Submitted by Amanda Silva (amanda.osilva2@ufpe.br) on 2015-03-03T14:21:04Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO POLIANE ANGELO DE LUCENA.pdf: 1675010 bytes, checksum: b2b1eb6f66bd8f1d32454cd3f9b6fa33 (MD5) / Made available in DSpace on 2015-03-03T14:21:04Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO POLIANE ANGELO DE LUCENA.pdf: 1675010 bytes, checksum: b2b1eb6f66bd8f1d32454cd3f9b6fa33 (MD5) Previous issue date: 2013 / CNPq;CNEN / Este trabalho avaliou a qualidade do radiofármaco 99mTc-MIBI de diferentes fabricantes utilizados em três serviços de medicina nuclear (SMN) na cidade de Recife-PE, a partir do procedimento de marcação de cada serviço, observando a sua biodistribuição por meio da quantificação da atividade presente nos órgãos de interesse (Coração/Fígado), a influência e interferência na qualidade da imagem e no diagnóstico do exame de cintilografia do miocárdio. Nesses SMN (A, B e C), foram realizados os controles de qualidade nos eluatos de geradores de 99Mo/99mTc (purezas radionuclídica, química e radioquímica e pH) e do radiofármaco 99mTc-MIBI (pureza radioquímica e pH), utilizado no exame de cintilografia do miocárdio. No caso da pureza radioquímica (PRQ), foi utilizada a técnica de cromatografia em camada delgada e, após a corrida cromatográfica, as fitas foram analisadas tanto no calibrador de dose, como na câmara de cintilação de cada SMN. A biodistribuição do radiofármaco foi avaliada através das atividades presentes no coração e no fígado em imagens de 60 pacientes, utilizando a técnica de contagem em imagens conjugadas. Cinco médicos nucleares analisaram 24 imagens por meio da interpretação visual da perfusão do miocárdio na fase de estresse e foi verificado o grau de concordância entre eles. Os resultados do controle de qualidade mostraram que todas as amostras de eluatos estavam em concordância com os fabricantes quanto a pureza radionuclídica e pH. Em relação à pureza química, 10% das amostras dos serviços B e C apresentaram teores de Al+3 acima de 10ppm. Na PRQ, observou-se que, utilizando a câmara de cintilação, apenas 22% do total das amostras seriam descartadas, enquanto que com o calibrador de dose seriam 78%, indicando que a câmara de cintilação é mais sensível na análise da fita cromatográfica. Para o radiofármaco marcado, os serviços B e C apresentaram, respectivamente, uma e três amostras com percentual de PRQ abaixo de 90%. No entanto, o serviço C apresentou a menor média em relação a proporção fígado/coração, demonstrando que este fator não depende da eficiência de marcação. Na avaliação das imagens quanto ao grau de defeito perfusional, observou-se um menor número de concordância (20%) entre os avaliadores no grupo de exames com problemas de marcação do radiofármaco. Esses resultados sugerem que problemas na marcação do radiofármaco podem interferir na interpretação da imagem, enfatizando a necessidade de cumprir com a exigência da ANVISA em relação a realização dos controles de qualidade nos radiofármacos antes da administração ao paciente.

Este trabalho teve por objetivo propor uma racionalização da síntese, da análise e da purificação do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO para uso diagnóstico e terapêutico em tumores neuroendócrinos, bem como avaliar a biodistribuição deste radiofármaco em modelo animal. A reação de complexação para a síntese do radiofármaco foi realizada em tampão acetato de amônio 0,5 M, pH 7,0, à 95 oC, com tempo de reação de 30 minutos. Obteve-se pureza radioquímica > 95%, de acordo com a análise por cromatografia em ITLC-SG, utilizando-se como fase móvel, tampão citrato de sódio 0,1 M, pH 5,0. A razão molar-limite 177Lu3+: DOTATATO utilizada na síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO foi dependente da atividade específica e da procedência do radioisótopo, sendo de 1:3,5 (370 MBq : 2,6 mg) para radioisótopo oriundo do Oak Ridge National Laboratory/EUA e de 1:16 (370 MBq : 11,8 mg) para o radioisótopo oriundo do Nuclear Analytical and Medical Services/Holanda, considerando para ambos, um decaimento de cinco dias a partir da data de produção do radioisótopo. Esta racionalização da síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO permite uma grande economia nos custos de produção. O estudo químico da síntese do radiofármaco também evidenciou a interferência do 177Hf4+, produto de decaimento do 177Lu3+, como competidor do 177Lu3+ pelo DOTATATO. A preparação radiofarmacêutica mostrou-se estável durante 24 horas, a uma atividade de 2775 MBq, com adição de 0,6 mg/mL de ácido gentísico, mantida em gelo seco. Nos estudos de biodistribuição em camundongos Swiss e Nude demonstrou-se a especificidade do radiofármaco pelos tecidos receptor-específicos para somatostatina como pâncreas, estômago, pulmão, adrenais, rins e de células tumorais AR42J. Palavras chave: síntese, complexação, radiofármaco, 177Lu-DOTATATO, tumor neuroendócrino. / The aim of this work was to propose rationalization in the synthesis, analysis and purification of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO for diagnostic and therapeutic use in neuroendocrine tumors, as well as for evaluating biodistribution of this radiopharmaceutical