Orientador: Letícia Helena Theodoro / Coorientador: Valdir Gouveia Garcia / Banca: Edilson Ervolino / Banca: João Eduardo Gomes Filho / Banca: Guilherme José Pimentel Lopes de Oliveira / Banca: Karina Gonzales Silvério Ruiz / Resumo: Os probióticos (PROs) estão sendo intensamente avaliados na prevenção ou tratamento de doenças da cavidade oral, que estão associadas a uma mudança na composição e atividade microbiana do biofilme e resposta do hospedeiro. O objetivo desse estudo foi avaliar o efeito do Lactobacillus reuteri aplicado localmente ou sistemicamente como coadjuvante ao tratamento periodontal não cirúrgico de raspagem e alisamento radicular (RAR), na periodontite experimentalmente induzida em animais submetidos à quimioterapia com 5-fluorouracil (5-FU). A indução da periodontite experimental (PE) foi realizada com a colocação de um fio de algodão ao redor dos molares inferiores esquerdos de 108 ratos, que permaneceu por 7 dias. Todos os animais receberam o quimioterápico no momento da indução da PE (60mg/kg) e 48 horas após (40mg/kg) e foram separados aleatoriamente em 6 grupos com 18 animais cada um, com os seguintes tratamentos: 5FU: animais tratados com 5-FU; 5FU/RAR: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR seguido de 1 aplicação de solução fisiológica salina (SS; 0,16mL); Grupo 5FU/SSL: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 aplicações locais de SS (0,16mL); 5FU/SSS: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 gavagens com SS (0,16mL); 5FU/PL: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 aplicações locais de PRO (0,16 mL); 5FU/PS: animais tratados com 5-FU, que receberam tratamento com RAR e 4 gavagens com PRO ... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: Probiotics (PROs) have been intensively evaluated to prevent or treat oral cavity diseases, associated with a change in the composition and microbial activity of the biofilm and response of the host. The aim of this study was to evaluate the effect of Lactobacillus reuteri applied locally or systemically as a coadjuvant to the non-surgical periodontal treatment of scaling and root planing (SRP) in experimentally induced periodontitis in animals treated with 5-fluorouracil (5-FU). Induction of experimental periodontitis (EP) was performed by placing a cotton thread around the left lower molars of 108 rats, which were kept there for 7 days. All animals underwent chemotherapy twice. They were 60mg/kg at the time they were subjected to ligature induction and again another 40 mg/kg, 48 hours later. They were randomly divided into 6 groups with 18 animals each and they received the following treatments: 5FU: treated animals with 5-FU; 5FU/SRP: 5-FU treated animals receiving SRP treatment followed by physiological saline (SS) solution; 5FU/SSL group: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and local SS applications; 5FU/SSS: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and systemic treatment with SS; 5FU/PL: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and local applications of PRO; 5FU/PS: animals treated with 5-FU, who received SRP treatment and systemic treatment with PRO (0.16ml x 4 days). Six animals from each group were submitted to euthanasia a... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

O objetivo deste estudo foi avaliar os efeitos da administração tópica de bactérias probióticas do gênero Bifidobacterium na doença periodontal experimental em ratos. Foram utilizados 32 ratos divididos nos seguintes grupos: CT (controle), DPT (doença periodontal), CT-HN019 (controle + probiótico) e DPT-HN019 (doença periodontal + probiótico). No dia 0 do experimento, a doença periodontal foi induzida nos animais dos grupos DPT e DPT-HN019 por meio da colocação de ligaduras ao redor dos primeiros molares inferiores. Nos Grupos CT-HN019 e DPT-HN019, 2 mL de uma suspensão contendo 109 unidades formadoras de colônia/mL de Bifidobacterium animalis subsp lactis (B. lactis) HN019 foram administrados topicamente na região subgengival dos primeiros molares inferiores nos dias 0, 3 e 7 do experimento. Nos grupos CT e DPT, as administrações tópicas foram realizadas com uma suspensão sham (sem probiótico). Todos os animais foram submetidos à eutanásia 14 dias após o início do experimento. Foram coletados tecido gengival, hemi-mandíbulas e biofilme bucal para avaliação dos seguintes parâmetros: i) microbiota bacteriana (checkerboard DNA-DNA hybridization; ii) expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias (análise Multiplex); iii) imunorreatividade de peptídeos antimicrobianos (reações imunohistoquímicas - estreptavidina-biotina-peroxidase); iv) níveis inserção conjuntiva (análise histomorfométrica) e v) microarquitetura e volume ósseos (microtomografia computadorizada por transmissão de raios X). Os dados obtidos foram submetidos à análise estatística (p < 0,05). O grupo DPT apresentou maiores valores de porosidade óssea, espaçamento de trabéculas ósseas e nível de inserção conjuntiva, bem como menor número de trabéculas e volume ósseos quando comparado a todos os outros grupos (p < 0,05). No Grupo DPT-HN019, foram observados maiores percentuais de bactérias dos complexos amarelo e azul, bem como maiores expressões de Osteoprotegerina (OPG), Beta-defensina (BD)-1, BD-2 e BD-3 quando comparados àqueles do Grupo DPT (p < 0,05). O Grupo DPT apresentou níveis de Interleucina (IL)-1&beta; Receptor Ativador do Fator Nuclear Kappa-beta (RANKL) maiores que aqueles do Grupo DPT-HN019 (p < 0,05). As razões RANKL/OPG e IL-1&beta;/IL-10 foram mais elevadas no grupo DPT do que no Grupo DPT-HN019 (p < 0,05). Dentro dos limites deste estudo pode-se concluir que o uso tópico de B. lactis HN019 promove um efeito protetor contra a perda óssea e de inserção conjuntiva decorrentes da periodontite experimental em ratos. / The purpose of this study was to evaluate the effects of topical administration of probiotic bacteria of the genus Bifidobacterium on experimental periodontal disease in rats. 32 rats were divided into groups C (control), EP (experimental periodontitis), C-HN019 (control + probiotic) and EP-HN019 (EP+ probiotic). On day 0 of the experiment, periodontitis was induced in the animals of groups EP and EP-HN019 through the placement of ligatures around mandibular first molars. In groups C-HN019 and EP-HN019, 2 mL of suspensions containing 109 colony-forming units/mL of Bifidobacterium animalis subsp lactis (B. lactis) HN019 were topically administered in the subgingival region