The Master thesis gives an overview of sepsis, its causes, manifestation and diagnostics. The role of procalcitonin as a sepsis marker is dicussed. In the experimental part, case records of 106 were examined and the determination of procalcitonin as a sepsis marker was evaluated. Based on the evaluation, a recommendation about timing of the procalcitonin level analyses with septic patients were made.

Sepsis is a worldwide health condition. It is caused by disproportionatly large immunity system response for patogene presence. Fast and accurate diagnosis of sepsis can make difference between life and death. For clinical diagnosis of sepsis is used serum protein procalcitonin (PCT) as biomarker. Procalcitonin concentration level in patient bloodstream increases up to thousand times in short time period. Severity of sepsis can be determined by correlation with its concentration in bloodstream. To determine PCT level in patient bloodstream a broad variety of specialized instrument is used. All methods have same principle of measurement - PCT-antibody interaction. Procalcitonin level is then quantified by calibration curve method. During these measurements non-specific protein-antibody interactions can occur and distort the quantification of PCT level. Mass spectrometry due to its properties comes into consideration as an alternative method, that can be used for PCT determination. Aim of this diploma thesis was in situ enrichment of PCT on surface modified affinity carriers with immobilized antibody against PCT. These carriers are compatible with matrix assisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry. Mass spectrometry provides mass spectrum, where PCT and other signals...

Procalcitonin (PCT) is a precursor protein of the hormone calcitonin and is encoded by the gene Calcitonin-1. In the Blekinge Regional, P-PCT is only analyzed in Karlskrona. The analysis is performed in the department of clinical chemistry on the Alinity i-series instrument. PCT indicates bacterial infections and therefore, it is important to have a backup method for the analysis when the instrument in the city of Karlskrona is out of order. The aim of this work was to verify the analysis method of P-PCT on the instrument Alinity i-series in the city of Karlshamn. Analysis method verification means to confirm and prove that the method meets the specified requirements. Verification was performed by analyzing 35 samples with different concentration of PCT on the master instrument in Karlskrona and on “Alinity 1” and “Alinity 2” in Karlshamn. The method was compared by studying correlation coefficient and bias. The precision was measured only on “Alinity 1” which would be the master instrument in Karlshamn. Precision was measured by analyzing 25 replicates at two control levels and then was 5 replicates of each control level analyzed over 5 days. The correlation was good and no significant bias between results from Karlskrona and “Alinity 1” and between results from “Alinity 1” and “Alinity 2”. Precision on “Alinity 1” meets the requirements. The conclusion was that verification of PCT on master instrument “Alinity 1” and slave instrument “Alinity 2” was approved and the backup method for the PCT analysis in Karlshamn was verified. / Prokalcitonin (PCT) är en peptidprekursor till hormonet kalcitonin och kodas av genen kalcitonin-1 (CALC-1). PCT används som biomarkör för bakteriella infektioner och sepsis. I Region Blekinge analyseras P-PCT bara i Karlskrona. Analysen utförs på avdelningen för Klinisk kemi på instrumentet Alinity i-serie Abbot. PCT indikerar bakteriella infektioner och av denna anledning efterfrågas av flera avdelningar. Därför är det viktigt att verifiera en analysmetod för P-PCT i Karlshamn, ifall instrumenten i Karlskrona är ur funktion. Syftet med arbetet var att verifiera analysmetoden för P-PCT på instrumentet Alinity i-serie Abbot i Karlshamn. Metodverifiering innebär att bekräfta och bevisa att metoden uppfyller specificerade krav. Metodverifiering utfördes genom att analysera 35 prover med olika PCT-koncentrationer på masterinstrument ”Shrek” i Karlskrona och på ”Alinity 1” och ”Alinity 2” i Karlshamn. Metoderna jämfördes genom att studera korrelationskoefficient och bias. Inom och total serie-precision mättes bara på ”Alinity 1” som ska vara masterinstrument i Karlshamn. Inom serie-precision mättes genom att analysera 25 replikat av två kontrollnivåer och total serie-precision genom att analysera 5 replikat/dag under 5 dagar. Resultaten blev att metoden på ”Alinity 1” hade en god korrelation med metoden på masterinstrument ”Shrek” och ingen signifikant bias observerades mellan metoderna. Inom och total serie-precision på ”Alinity 1” uppfyller kraven. Metoden på ”Alinity 2” hade en god korrelation med metoden på masterinstrument ”Alinity 1” och ingen signifikant bias observerades mellan metoderna. Slutsatsen var att verifiering av P-PCT på masterinstrument ”Alinity 1” och slavinstrument ”Alinity 2” var godkänd och därmed verifierades en backupmetod för analysen P-PCT i Karlshamn.