in an animal-model. The complexation reaction for the synthesis of radiopharmaceutical was carried out in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC. The radiochemical purity was > 95%, according to analysis by chromatography in ITLC-SG, when using the sodium citrate buffer 0,1 M, pH 5.0, as the mobile phase. The molar-limit ratio 177Lu3+: DOTATATO, used in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO, in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC, was dependent on the specific activity and origin of the radioisotope, this being 1:3.5 (370 MBq : 2.6 mg) for that from the Oak Ridge National Laboratory/U.S.A., and 1:16 (370 MBq : 11.8 mg) for that from Nuclear Analytical and Medical Services/Holland, when considering a decay of five days from the production date of the radioisotopes. This rationalization in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO permits high economy in production costs. Chemical studies on the synthesis of radiopharmaceuticals also placed in evidence the interference of 177Hf4+, the decay product of 177Lu3+, as the 177Lu3+ competitor for DOTATATO. Radiopharmaceutical preparation proved to be stable during 24 hours, at an activity rate of 2775 MBq, with the addition of 0.6 mg/mL of gentisic acid and when kept in dry ice. In biodistribution studies on Swiss and Nude mice, the specificity of radiopharmaceutical for somatostatin positive-receptor tissues, such as the pancreas, stomach, lungs, adrenal glands, kidneys and the cell tumor AR42J was demonstrated. Key words: synthesis, complexation, radiopharmaceutical, 177Lu3+-DOTATATO, neuroendocrine tumors

Este trabalho teve por objetivo propor uma racionalização da síntese, da análise e da purificação do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO para uso diagnóstico e terapêutico em tumores neuroendócrinos, bem como avaliar a biodistribuição deste radiofármaco em modelo animal. A reação de complexação para a síntese do radiofármaco foi realizada em tampão acetato de amônio 0,5 M, pH 7,0, à 95 oC, com tempo de reação de 30 minutos. Obteve-se pureza radioquímica > 95%, de acordo com a análise por cromatografia em ITLC-SG, utilizando-se como fase móvel, tampão citrato de sódio 0,1 M, pH 5,0. A razão molar-limite 177Lu3+: DOTATATO utilizada na síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO foi dependente da atividade específica e da procedência do radioisótopo, sendo de 1:3,5 (370 MBq : 2,6 mg) para radioisótopo oriundo do Oak Ridge National Laboratory/EUA e de 1:16 (370 MBq : 11,8 mg) para o radioisótopo oriundo do Nuclear Analytical and Medical Services/Holanda, considerando para ambos, um decaimento de cinco dias a partir da data de produção do radioisótopo. Esta racionalização da síntese do radiofármaco 177Lu3+-DOTATATO permite uma grande economia nos custos de produção. O estudo químico da síntese do radiofármaco também evidenciou a interferência do 177Hf4+, produto de decaimento do 177Lu3+, como competidor do 177Lu3+ pelo DOTATATO. A preparação radiofarmacêutica mostrou-se estável durante 24 horas, a uma atividade de 2775 MBq, com adição de 0,6 mg/mL de ácido gentísico, mantida em gelo seco. Nos estudos de biodistribuição em camundongos Swiss e Nude demonstrou-se a especificidade do radiofármaco pelos tecidos receptor-específicos para somatostatina como pâncreas, estômago, pulmão, adrenais, rins e de células tumorais AR42J. Palavras chave: síntese, complexação, radiofármaco, 177Lu-DOTATATO, tumor neuroendócrino. / The aim of this work was to propose rationalization in the synthesis, analysis and purification of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO for diagnostic and therapeutic use in neuroendocrine tumors, as well as for evaluating biodistribution of this radiopharmaceutical in an animal-model. The complexation reaction for the synthesis of radiopharmaceutical was carried out in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC. The radiochemical purity was > 95%, according to analysis by chromatography in ITLC-SG, when using the sodium citrate buffer 0,1 M, pH 5.0, as the mobile phase. The molar-limit ratio 177Lu3+: DOTATATO, used in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO, in ammonium acetate buffer 0.5 M, pH 7.0, for 30 minutes at 95 oC, was dependent on the specific activity and origin of the radioisotope, this being 1:3.5 (370 MBq : 2.6 mg) for that from the Oak Ridge National Laboratory/U.S.A., and 1:16 (370 MBq : 11.8 mg) for that from Nuclear Analytical and Medical Services/Holland, when considering a decay of five days from the production date of the radioisotopes. This rationalization in the synthesis of radiopharmaceutical 177Lu3+-DOTATATO permits high economy in production costs. Chemical studies on the synthesis of radiopharmaceuticals also placed in evidence the interference of 177Hf4+, the decay product of 177Lu3+, as the 177Lu3+ competitor for DOTATATO. Radiopharmaceutical preparation proved to be stable during 24 hours, at an activity rate of 2775 MBq, with the addition of 0.6 mg/mL of gentisic acid and when kept in dry ice. In biodistribution studies on Swiss and Nude mice, the specificity of radiopharmaceutical for somatostatin positive-receptor tissues, such as the pancreas, stomach, lungs, adrenal glands, kidneys and the cell tumor AR42J was demonstrated. Key words: synthesis, complexation, radiopharmaceutical, 177Lu3+-DOTATATO, neuroendocrine tumors

