotofase de 14 horas) e reunir informações sobre as plantas hospedeiras de suas lagartas. Para tanto foram empregadas e validadas novas metodologias de criação e dieta artificial. Nas fases imaturas observou-se que a viabilidade das fases de ovo, larva, pré-pupa e pupa foram de 94,54; 97,33; 93,84 e 92,34%, para S. albula, e de 97,82; 93,62; 96,42 e 97,03% para S. eridania, respectivamente. A duração média das fases de ovo, larva, pré-pupa e pupa foi de 4,14; 16,37; 1,69; e 9,34 dias, para S. albula e de 4,00; 16,18; 1,58; e 9,17 dias, para S. eridania. Na fase de larva observou-se que para ambas as espécies a maioria dos espécimes passaram por seis instares, com protandria larval significat iva. Foram relacionadas 55 plantas hospedeiras para S.albula e 202 para S. eridania. A longevidade das fêmeas foi significativamente maior que a dos machos para ambas as espécies. Os períodos médios de pré, pós e oviposição foram de 2,615; 1,769 e 9,385 dias, respectivamente para S. albula e 2,067; 0,600 e 8,133 para S. eridania. A fecundidade média foi de 1.417,69 ovos e a fertilidade 1.340,401 lagartas por fêmea para S. albula e 1.398.00 e 1.367.50 para S. eridania. Em média as fêmeas copularam 1,2 vezes. Observou-se forte correlação posit iva entre o número de cópulas e a fecundidade e, forte correlação negativa, entre o número de cópulas e a duração do período de pré-oviposição e a longevidade. O potencial biótico de S. albula e S. eridania foi estimado em 8,768 x 1022 e 1,894 x 1025 indivíduos/fêmea/ano respectivamente. A taxa líquida de reprodução (Ro), o tempo médio de geração, e a taxa intrínseca de aumento (rm) para S. albula e S.eridania foram respectivamente, 353,904; 560,531 vezes por geração, 37,187; 35,807 dias e 1,105; 0,177, com uma razão finita de aumento de (λ) 3,019 e (λ) de 1,193. Tanto a metodologia de criação quanto a dieta larval mostraram-se adequadas, pois permit iram alta sobrevivência, fertilidade e um melhor detalhamento das observações relacionadas ao ciclo biológico, especialmente do estágio larval. / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico / The genus Spodoptera, Guenée 1852, (Lepidoptera: Noctuidae) is represented by 30 species of great importance to encompass most of the insects that cause significant damage to several economically important crops cult ivated by man. However, there are few detailed studies of biology, especially related to reproductive aspects. This study aimed to develop and validate a methodology to detail the biological parameters of representatives of Lepidoptera, particularly S. eridania and S. albula to allow comparisons intra and interspecific under controlled condit ions (25 ± 1 º C, 70 ± 10% RH and 14h photophase) and gather informat ion about the host plants for their larvae. For both were employed and validated new methods of creation and artificial diet. In the immature stages was observed that the viability of the egg, larva, pupa and pre-pupae were 94.54, 97.33, 93.84 and 92.34% for S. albula, and 97.82, 93.62, 96.42 and 97.03% for S. eridania, respectively. The average duration of the stages of egg, larva, pupa and pre-pupa was 4.14, 16.37, 1.69, and 9.34 days for S. albula and 4.00, 16.18, 1.58, and 9.17 days for S. eridania. At the stage of larvae was observed that for both species passed through six instar, with significant larval protandry. 55 host plants were related for S. albula and 202 for S. eridania. The longevity of females was significant ly higher than in males for both species. The average periods of pre, post and oviposit ion were 2.615, 1.769 and 9.385 days, respectively for S. albula and 2.067, 0.600 and 8.133 for S. eridania. The average fecundity was 1.417,69 egss 1.340,401 larvae per female for S. albula and 1.398.00 and 1.367.50 to S. eridania. On average females mated 1.2 times. There was a strong posit ive correlation between the number of mat ings and fecundity, and a strong negat ive correlat ion between the number of copulations and duration of pre-oviposit ion and longevity. The biot ic potential of S. albula and S. eridania was estimated at 8,768 x 1022 and 1,894 x 1025 individuals / female / year respectively. The net reproductive rate (Ro), mean generat ion time and intrinsic rate o f increase (rm) for S. albula and S.eridania were respectively 353.904, 560.531 times per generation, 37.187, 35.807 days and 1.105, 0.177, with a finite rate of increase (λ) and 3.019 (λ) of 1.193. Both the methodology of creation as the larval diet were suitable, because they enabled high survival, fert ility and much more detail of the observat ions related to the biological cycle, especially the larval stage.