of mandibular first molars on days 0, 3 and 7 of the experiment. In groups C and EP, topical administrations were performed using a sham suspension (without probiotic). All animals were euthanized 14 days after the beginning of the experiment. Gingival tissue, hemi-mandibles and oral biofilm were collected for evaluation of the following parameters: i) bacterial microbiota (checkerboard DNA-DNA hybridization), ii) expression of pro- and anti-inflammatory cytokines (Multiplex analysis), iii) immunoreactivityof antimicrobial peptides (immunohistochemical reactions - streptavidin-biotin-peroxydase); iV) connective tissue attachment levels (histomorphometric analysis) and v) bone microarchitecture and volume (microtomographic analysis). Data were statistically analyzed (p < 0.05). Group EP presented greater values of bone porosity, trabecular separation and connective tissue attachment loss as well as reduced trabecular number and bone volume when compared with all the other groups (p < 0.05). In group EP-HN019, there were greater percentages of bacteria of the yellow and blue complexes and greater expressions of Osteoprotegerin (OPG) and beta-defensins (BD)-1, BD-2 and BD-3 when compared with group EP (p < 0.05). Group EP presented greater levels of Interleukin (IL)-1&beta; and Receptor Activator of Nuclear Factor-Kappa B ligand (RANKL) than group EP-HN019 (p < 0.05). The increase in the ratios RANKL/OPG and IL-1&beta;/IL-10 was greater in group EP than in group EP-HN019 (p < 0.05). Within the limits of the present study, it can be concluded that the topical use of B. lactis HN019 promotes a protective effect against alveolar bone and connective tissue attachment losses attributable to experimental periodontitis in rats.

A infecção por Haemonchus contortus é a principal parasitose que afeta a ovinocultura, provocando consideráveis perdas econômicas. Sua patogenia é caracterizada por uma intensa anemia, além de hipoproteinemia e reduções nos níveis séricos de ferro. Devido ao aumento da resistência desse parasito aos anti-helmínticos comumente encontrados no mercado, surge a necessidade de tratamentos alternativos, como por exemplo, o uso de produtos probióticos. Probióticos são alimentos funcionais que contém micro-organismos vivos, que ingeridos, com frequência e em doses adequadas trazem benefícios aos hospedeiros por meio de diferentes mecanismos de ação. Desta forma, o presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito de uma preparação probiótica constituída de diferentes espécies de Lactobacillus (L. casei ATCC 7469, L. plantarum ATCC 8014, L. fermentum ATCC 9338 e L. acidophilus ATCC 4536) na forma de \"pool\" sobre H. contortus em ovinos. Para tanto foram estudados 40 animais naturalmente infectados e distribuídos em 4 grupos e por 90 dias submetidos a diferentes tratamentos, a saber: Grupo A (controle): os animais não receberam nenhum tratamento, Grupo B os animais receberam em 3 dias por semana (2ª, 4ª e 6ª feiras) uma dose de 10 mL da preparação probiótica, Grupo C os animais receberam, no dia 0 dose única de Diantel® (1 mL para cada 10 Kg de PV) e Grupo D os animais receberam, no dia 0, dose única de Diantel® (1 mL para cada 10 Kg de PV) e após 30 dias passaram a receber em 3 dias por semana 10 mL da preparação probiótica, sendo interrompido no 60° dia. A cada 15 dias foram realizados exames parasitológicos para quantificação de OPG de fezes, hemograma completo, dosagem de proteínas e ferro. Os resultados demonstraram que os animais do Grupo B (probiótico) apresentaram uma eliminação de OPG de fezes significativamente menor (p<0,05) em relação aos demais grupos com uma eficácia de ação máxima de 66,3%, além dos animais se apresentarem em melhores condições fisiológicas. Maiores concentrações de hemoglobina, hematócrito e ferro também foram observadas nesse grupo, que podem ser explicadas pela ação imunomoduladora apresentada pelas espécies de Lactobacillus avaliadas, além de facilitar a absorção de nutrientes pelo animal hospedeiro. Em relação aos animais do Grupo C (Diantel®), após 45 dias ocorreu um aumento significativo (p<0,05) na contagem de OPG de fezes indicando uma maior atividade parasitária, levando a redução dos valores de hemoglobina e hematócrito. O uso do anti-helmíntico no Grupo D apresentou eficácia máxima de 90,3% após 15 dias. A inclusão da preparação probiótica, na dieta dos animais deste grupo após 30 dias, não contribuiu para se evitar a reinfecção, possivelmente devido a sensibilidade das cepas utilizadas ao princípio ativo closantel, tendo sido evidenciada a necessidade de uma nova dosagem do anti-helmíntico após 60 dias, como indicado pelo fabricante. / The infestation by Haemonchus contortus is the main parasitize that affects the ovine farms, causing a significantly economic loss. Its pathogenesis is characterized through an intense anemia, besides hypoproteinemia and blood iron level reduction. Due to the parasite resistance increasing to anti-helmintics usually found in the market, a need of an alternative treatment is evident, as example, the use of probiotics microorganisms. Probiotics are functional food that contains live microorganisms that when ingested in appropriate amount bring benefits to the hosts through different action mechanisms. Thus, this research had as purpose to study the effect of a probiotic preparation formed by a pool of Lactobacillus species (L. casei ATCC 7469, L. plantarum ATCC 8014, L. fermentum ATCC 9338 e L. acidophilus ATCC 4536) on H. contortus in ovines. Therefore, 40 naturally infected animals were distributed in 4 groups and during 90 days they were submitted to different treatments: Group A (control): the animals did not receive any treatment, Group B: The animals received 3 times a week (2º, 4º, 6º) a 10 ml dose of the probiotic preparation, Group C: the animals received on 0 day, a Diantel single dose (1 ml /10 kg of LW) and in group D: the animals received on 0 day, a Diantel single dose (1 ml /10 kg of LW) and after 30 days they started receiving 3 times a week 10 ml of the probiotic preparation, ending at the 60th day. In each fifteen days parasitological exams were realized to check the amount of EPG of feces, complete blood exam, protein and blood iron analysis. The results showed that the animals in group B (probiotic) had \"EPG\" of feces elimination significantly minor (p 0,05) related to the other groups with a efficacy of 66,3% besides, the animals presented better physiological conditions. An increasing of hemoglobin, hematocrit and blood iron level were also observed in this group, which can be explained by the immunemodulator action presented by the Lactobacillus species, which contribute to the nutrients absorption by the host animal. In relation to group C animals (Diantel), is was observed, after 45 days, a significantly increasing (p 0,05) in the EPG counting, resulting in a major parasitary activity, decreasing the hemoglobin and hematocrit values. The usage of anti-helmintic in group D showed a efficacy of 90,3% after 15 days. The probiotic preparation administered to the animals of group D did not contribute to avoid the re-infestation, probably due to the strains sensibility regarding to the active principle (closantel) of Diantel, being necessary another anti-helmintic dose administration after 60 days as indicated by the manufacturer.

