Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, 2007. / Submitted by Fabrícia da Silva Costa Feitosa (fabriciascf@gmail.com) on 2010-01-14T20:26:08Z No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Approved for entry into archive by Carolina Campos(carolinacamposmaia@gmail.com) on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT) No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) / Made available in DSpace on 2010-01-19T19:16:11Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007_ThiagoAntoniodeSouzaNSilva.pdf: 338092 bytes, checksum: 8bebea45e3f4500b30877f51ec2c619a (MD5) Previous issue date: 2007-07-04 / Este trabalho teve por objetivo avaliar in vitro e pela inseminação artificial (IA) em ovelhas com estro sincronizado o efeito da adição do plasma seminal (PS) na descongelação do sêmen ovino criopreservado em “pellets”. Foram realizados dois trabalhos. No primeiro foi avaliado in vitro a adição do PS. Não houve diferença significativa para o parâmetro de motilidade entre os tratamentos. Mas com relação à integridade do acrossoma a adição do PS proporcionou uma média superior de espermatozóides vivos com acrossoma integro (P<0,05) em relação ao tratamento com PBS nas 2 e 6 horas de incubação. No segundo trabalho foi realizado a avaliação in vitro e in vivo com IA em ovelhas com estro sincronizado. Os resultados in vitro confirmaram os resultados encontrados no primeiro trabalho. As IA foram realizadas em tempo fixo a partir das 50 horas após a retirada dos pessários vaginais, pelo método transcervical sem tração. Conforme o grau de penetração do aplicador de sêmen no canal cervical das ovelhas considerou-se três graus de profundidade caracterizados como: grau 1: superficial; grau 2: intermediário; grau 3: profundo. Como grupo controle 61 ovelhas foram inseminadas com sêmen fresco/diluído com solução salina fosfatada (PBS). Das 100 restantes, metade foi inseminada com sêmen congelado/descongelado com PBS e a outra metade com sêmen congelado/descongelado com PS. Após 45 dias da IA, foi realizado o diagnóstico de prenhez, por ultra-sonografia. As ovelhas inseminadas apresentaram os percentuais de prenhez de 60,0% (50/30), 74,0% (50/38) e 67,2% (61/41), respectivamente, para sêmen congelado/descongelado, com PBS, com PS e fresco/diluído. Os índices de prenhez não diferiram entre os tratamentos (PBS/PS/FRESCO) nos graus 1 e 2 de penetração. No entanto, as percentagens de prenhez diagnosticadas nas ovelhas inseminadas com sêmen fresco (95,6%) e com sêmen congelado com PS (94,1%) foram superiores as obtidas com sêmen congelado com PBS (60,0%; P<0,05) no grau 3 de penetração. Tendo como base os resultados obtidos, conclui-se que, o sêmen congelado utilizado via cervical, adicionado de PS obteve índices de gestação satisfatórios no mesmo nível que o sêmen fresco, é capaz de proporcionar os mesmos índices obtidos com o sêmen fresco e realizar um efeito protetor nos espermatozóides contra a reação precoce do acrossoma. ________________________________________________________________________________________ ABSTRACT / The aim of the present experiment was to evaluate in vitro and artificial insemination (AI) in sheep with synchronized estrus the effect of addition of seminal plasma in ram semen frozen-thawed criopreserved at pellets. Two works were made. On the first was evaluate the addition of seminal plasma in vitro. To motility there wasn’t difference among treatments. But about the acrossome intact the addition of seminal plasma had a higher average of spermatozoa alives with acrossome intact (P<0,05) than PBS treatment at 2 and 6 hours of incubation period. On the second experiment was evaluate in vitro and in vivo with artificial insemination in sheep with synchronized estrus. The results in vitro confirmed the results found in the first experiment. The AI was in fixed time, at 50 hours after removing the vaginal device, by the method trans-cervical without traction. The penetration degree of the semen applicator in the ewe cervical channel was classified as following: degree 1: superficial; degree 2: intermediate; degree 3: deep. In control group 61 ewes were inseminated with fresh semen diluted with PBS and the other 100, half ewes were inseminated with frozen-thawed semen with PBS, and the other half ewes was inseminated with frozen-thawed semen with seminal plasma. The diagnosis of pregnancy was performed 45 days after AI with ultrasound. The pregnancy rate was 60.0% (50/30), 74.0% (50/37) and 67.2% (61/41), respectively for frozen semen and thawed without seminal plasma, with seminal plasma and fresh semen. The pregnancy rate did not differ among treatments in degrees 1 and 2. However, the pregnancy in ewes inseminated with fresh semen (95.6%) and with frozen-thawed semen with seminal plasma (94.1%) were higher than with frozen-thawed semen without plasma (60.0%; P<0.05) in degree 3. Based on results, the conclusion is, frozen semen additioned of seminal plasma used at cervical way had satisfactory pregnancy rates similar that fresh semen and had a protector effect on spermatozoa against the premature acrossome reaction.