Orientador : Mohamed E. M. Habib / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-07-14T02:18:26Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Waib_ClaudiaMaria_M.pdf: 4807680 bytes, checksum: ccef75da69ca8c83c6e7fac986ca404d (MD5) Previous issue date: 1992 / Resumo: A bactéria entomopatogênica Bacillus thuringiensis var. tenebrionis (H:82-8b), isolada em 1982 na Alemanha, tem sido considerada um agente promissor para o controle de coleópteros prejudiciais. O presente trabalho teve como objetivo avaliar a patogenicidade de dois preparados experimentais à base desta bactéria (ABG-6256/ABBOTT e BSF) a espécies de coleópteros pragas de grãos e subprodutos armazenados. O estágio de desenvolvimento mais susceptível para cada espécie, assim como observações da sintomatologia externa da patogenia e dinâmica da germinação dos esporos em meio artificial são aspectos abordados. As espécies estudadas foram: Sitophillus zeamais (Curculionidae), Cryptolestes ferrugineus (Cucujidae), Lasioderma serricorne (Anobiidae), Carpophilus sp. (Nitidulidae), Tribolium sp. E Tenebrio molitor (Tenebrionidae). Estes coleópteros foram mantidos em criação de laboratório sob condições controladas de temperatura, umidade relativa e fotoperíodo, em suas dietas naturais. A susceptibilidade de cada espécie estudada foi avaliada através de bioensaios utilizando-se o critério de Tempo Letal Mediano (TL50), o qual foi calculado pelo método de regressão log-próbite. O plaqueamento dos preparados experimentais foi feito em meio nutriente completo e as contagens das colônias foram realizadas 8, 12 e 15 h após a inoculação do patógeno. Nenhum sintoma pré-mortal da doença foi constatado além de alterações comportamentais como lentidão de movimentos e ausência de respostas a estímulos mecânicos e físicos tanto nas larvas como nos adultos tratados. Sintomas externos pós-mortais da bacteriose, como a flacidez do corpo e escurecimento total de tegumento, foram observados nas larvas das espécies avaliadas. Já nos adultos, não foi possível a observação de tais sintomas. O preparado ABG-6256 mostrou-se mais eficiente que o da BASF para larvas de L. serricorne e larvas e adultos de T. molitor. Já para as larvas de Carpophilus sp., o preparado da BASF demonstrou uma maior eficiência. Para os adultos desta espécie não houve diferença significativa entre a eficiência dos dois preparados. Observação: O resumo, na íntegra, poderá ser visualizado no texto completo da tese digital / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Ciências Biológicas

Orientador: Regiane Cristina Oliveira de Freitas Bueno / Banca: Roberto Postali Parra / Banca: Pedro Takao Yamamoto / Banca: Juliano Carlos Calonego / Banca: Sandra Regina Magro / Resumo: A exemplo de praticamente todos os cultivos agrícolas no Brasil, a cultura do milho é hospedeira de insetos fitófagos de diferentes espécies, que invariavelmente ocasionam prejuízos econômicos à produção do país. Para diminuir os prejuízos causados pelos insetos-praga, o uso de inseticidas se tornou uma pratica cada vez mais comum nos plantios. No entanto, as pulverizações excessivas, e muitas vezes realizadas sem necessidade tornaram essa tática de controle pouco eficiente no manejo das principais pragas da cultura do milho. Dentro desse contexto, torna-se cada vez mais importante a adoção das práticas do MIP, ainda muito pouco utilizadas no Brasil, em que as táticas de controle são utilizadas de forma isolada ou integrada afim de regular a população da praga e preservar os inimigos naturais. Para tanto, o monitoramento das pragas e o reconhecimento do papel regulador dos insetos benéficos são primordiais. Sendo assim, o objetivo desse estudo foi a avaliar a eficiência de T. pretiosum e T. remus no manejo de S. frugiperda na cultura do milho. Os experimentos foram conduzidos nas áreas pertencentes a Fazenda de Ensino, Pesquisa e Extensão (FEPE) da FCA/UNESP, Campus Botucatu - SP, durante as safras 2015/16 e 2016/17. Durante a segunda safra (safrinha) 2016 o experimento foi conduzido na Fazenda São José, localizada no munícipio de Sidrolândia-MS. Os quatro tratamentos adotados em Botucatu-SP foram alocados em uma área contendo três hectares, dividida em parcelas de 1 hectare ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: As practically all agricultural crops in Brazil, maize crop is a host of phytophagous insects of different species, that invariably cause economic losses to the country's production. To reduce the damage caused by insect pests, the use of insecticides has become an increasingly common practice in planting. However, excessive