Antes de se iniciar os estudos clínicos de uma nova droga, é necessário realizar uma bateria de testes de segurança, para avaliar o risco humano. Os radiofármacos como qualquer outra nova droga, devem ser testados levando em conta sua especificidade, duração de tratamento e principalmente a toxicidade de ambas as partes, a molécula não marcada e a sua radioatividade em si, além das impurezas provindas da radiólise. Órgãos regulatórios como o Food and Drug Administration-EUA (FDA) e a Agência de Medicina Européia (EMEA), estabelecem guias para a regulamentação de produção e pesquisas de radiofármacos, No Brasil a produção de radiofármacos não era regulamentada até o final de 2009, quando foram estabelecidas pela Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA) as resoluções nº 63, que visa as Boas Práticas de Fabricação de Radiofármacos e a nº 64 que visa o registro do radiofámaco. Para a obtenção do registro de radiofármacos são necessárias a comprovação da qualidade, segurança, eficácia e especificidade do medicamento. Para a segurança dos radiofármacos devem ser apresentados estudos de toxicidade aguda, subaguda e crônica como também a toxicidade reprodutiva, mutagênica e carcinogênica. Hoje o IPEN-CNEN/SP produz um dos radiofámacos mais importantes da medicina nuclear, o 18F-FDG, que é utilizado em muitas aplicações clínicas, em particular no diagnóstico e estadiamento de tumores. O objetivo deste trabalho foi avaliar a toxicidade sistêmica (aguda/subaguda) do radiofármaco 18F- FDG em um sistema teste in vivo, conforme preconiza a RDC nº 64, que servirá de modelo para os protocolos de toxicidade dos radiofármacos produzidos no IPEN. Os ensaios realizados foram: os testes de toxicidade aguda e de toxicidade subaguda, estudos de biodistribuição do 18F-FDG, ensaio cometa e toxicidade reprodutiva. Na toxicidade aguda, ratos sadios foram injetados com 18F- FDG e observados durante 14 dias enquanto na toxicidade subaguda os animais foram observados durante 28 dias. Os resultados não mostraram nenhuma evidência de toxicidade na exposição ao 18F-FDG na toxicidade aguda e na subaguda. A biodistribuição demonstrou resultados semelhantes aos da literatura, onde a bexiga é o órgão que mais recebe radiação. O ensaio cometa mostrou que a radiação do radiofármaco não foi significativa para gerar danos no DNA. Na toxicidade reprodutiva, casais de ratos expostos ao 18F-FDG geraram filhotes completamente normais e saudáveis. Por fim, o 18F-FDG não evidenciou nenhuma toxicidade. / Before starting clinical trials of a new drug, it is necessary to perform a battery of safety tests for assessing human risk. Radiopharmaceuticals like any new drug must be tested taking into account its specificity, duration of treatment and especially the toxicity of both parties, the unlabeled molecule and its radionuclide, apart from impurities emanating from radiolysis. Regulatory agencies like the Food and Drug Administration - USA (FDA) and the European Medicine Agency (EMEA), establish guidelines for the regulation of production and research of radiopharmaceuticals. In Brazil the production of radiopharmaceuticals was not regulated until the end of 2009, when were established by the National Agency for Sanitary Surveillance (ANVISA) resolutions No. 63, which refers to the Good Manufacturing Practices of Radiopharmaceuticals and No. 64 which seeks the registration of record radiopharmaceuticals. To obtain registration of radiopharmaceuticals are necessary to prove the quality, safety, efficacy and specificity of the drug . For the safety of radiopharmaceuticals must be presented studies of acute toxicity, subacute and chronic toxicity as well as reproductive, mutagenic and carcinogenic. Nowadays IPEN-CNEN/SP produces one of the most important radiopharmaceutical of nuclear medicine, the 18F-FDG, which is used in many clinical applications, particularly in the diagnosis and staging of tumors. The objective of this study was to evaluate the systemic toxicity (acute/ subacute) radiopharmaceutical 18F-FDG in an in vivo test system, as recommended by the RDC No. 64, which will serve as a model for protocols toxicity of radiopharmaceuticals produced at IPEN . The following tests were performed: tests of acute and subacute toxicity, biodistribution studies of 18F-FDG, comet assay and reproductive toxicity. In acute toxicity, healthy rats were injected with 18F-FDG and observed for 14 days while in subacute toxicity animals were observed for 28 days. The results showed no evidence of toxicity at exposure 18F-FDG in acute and subacute toxicity. The biodistribution showed similar results to the literature, where the bladder is the organ that receives the most radiation. The comet assay showed that the radiation from the radiopharmaceutical was not significant to generate DNA damage. In reproductive toxicity in coupled rats exposed to 18F-FDG generated completely normal and healthy puppies. Finally, the 18F-FDG did not show any toxicity.