O Brasil é o quinto maior produtor de leite do mundo, entretanto sua produtividade é considerada baixa. Um dos motivos desta baixa produtividade é a alta incidência da mastite no rebanho. A mastite é a reação inflamatória da glândula mamária, causada principalmente pela invasão e ação de espécies de micro-organismos patogênicos. O principal tratamento consiste no uso de antibióticos de aplicação intramamária. Entretanto, o uso constante de antibióticos apresenta problemas graves como o surgimento de cepas de bactérias resistentes e a presença de resíduos destes medicamentos no leite. Para reduzir esses problemas, formas alternativas de prevenção e tratamento da mastite têm sido estudadas, como o uso de preparações contendo espécies probióticas. Pesquisas recentes têm demonstrado o potencial de algumas destas espécies no tratamento e prevenção da mastite bovina tendo em vista sua atividade inibitória sobre os patógenos responsáveis por esta infecção. Desta forma, a proposta deste estudo foi desenvolver e avaliar a estabilidade de uma preparação probiótica na forma de emulsão de aplicação intramamária contendo 108 UFC/mL de um \"pool\" constituído de cinco cepas de Lactobacillus (L. acidophilus ATCC 4356, L. casei ATCC 7469, L. fermentum ATCC 9338, L. plantarum ATCC 8014 e L. paracasei Nestlé ST11). Para tanto, 12 formulações de emulsão base foram desenvolvidas e avaliadas em ensaios preliminares de estabilidade (centrifugação e estresse térmico), sendo a formulação contendo monestearato de glicerila, lanolina anidra, óleo mineral, Tween 80® e Spam 80® selecionada para formulação da preparação probiótica. Adicionalmente, selecionou-se como agente conservante sorbato de potássio visando aumentar a vida útil da preparação probiótica. A preparação, assim desenvolvida, foi submetida ao teste de estabilidade físico-químico por 90 dias a 50°C ± 2°C. Observou-se que o aspecto da preparação se manteve estável, mas com redução nos parâmetros pH, densidade e aumento na viscosidade. A manutenção da viabilidade dos Lactobacillus na preparação foi estudada em um ensaio de 120 dias, sendo avaliada a influência dos fatores: temperatura de estocagem, adição de sacarose e sorbato de potássio. Observou-se influência significativa da temperatura demonstrando a importância da refrigeração na manutenção na viabilidade dos Lactobacillus. Verificou-se também que, sob refrigeração, a adição de sacarose promoveu redução de 0,5 ciclo logarítmico em relação a população inicial de células viáveis. Observou-se redução do pH da preparação probiótica avaliada nestas condições. Estes resultados permitem concluir que a refrigeração da preparação é indispensável para a manutenção da viabilidade das bactérias probióticas. A adição de 2% de sacarose à preparação, mantida sob refrigeração, se mostrou eficiente na manutenção da população de células viáveis ao final de 120 dias de ensaio, contendo 108 UFC/g, característica desejável para um produto probiótico. / Brazil is the world\'s fifth largest milk producer, though its productivity has been considered low. One of the reasons for this low productivity is the high incidence of mastitis in the herd. Mastitis is the inflammation of the mammary gland, mainly caused by the invasion and action of pathogenic microorganisms. The treatment is accomplished through the use of intramammary application of antibiotics. However, the constant use of antibiotics has serious problems such as the emergence of resistant strains of bacteria and the presence of residues of these drugs in milk. To reduce these problems, alternative means of prevention and treatment of mastitis has been studied as the use of preparations containing probiotic species. Recent studies have demonstrated the potential of some of these species in the treatment and prevention of bovine mastitis due to their inhibitory activity on pathogen species responsible for the infection. Thus, the purpose of this study was to develop and evaluate the stability of probiotic preparation in the form of intramammary application emulsion containing 108 CFU/mL of five Lactobacillus strains (L. acidophilus ATCC 4356, L. casei ATCC 7469 L. fermentum ATCC 9338, ATCC 8014, L. plantarum and L. paracasei ST11 Nestle). Therefore, 12 basic emulsion formulations were developed and evaluated in preliminary tests for stability (thermal stress and centrifugation), and only one was selected. Additionally, potassium sorbate was selected as preservative in order to increase the shelf life of the preparation. The developed preparation was subjected to study the physicochemical stability for 90 days at 50 ° C ± 2 ° C. The results showed that the aspect of the preparation remained stable, but decreasing in pH and density and increasing in viscosity. The maintenance of the viability of the lactobacillus in the preparation was studied in a 120-day test, and flowing factors were considered: storage temperature, sucrose addition and the potassium sorbate addition. It was observed that there was significant differences in the temperature factor demonstrating the importance of cooling in maintaining the viability of Lactobacillus. It was also observed that sucrose decreased by 0,5 log cycle compared to initial population of viable cells in the refrigerated preparation. Regarding the pH, it was noted a decrease in the different formulations evaluated. These results show that the cooling of the preparation is indispensable for maintaining the viability of probiotic bacteria. The addition of 2% sucrose to the preparation proved efficient with a slower decrease in viability maintaining the population of viable cells at the end of the 120 days of the assay.