spraying, and often carried out without necessity, has rendered this tactic control inefficient in the management of main maize crop pests. In this context, it becomes increasingly important to adopt Integrated Pest Management (IPM) practices, still underused in Brazil, where control tactics are used in isolation or integrated to regulate the population of the pest and preserve natural enemies. To this end, pest monitoring and recognition of the regulatory role of agents beneficial are paramount. Therefore, the objective of this study was to evaluate the management of lepidopteran pests with the release of the parasitoids of Trichogramma pretiosum Riley (Hymenoptera: Trichogrammatidae) and Telenomus remus Nixon (Hymenoptera: Platygastridae) eggs in maize. The experiments were conducted in the areas belonging to FCA / UNESP in the Farm of Education, Research and Extension (FEPE), Campus Botucatu - SP, during the 2015/16 and 2016/17 seasons. In the second harvest 2016 the experiment was conducted at São José Farm, located in the Municipality of Sidrolândia-MS. The four treatments adopted in Botucatu-SP were allocated in an area containing three hectares, divided in plots of 1 hectare each and sized with GPS assistance, the areas were far apart so that one treatment did not influence the other. In Sidrolândia-MS, only three treatments were tested and installed each in an area of three hectares, divided into plots of 1 hectare each, between treatments was left 150 meters of planted area to avoid the influence of one treatment on the other. Spodoptera frugiperda (JE Smith) ... / Doutor

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Biologia, 2011. / Submitted by Jaqueline Ferreira de Souza (jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-05T14:28:18Z No. of bitstreams: 1 2011_MichelyFerreiraSantosdeAquino.pdf: 8914441 bytes, checksum: 101e518f6bb5c891e0294318ebcae578 (MD5) / Approved for entry into archive by Jaqueline Ferreira de Souza(jaquefs.braz@gmail.com) on 2011-09-05T14:28:33Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2011_MichelyFerreiraSantosdeAquino.pdf: 8914441 bytes, checksum: 101e518f6bb5c891e0294318ebcae578 (MD5) / Made available in DSpace on 2011-09-05T14:28:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2011_MichelyFerreiraSantosdeAquino.pdf: 8914441 bytes, checksum: 101e518f6bb5c891e0294318ebcae578 (MD5) / Os parasitóides são importantes componentes dos ecossistemas terrestres atuando como controladores de populações de insetos herbívoros. A busca e seleção de hospedeiros constituem etapas decisivas do ciclo vital destes insetos já que asseguram seu sucesso reprodutivo. O forrageamento das fêmeas dos parasitóides inclui uma série de passos comportamentais seqüenciais intermediados por estímulos de natureza física (visuais ou mecânicas), química (semioquímicos) ou bioquímica. O objetivo deste trabalho foi estudar a influência de características físicas e químicas do hospedeiro nos comportamentos de busca e seleção dos parasitóides de ovos Telenomus podisi e Trissolcus basalis, importantes agentes de mortalidade de percevejos praga da soja. Foram realizados experimentos utilizando substratos coloridos para estudar sua influência no comportamento de busca de hospedeiros. Os parasitóides mostraram preferência inata por substratos de cor amarelo e secundariamente verde. Esta resposta não foi modificada após experiência de oviposição em substratos de diferentes cores, indicando ausência de aprendizado associativo em relação à cor de substrato. Os resultados sugerem que a resposta a cores de substratos observada estaria relacionada com a orientação para a folhagem de plantas durante a busca de hospedeiros. Em outra etapa do trabalho foram estudados os comportamentos de reconhecimento e aceitação de hospedeiros quando os parasitóides utilizaram ovos de quatro espécies de percevejos (Euschistus heros, Nezara viridula, Piezodorus guidlinii e Chinavia ubica). Neste caso foram analisadas a influência de características físicas do hospedeiro. Os parasitóides mostraram uma clara discriminação de hospedeiros parasitando somente ovos daquelas espécies de percevejos que maximizam seu sucesso reprodutivo. Embora os comportamentos de reconhecimento e aceitação de hospedeiros se apresentaram bem estereotipados, foi observado que diferenças morfológicas como tamanho e forma das posturas e cor e ornamentação dos ovos são importantes para diferenciação dos hospedeiros. A última etapa do trabalho foi dedicada ao estudo de estímulos químicos relacionados ao reconhecimento de hospedeiros. Extrações químicas de ovos de E. heros em