Bancos de Tecidos de diversas regiões do mundo têm estocado cartilagens humanas obtidas de doadores post mortem para uso em diversos tipos de cirurgias reconstrutivas. Para garantir que tais tecidos não estejam contaminados, estes têm sido esterilizados com radiação ionizante. Entretanto, altas doses de radiação gama podem causar efeitos indesejáveis nos tecidos. No presente trabalho, avaliamos a viabilidade de utilizar duas técnicas, Tomografia por Coerência Óptica (OCT) e Termogravimetria (TGA), para identificar possíveis modificações estruturais causadas na cartilagem costal humana em decorrência dos métodos de preservação e doses de radiação ionizante utilizadas. As cartilagens obtidas de doadores cadavéricos foram congeladas a -70 ºC ou preservadas em glicerol. A seguir, as amostras foram irradiadas por fontes de 60Co com doses de 15, 25 e 50 kGy. Nos resultados de TGA verificamos que as cartilagens preservadas em glicerol e irradiadas com diferentes doses de radiação não apresentaram diferenças estatisticamente significantes quando comparadas ao grupo controle, no que tange a taxa de desidratação do tecido, sendo que o mesmo não ocorre com cartilagens congeladas a -70 ºC e irradiadas com doses de 15 kGy. Em relação ao uso da técnica de OCT, por meio do cálculo do coeficiente de atenuação óptica total, verificamos que doses de 15 kGy promovem a criação de ligações cruzadas entre as fibrilas de colágeno, corroborando os resultados de TGA. Ainda, os valores do coeficiente de atenuação óptica total são diretamente proporcionais à tensão de ruptura das cartilagens, o que nos possibilitará, em um futuro próximo, predizer a qualidade de um enxerto sem a necessidade de perda de material biológico, visto ser o OCT um método não destrutivo. Por meio das imagens de PS-OCT podemos verificar que as doses de radiação utilizadas para esterilizar as amostras não provocam danos à rede de colágeno a ponto de que sua birrefringência seja perdida. Assim, o TGA e OCT são técnicas que podem ser utilizadas por bancos de tecidos de forma a verificar a qualidade dos tecidos antes de serem transplantados em pacientes. / Tissue Banks around the world have stored human cartilages obtained from post mortem donors for use in several kinds of reconstructive surgeries. To ensure that such tissues are not contaminated, they have been sterilized with ionizing radiation. However, high doses of gamma radiation may cause undesirable changes in the tissues. In this work, we evaluated the possibility of use Optical Coherence Tomography (OCT) and Thermogravimetric Analysis (TGA) to identify possible structural modifications caused by both preservation methods of cartilage and gamma irradiation doses. Cartilages were obtained from cadaveric donors and were frozen at -70 ºC or preserved in glycerol. Irradiation was performed by 60Co source with doses of 15, 25 and 50 kGy. Our TGA results showed that glycerolized cartilages irradiated with different doses of radiation does not presented statistical differences when compared to the control group for the dehydration rate. However, the same was not observed for deep-fronzen cartilages irradiated with 15 kGy. The results of OCT associated to total optical attenuation coefficient showed that doses of 15 kGy promote cross-link between collagen fibrils, corroborating the results obtained from TGA. Moreover, total optical attenuation coefficient values are proportionals to stress at break of cartilages, what will be very useful in a near future to predict the quality of the allografts, without unnecessary loss of biological tissue, once OCT is a nondestructive technique. By PS-OCT images, we found that high doses of ionizing radiation does not promote sufficient impairments to promote complete loss of tissue birefringence. Thus, TGA and OCT are techniques that can be used for tissue banks to verify tissue quality before its transplant.

Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um sistema computacional (software) de gerenciamento de risco, viabilizando o diagnóstico dos riscos dos processos de radioesterilização de tecidos biológicos. O gerenciamento de risco pode ser entendido como uma gestão sistemática que tem por objetivo identificar, registrar e controlar os riscos de um processo. Para a execução do gerenciamento de risco são requisitos fundamentais: a experiência, o discernimento e o julgamento de uma equipe multidisciplinar, direcionada por meio de ferramentas de qualidade, no intuito de proporcionar padronização no processo investigativo das causas e efeitos dos riscos; dinamismo também é requisito no alcance do objetivo desejado: a redução e o controle do risco. Nesse sentido, a aplicação do gerenciamento de risco torna-se uma atividade complexa, devido à variedade de profissionais envolvidos. Por isso, o apoio de um sistema computacional é tão importante, pois, no que tange ao gerenciamento de risco, o software facilita as tarefas do responsável pelo processo de radioesterilização de tecidos biológicos, que pode, inclusive, contar com a utilização de normas e guias específicos. Essas informações de sumária importância são indexadas nos diagnósticos de riscos, o que torna possível ao responsável qualificado a execução de ações corretivas para a garantia da segurança do processo. A metodologia adotada neste trabalho foi a pesquisa-ação, segundo a qual o pesquisador desempenha um papel ativo no equacionamento dos problemas encontrados, bem como no acompanhamento e avaliação das ações desencadeadas em função dos problemas observados. O cenário dessa pesquisa-ação foi o Laboratório de Tecidos Biológicos (LTB) no Centro de Tecnologia das Radiações (CTR, IPEN/CNEN-SP, Brasil). O software foi desenvolvido em linguagem PHP e Flash/MySQL e está hospedado num servidor que o torna disponível na internet via endereço www.vcrisk.com.br, podendo, então, ser acessado de qualquer lugar pelo usuário , por meio de um login/senha previamente encaminhados por e-mail. O sistema computacional apresenta uma navegabilidade amigável, o que permite que o usuário seja guiado, passo a passo, no processo investigativo do risco até as suas medidas de redução. Tal sistema direciona o usuário a apresentar a efetividade das ações tomadas para redução do risco dentro de prazos previstos. Assim, o uso desse sistema proporciona à organização (LTB/CTR/IPEN) uma comunicação dinâmica e efetiva entre os membros da equipe multidisciplinar: a) na tomada de decisões; b) nas lições aprendidas; c) no conhecimento do novo risco e suas ações para mantê-lo controlado; e d) no gerenciamento de falhas e riscos, garantindo a realização da principal meta de um laboratório de radioesterilização de tecidos biológicos que é a excelência de qualidade do tecido radioesterilizado. / Risk management can be understood to be a systematic management which aims to identify record and control the risks of a process. Applying risk management becomes a complex activity, due to the variety of professionals involved. In order to execute risk management the following are requirements of paramount importance: the experience, discernment and judgment of a multidisciplinary team, guided by means of quality tools, so as to provide standardization in the process of investigating the cause and effects of risks and dynamism in obtaining the objective desired, i.e. the reduction and control of the risk. This work aims to develop a computational system of risk management (software) which makes it feasible to diagnose the risks of the processes of radiosterilization of biological tissues. The methodology adopted was action-research, according to which the researcher performs an active role in the establishment of the problems found, in the follow-up and in the evaluation of the actions taken owing to the problems. The scenario of this action-research was the Laboratory of Biological Tissues (LTB) in the Radiation Technology Center IPEN/CNEN-SP São Paulo/Brazil. The software developed was executed in PHP and Flash/MySQL language, the server (hosting), the software is available on the Internet (www.vcrisk.com.br), which the user can access from anywhere by means of the login/access password previously sent by email to the team responsible for the tissue to be analyzed. The software presents friendly navigability whereby the user is directed step-by-step in the process of investigating the risk up to the means of reducing it. The software makes the user comply with the term and present the effectiveness of the actions taken to reduce the risk. Applying this system provided the organization (LTB/CTR/IPEN) with dynamic communication, effective between the members of the multidisciplinary team: a) in decision-making; b) in lessons learned; c) in knowing the new risk and the actions to maintain it controlled and, d) in the management of failures and risks, guaranteeing fulfillment of the main goal of a laboratory of radiosterilization of biological tissues: excellence in the quality of the radiosterilized tissue.