Orientador: Daniela Cardoso Umbelini Cavallini / Orientador no exterior: Bruce A. Vallance / Coorientador: Caetano Martha Antunes / Banca: Bruce Vallance / Banca: Carla Fontana / Banca: Xiaonan Lu / Banca: Ligia Sassaki / Resumo: O trato gastrointestinal abriga a maior população de microrganismos no corpo humano, onde eles desempenham um papel importante na promoção da saúde do hospedeiro. A alteração na composição da microbiota pode levar à disbiose intestinal, que consequentemente desencadeia ou agrava doenças intestinais e extra-intestinais. Microrganismos benéficos também conhecidos como probióticos são constantemente investigados como uma terapia complementar nas doenças relacionadas à disbiose. No entanto, sua eficácia no tratamento de condições severas, como por exemplos as doenças inflamatórias intestinais (DII), é bastante variável e apresenta resultados controversos. Para abordar a importância de uma abordagem probiótica personalizada para tratar a inflamação intestinal, primeiro examinamos o efeito de bactérias personalizadas usando um modelo de colite induzida por produtos químicos. Os animais que receberam comensais isolados de suas próprias fezes foram mais protegidos contra a inflamação, pois mostraram sinais reduzidos de colite, menor dano histológico e menores níveis de marcadores inflamatórios, quando comparados aos ratos que receberam uma cepa probiótica comercial. Em seguida, o papel da mucina intestinal Muc2 e da enzima Core-1 que glicosilam foram explorados usando o modelo de colite infecciosa Citrobacter rodentium. A camada de muco intestinal é a primeira linha de defesa no intestino e é composta em grande parte pela mucina Muc2. Uma vez que quase todas as bactérias entéricas de... (Resumo completo, clicar acesso eletrônico abaixo) / Abstract: The intestinal tract harbours the largest population of microbes in the human body where they play an important role in promoting the health of their host. If the composition of these microbes is altered, this may lead to dysbiosis that triggers or exacerbates intestinal and extra-intestinal diseases. Probiotics have been investigated as a complementary therapy in dysbiosis-related diseases. However, their effectiveness in treating severe conditions such as Inflammatory Bowel Disease (IBD) is quite variable and have shown controversial results. To address the importance of a personalized probiotic approach to treat intestinal inflammation, we first examined the effect of personalized bacteria using a model of chemical induced colitis. The animals that received commensals isolated from their own feces were more protected against inflammation as they showed reduced signs of colitis, less histological damage and lower levels of inflammatory markers as compared to mice given a commercial probiotic strain. Next, the role of the intestinal mucin Muc2 and the Core-1 enzyme that glycosylates it were explored using the Citrobacter rodentium model of infectious colitis. The intestinal mucus layer is the first line of defense in the intestine and is largely composed of the secreted mucin Muc2. Since almost all enteric bacteria must cross the overlying mucus layer to infect the host, the mucus-enteric bacterial interactions provide fundamental knowledge about infectious diseases as well as inflammatory conditions linked to dysbiosis... (Complete abstract click electronic access below) / Doutor

Submitted by FERNANDA CAMPOS FREIRE null (nandacfreire4@gmail.com) on 2017-01-30T20:47:07Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Fernanda Freire.pdf: 1340162 bytes, checksum: 0f0e278cf9a0399528ef84c81d8d0cca (MD5) / Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitamos que realize uma nova submissão seguindo as orientações abaixo: O arquivo submetido está sem a ficha catalográfica. Incluir o número do processo de financiamento nos agradecimentos da dissertação/tese. A versão submetida por você é considerada a versão final da dissertação/tese, portanto não poderá ocorrer qualquer alteração em seu conteúdo após a aprovação. Corrija estas informações e realize uma nova submissão com o arquivo correto. Agradecemos a compreensão. on 2017-02-03T17:08:32Z (GMT) / Submitted by FERNANDA CAMPOS FREIRE null (nandacfreire4@gmail.com) on 2017-03-17T10:54:05Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Final Fernanda Freire 30 01 2017.pdf: 1387491 bytes, checksum: c1f330172cc3dc710736fb943048a1d0 (MD5) / Approved for entry into archive by Juliano Benedito Ferreira (julianoferreira@reitoria.unesp.br) on 2017-03-22T12:47:19Z (GMT) No. of bitstreams: 1 freire_fc_me_arafcf.pdf: 1387491 bytes, checksum: c1f330172cc3dc710736fb943048a1d0 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-22T12:47:19Z (GMT). No. of bitstreams: 1 freire_fc_me_arafcf.pdf: 1387491 bytes, checksum: c1f330172cc3dc710736fb943048a1d0 (MD5) Previous issue date: 2016-12-02 / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Objetivo: Identificar os principais compostos bioativos presentes em uma bebida fermentada probiótica sabor uva, à base de leite de cabra, adicionada ou não de extrato de bagaço de uva e avaliar seu efeito funcional sobre a microbiota intestinal em Simulador do Ecossistema Microbiano Humano (SEMH). Métodos: Foram realizadas análises de caracterização química (composição centesimal e fibra alimentar, perfil de ácidos graxos, teor de compostos fenólicos totais e atividade antioxidante) e microbiológicas (viabilidade de L. rhamnosus e S. thermophilus) das bebidas. O efeito funcional das bebidas foi avaliado através da composição da microbiota intestinal (enumeração de Lactobacillus spp., Bifidobacterium spp., Anaerobios totais, Clostridium spp. e Coliformes totais), produção de ácidos graxos de cadeia curta e íons amônio, bem como sob a capacidade antioxidante. Resultados: Os resultados obtidos neste estudo demonstraram que as bebidas formuladas, enriquecidas ou não com extrato de bagaço de uva apresentaram alto (p≤0.05) teor de fibras dietéticas, ácido oleico, compostos fenólicos e atividade antioxidante. Ainda, mantiveram (p≤0.05) a viabilidade do L. rhamnosus e S. thermophilus durante a passagem pelo trato gastrointestinal e, exerceram efeitos positivos sobre a microbiota intestinal, uma vez que alteraram (p≤0.05) a composição da comunidade microbiana, aumentaram (p≤0.05) a produção de ácidos graxos de cadeia curta e capacidade antioxidante e diminuíram (p≤0.05) a concentração de íons amônio. Conclusão: Ambas as formulações, adicionada ou não de extrato, exerceram um efeito positivo sobre a microbiota intestinal, uma vez que proporcionaram modificações metabólicas positivas nas diferentes regiões que simulavam os cólons. / FAPESP: 2015/00460-7