diferentes solventes (acetona, metanol e diclorometano) e tempos de extração (1, 4 e 24 h) revelaram que o solvente de maior polaridade utilizado, metanol, foi o mais eficiente, extraindo maior quantidade de compostos que os obtidos nos outros solventes. Adicionalmente os extratos metanólicos induziram no parasitóide T. podisi os comportamentos de reconhecimento e tentativa de oviposição, quando os mesmos foram aplicados em posturas artificiais, formadas com pérolas de vidro. A resposta observada no parasitóide resultou significativamente superior à observada frente a extratos obtidos com outros solventes ou solventes aplicados individualmente nas pérolas de vidro. Os resultados obtidos representam novas contribuições para o avanço do conhecimento do comportamento de forrageamento de parasitóides da família Scelionidae. Trabalhos futuros devem orientar-se principalmente à identificação precisa dos compostos químicos com ação cairomonal, ao estudo das interações entre estímulos físicos e químicos e a estabelecer a importância dos mesmos tanto para estimular comportamentos específicos quanto para identificar aqueles envolvidos na seleção de hospedeiros que maximizam o potencial reprodutivo dos parasitóides. ______________________________________________________________________________ ABSTRACT / Insect parasitoids are main components of terrestrial ecosystems functionin as regulators of insect herbivores populations. Search and selection of host are decisive steps in the vital cycle because ensure the reproductive success. Parasitoids females foraging include some behavioral steps mediated by physical (visual or mechanics), chemical (semiochemicals) or biochemical. The egg parasitoids Telenomus podisi and Trisssolcus basalis are important as mortality agents of stink bugs that are pest on soybean and some aspects of their behavior are unknown. The objective of this work was study the influence of physical and chemical characteristic of the host in the search and selection behaviors of the egg parasitoids, Telenomus podisi and Trissolcus, two important mortality agents of stink bugs that are pest on soybean. There were conducted experiments using colored substrates to study their influence in the host searching behavior. The parasitoids showed innate preference by yellow substrates and, secondarily, by green substrates. This response was not modified after oviposition experience on substrates of different colors, indicating absence of associative learning in relation to the colors of the substrate. The results suggest that the response to colour of substrate observed could be related to the orientation to plants foliages when search for hosts. In other step of the work the host identification and acceptation behaviors when the parasitoids used egg of four species of stink bugs (Euschistus heros, Nezara viridula, Piezodorus guidlinii e Chinavia ubica) were studied. In this case were analyzed the physical characteristics of hosts. The parasitoids showed a clear discrimination of host parasitizing eggs of stink bugs species that maximize their reproductive success. Although the host identification and acceptation behaviors were stereotyped it was observed that, morphological differences as size and shape of the egg masses and egg color and ornamentation are important to host differentiation. The last stage of the work was dedicated to the study of chemical stimuli related to the recognition of host. Chemical extractions of eggs of the brown stink bug, E. heros, in different solvents (acetone, methanol and dichloromethane) and extraction times (1,4 and 24 h) showed that the more polar solvent, methanol, was more efficient, extracting higher quantities of the compounds obtained when compared with the others solvents used. Besides methanolic extracts induced, in the parasitoid T. podisi, the recognition behavior and oviposition attempt, when they were applied on artificial egg mass, formed with glass beads. The parasitoid response was significantly higher than the observed when the glass beads were treated with extracts obtained in others solvents or solvents alone. The results obtained represent new contributions to the advance of knoweldge of foraging behavior of Scelionidae wasps. Future works should be oriented, principally, to accurate identification of the chemical compounds with kairomonal action, to the study of the interactions of chemical and physical stimuli and establish both their relevance to induce specific behaviors and to identify which are related to the selection of hosts that maximize the reproductive success of these parasitoids.