Prokalcitonin är ett prohormon på 116 aminosyror som normalt produceras i tyroideas c-celler och i neuroendokrina celler i lungorna som svar på hyperkalcemi. Vid sepsis och andra bakteriella infektioner stimulerar bakterielipopolysackarider (LPS) och olika cytokiner produktionen av prokalcitonin i celler i hela kroppen. Flera studier har gjorts för att utvärdera hur prokalcitoninmätningar kan användas, dels för att skilja bakteriella infektioner från icke-bakteriella, dels för att anpassa antibiotikabehandlingen individuellt. I dessa studier har antibiotikaanvändningen kunnat minskas, vilket kan leda till minskat selektivt tryck och minskad resistens hos bakterier, samt sänker kostnaden för behandling. Syftet med denna studie är att sätta upp en ny metod för prokalcitoninanalys. Metoden är en automatiserad, immunologisk metod på befintligt instrument i Kristianstad. Prover dels från Lund, som använder samma metod, dels från Malmö, som använder en annan automatiserad metod, jämfördes med mätningar på Kristianstads instrument. Resultatet visade god överensstämmelse mellan Kristianstads och Lunds mätningar och något sämre mellan Kristianstads och Malmös mätningar. Mellandagsprecisionen var tillfredsställande, totalt 4,5 % på den låga kontrollen och 1,9 % på den höga kontrollen. Inomserieprecisionen var utmärkt, 1,4 % i genomsnitt. / Procalcitonin is a 116 amino acid prohormone, normally produced in the thyroid c-cells and in the neuroendocrine cells in the lungs, in response to hypercalcemia. In infections and sepsis bacterial lipopolysaccharides and different cytokines stimulate cells throughout the body to produce procalcitonin. Several trials have been carried out to evaluate how measurements of procalcitonin can be used, partly to separate bacterial infections from non-bacterial, and partly to guide individual treatment with antibiotics. In these studies the use of antibiotics could be reduced, reducing the risk of developing bacterial resistance and the cost of treatment. The purpose of this trial is to investigate a new method for procalcitonin assay. The method is an automated immunoassay on an existing instrument in the department of Clinical chemistry in Kristianstad. Blood specimens from the departments of Clinical chemistry in Lund, who uses the same method and Malmö, who uses another automated immunoassay, were compared to the present method. Good agreement was found between Kristianstad and Lund, while the relationship between Kristianstad and Malmö was slightly weaker. Precision between days was satisfactory, totalling 4,5 % on the low control and 1,9 % on the high control. Precision within series was excellent, 1,4 % on average.

Som svar på bakteriellt orsakade systemiskainfektioner och sepsis frisätts prohormonet prokalcitonin (PCT) till blodbanan.Analys av plasma-PCT (P-PCT) kan utföras med reagenset Elecsys BRAHMS PCT ianalysmodulerna cobas® e602 och e411från Roche Diagnostics.Analysprincipen är electrochemiluminiscence som bygger på immunanalys avsandwichprincip. Syftet med föreliggande studie var att verifiera metoden föranalys av P-PCT på Roche cobas® e602 och e411 med Elecsys BRAHMS PCT(ThermoFischer) samt att göra en hållbarhetsstudie av analyten ioriginalprovröret. Verifieringen gjordes genom mätning av repeterbarhet ochprecision, samt jämförelse av analysresultat från patientprover mot ett annatlaboratorium som använder samma analysmetod. Hållbarhetsstudien gjordes genomanalys av fem patientprover under olika tidsintervall 0-24 timmar efterprovtagning. Resultaten av repeterbarhetsstudien gavvariationskoefficientvärdet (CV) 3,5 % på Roche cobas® e602 medkontrollmaterial nivå 1 (åsatt värde 0,53 µg/L) och CV 1,3 % för kontrollmaterialnivå 3 (åsatt värde 24,5 µg/L). På Roche cobas e411 blev CV 2,2 % för nivå 1och 1,6 % för nivå 3. Precisionsstudien gav mellanliggande imprecisions CV-värdenmellan 1,2–1,9 % (Kontrollmaterial nivå 1 och 3). Patientjämförelserna visadeett linjärt samband (r>0,99). Bias tenderade att vara högre vidanalysresultat >20 µg/L. Hållbarhetsstudien resulterade i en obetydlig minskningav PCT koncentrationen från omedelbar analys (0,73; 57,7; 2,4; 0,94; 0,27 µg/L)och efter 24 timmar (0,70; 53,69; 2,21; 0,73; 0,24 µg/L). Repeterbarheten ochprecisionen för samtliga instrument bedömdes vara god. Patientjämförelsernavisade på ett tydligt linjärt samband med låg spridning, både vid analys iKalmar och i Linköping. Hållbarhetsstudien visade acceptabel hållbarhet avanalyten i originalprovröret. Metoden anses kunna införas på kliniskt kemiskalaboratorier vid Klinisk kemi och transfusionsmedicin, Landstinget i Kalmar län. / In response to bacterial systemic infections and sepsis, the prohormone procalcitonin (PCT) is released to the bloodstream. PCT levels in plasma can be measured using Elecsys BRAHMS PCT reagent with cobas® immunoanalyzer modules e602 and e411 from Roche Diagnostics. The test principle is electrochemiluminiscence immunoassay. The aim of this study was to verify the method for measuring plasma levels of PCT with Roche cobas® e602 and e411 using Elecsys BRAHMS PCT as well as to do a sustainability study of the analyte in the original sample tube. The verification was done by measurements of repeatability and precision, and a comparison of assay results from patient samples against another laboratory using the same method. The sustainability study was done by analyzing five patient samples during different time intervals 0-24 hours after sampling. The repeatability study gave coefficient of variations (CV %) values 3.5 % and 2.2 % with Roche cobas® e602 and 1.3 % and 1.6 % with Roche cobas® e411 using quality control level 1 (affixed value 0,53 µg/L) and level 3 (affixed value 24,5 µg/L) respectively. The precision study gave CV% values between 1.2-1.9 % (quality control level 1 and 3). The patient comparison study showed linear regression (r>0,99). Bias tended to be higher on assay results >20 µg/L. The sustainability study resulted in a slight decrease of the plasma PCT level from immediate analysis (0.73; 57.78; 2.41; 0.94; 0.27 µg/L) to analysis after 24 hours (0.70; 53.69; 2.21; 0.73; 0.24 µg/L). The repeatability and precision was considered to be good. Patient comparisons showed a clear linear relationship with little distribution between the values, both in Kalmar and in Linköping. The sustainability study showed an acceptable sustainability of the analyte in the original sample tube. This method is considered accurate and will be introduced to the laboratories of Clinical Chemistry and Transfusion Medicine at county council of Kalmar.