Orientador: Daniela Cardoso Umbelini Cavallini / Banca: Raquel Bedani / Banca: Valéria de Carvalho Santos Ebinuma / Resumo: A utilização de microrganismos probióticos para a manutenção da saúde bucal tem despertado o interesse da comunidade científica, tendo em vista que estudos indicam que tais microrganismos podem conferir benefícios como: atividade anticariogênica, tratamento de doenças periodentais e halitose, e redução na população de microrganismos patogênicos relacionados a patologias bucais. Nesse sentido, o objetivo do presente trabalho foi o desenvolvimento e a caracterização de uma pastilha alimentícia diet contendo o microrganismo Enterococcus faecium CRL 183 e a avaliação do potencial da referida cepa probiótica em sobreviver em saliva humana e inibir a multiplicação da cepa patogênica Streptococcus mutans ATCC 25175. O microrganismo E. faecium CRL 183 foi microencapsulado por extrusão e coacervação em matriz complexa. A técnica de coacervação complexa apresentou o melhor desempenho em relação à manutenção da viabilidade durante o período de armazenamento à temperatura ambiente (23ºC), sendo selecionada para a produção das pastilhas potencialmente probióticas. As pastilhas foram processadas em três tratamentos: PC - pastilha controle, sem adição do probiótico; PPP1 - com adição do microrganismo probiótico e PPP2 - pastilha com adição do microrganismo probiótico e de inulina (prebiótico). Análises microbiológicas (viabilidade e segurança), físico-químicas (umidade, atividade de água, pH e cor) e sensoriais (testes de aceitação e intenção de compra) foram conduzidas no tempo inicial e ao longo do tempo de estocagem. A sobrevivência do probiótico à saliva e a inibição da multiplicação da cepa patogênica, foram avaliadas através da inoculação da cepa pura e das pastilhas em saliva e da técnica de difusão em poços, respectivamente. A cepa de E. faecium teve sua... / Abstract: The interest in the local effect of probiotic microorganisms is increasing among the scientific community, since studies have indicated that such microorganisms can present anticariogenic activity, help on the treatment of periodontal and halitosis diseases, and reduction in the population of pathogenic microorganisms associated to oral pathologies. The main purpose of this study was the development and characterization of a diet lozenge containing the probiotic strain Enterococcus faecium CRL 183. Its potential of surviving in the human saliva environment and the inhibition of the pathogenetic strain Streptococcus mutans ATCC 25175, were also evaluated. The probiotic strain E. faecium CRL 183 was microencapsulated through the extrusion and complex coacervation techniques. The last one was selected to the next step of the study (lozenges production), as it showed the best performance in comparison to the extrusion technique, regarding viability maintenance during the storage period at room temperature (23ºC). The lozenges were produced through three different treatments: PC - control formulation, without the probiotic; PPP1 - probiotic formulation; PPP2 - probiotic formulation with inulin addition. Microbiologic (viability and security), physicochemical (moisture, water activity, pH and color) and sensorial (acceptance and purchase intention) analyses were conducted during the storage period. The probiotic survival to human saliva was evaluated through inoculation of the pure probiotic strain and the probiotic lozenges in saliva. The agar diffusion technique was used to evaluate the E. faecium CRL 183 inhibition potential against the pathogenic strain, S. mutans ATCC 25175. The probiotic strain had the viability decreased after the lozenges production and also during the storage period at room temperature for the PPP1 and PPP2 ... / Mestre

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-08-30T12:54:32Z No. of bitstreams: 1 PDF - Michelangela Suelleny de Caldas Nobre.pdf: 1299620 bytes, checksum: 913e06322c3ba929d99335a5d289dcea (MD5) / Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-08-31T18:13:58Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Michelangela Suelleny de Caldas Nobre.pdf: 1299620 bytes, checksum: 913e06322c3ba929d99335a5d289dcea (MD5) / Made available in DSpace on 2016-08-31T18:13:58Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Michelangela Suelleny de Caldas Nobre.pdf: 1299620 bytes, checksum: 913e06322c3ba929d99335a5d289dcea (MD5) Previous issue date: 2015-08-24 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES / Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq / The goat milk whey is a by-product of cheese production and often discharged without any kind of treatment as effluent, becoming a source of pollution. Instead, the use of whey to produce dairy drinks has been a very attractive option, remarkably because of its nutritional value. Probiotic cultures contain microorganisms that bring health benefits to the host by improving its intestinal balance, and they can be used in fermented beverages. This study aimed to evaluate the influence of different potential probiotic lactobacilli cultures on the