Toxinas Cry provenientes de Bacillus thuringiensis, também denominadas de δ- endotoxinas, possuem ampla atividade inseticida e são específicas para insetos de diferentes ordens, não sendo nocivas a mamíferos, aves, anfíbios ou répteis. Devido a esta característica, seus genes vêm sendo utilizados no desenvolvimento de plantas transgênicas, visando o controle de insetos-praga de culturas de importância econômica. Dentre estas, destaca-se o algodoeiro que tem como principais pragas o bicudo-do-algodoeiro (Anthonomus grandis) e a lagarta-do-cartucho (Spodoptera frugiperda), ambas causadoras de grandes prejuízos econômicos. Assim, este trabalho objetivou: caracterizar uma estirpe de Bt (S811) tóxica contra S. frugiperda e A. grandis, identificar e clonar os genes codificadores de toxinas Cry potenciais para o controle dessas pragas, expressar os genes em sistema heterólogo Escherichia coli e testar a toxicidade das toxinas contra as pragas em questão. Os resultados obtidos nas análises da estirpe por microscopia eletrônica revelaram a presença de cristais esféricos e bipiramidais, enquanto que a análise de SDS-PAGE detectou proteínas de massa molecular com cerca de 140 kDa e 80 kDa. Posteriormente, uma caracterização gênica, utilizando oligonucleotídeos específicos para genes cry, identificou três genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, sendo estes dois últimos de maior interesse. O gene cry8, que foi isolado pela técnica TAIL-PCR, codifica uma proteína com 58% de identidade de aminoácidos com outras toxinas Cry8, enquanto que o gene cry1Ia12 (isolado com oligonucleotídeos específicos) codifica uma proteína que possui 99% de identidade com as outras proteínas do tipo Cry1Ia descritas na literatura. As porções tóxicas dos genes foram clonadas e expressadas em E. coli produzindo as proteínas recombinantes Cry8 e Cry1Ia12 de aproximadamente 70 kDa (cada uma). As proteínas recombinantes causaram mortalidade de 50% para larvas de A. grandis com 230 μg/ml e 160 μg/ml de Cry1Ia12 e Cry8, respectivamente, enquanto que para larvas de S. frugiperda, apenas Cry1Ia12 foi tóxica causando mortalidade de 50% com 5 μg/ml. Todos estes estudos contribuirão para o desenvolvimento de plantas transgênicas de algodão, bem como para a geração de novas moléculas com maior toxicidade e especificidade utilizando a evolução molecular in vitro (DNA shuffling) destes genes. / Cry toxins or δ-endotoxins, produced by Bacillus thuringiensis, show broad activity against several orders of insects. In addition, they are harmless to mammals, birds, amphibian, and reptiles. Because of these characteristics, several genes have been used in the development of transgenic plants to control pests in important crops. Among them, the cotton crop is very important in Brazil and it has the cotton boll weevil, Anthonomus grandis, and the fall armyworm, Spodoptera frugiperda, as the major pests in this crop, which cause several economic damages. The objective of this work was: to characterize a Bt strain (S811), which is toxic towards S. frugiperda and A. grandis, to identify and clone the coding genes of the Cry toxins with potential to control these pests, to express the genes in Escherichia coli heterologous system, and to test the toxicity of the recombinant proteins towards the reported pests. Electronic microscopic analysis revealed the presence of bipyramidal and spherical crystals and SDS-PAGE analysis showed proteins with 140 kDa and 80 kDa of molecular weight mass. Further gene characterization, using specific primer sets to detect cry genes, identified three genes, cry1Ab, cry1Ia e cry8, although the cry1Ia e cry8 were the genes of major interest. The cry8 gene was isolated through TAIL-PCR techniques and encodes a protein 58% identical to other Cry8 toxins, while the protein deduced from cry1Ia12 gene showed 99% identity with other Cry1Ia toxins previously described. The cry1A12 and cry8 gene toxic fragments were cloned and expressed in E. coli, and the 70 kDa recombinant proteins of were tested against A. grandis and S. frugiperda. Cry1Ia12 toxin caused 50% mortality at 230 μg/ml and 5 μg/ml towards both A. grandis and S. frugiperda, respectively. Cry8 toxin caused 50% mortality only against A. grandis at 160 μg/ml. In addition to the transgenic cotton development program, these results will permit the generation of new molecules with higher toxicity and specificity for these pests through in vitro molecular evolution (DNA shuffling) of these genes.