Este trabalho teve como objetivo o desenvolvimento de um sistema computacional (software) de gerenciamento de risco, viabilizando o diagnóstico dos riscos dos processos de radioesterilização de tecidos biológicos. O gerenciamento de risco pode ser entendido como uma gestão sistemática que tem por objetivo identificar, registrar e controlar os riscos de um processo. Para a execução do gerenciamento de risco são requisitos fundamentais: a experiência, o discernimento e o julgamento de uma equipe multidisciplinar, direcionada por meio de ferramentas de qualidade, no intuito de proporcionar padronização no processo investigativo das causas e efeitos dos riscos; dinamismo também é requisito no alcance do objetivo desejado: a redução e o controle do risco. Nesse sentido, a aplicação do gerenciamento de risco torna-se uma atividade complexa, devido à variedade de profissionais envolvidos. Por isso, o apoio de um sistema computacional é tão importante, pois, no que tange ao gerenciamento de risco, o software facilita as tarefas do responsável pelo processo de radioesterilização de tecidos biológicos, que pode, inclusive, contar com a utilização de normas e guias específicos. Essas informações de sumária importância são indexadas nos diagnósticos de riscos, o que torna possível ao responsável qualificado a execução de ações corretivas para a garantia da segurança do processo. A metodologia adotada neste trabalho foi a pesquisa-ação, segundo a qual o pesquisador desempenha um papel ativo no equacionamento dos problemas encontrados, bem como no acompanhamento e avaliação das ações desencadeadas em função dos problemas observados. O cenário dessa pesquisa-ação foi o Laboratório de Tecidos Biológicos (LTB) no Centro de Tecnologia das Radiações (CTR, IPEN/CNEN-SP, Brasil). O software foi desenvolvido em linguagem PHP e Flash/MySQL e está hospedado num servidor que o torna disponível na internet via endereço www.vcrisk.com.br, podendo, então, ser acessado de qualquer lugar pelo usuário , por meio de um login/senha previamente encaminhados por e-mail. O sistema computacional apresenta uma navegabilidade amigável, o que permite que o usuário seja guiado, passo a passo, no processo investigativo do risco até as suas medidas de redução. Tal sistema direciona o usuário a apresentar a efetividade das ações tomadas para redução do risco dentro de prazos previstos. Assim, o uso desse sistema proporciona à organização (LTB/CTR/IPEN) uma comunicação dinâmica e efetiva entre os membros da equipe multidisciplinar: a) na tomada de decisões; b) nas lições aprendidas; c) no conhecimento do novo risco e suas ações para mantê-lo controlado; e d) no gerenciamento de falhas e riscos, garantindo a realização da principal meta de um laboratório de radioesterilização de tecidos biológicos que é a excelência de qualidade do tecido radioesterilizado. / Risk management can be understood to be a systematic management which aims to identify record and control the risks of a process. Applying risk management becomes a complex activity, due to the variety of professionals involved. In order to execute risk management the following are requirements of paramount importance: the experience, discernment and judgment of a multidisciplinary team, guided by means of quality tools, so as to provide standardization in the process of investigating the cause and effects of risks and dynamism in obtaining the objective desired, i.e. the reduction and control of the risk. This work aims to develop a computational system of risk management (software) which makes it feasible to diagnose the risks of the processes of radiosterilization of biological tissues. The methodology adopted was action-research, according to which the researcher performs an active role in the establishment of the problems found, in the follow-up and in the evaluation of the actions taken owing to the problems. The scenario of this action-research was the Laboratory of Biological Tissues (LTB) in the Radiation Technology Center IPEN/CNEN-SP São Paulo/Brazil. The software developed was executed in PHP and Flash/MySQL language, the server (hosting), the software is available on the Internet (www.vcrisk.com.br), which the user can access from anywhere by means of the login/access password previously sent by email to the team responsible for the tissue to be analyzed. The software presents friendly navigability whereby the user is directed step-by-step in the process of investigating the risk up to the means of reducing it. The software makes the user comply with the term and present the effectiveness of the actions taken to reduce the risk. Applying this system provided the organization (LTB/CTR/IPEN) with dynamic communication, effective between the members of the multidisciplinary team: a) in decision-making; b) in lessons learned; c) in knowing the new risk and the actions to maintain it controlled and, d) in the management of failures and risks, guaranteeing fulfillment of the main goal of a laboratory of radiosterilization of biological tissues: excellence in the quality of the radiosterilized tissue.