Os radiofármacos são fármacos que possuem em sua composição um radionuclídeo e são utilizados para diagnóstico e tratamento de diversas doenças na medicina nuclear. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da temperatura e umidade na estabilidade de alguns reagentes liofilizados ALBUMINA-TEC, CIS-TEC, DEX-500-TEC, DEX-70-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, FITA-TEC, PUL-TEC, MIBI-TEC, MDP-TEC, PIRO-TEC, e TIN-TEC. Foi utilizada uma câmara climática para expor amostras destes produtos a uma temperatura de 40 °C e 75% de umidade relativa por 48 horas, para simular uma condição de transporte. Foram avaliadas duas situações: após um determinado tempo de armazenamento em temperatura de 2 - 8 °C, amostras de RL foram expostas por 48 horas em 40 °C e 75% UR e em seguida foram analisadas enquanto outras amostras foram colocadas por 48 horas em 40 °C e 75% UR, mantidas em temperatura de 2 - 8 °C até a validade do radiofármaco e analisadas quanto à pureza radioquímica e biodistribuição. Os radiofármacos ALBUMINA-TEC, DEX-70-TEC, DEX-500-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, PIRO-TEC, MDP-TEC, MIBI-TEC e MDP-TEC apresentaram resultados de % PRq e biodistribuição que atenderam às especificações, enquanto que CIS-TEC, PUL-TEC e TIN-TEC apresentaram alguns valores de % PRq menor que o especificado. TIN-TEC apresentou % PRq de 84% em um de três lotes, enquanto PUL-TEC apresentou % PRq de 88% em um de quatro lotes analisados; CIS-TEC é um RL que ainda precisa melhor analisado pois os resultados fora do especificado no controle radioquímico e biológico foram obtidos com um produto fora da validade especificada. Estes resultados indicaram que a pureza radioquímica pode ser afetada pela condição de estudo, o que não foi confirmado pelo controle biológico. / Radiopharmaceuticals are pharmaceuticals that have in their composition a radionuclide and are used for diagnosis and treatment of various diseases in nuclear medicine. The main objective of this study was to evaluate the effect of temperature and humidity on the stability of some lyophilized reagents: ALBUMINA-TEC, CIS-TEC, DEX-500-TEC, DEX-70-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, FITA-TEC, PUL-TEC, MIBI-TEC, MDP-TEC, PIRO-TEC and TIN-TEC. A climatic chamber was used for exposing some samples of these products to a temperature of 40 °C and 75% RH for 48 hours to simulate a transport condition. Two situations were evaluated: after a certain storage time at 2 - 8 °C, LR samples were exposed for 48 hours at 40 °C and 75% RH and analyzed while other samples were placed for 48 hours at 40 °C and 75% RH, kept at 2 - 8 °C until the expiration time of each radiopharmaceutical and analyzed for radiochemical purity and biodistribution. ALBUMINA-TEC, DEX-70-TEC, DEX-500-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, PIRO-TEC, MDP-TEC, MIBI-TEC and MDP-TEC presented results of % RCP and biodistribution that met the specifications while CIS-TEC PUL-TEC and TIN-TEC presented some % RCP lower than specified. TIN-TEC presented % RCP of 84% in one of three lots while PUL-TEC presented % RCP of 88% in a one of four batches analyzed; CIS-TEC is a LR that further need to be analyzed because probable the out of specification results of radiochemical and biological controls were obtained with a product outside of the validity date. These results indicated that radiochemical purity, can be affected by study condition, which has not been confirmed by biological control.

Os radiofármacos são substâncias que possuem radioisótopos em sua composição. Cerca de 95% dos procedimentos realizados em medicina nuclear faz o uso de radiofármacos com finalidade diagnóstica, sendo os reagentes liofilizados (RL) marcados com Tecnécio-99 meta estável (99mTc), obtido a partir de um gerador de 99Mo/99mTc, os mais utilizados. O controle de qualidade representa o conjunto de ensaios a serem realizados para certificar que o produto é adequado ao propósito. Um aspecto importante a ser avaliado nos radiofármacos de 99mTc é a pureza radioquímica (% PRq) para quantificação de pertecnetato livre (99mTcO4 -) e tecnécio coloidal (99mTcO2), principalmente por cromatografia em papel (CP), em camada delgada (CCD) e cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). O objetivo deste trabalho foi realizar a comparação das metodologias de controle radioquímico de RL marcados com 99mTc descritas nas farmacopéias americana (FA) e europeia (FE) com aquelas utilizadas no IPEN. O eluído de 99mTcO4 e os RL: DISIDA, DMSA, DTPA, EC, ECD, GHA, MIBI, MDP, PIRO, SAH e Sn Coloidal foram provenientes do IPEN-CNEN/SP. Foram utilizados os suportes cromatográficos TLC-celulose, TLC-SG,TLC-SG fase reversa, HPTLC-celulose e HPTLC-SG da Merck e ITLC-SG da Pall Corporation, W1MM, W3MM, W17M e W31ET da Whatman. A contagem da radioatividade foi feita em contador gama Perkin Elmer modelo Cobra D-5002. A marcação dos RL foi feita de modo a obter concentração radioativa de 55,0 MBq mL-1 (1,5 mCi mL-1). Foram determinadas as %99mTcO4 -, %99mTcO2 e % PRq até 4 horas de marcação. Dos 11 RL, apenas EC e GHA não possuem método de controle radioquímico na FA e FE. Na FA e/ou na FE, os métodos para DTPA, MDP, PIRO, SAH e Sn Coloidal utilizam ITLC-SG; no IPEN, este suporte cromatográfico é utilizado em DISIDA, EC, ECD, GHA, PIRO, MIBI e SAH. Devido à descontinuidade na fabricação de ITLC-SG (recomendado em 40, 70 e 41% das metodologias da FA, FE e IPEN, respectivamente), foi necessário buscar alternativas para sua substituição no controle radioquímico, avaliando-se suportes do tipo HPTLC (celulose e sílica gel) e Whatman (com diferenças de espessura e fluxo de corrida). Os resultados de % PRq determinada pelos métodos descritos na FA, FE, IPEN e os demais sistemas avaliados que apresentaram coeficiente