Made available in DSpace on 2014-08-13T14:50:36Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2013-06-21Bitstream added on 2014-08-13T18:01:08Z : No. of bitstreams: 1 000738502_20150619.pdf: 168048 bytes, checksum: 67974831ca78b6d925c01cebfef1a94c (MD5) Bitstreams deleted on 2015-06-22T12:53:50Z: 000738502_20150619.pdf,. Added 1 bitstream(s) on 2015-06-22T12:54:45Z : No. of bitstreams: 1 000738502.pdf: 1467766 bytes, checksum: 7c0de265290f7067173746101d9a2b71 (MD5) / Aminopeptidases N (APNs) são uma classe de ectoenzimas presentes no intestino médio das larvas de lepidópteros, que participa no cenário do modo de ação das toxinas Bacillus thuringiensis (Bt). No presente trabalho, duas aminopeptidases (OnAPN5 e OnAPN6) foram clonadas a partir células do intestino de Ostrinia nubilalis, lepidópteros praga do milho dos climas temperados. As duas sequências foram identificadas como APNs pela da presença dos motivos HEXXH18(X)E e GAMEM, bem como o peptídeo sinal. As mesmas se agruparam corretamente quando analisadas com outras sequências de aminopeptidase em uma arvore fenogenética, Pode-se verificar a expressão em tempo real em diferentes tecidos (intestinal, adiposo e tegumento) da APN5 e APN6 e também de uma terceira aminopeptidase APN7 analisada nesta etapa do trabalho, onde APN7 apresentou expressão de 7,5 vezes mais no tegumento quando comparado com o intestino e de 4,9 vezes mais no tecido adiposo quando comparado com o intestino enquanto que a APN5 e APN6 apresentaram expressão relevante apenas no tecido do intestino. Estas identificações de APNs irão facilitar estudos para caracterizar interações de ligação com as toxinas Bt, proporcionando uma forma de compreender e evitar o desenvolvimento da resistência às proteínas Cry de B. thuringiensis. Estas informações são fundamentais para a elaboração de estratégias adequadas para o manejo da resistência de pragas e seu efetivo controle / Aminopeptidases N (APNs) are a class of ectoenzymes present in the midgut of lepidopteran larvae, which participates in setting the mode of action of Bacillus thuringiensis toxin (Bt). In this work, two aminopeptidases (OnAPN5 and OnAPN6) were cloned from cells of the intestine Ostrinia nubilalis, Lepidoptera pests of temperate maize. The two sequences were identified as APNs for the presence of motifs HEXXH18 (X) and E GAMEM as well as the signal peptide. The same when analyzed correctly grouped with other aminopeptidase sequences in a tree fenogenética, can check in real time the expression in different tissues (gut, adipose tissue and carcass) from APN5 and APN6 and also a third aminopeptidase analyzed in this step APN7 work, where APN7 showed expression of 7.5 times the carcass when compared with the intestine and 4.9 times in adipose tissue when compared with the intestine while APN5 and APN6 relevant only showed expression in tissue of the intestine. These IDs APNs will facilitate studies to characterize binding interactions with Bt toxins, providing a way to understand and prevent the development of resistance to Cry proteins of B. thuringiensis. This information is fundamental to the development of appropriate strategies for managing pest resistance and its effective control