Bancos de Tecidos de diversas regiões do mundo têm estocado cartilagens humanas obtidas de doadores post mortem para uso em diversos tipos de cirurgias reconstrutivas. Para garantir que tais tecidos não estejam contaminados, estes têm sido esterilizados com radiação ionizante. Entretanto, altas doses de radiação gama podem causar efeitos indesejáveis nos tecidos. No presente trabalho, avaliamos a viabilidade de utilizar duas técnicas, Tomografia por Coerência Óptica (OCT) e Termogravimetria (TGA), para identificar possíveis modificações estruturais causadas na cartilagem costal humana em decorrência dos métodos de preservação e doses de radiação ionizante utilizadas. As cartilagens obtidas de doadores cadavéricos foram congeladas a -70 ºC ou preservadas em glicerol. A seguir, as amostras foram irradiadas por fontes de 60Co com doses de 15, 25 e 50 kGy. Nos resultados de TGA verificamos que as cartilagens preservadas em glicerol e irradiadas com diferentes doses de radiação não apresentaram diferenças estatisticamente significantes quando comparadas ao grupo controle, no que tange a taxa de desidratação do tecido, sendo que o mesmo não ocorre com cartilagens congeladas a -70 ºC e irradiadas com doses de 15 kGy. Em relação ao uso da técnica de OCT, por meio do cálculo do coeficiente de atenuação óptica total, verificamos que doses de 15 kGy promovem a criação de ligações cruzadas entre as fibrilas de colágeno, corroborando os resultados de TGA. Ainda, os valores do coeficiente de atenuação óptica total são diretamente proporcionais à tensão de ruptura das cartilagens, o que nos possibilitará, em um futuro próximo, predizer a qualidade de um enxerto sem a necessidade de perda de material biológico, visto ser o OCT um método não destrutivo. Por meio das imagens de PS-OCT podemos verificar que as doses de radiação utilizadas para esterilizar as amostras não provocam danos à rede de colágeno a ponto de que sua birrefringência seja perdida. Assim, o TGA e OCT são técnicas que podem ser utilizadas por bancos de tecidos de forma a verificar a qualidade dos tecidos antes de serem transplantados em pacientes. / Tissue Banks around the world have stored human cartilages obtained from post mortem donors for use in several kinds of reconstructive surgeries. To ensure that such tissues are not contaminated, they have been sterilized with ionizing radiation. However, high doses of gamma radiation may cause undesirable changes in the tissues. In this work, we evaluated the possibility of use Optical Coherence Tomography (OCT) and Thermogravimetric Analysis (TGA) to identify possible structural modifications caused by both preservation methods of cartilage and gamma irradiation doses. Cartilages were obtained from cadaveric donors and were frozen at -70 ºC or preserved in glycerol. Irradiation was performed by 60Co source with doses of 15, 25 and 50 kGy. Our TGA results showed that glycerolized cartilages irradiated with different doses of radiation does not presented statistical differences when compared to the control group for the dehydration rate. However, the same was not observed for deep-fronzen cartilages irradiated with 15 kGy. The results of OCT associated to total optical attenuation coefficient showed that doses of 15 kGy promote cross-link between collagen fibrils, corroborating the results obtained from TGA. Moreover, total optical attenuation coefficient values are proportionals to stress at break of cartilages, what will be very useful in a near future to predict the quality of the allografts, without unnecessary loss of biological tissue, once OCT is a nondestructive technique. By PS-OCT images, we found that high doses of ionizing radiation does not promote sufficient impairments to promote complete loss of tissue birefringence. Thus, TGA and OCT are techniques that can be used for tissue banks to verify tissue quality before its transplant.