de variação menor que 5% não foi considerada diferença significativa entre os métodos. Os sistemas cromatográficos avaliados neste trabalho podem ser utilizados em substituição ao suporte ITLC-SG. O HPTLC-celulose foi o suporte que apresentou tempo de análise, perfil cromatográfico e custo semelhante ao ITLC-SG, tornando-o um dos suportes mais indicados a ser utilizado como alternativa ao ITLC-SG nos 11 RL avaliados. / Radiopharmaceuticals are substances that have radioisotopes in their composition. About 95% of the procedures performed in nuclear medicine use radiopharmaceuticals with diagnostic pruposes, and the Lyophilized Reagents (LR) labeled with Technetium-99m (99mTc), obtained from 99Mo/99mTc generator, are the most one used. Quality Control represents the set of assays to be performed to assure that the product is adequate to its purpose. An important feature to be evaluated in 99mTc radiopharmaceuticals is the radiochemical purity (% RqP) to quantify free pertechnetate (99mTcO4 -) and technetium colloidal (99mTcO2) mainly by paper chromatography (PC), thin layer (TLC) and High Performance Liquid Chromatography (HPLC). The objective of this work was to perfom the comparison among the radiochemical control methodologies of LR labeled with 99mTc, described in the United States Pharmacopoeia (USP) and European Pharmacopoeia (EP) and those used by IPEN. 99mTcO4 - eluate and DISIDA, DMSA, DTPA, EC, ECD, GHA, MIBI, MDP, PIRO, SAH and Sn Coloidal LR were provided by IPEN-CNEN/SP. TLC-celulose, TLC-SG,TLC-SG reverse phase, HPTLC-celulose, HPTLC-SG (Merck) and ITLC-SG (Pall Corporation), W1MM, W3MM, W17M e W31ET (Whatman) chromatographic plates were used. The measurement of the radioactivity was done in a Perkin Elmer Cobra D-5002 gamma counter. LR were labeled to obtain 55,0 MBq mL-1 (1,5 mCi mL-1) of final radioactive concentration. The %99mTcO4 -, %99mTcO2 and % RqP were determined up to 4 hour labeling. From 11 LR, only EC and GHA have no radiochemical control methods in USP and EP. In USP and/or EP, DTPA, MDP, PIRO, SAH and Sn Coloidal methods use ITLC-SG; IPEN uses this chromatography plate in DISIDA, EC, ECD, GHA, PIRO, MIBI and SAH. As ITLC-SG had been out of production (recommended in 40, 70 and 41% of the USP, EP and IPEN methodologies, respectively), it was necessary to search alternatives to replace ITLC-SG plate in the radiochemical control, comparing with HPTLC (cellulose and silica gel) and Whatman plates (with thickness and flow rate differences). The % RqP results determined by the methods described in USP, EP, IPEN and the methods evaluated in this work presented coefficient of variation less than 5%, and it was not considered a significant value among the methods. Some chromatographic systems evaluated in this work can be used as replacement to the ITLC-SG plate. HPTLC-cellulose was the plate that presented time of analysis chromatography profile and cost similar to ITLC-SG, making it one of the most indicated to replace ITLC-SG, in 11 LR evaluated.

Os radiofármacos são fármacos que possuem em sua composição um radionuclídeo e são utilizados para diagnóstico e tratamento de diversas doenças na medicina nuclear. O principal objetivo desse trabalho foi avaliar o efeito da temperatura e umidade na estabilidade de alguns reagentes liofilizados ALBUMINA-TEC, CIS-TEC, DEX-500-TEC, DEX-70-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, FITA-TEC, PUL-TEC, MIBI-TEC, MDP-TEC, PIRO-TEC, e TIN-TEC. Foi utilizada uma câmara climática para expor amostras destes produtos a uma temperatura de 40 °C e 75% de umidade relativa por 48 horas, para simular uma condição de transporte. Foram avaliadas duas situações: após um determinado tempo de armazenamento em temperatura de 2 - 8 °C, amostras de RL foram expostas por 48 horas em 40 °C e 75% UR e em seguida foram analisadas enquanto outras amostras foram colocadas por 48 horas em 40 °C e 75% UR, mantidas em temperatura de 2 - 8 °C até a validade do radiofármaco e analisadas quanto à pureza radioquímica e biodistribuição. Os radiofármacos ALBUMINA-TEC, DEX-70-TEC, DEX-500-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, PIRO-TEC, MDP-TEC, MIBI-TEC e MDP-TEC apresentaram resultados de % PRq e biodistribuição que atenderam às especificações, enquanto que CIS-TEC, PUL-TEC e TIN-TEC apresentaram alguns valores de % PRq menor que o especificado. TIN-TEC apresentou % PRq de 84% em um de três lotes, enquanto PUL-TEC apresentou % PRq de 88% em um de quatro lotes analisados; CIS-TEC é um RL que ainda precisa melhor analisado pois os resultados fora do especificado no controle radioquímico e biológico foram obtidos com um produto fora da validade especificada. Estes resultados indicaram que a pureza radioquímica pode ser afetada pela condição de estudo, o que não foi confirmado pelo controle biológico. / Radiopharmaceuticals are pharmaceuticals that have in their composition a radionuclide and are used for diagnosis and treatment of various diseases in nuclear medicine. The main objective of this study was to evaluate the effect of temperature and humidity on the stability of some lyophilized reagents: ALBUMINA-TEC, CIS-TEC, DEX-500-TEC, DEX-70-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, FITA-TEC, PUL-TEC, MIBI-TEC, MDP-TEC, PIRO-TEC and TIN-TEC. A climatic chamber was used for exposing some samples of these products to a temperature of 40 °C and 75% RH for 48 hours to simulate a transport condition. Two situations were evaluated: after a certain storage time at 2 - 8 °C, LR samples were exposed for 48 hours at 40 °C and 75% RH and analyzed while other samples were placed for 48 hours at 40 °C and 75% RH, kept at 2 - 8 °C until the expiration time of each radiopharmaceutical and analyzed for radiochemical purity and biodistribution. ALBUMINA-TEC, DEX-70-TEC, DEX-500-TEC, DISI-TEC, DMSA-TEC, DTPA-TEC, PIRO-TEC, MDP-TEC, MIBI-TEC and MDP-TEC presented results of % RCP and biodistribution that met the specifications while CIS-TEC PUL-TEC and TIN-TEC presented some % RCP lower than specified. TIN-TEC presented % RCP of 84% in one of three lots while PUL-TEC presented % RCP of 88% in a one of four batches analyzed; CIS-TEC is a LR that further need to be analyzed because probable the out of specification results of radiochemical and biological controls were obtained with a product outside of the validity date. These results indicated that radiochemical purity, can be affected by study condition, which has not been confirmed by biological control.

