INTRODUÇÃO: A leishmaniose tegumentar americana (LT) é uma doença infecciosa, não contagiosa, de transmissão vetorial com ciclo heteroxênico causada por parasitos do gênero Leishmania. É considerada uma enfermidade polimórfica que acomete pele e mucosas. Os medicamentos atualmente disponíveis para o tratamento da doença são insatisfatórios devido à sua eficácia limitada e seus efeitos colaterais, além do alto custo e a resistência que os protozoários acumulam contra essas drogas. O aumento da tolerabilidade é fundamental para o êxito global do tratamento. As formulações lipídicas comerciais da anfotericina B (AB), Ambisome®, Abelcet®e Amphocil®, apresentaram-se como um avanço no tratamento da (LT). Sistemas de nanoemulsões lipídicas reduzem a toxicidade de quimioterápicos e, ao mesmo tempo, aumentam sua ação farmacológica. Emulsões lipídicas com composição semelhante aos quilomícrons tem potencial aplicabilidade para vetorização de AB. OBJETIVO: Avaliar a citotoxicidade in vitro da anfotericina B desoxicolato (AB) e sua associação à nanoemulsão lipídica, o quilomícron artificial (QMA-AB), e in vivo, a tolerabilidade e eficácia terapêutica no tratamento da leishmaniose tegumentar em camundongos BALB/c. MÉTODOS: Para os testes in vitro, foi determinada a concentração inibitória (IC50) em formas promastigotas, a concentração citotóxica (CC50) em macrófagos sem infecção e a taxa de macrófagos infectados quando tratados com as formulações QMA, AB e QMA-AB. Já para os testes in vivo, camundongos BALB/c foram infectados com L. amazonensis e tratados com 2,5 mg/kg/dia de AB e 17,5 mg/kg/dia de QMA-AB e QMA. Durante o tratamento os animais foram monitorados semanalmente acerca do peso corporal e do diâmetro das patas. Ao término do tratamento os camundongos foram eutanasiados e amostras de sangue e tecido foram coletadas para análises bioquímicas, hematológicas, histopatológicas e quantificação da carga parasitária por método molecular qPCR. A análise estatística foi realizada com teste ANOVA seguido de Bonferroni ou Kruskal-Wallis com pós-teste de Dunn. As variáveis categóricas foram reportadas em tabelas de contingência (teste exato de Fisher). As análises foram consideradas estatisticamente significantes com p < 0,05. RESULTADOS: A formulação QMA-AB foi mais efetiva contra formas promastigotas apresentando IC50 em torno de 0,012 micro g/mL, enquanto que o IC50 de AB foi de 0,023 micro g/mL. AB foi mais tóxica para os macrófagos J744 com baixa concentração, 2,324 micro g/mL. QMA-AB foi menos tóxica para os macrófagos com CC50 de 8,106 micro g/mL, superior à AB, e apresentou alto índice de seletividade (IS=675,5). A formulação QMA-AB diminuiu a taxa de infecção em macrófagos, foi menos tóxica, mais eficaz no tratamento dos animais infectados e reduziu em torno de 60% o tamanho do diâmetro das lesões em relação à AB e 95% da carga parasitária. CONCLUSÕES: A associação QMA-AB apresentou-se como uma alternativa em potencial no tratamento da LT na busca de uma preparação de alta eficácia terapêutica, baixa toxicidade e baixo custo para o Sistema Único de Saúde / INTRODUCTION: American tegumentary leishmaniasis (ATL) is an infectious, non-contagious, vector-borne disease with heteroxenic cycle caused by parasites of the genus Leishmania. It is considered a polymorphic disease that affects skin and mucous membranes. Medications currently available for the treatment of the disease are unsatisfactory because of their limited effectiveness and side effects, and the high cost and resistance that protozoa accumulate against these drugs. Increased tolerability is critical to the overall success of treatment. The commercial lipid formulations of amphotericin B (AB), Ambisome®, Abelcet® and Amphocil®, presented as an advance in the treatment of (ATL). Lipid nanoemulsion systems reduce the toxicity of chemotherapeutics and, at the same time, increase their pharmacological action. Lipid emulsions with composition similar to chylomicrons have potential applicability for vectorization of AB. OBJECTIVE: This study evaluated the in vitro cytotoxicity of amphotericin B deoxycholate (AB) and its association with lipid nanoemulsion, artificial chylomicron (ACM), and in vivo, the tolerability and therapeutic efficacy in the treatment of cutaneous leishmaniasis in BALB/c. METHODS: For in vitro tests, the inhibitory concentration (IC50) in promastigote forms, the cytotoxic concentration (CC50) in non-infected macrophages and the rate of infected macrophages when treated with the ACM, AB and ACM-AB formulations were determined. For the in vivo tests, BALB/c mice were infected with L. amazonensis and treated with 2,5 mg/kg/day of AB and 17,5 mg/kg/day of ACM-AB and ACM. During the treatment the animals were monitored weekly about body weight and leg diameter. At the end of the treatment the mice were euthanized and blood and tissue samples were collected for biochemical, hematological, histopathological and quantitative analysis of the parasite load. Statistical analysis was performed using ANOVA followed by Bonferroni or Kruskal-Wallis with Dunn post-test. Categorical variables were reported in contingency tables (Fisher\'s exact test). The analyzes were considered statistically significant at p < 0.05. RESULTS: The ACM-AB formulation was more effective against promastigote forms exhibiting IC50 around 0,012 Micro g/mL, while the IC50 of AB was 0,023 Micro g/mL. AB was more toxic to J744 macrophages with low concentration, 2,324 Micro g/mL. ACM-AB was less toxic to macrophages with CC50 of 8,106 Micro g/mL, higher than AB, and presented a high selectivity index (IS = 675.5). The ACM-AB formulation decreased the rate of macrophages infected, was less toxic, more effective in the treatment of infected animals and reduced the size of the lesion diameter by about 60% in relation to AB and 95% of the parasite load. CONCLUSIONS: The ACM-AB association was presented as a potential alternative in the treatment of ATL in the search for a high therapeutic efficacy, low toxicity and low cost preparation for the Unified Health System

O principal distúrbio metabólico decorrente do Diabetes mellitus tipo 2 e da Síndrome Metabólica corresponde a alterações no metabolismo lipídico. Portanto, torna-se importante a melhor compreensão de alguns aspectos do metabolismo de lipoproteínas plasmáticas. Nesse sentido, a avaliação do metabolismo dos quilomícrons e da transferência de lípides de lipoproteínas plasmáticas para a lipoproteína de alta densidade (HDL), pode fornecer informações importantes relacionadas com o processo aterogênico. No presente estudo, foram estudados 15 indivíduos portadores de Diabetes mellitus tipo 2, 15 indivíduos com Síndrome Metabólica e 14 controles normolipidêmicos. Foi avaliada a cinética plasmática de uma nanoemulsão lipídica artificial com comportamento metabólico similar ao dos quilomícrons naturais, marcada com triglicérides (TG-3H) e éster de colesterol (EC-14C) radioativos. A nanoemulsão de quilomícrons artificiais foi injetada endovenosamente e amostras de sangue foram coletadas durante intervalos préestabelecidos. As curvas de decaimento plasmático dos lípides radioativos da nanoemulsão foram traçadas e as taxas fracionais de remoção (TFR) foram calculadas por análise compartimental. Para avaliação da transferência de lípides foi utilizada uma nanoemulsão semelhante a LDL (LDE) marcada com