Nas últimas décadas tem aumentado o interesse pelos enxertos de pele humana radioesterilizadas, para aplicação principalmente em queimaduras extensas e profundas. Isto se deve ao fato destes enxertos apresentarem rápida aderência e menor potencial antigênico, em comparação com os demais tratamentos utilizados. A proposta deste estudo foi avaliar a histoarquitetura do enxerto de pele humana irradiada com doses de 25 kGy, 50 kGy e não irradiada, durante o processo de reparação tecidual, em camundongos Nude submetidos a enxertia de pele na região dorsal. Três grupos de animais receberam enxertos de pele humana irradiada (25 kGy e 50 kGy) e não irradiada e foram eutanasiados no 3º, 7º e 21º dia após a realização da cirurgia. Após os procedimentos histológicos de rotina, as amostras de tecido foram coradas com hematoxilina e eosina (HE) para a quantificação de queratinócitos, fibroblastos, células de defesa e vasos sanguíneos e a reação de imunofluorescência (IF) foi realizada para a determinação da expressão de colágeno do tipo I humano e do colágeno dos tipos I e III de camundongo. A quantificação, tanto das células quanto dos tipos de colágeno foi realizada por análise de imagem, utilizando o programa Image-Pro PLus 6.0. Os resultados histológicos demostraram que a pele humana irradiação, quando enxertada, influencia o aumento do número de células no local de cicatrização ao longo do tempo, principalmente na dose de 25 kGy, além de proporcionar uma melhor dispersão destas células. No 21º dia, os três grupos de animais com enxertia de pele humana tiveram parte do enxerto incorporado no processo de cicatrização. O grupo não irradiado apresentou maior incorporação do enxerto (43%), porém menor produção de colágeno do tipo III de camundongo (22%). Já os grupos com enxertia de pele irradiada apresentaram menor incorporação do enxerto (6 e 15%), mas com maior produção de colágeno do tipo III de camundongo (35% e 28%, para 25 kGy e 50 kGy, respectivamente). Com este estudo pôde-se concluir que o grupo irradiado a 25 kGy, apresenta maior proliferação celular e formação de vasos,além de melhor remodelamento da região de cicatrização. / Over the last few years it has increased the interest in the human skin grafts radio sterilized for application mainly in extensive and deep burns. Because these grafts quickly grip and present antigenic lower potential, compared with other treatments used. The purpose of this study was to evaluate the histoarchitecture of human skin grafts irradiated with doses 25 kGy, 50 kGy and non-irradiated during the pepair tissue process in nude mice submitted by skin grafting in the dorsal region. Three groups of animals received irradiated human skin grafts (25 kGy and 50 kGy) and non-irradiated and were euthanized on the 3rd, 7th and 21th day after the surgery. Indeed, routine histologic procedures, tissue samples were stained with hematoxylin and eosin (HE) for quantification of keratinocytes, fibroblasts, immune cells and blood vessels and immunofluorescence (IF) was performed to determine the expression human collagen type I and collagen type I and III mouse. Therefore, quantification of both the cells and the collagen types was performed by image analysis using Image-Pro Plus 6.0 software. Histologic results demonstrated at a dose of 25 kGy that human skin irradiation when grafted influences the increase in the number of cells in wound site over time and it provides better dispersion of these cells. In addition, on the 21st day, three groups of animals with human skin graft were embedded part of the graft in the healing process. On the other hand, the group not irradiated showed greater incorporation of the graft (43 %), but less production of collagen type III mouse (22 %). Since the groups irradiated skin graft showed lower graft incorporation (6 and 15%), but with greater production of collagen type III mice (35 % and 28 % to 25 kGy and 50 kGy, respectively). In conclusion, this study presented that the group irradiated to 25 kGy and it has a higher cell proliferation and vessel formation, and better remodeling of the healing area.