Gliomas malignos são tumores cerebrais primários, resistentes a vários tratamentos, como quimioterapia, radioterapia, indução de apoptose e cirurgia. Uma alternativa para o tratamento dos gliomas malignos é a terapia radionuclídea. Essa técnica utiliza moléculas radiomarcadas que se ligam seletivamente às células tumorais e nelas depositam dose citotóxica de radiação, provocando a morte das células doentes. A maioria dos protocolos de terapia radionuclídea para tumores cerebrais malignos envolve a administração de peptídeos marcados com radioisótopos emissores -. A substância P (SP) é um neuropeptídeo de 11 aminoácidos, da família das taquicininas, caracterizada pela sequência C-terminal Phe-X-Gly-Leu-Met-NH2. A SP radiomarcada com diferentes radioisótopos, inclusive Lutécio-177, tem sido descrita e proposta para tratamento in vivo de tumores. A SP é o ligante mais importante dos receptores de neuroquinina tipo 1, superexpressos em gliomas malignos. O objetivo deste trabalho foi estudar as condições de marcação de SP-DOTA com 177Lu, a estabilidade do composto marcado e suas propriedades in vitro e in vivo, a fim de desenvolver um protocolo de produção e avaliar o potencial do radiofármaco para terapia de gliomas. As condições de marcação foram otimizadas variando-se temperatura, tempo de reação, atividade de cloreto de lutécio-177 e massa de SP-DOTA e analisou-se a pureza radioquímica das preparações por meio de técnicas cromatográficas. A estabilidade da SP-DOTA-177Lu radiomarcada com baixa atividade de 177Lu foi avaliada por diferentes tempos a 2 - 8 ºC ou incubadas em soro humano a 37 ºC. A estabilidade das marcações com alta atividade de 177Lu também foi analisada na presença de ácido gentísico (6 mg/mL) adicionado após a reação de marcação. As condições de marcação em baixa e alta atividade foram submetidas à avaliação quanto à possibilidade de oxidação do resíduo de metionina, adicionando o aminoácido D-Lmetionina (6 mg/mL) ao meio de reação e posterior avaliação cromatográfica. Estudo in vitro com SP-DOTA-177Lu, radiomarcada na ausência e presença de metionina, utilizando células de glioma humano M059J e U-87 MG, verificou o efeito da oxidação da metionina sobre a ligação às células. Estudos de biodistribuição foram realizados em camundongos Nude com modelo tumoral e em camundongos Balb-c sadios. Obteve-se a maior pureza radioquímica (> 95 %) associada à maior atividade específica de SP-DOTA-177Lu quando o tempo de reação foi de 30 minutos, temperatura de 90 ºC, massa de SP-DOTA de 10 g e a atividade do 177Lu de 185 MBq. A SP radiomarcada em condições otimizadas manteve-se estável a 2 - 8 ºC e em soro humano por 4 horas. Os estudos in vitro demonstraram ligação aos receptores celulares e essa ligação mostrou-se reduzida quando o peptídeo apresenta-se em sua forma oxidada. A adição de metionina combinada com ácido gentísico preveniu a oxidação peptídica e assegurou-se a estabilidade do composto marcado, principalmente com alta atividade de 177Lu, quando se utilizou maior massa de SP-DOTA. Nos estudos in vivo, os resultados mostraram uma cinética de biodistribuição favorável do composto e capacidade de ligação às células tumorais. SP-DOTA-177Lu pode ser uma ferramenta útil para estudos in vivo devido à facilidade de preparação, alta estabilidade e afinidade pelas células tumorais. / Malignant gliomas are primary brain tumors, resistant to various treatments, as chemotherapy, radiotherapy, induction of apoptosis and surgery. An alternative for the treatment of malignant gliomas is the radionuclide therapy. This technique apply radiolabeled molecules that selectively bind to tumor cells producing cytotoxic effect by dose irradiation, and resulting in death of tumor cells. Most protocols for radionuclide therapy of malignant brain tumors involve the administration of peptides labeled with - emitting radioisotopes. The Substance P (SP) is an 11- amino acid neuropeptide, characterized by the C-terminal sequence Phe-X-Gly-Leu-Met-NH2. The use of SP labeled with different radionuclides including 177Lu, have been proposed for in vivo treatment of tumors. SP is the most important target of neurokinin 1 receptors, overexpressed in malignant gliomas. The objective of this work was to study conditions of radiolabeling DOTA-SP with 177Lu, the stability of labeled compound and in vivo and in vitro, to develop a protocol production and evaluate the potential of the radiopharmaceutical in the therapy of gliomas. The labeling conditions were optimized varying the temperature, reaction time, activity of lutetium-177 chloride and mass of DOTA-SP. The radiochemical purity of preparations were analyzed by chromatographic techniques. The stability of 177Lu -DOTA- SP radiolabeled with low activity of 177Lu was evaluated for different time at 2-8 °C or incubated in human serum. The stability of the labeled with high activity of 177Lu was also analyzed in the presence of gentisic acid (6 mg / mL) added after the labeling reaction. The labeled conditions in low and high activity were subjected to evaluation for the ability to cause oxidation of methionine residue, adding