physicochemical and microbiological features, and also on the pattern of protein degradation on reconstituted and fermented goat Coalho Cheese whey powder. The fermentation process was performed in four trials, C1, C2, C3 and C4, added, respectively, of Lactobacillus casei BGP93, Lactobacillus paracasei BGP1, L. paracasei and Lactobacillus rhamnosus LPC37 LR32, all of them also added of Streptococcus thermophilus TA40 as starter culture. Titratable acidity, pH values, and viability of both S. thermophilus and Lactobacillus sp. were monitored in the reconstituted whey after adding cultures before fermentation (TI), after fermentation (TF), and after 1 (D1) and 7 (D7) days of storage at 4 °C. The use of near infrared spectroscopy (NIR) was evaluated as an alternative method for the determination of Lactobacillus sp. populations. The analyses of proteolysis by the method o-phthaldialdehyde (OPA), ultrafast reversed phase high-performance liquid chromatography (RP- UFLC) and sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS- PAGE) were performed to evaluate the protein degradation in samples throughout the processing and storage period. The whey added of L. rhamnosus (C4) obtained the lowest pH (4.83) and the highest acidity (lactic acid 0.637g / 100 g) after 7 days of storage. The viability of Lactobacillus sp. in all trials (C1, C2, C3 and C4) obeyed the Brazilian criteria for probiotic foods, remaining above 9 log CFU in the recommended daily serving portion (200 ml). The calibration procedure for Lactobacillus sp. values in NIR analysis was adequate; however, it is required additional samples of each trial to improve the performance of calibration models and the construction of prediction models to be performed in future studies. The protein content was around 25 mg/g in all treatments over all sampling periods and, therefore, no significant difference between them was verified (p > 0.05). The chromatograms of the reconstituted whey without addition of cultures showed differences from those obtained for the TI, TF, D1 and D7 sampling periods in all trials, probably due to the thermal treatment of samples prior to the addition of cultures. The degree of proteolysis did not differ significantly between treatments (p > 0.05); however, according with the analysis of all the results, including electrophoresis and chromatography data for the C1 trial, in which low molecular weight fraction was formed, there was a trend towards of higher proteolytic activity in goat cheese whey added of the probiotic culture L. casei BGP93. / O soro caprino é um subproduto da produção queijeira e muitas vezes descartado sem nenhum tratamento como efluente, tornando-se uma fonte de poluição. Como alternativa, a utilização de soro de queijo para a produção de bebidas lácteas tem sido uma opção muito atraente, notadamente devido ao seu valor nutricional. Culturas probióticas são constituídas de microrganismos que conferem benefícios à saúde do hospedeiro, melhorando seu equilíbrio intestinal, podendo ser utilizadas em bebidas fermentadas. Este trabalho teve por objetivo avaliar a influência de diferentes culturas de lactobacilos com potencial probiótico sobre as características físico-químicas, microbiológicas e sobre o padrão de degradação proteica de soro de queijo de cabra tipo coalho em pó reconstituído fermentado. O processo de fermentação foi realizado em quatro tratamentos, C1, C2, C3 e C4, adicionados, respectivamente, das culturas de Lactobacillus casei BGP93, Lactobacillus paracasei BGP1, L. paracasei LPC37 e Lactobacillus rhamnosus LR32, todos eles também adicionados de Streptococcus thermophilus TA40 como cultura starter. Foram monitorados os valores de pH, acidez titulável, S. thermophilus e Lactobacillus sp. no soro reconstituído após a adição das culturas antes da fermentação (TI), depois da fermentação (TF), e após um (D1) e sete (D7) dias de armazenamento a 4 °C. Foi avaliado o uso da espectroscopia de infravermelho próximo (NIR) como método alternativo para a determinação de populações de Lactobacillus sp. As análises de grau de proteólise pelo método o-ftaldialdeído (OPA), cromatografia líquida ultrarrápida de alta eficiência em fase reversa (RP-UFLC) e eletroforese em gel de poliacrilamida-dodecil sulfato de sódio (SDS-PAGE) foram realizadas para avaliar a degradação proteica nas amostras ao longo do processamento e armazenamento. O soro contendo o microrganismo L. rhamnosus (C4) foi o que obteve pH mais baixo (4,83) e acidez mais alta (0,637g de ácido lático/100 g) após 7 dias de armazenamento. A viabilidade de Lactobacillus sp. em todos os tratamentos (C1, C2, C3 e C4) obedeceram aos critérios nacionais para alimentos probióticos, mantendo-se acima de 9 log UFC na porção diária recomendada (200 ml). O método NIR mostrou-se adequado no método de calibração para os valores de Lactobacillus sp.; no entanto, faz-se necessária quantidade maior de amostras de cada tratamento para melhorar a performance dos modelos de calibração e na construção de modelos de predição a serem realizados em trabalhos posteriores. O teor proteico foi próximo de 25 mg/g em todos os tratamentos durante todos os períodos de amostragem e, portanto, sem diferenças significativas entre eles (p > 0,05). Os cromatogramas do soro reconstituído sem adição da cultura apresentaram diferenças em relação àqueles obtidos para os tempos TI, TF, D1 e D7 em todos os tratamentos, provavelmente devido ao tratamento térmico aplicado nas amostras antes da adição das culturas. O grau de proteólise não diferiu significativamente entre os tratamentos (p > 0,05); entretanto, pela análise do conjunto de resultados obtidos, incluindo os dados de cromatografia e eletroforese para o tratamento C1, no qual houve o aparecimento de frações com baixo peso molecular, verificou-se uma tendência de maior atividade proteolítica no soro contendo a cultura probiótica L. casei BGP93.