Nas últimas décadas tem aumentado o interesse pelos enxertos de pele humana radioesterilizadas, para aplicação principalmente em queimaduras extensas e profundas. Isto se deve ao fato destes enxertos apresentarem rápida aderência e menor potencial antigênico, em comparação com os demais tratamentos utilizados. A proposta deste estudo foi avaliar a histoarquitetura do enxerto de pele humana irradiada com doses de 25 kGy, 50 kGy e não irradiada, durante o processo de reparação tecidual, em camundongos Nude submetidos a enxertia de pele na região dorsal. Três grupos de animais receberam enxertos de pele humana irradiada (25 kGy e 50 kGy) e não irradiada e foram eutanasiados no 3º, 7º e 21º dia após a realização da cirurgia. Após os procedimentos histológicos de rotina, as amostras de tecido foram coradas com hematoxilina e eosina (HE) para a quantificação de queratinócitos, fibroblastos, células de defesa e vasos sanguíneos e a reação de imunofluorescência (IF) foi realizada para a determinação da expressão de colágeno do tipo I humano e do colágeno dos tipos I e III de camundongo. A quantificação, tanto das células quanto dos tipos de colágeno foi realizada por análise de imagem, utilizando o programa Image-Pro PLus 6.0. Os resultados histológicos demostraram que a pele humana irradiação, quando enxertada, influencia o aumento do número de células no local de cicatrização ao longo do tempo, principalmente na dose de 25 kGy, além de proporcionar uma melhor dispersão destas células. No 21º dia, os três grupos de animais com enxertia de pele humana tiveram parte do enxerto incorporado no processo de cicatrização. O grupo não irradiado apresentou maior incorporação do enxerto (43%), porém menor produção de colágeno do tipo III de camundongo (22%). Já os grupos com enxertia de pele irradiada apresentaram menor incorporação do enxerto (6 e 15%), mas com maior produção de colágeno do tipo III de camundongo (35% e 28%, para 25 kGy e 50 kGy, respectivamente). Com este estudo pôde-se concluir que o grupo irradiado a 25 kGy, apresenta maior proliferação celular e formação de vasos,além de melhor remodelamento da região de cicatrização. / Over the last few years it has increased the interest in the human skin grafts radio sterilized for application mainly in extensive and deep burns. Because these grafts quickly grip and present antigenic lower potential, compared with other treatments used. The purpose of this study was to evaluate the histoarchitecture of human skin grafts irradiated with doses 25 kGy, 50 kGy and non-irradiated during the pepair tissue process in nude mice submitted by skin grafting in the dorsal region. Three groups of animals received irradiated human skin grafts (25 kGy and 50 kGy) and non-irradiated and were euthanized on the 3rd, 7th and 21th day after the surgery. Indeed, routine histologic procedures, tissue samples were stained with hematoxylin and eosin (HE) for quantification of keratinocytes, fibroblasts, immune cells and blood vessels and immunofluorescence (IF) was performed to determine the expression human collagen type I and collagen type I and III mouse. Therefore, quantification of both the cells and the collagen types was performed by image analysis using Image-Pro Plus 6.0 software. Histologic results demonstrated at a dose of 25 kGy that human skin irradiation when grafted influences the increase in the number of cells in wound site over time and it provides better dispersion of these cells. In addition, on the 21st day, three groups of animals with human skin graft were embedded part of the graft in the healing process. On the other hand, the group not irradiated showed greater incorporation of the graft (43 %), but less production of collagen type III mouse (22 %). Since the groups irradiated skin graft showed lower graft incorporation (6 and 15%), but with greater production of collagen type III mice (35 % and 28 % to 25 kGy and 50 kGy, respectively). In conclusion, this study presented that the group irradiated to 25 kGy and it has a higher cell proliferation and vessel formation, and better remodeling of the healing area.