the D-L- methionine amino acid to the reaction medium (6 mg / mL) and subsequent chromatographic evaluation. In vitro study with 177Lu-DOTA-SP, radiolabeled in the absence and presence of methionine, using human M059J U-87 MG glioma cells and, showed the effect of oxidation of methionine on the cells binding. Biodistribution studies were performed in Nude mice with tumor model and Balb-c mice. Highest radiochemical purity (> 95%) associated with the highest specific activity of 177Lu-DOTA-SP when the reaction time was 30 minutes, temperature of 90 °C, 10 g of DOTA-SP, and the activity of 177Lu of 185 MBq. The radiolabeled SP in optimized conditions remained stable at 2-8 °C and in human serum for 4 hours. In vitro studies showed the binding to cell receptors and this binding was reduced when the peptide was presented in its oxidized form. The addition of methionine combined with gentisic acid prevented the oxidation of peptide and increased the stability of the labeled compound, particularly with high activity of 177Lu, when using larger mass of DOTA-SP. In vivo studies results showed a favorable biodistribution kinetics of the compound and ability to bind to tumor cells. 177Lu-DOTA-SP can be a useful tool for in vivo studies due to ease preparation, high stability and affinity for tumor cells.

O radiofármaco FLT-18F é um análogo do nucleosídeo timidina e um promissor marcador da proliferação tumoral para imagens em PET. A síntese deste radiofármaco não é simples e, muitas vezes, apresenta baixos rendimentos. Este radiofármaco já vem sendo estudado há alguns anos, porém, não há produção, nem estudos clínicos, no Brasil. O estudo do processo produtivo e a sua adequação às diretrizes de Boas Práticas de Fabricação (ANVISA) são de extrema importância. Este trabalho teve como objetivo estudar a síntese deste radiofármaco, avaliar os métodos de controle de qualidade que serão utilizados na rotina de produção futura, realizar estudos de citotoxicidade, estudos de biodistribuição e imagens PET em animais, contribuindo para o desenvolvimento e elaboração do protocolo de validação de processo e estabelecimento das metodologias analíticas a serem utilizadas durante a rotina de produção. Inicialmente, foi estudada a síntese e produção do produto FLT-18F, com a avaliação de três temperaturas diferentes de marcação, a m de vericar o comportamento do rendimento radioquímico e a estabilidade do produto nal. Os estudos de metodologia analítica compreenderam as análises de identicação radionuclídica, determinação dos pers cromatográcos, pureza radioquímica, solventes residuais e pH. Estudos in vitro do FLT- 18F de internalização e citotoxicidade também foram feitos. Nos estudos in vivo, avaliou-se a farmacocinética, biodistribuição em animais sadios e em animais com modelos tumorais, além de imagens PET/CT de animais com melanoma. O produto nal apresentou alta pureza radioquímica e mostrou-se estável por até 10 horas após a síntese, porém obteve-se um rendimento radioquímico relativamente baixo, conforme descrito na literatura. As metodologias analíticas testadas mostraram-se adequadas para o uso no controle de qualidade do FLT-18F. Nos estudos in vitro o FLT-18F apresentou uma signicativa porcentagem de ligação às células tumorais e a molécula não radiomarcada não foi considerada tóxica para estas células estudadas. A biodistribuição e as imagens apresentaram resultados compatíveis com o esperado. As contribuições para a validação de processo foram satisfatórias e auxiliarão na validação futura do processo produtivo do radiofármaco em estudo. / Radiopharmaceutical 18F-FLT is a thymidine nucleoside analogue and a promising tumor proliferation marker for PET images. The synthesis of this radiopharmaceutical is not simple, and often has low yields. This radiopharmaceutical has already been studied for some years; however, there is no production, nor are there clinical studies in Brazil. The study of the production process and its compliance with the guidelines of Good Manufacturing Practices (ANVISA) are of extreme importance. This study aimed to investigate the synthesis of this radiopharmaceutical, evaluate methods of quality control that will be used in future production routines, perform cytotoxicity studies, biodistribution studies and PET imaging in animals, thereby contributing to the development and elaboration of the process validation protocol and to the establishment of analytical methods to be used during production routines. Initially, we studied the synthesis and production of 18F-FLT, with the evaluation of three dierent temperatures of radiolabeling to check the behavior of the radiochemical yield and stability of the nal product. Studies of analytical methodology comprised the analysis of radionuclide identication, determination of chromatographic proles, radiochemical purity, residual solvents, and pH. In vitro studies of internalization and cytotoxicity were also carried out. In in vivo studies, we evaluated the pharmacokinetics, biodistribution in healthy animals and in animals with tumor models, in addition to PET/CT images in animals with melanomas. The nal product had high radiochemical purity and was stable for up to 10 hours after the synthesis, but got a relatively low radiochemical yield, as described in the literature. The tested analytical methods proved suitable for use in the quality control of 18F-FLT. In in vitro studies, 18F-FLT showed a signicant percentage of binding to tumor cells, and the nonradiolabeled molecule was not considered toxic for these studied cells. The biodistribution and images showed results that were consistent with expectations. Contributions to the validation process were satisfactory, and will assist in the future validation of the production process of the radiotracer under study.