Os probióticos são produtos ou preparações que contém microrganismos viáveis, com concentrações definidas, capazes de alterar a microbiota intestinal do hospedeiro, exercendo efeitos benéficos a sua saúde. Os microrganismos mais usados para esta finalidade são as bactérias lácticas, destacando-se espécies de Lactobacillus. Apesar do avanço científico nesta área, poucos estudos são encontrados a respeito da ação probiótica sobre protozoários, como Cryptosporidium parvum, um parasito intestinal importante por causar uma das principais infecções oportunistas em indivíduos imunodebilitados, como aidéticos e transplantados. Os produtos probióticos podem ser uma alternativa para o tratamento da criptosporidiose, uma vez que, ainda, não há um tratamento eficaz contra esta parasitose. Sendo assim, o presente estudo visou avaliar a ação de cepas de Lactobacillus plantarum, L. acidophillus e L. delbruekii, na forma de pool, sobre Cryptosporidium parvum em camundongos imunossuprimidos. Os experimentos foram desenvolvidos utilizando-se 42 animais divididos em seis grupos: Controle - não imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Imuno - imunossuprimidos, não infectados e não tratados; Não tratado - imunossuprimidos, infectados e não tratado; NTZ - imunossuprimidos, infectados e tratados com o antiprozotoário nitazoxanida (150mg/kg); PRO - imunossuprimidos, infectados e tratados com a preparação probiótica (3x10¹²UFC/mL); e, Preventivo - imunossuprimidos, tratados com a preparação probiótica e posteriormente infectados. Após 12 dias de imunossupressão os animais foram infectados com 1,6x106 oocistos e, os respectivos tratamentos iniciados após cinco dias da inoculação dos oocistos. A infecção foi analisada pela contagem de oocistos nas fezes, purificados pela técnica de sedimentação de formol-éter. A colonização intestinal pelos lactobacilos foi analisada pela técnica de \"pour plate\" em ágar MRS com antibiótico Rifampcina. O desempenho nutricional dos camundongos foi analisado por meio da conversão alimentar, uma relação entre a quantidade de ração consumida e o ganho de peso dos animais. Os resultados demonstraram que os animais que receberam o tratamento preventivo com os probióticos apresentaram uma eliminação de oocistos significativamente menor (P<=0,05) que os demais grupos infectados. O tratamento com a preparação probiótica, pós-infecção, também se mostrou eficaz, pois todos os animais eliminaram a infecção. Estes resultados podem ser explicados por meio do mecanismo de ação conhecido como exclusão competitiva, devido a colonização do trato gastrointestinal ou, pela produção de substância antimicrobiana, produzida por Lactobacillus, que apresentou ação sobre os oocistos. Observou-se, também, que os animais tratados com probióticos tiveram um melhor desempenho nutricional. Estes resultados confirmam a hipótese que microrganismos com propriedades probióticas representam uma forma alternativa, e promissora, na prevenção e tratamento da criptosporidiose. / The probiotics are products or preparation containing viable microorganisms, in defined concentrations, capable of change the host\'s microbiota, exerting beneficial effects on the host\'s health. The most important microorganisms which present these properties belong to the group of lactic acid bacterium, mainly species of Lactobacillus. Even though technological advances in this area, few studies are found concerning the action probiotics on protozoan, as Cryptosporidium parvum, an important intestinal parasite which causes one of the main opportunist infection in immunodeficient individuals, such as AIDS and transplanted patients. The probiotics products can be an alternative to treatment against cryptosporidiosis, since, so far an effective treatment against this infection has not been found. Therefore, the present study aimed to evaluate the action of strains of Lactobacillus plantarum, L. acidophillus and L. delbruekii, as a pool, on Cryptosporidium parvum in immunosuppressed mice. The experiments were developed using 42 animals separated in six groups: Control - the mices were not immunosuppressed, no infected and no treated; Immuno - immunosuppressed, no infected and no treated; No treated - immunosuppressed, infected and no treated; NTZ - immunosuppressed, infected and treated with a Nitazoxanide antimicrobial (150mg/kg); PRO - immunosuppressed, infected and treated with a preparation probiotic (3x10¹²UFC/mL); and, Preventive - immunosuppressed, treated with the probiotic preparation and then infected. After 12 days of immunosuppression procedure the animals were infected with 1,6x106 oocysts and, the respective treatments were started after five days of the inoculation of the oocysts. The infection was analyzed by counting of purified oocysts by tecnic of formol ether sedimentation of the feces. The intestinal colonization by lactobacilli was analyzed by pour plate technique on MRS agar containing Rifampicin antibiotic. The nutritional performance of the animals was calculated based on the rate of feed conversion, which is a relation between the amount of food consumed and the body weight gained by each animal. The results showed that the animals that received a preventive treatment with the probiotic preparation presented an elimination of oocysts lower than (P<=0,05) the other infected groups. The treatment with the probiotic preparation, post-infection also showed to be effective, once all the animals eliminated the infection. These results can be explained by competitive exclusion due to the colonization of gastrointestinal tract of the animals or by production of antimicrobial substances produced by Lactobacillus, which presented somehow any action on oocysts. It was also observed that the treated animals with the probiotic preparation presented better nutritional performance. These results confirm the hypothesis that the microorganisms which present probiotic properties represent an alternative way and promising, in the preventing and treatment of cryptosporidiosis.