TG-3H e colesterol livre-14C (CL-14C) ou fosfolípides-14C (PL-14C) e EC-3H, como doadora de lípides para a HDL. Após incubação in vitro da LDE com o plasma, seguiu-se a precipitação das lipoproteínas que contem apolipoproteína B, restando no sobrenadante apenas a HDL. As taxas de transferência de lípides foram expressas em % de radioatividade encontrada no sobrenadante. Também foi determinado o diâmetro da HDL por espalhamento de luz. A TFR-EC dos grupos DM2 (p <0,05) e SM (p <0,01) comparado ao grupo controle apresentou-se diminuída, enquanto que as TFR-TG foram similares nos três grupos. Houve maior transferência de fosfolípides e colesterol nos grupos DM2 e SM comparando-se com grupo controle (p<0,001) A transferência de triglicérides e de éster de colesterol não diferiu entre os grupos. Não observou-se diferença no diâmetro da HDL nos três grupos. Concluindo, nossos resultados sugerem que a remoção plasmática dos remanescentes de quilomícrons encontra-se alterada em pacientes com SM e com DM2. Além disso, a transferência de lípides presentes na superfície das lipoproteínas para a HDL encontra-se aumentada nesses dois distúrbios metabólicos. Essas alterações podem contribuir com a maior incidência de aterosclerose nesses pacientes. / The main metabolic disturbances occurring as a result of type 2 diabetes mellitus (DM2) and Metabolic Syndrome (MetS) are alterations in the metabolism of lipids. It is therefore, important to better understand the aspects by which plasma lipoproteins are metabolized. The evaluation of chylomicron metabolism and lipid transfer of high density lipoprotein (HDL) can thus yield useful information regarding the atherosclerotic process. In this study, 15 Type 2 Diabetes individuals, 15 Metabolic Syndrome individuals and 14 normolipidemic control individuals were studied. The plasmatic kinetics of an artificial lipidic nanoemulsion mimicking the behavior of natural chylomicrons were evaluated. This artificial chylomicron nanoemulsion, labele with radioactive triglycerides (TG-3H) and radioactive cholesteryl oleate (CO-14C) was injected intravenously and blood samples collected at pre-established time intervals. The plasmatic decay curve of the radioactive lipids of the nanoemulsion was traced and the fractional clearance rate calculated (FCR) through compartmental analysis. In order to evaluate the lipid transfer, we used a nanoemulsion similar to LDL., labeled with TG-3H and free cholesterol -14C (CL-14C) or with phospholipids -14C (PL-14C) and CO-3H, as a lipid donator to HDL. After in vitro nanoemulsion incubation with the plasma, the lipoproteins containing apolipoprotein B were precipitated, resulting in a supernatant containing HDL. The lipid transfer rates were expressed in % of radioactivity measured in the supernatant. It was also determined the diameter of the HDL using light scattering technique. The TFR-EC for the DM2 (p <0.05) and MetS (p <0.01) groups when compared to the control group was reduced. The TFR-TG, on the other hand, remained similar in all three groups. The transfer of phospholipids and cholesterol for the DM2 (p<0.001) and MetS groups was greater than that of the control group (p<0.001). The triglycerides and ester cholesteryl transfer showed no differences between the studied groups. Furthermore, no difference in HDL diameter was observed in any of the three groups. In conclusion, our results suggest that the removal of chylomicron remnants from the plasma is altered in SM and DM2 patients. Furthermore, there is an increase in the transfer of lipids located on the surface of lipoproteins to HDL . These alterations may contribute to a higher incidence of atherosclerosis in these patients.