Biotin är ett vitamin som finns naturligt i livsmedel och det dagliga intaget nås via födan. Höga doser biotintillskott samt höga doser biotin i läkemedel, kan leda till biotininterferens i kliniska immunokemiska analyser. Roche Diagnostics® vill införa nya reagens med högre tröskel för biotininterferens för att minska risken för biotininterferens vid analys av patientplasma. Därför var syftet med studien att metodverifiera fyra nya reagens från Roche Diagnostics® som används vid diagnostisering och behandling av hjärtsvikt, sepsis, och prostatacancer. De fyra reagensen, Elecsys® proBNP II, Elecsys® BRAHMS PCT, Elecsys® total PSA samt Elecsys® free PSA metodverifierades för att användas på Cobas® e801. Studiematerialet bestod av 20 patientprover av litiumheparinplasma per reagens (totalt 80 patientprover). Resultatet av verifieringen av Elecsys® proBNP II visade en korrelation till det befintliga reagenset på r = 0,9998 och Bland-Altman analys visade en spridning av resultaten på < 10 %; inomserieprecisionsstudien gav CV 1,56 %. Elecsys® BRAHMS PCT hade en korrelation på r = 0,9997 och Bland-Altman analysen visade en spridning på > 10 %; inomserieprecisionsstudien gav CV 1,70 %. För Elecsys® total PSA och free PSA fanns korrelationen till det befintliga reagenset på r = 1 respektive 0,9997 och Bland- Altman analysen visade en spridning på < 10 % hos båda reagensen. Inomserieprecisionsstudien gav CV 0,44 % respektive CV 2,67 %. Resultaten för samtliga reagens uppvisar god korrelation till det befintliga reagenset och en hög mätnoggrannhet vilket talar för att de fyra nya reagensen kan tas i bruk. / Biotin is naturally found in foods, and we obtain this vitamin through our daily diet. Biotin supplements as well as high doses of biotin in drugs can lead to biotin interference in clinical immunochemical analyzes. Therefore, the purpose of this study was to methodically verify four new reagents from Roche Diagnostics® with a higher threshold for biotin interference, used in the diagnosis and treatment of heart faliure, sepsis and prostate cancer. The four reagents, Elecsys® proBNP II, Elecsys® BRAHMS PCT, Elecsys® total PSA and Elecsys® free PSA were method-verified for use on Cobas® e801. The study material consisted of 20 patient samples of lithium heparin plasma per reagent. In total 80 samples were analyzed.The result of the verification of Elecsys® proBNP II showed a correlation to the existing reagent of r = 0.9998 and Bland-Altman analysis showed a distribution of the results of <10 %. The withinseries precision study yielded CV 1.56 %. Elecsys® BRAHMS PCT had a correlation of r = 0.9997 and the Bland-Altman analysis showed a distribution of > 10 %. The withinseries precision study gave CV 1.70 %. For Elecsys® total PSA and free PSA, the correlation to the existing reagent was r = 1 and 0.9997, respectively, and the Bland-Altman analysis showed a distribution of <10 % in both reagents. The withinseries precision study yielded CV 0.44 % and CV 2.67 % respectively.The results for all reagents show a good correlation to the existing reagent and a high accuracy of measurement, which indicates that the four new reagents can be used.