O cão (Canis familiaris) é o animal doméstico que convive mais em proximidade com o homem, como animal de companhia e guarda. No entanto, existe uma série de parasitos zoonóticos de cães, que levam ao desenvolvimento de patologias muitas vezes de prognóstico grave para o ser humano. Dentre esses destacam-se os helmintos da família Ancylostomidae que são encontrados com freqüência em inquéritos coproparasitológicos. A ancilostomíase canina é caracterizada pelo desenvolvimento de anemia, perda de peso e dores abdominais, sendo o tratamento com drogas anti-helmínticas alopáticas fundamental para eliminação do parasito. Porém, devido à ocorrência cada vez maior de resistência a tratamentos com medicamentos alopáticos e aos riscos inerentes ao uso abusivo destes medicamentos, a pesquisa de novos insumos terapêuticos consiste em uma promissora iniciativa, e, neste sentido os probióticos têm se destacado, por serem capazes de alterar positivamente a microbiota intestinal e exercer efeito imunomodulador, e, assim sendo, contribuir para o controle de agentes patogênicos. Com o intuito de contribuir para a compreensão do mecanismo de ação de espécies de microrganismos que apresentam atividade probiótica sobre helmintos, no presente trabalho objetivou-se avaliar o papel de espécies de Lactobacillus à saber: L. acidophilus ATCC 4536, L. plantarum ATCC 8014 e L. delbrueckii UFV H2B20, na forma de um \"pool\", no sentido de estimularem a resposta imune, bem como reduzir o quadro de anemia e a carga parasitária em cães naturalmente infectados com Ancylostomidae. Para tanto, selecionouse 40 cães do CCZ de Taubaté-SP, divididos em 4 grupos: 10 animais naturalmente infectados com Ancylostomidae aos quais foi administrada a preparação probiótica, contendo 1X106 UFC de cada cepa de Lactobacillus; 10 animais naturalmente infectados que não foram submetidos a nenhum tratamento; 10 animais não infectados e não submetidos a nenhum tratamento e 10 animais não infectados aos quais foi administrada a preparação probiótica em estudo. Esta preparação foi administrada em dias alternados, por 28 dias e os animais foram acompanhados semanalmente para determinação do número de ovos por grama (OPG) de fezes, dosagem dos níveis de IgE sérica e avaliação do hemograma. Os resultados permitiram observar que o tratamento com a preparação probiótica se mostrou promissor no controle à ancilostomíase canina, sendo observada uma redução significativa (p<0,05) de 88,83% da contagem de OPG nas fezes dos animais (GITP), sendo esta menor que a observada nos demais grupos. Observou-se também uma melhora na imunidade destes animais, observada pelo aumento de IgE e da contagem global de leucócitos. Desta forma, demonstrou-se o potencial das espécies de Lactobacillus no controle da ancilostomíase canina. / Dogs (Canis familiaris) are the domestic animals that live in more proximity to human, serving as guards as well as company but that are a range of canine diseases that leads to the development of serious prognostic pathologies to mankind. Therefore, some intestinal parasites should be emphasized, among them, the Ancylostomidae family, considering that they are frequently found in canine faecal samples. Canine ancylostomiasis has a wide array of general symptoms, eg, anemia, weight loss and abdominal pain, and the use of some alopathic antihelmintics is considered fundamental to eliminate these hookworm species. Nevertheless, taking into account the high resistance to such alopathic drugs and the inherent risk involved with their use, the development of new therapeutic strategies is a promising enterprise and probiotics seem to be a promising alternative, in view of its capacity of positively alter the intestinal microbiota and of exerting an immunomodulatory effect which can finally contribute to pathogen\'s control. Intenting to contribute for the understanding of probiotics action against helminths, the present study has the aim of evaluating the antihelmintic properties of some Lactobacillus isolates, namely L. acidophilus ATCC 4536, L. plantarum ATCC 8014 and L. delbrueckii UFVH2B20, as a \"pool\", in the stimulation of immune response against, and in reducing the anemia and the parasite counts in hookworm naturally infected dogs. Forty dogs sheltered in the Centro de Controle de Zoonoses, Taubate, Brazil, were selected and split into four groups: Ten hookworm naturally infected dogs, treated with a pool of Lactobacilli, containing 1x106 of each one of the bacterial strains; Ten hookworm naturally infected animals, not treated with any drug; Ten non-infected animals which did not receive any treatment; and ten non-infected dogs which received a pool containing the three bacterial isolates. The pool was administered during 28 alternate days and animals were followed weekly in order to determine EPG (number of eggs per gram of feces), serum IgE levels and blood counts. It was observed that the administration of the probiotic pool is promising in the control of hookworm canine infection, and a statistically significant reduction (88.83%) of EPG in the treated animal group was demonstrated. It was also observed an increase in the immune response, as demonstrated by the higher levels of IgE and increased leukocyte count, which emphasizes the potential use of these Lactobacilli specimens in the canine ancylostomiasis control.