O radiofármaco FLT-18F é um análogo do nucleosídeo timidina e um promissor marcador da proliferação tumoral para imagens em PET. A síntese deste radiofármaco não é simples e, muitas vezes, apresenta baixos rendimentos. Este radiofármaco já vem sendo estudado há alguns anos, porém, não há produção, nem estudos clínicos, no Brasil. O estudo do processo produtivo e a sua adequação às diretrizes de Boas Práticas de Fabricação (ANVISA) são de extrema importância. Este trabalho teve como objetivo estudar a síntese deste radiofármaco, avaliar os métodos de controle de qualidade que serão utilizados na rotina de produção futura, realizar estudos de citotoxicidade, estudos de biodistribuição e imagens PET em animais, contribuindo para o desenvolvimento e elaboração do protocolo de validação de processo e estabelecimento das metodologias analíticas a serem utilizadas durante a rotina de produção. Inicialmente, foi estudada a síntese e produção do produto FLT-18F, com a avaliação de três temperaturas diferentes de marcação, a m de vericar o comportamento do rendimento radioquímico e a estabilidade do produto nal. Os estudos de metodologia analítica compreenderam as análises de identicação radionuclídica, determinação dos pers cromatográcos, pureza radioquímica, solventes residuais e pH. Estudos in vitro do FLT- 18F de internalização e citotoxicidade também foram feitos. Nos estudos in vivo, avaliou-se a farmacocinética, biodistribuição em animais sadios e em animais com modelos tumorais, além de imagens PET/CT de animais com melanoma. O produto nal apresentou alta pureza radioquímica e mostrou-se estável por até 10 horas após a síntese, porém obteve-se um rendimento radioquímico relativamente baixo, conforme descrito na literatura. As metodologias analíticas testadas mostraram-se adequadas para o uso no controle de qualidade do FLT-18F. Nos estudos in vitro o FLT-18F apresentou uma signicativa porcentagem de ligação às células tumorais e a molécula não radiomarcada não foi considerada tóxica para estas células estudadas. A biodistribuição e as imagens apresentaram resultados compatíveis com o esperado. As contribuições para a validação de processo foram satisfatórias e auxiliarão na validação futura do processo produtivo do radiofármaco em estudo. / Radiopharmaceutical 18F-FLT is a thymidine nucleoside analogue and a promising tumor proliferation marker for PET images. The synthesis of this radiopharmaceutical is not simple, and often has low yields. This radiopharmaceutical has already been studied for some years; however, there is no production, nor are there clinical studies in Brazil. The study of the production process and its compliance with the guidelines of Good Manufacturing Practices (ANVISA) are of extreme importance. This study aimed to investigate the synthesis of this radiopharmaceutical, evaluate methods of quality control that will be used in future production routines, perform cytotoxicity studies, biodistribution studies and PET imaging in animals, thereby contributing to the development and elaboration of the process validation protocol and to the establishment of analytical methods to be used during production routines. Initially, we studied the synthesis and production of 18F-FLT, with the evaluation of three dierent temperatures of radiolabeling to check the behavior of the radiochemical yield and stability of the nal product. Studies of analytical methodology comprised the analysis of radionuclide identication, determination of chromatographic proles, radiochemical purity, residual solvents, and pH. In vitro studies of internalization and cytotoxicity were also carried out. In in vivo studies, we evaluated the pharmacokinetics, biodistribution in healthy animals and in animals with tumor models, in addition to PET/CT images in animals with melanomas. The nal product had high radiochemical purity and was stable for up to 10 hours after the synthesis, but got a relatively low radiochemical yield, as described in the literature. The tested analytical methods proved suitable for use in the quality control of 18F-FLT. In in vitro studies, 18F-FLT showed a signicant percentage of binding to tumor cells, and the nonradiolabeled molecule was not considered toxic for these studied cells. The biodistribution and images showed results that were consistent with expectations. Contributions to the validation process were satisfactory, and will assist in the future validation of the production process of the radiotracer under study.