O principal distúrbio metabólico decorrente do Diabetes mellitus tipo 2 e da Síndrome Metabólica corresponde a alterações no metabolismo lipídico. Portanto, torna-se importante a melhor compreensão de alguns aspectos do metabolismo de lipoproteínas plasmáticas. Nesse sentido, a avaliação do metabolismo dos quilomícrons e da transferência de lípides de lipoproteínas plasmáticas para a lipoproteína de alta densidade (HDL), pode fornecer informações importantes relacionadas com o processo aterogênico. No presente estudo, foram estudados 15 indivíduos portadores de Diabetes mellitus tipo 2, 15 indivíduos com Síndrome Metabólica e 14 controles normolipidêmicos. Foi avaliada a cinética plasmática de uma nanoemulsão lipídica artificial com comportamento metabólico similar ao dos quilomícrons naturais, marcada com triglicérides (TG-3H) e éster de colesterol (EC-14C) radioativos. A nanoemulsão de quilomícrons artificiais foi injetada endovenosamente e amostras de sangue foram coletadas durante intervalos préestabelecidos. As curvas de decaimento plasmático dos lípides radioativos da nanoemulsão foram traçadas e as taxas fracionais de remoção (TFR) foram calculadas por análise compartimental. Para avaliação da transferência de lípides foi utilizada uma nanoemulsão semelhante a LDL (LDE) marcada com TG-3H e colesterol livre-14C (CL-14C) ou fosfolípides-14C (PL-14C) e EC-3H, como doadora de lípides para a HDL. Após incubação in vitro da LDE com o plasma, seguiu-se a precipitação das lipoproteínas que contem apolipoproteína B, restando no sobrenadante apenas a HDL. As taxas de transferência de lípides foram expressas em % de radioatividade encontrada no sobrenadante. Também foi determinado o diâmetro da HDL por espalhamento de luz. A TFR-EC dos grupos DM2 (p <0,05) e SM (p <0,01) comparado ao grupo controle apresentou-se diminuída, enquanto que as TFR-TG foram similares nos três grupos. Houve maior transferência de fosfolípides e colesterol nos grupos DM2 e SM comparando-se com grupo controle (p<0,001) A transferência de triglicérides e de éster de colesterol não diferiu entre os grupos. Não observou-se diferença no diâmetro da HDL nos três grupos. Concluindo, nossos resultados sugerem que a remoção plasmática dos remanescentes de quilomícrons encontra-se alterada em pacientes com SM e com DM2. Além disso, a transferência de lípides presentes na superfície das lipoproteínas para a HDL encontra-se aumentada nesses dois distúrbios metabólicos. Essas alterações podem contribuir com a maior incidência de aterosclerose nesses pacientes. / The main metabolic disturbances occurring as a result of type 2 diabetes mellitus (DM2) and Metabolic Syndrome (MetS) are alterations in the metabolism of lipids. It is therefore, important to better understand the aspects by which plasma lipoproteins are metabolized. The evaluation of chylomicron metabolism and lipid transfer of high density lipoprotein (HDL) can thus yield useful information regarding the atherosclerotic process. In this study, 15 Type 2 Diabetes individuals, 15 Metabolic Syndrome individuals and 14 normolipidemic control individuals were studied. The plasmatic kinetics of an artificial lipidic nanoemulsion mimicking the behavior of natural chylomicrons were evaluated. This artificial chylomicron nanoemulsion, labele with radioactive triglycerides (TG-3H) and radioactive cholesteryl oleate (CO-14C) was injected intravenously and blood samples collected at pre-established time intervals. The plasmatic decay curve of the radioactive lipids of the nanoemulsion was traced and the fractional clearance rate calculated (FCR) through compartmental analysis. In order to evaluate the lipid transfer, we used a nanoemulsion similar to LDL., labeled with TG-3H and free cholesterol -14C (CL-14C) or with phospholipids -14C (PL-14C) and CO-3H, as a lipid donator to HDL. After in vitro nanoemulsion incubation with the plasma, the lipoproteins containing apolipoprotein B were precipitated, resulting in a supernatant containing HDL. The lipid transfer rates were expressed in % of radioactivity measured in the supernatant. It was also determined the diameter of the HDL using light scattering technique. The TFR-EC for the DM2 (p <0.05) and MetS (p <0.01) groups when compared to the control group was reduced. The TFR-TG, on the other hand, remained similar in all three groups. The transfer of phospholipids and cholesterol for the DM2 (p<0.001) and MetS groups was greater than that of the control group (p<0.001). The triglycerides and ester cholesteryl transfer showed no differences between the studied groups. Furthermore, no difference in HDL diameter was observed in any of the three groups. In conclusion, our results suggest that the removal of chylomicron remnants from the plasma is altered in SM and DM2 patients. Furthermore, there is an increase in the transfer of lipids located on the surface of lipoproteins to HDL . These alterations may contribute to a higher incidence of atherosclerosis in these patients.