Made available in DSpace on 2016-12-08T16:24:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PGCA13MA112.pdf: 807586 bytes, checksum: b293744892841538c2ea9e0a5ae8325a (MD5) Previous issue date: 2013-07-19 / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / The in vitro production of pig embryos progressed significantly in the last decade. However, the embryo growing rates remain variable and with low embryonic quality. The chromosomal abnormalities as a result of high polyspermy rates and the inefficient culture systems are pointed as the main problems. Thus, the aim of this study was to improve the rates of monospermy, and also the hatching rates of in vitro produced porcine embryos. The first study investigated decreasing sperm concentrations combined with different incubation periods during in vitro fertilization (IVF). A total of 829 oocytes were matured and allocated in two experiments. In the first, oocytes were IVF using different sperm concentrations (62.5, 125, 187.5 or 250 x 103 sperm / mL). In the second experiment the oocytes were IVF using 62.5 x 103 sperm / mL pointed in experiment 1, for 2, 3 or 4 hours incubation time. Then the zygotes were cultured during twelve hours to evaluate the fertilization parameters, or during seven days to evaluate embryonic development. A third experiment was performed to evaluate the sperm acrosome reaction according to the incubation period. The higher sperm concentration reduced embryo production from 33.9% to 13.4%. The reduction of the incubation period from 4 to 3 or 2 hours significantly increased the rates of cleavage (42.1 to 71.6% and 73.3%), embryo development (14 to 34.7 and 38.9%) and hatching (25 to 66.7 and 65.7%. Increased sperm concentration and incubation period significantly altered the parameters related to fertilization, substantially impairing the monospermic embryos production. The number of sperm with reacted acrosome increased significantly as incubation time was increased. In the second study we evaluated the assisted hatching of porcine embryos IVP by zona pellucid incision or treatment with pronase. Oocytes were matured and in vitro fertilized with 62.5 x 103 spermatozoa / mL concentration for three hours. The zygotes were cultured for seven days, and then embryonic development and hatching rates evaluated. It was also determined the cell density and cell apoptosis rates of hatched embryos. Both the manual incision or pronase digestion were effective in weakening the ZP of embryos with high cell density. However, it was observed a reduction in the survival rates, and higher apoptosis rates in hatched embryos treated with Pronase. With basis on the data we concluded that a reduction in sperm concentration and incubation period decreases the incidence of polyspermy and improves the embryo development rates. This is probably due to reduction of capacitated /reacted sperm available for fertilization. Also, the weakening of the zona pellucid by incision improves significantly the number and quality of embryos hatched at the end of embryo culture / A produção in vitro de embriões suínos avançou significativamente na última década. Entretanto, os índices de desenvolvimento embrionário continuam inconstantes e a qualidade dos embriões extremamente baixa. A incidência de anormalidades cromossômicas decorrentes das altas taxas de polispermia e a ineficiência dos sistemas de cultivo são apontados como os principais impasses. Desta forma, este estudo buscou melhorar os índices de monospermia, e as taxas de eclosão dos embriões suínos produzidos in vitro. O primeiro estudo investigou a utilização de diferentes concentrações espermáticas e períodos de incubação dos gametas durante a fecundação in vitro (FIV). Para tanto, um total de 829 oócitos foram maturados e destinados à dois experimentos. No primeiro, os oócitos foram FIV utilizando diferentes concentrações espermáticas (62.5, 125, 187.5 ou 250 x 103 espermatozoides/mL). No segundo, os oócitos foram FIV utilizando 62.5 x 103 espermatozoides/mL durante duas, três ou quatro horas. Após a FIV os zigotos foram cultivados por doze horas para análise dos parâmetros da fertilização ou por sete dias para o estudo do desenvolvimento embrionário. Um terceiro experimento avaliou o número de espermatozóides com acrossoma reagido de acordo com o período de incubação. A máxima concentração de espermatozóides reduziu a produção embrionária (de 33.9% para 13.4%). Já a redução do período de incubação de quatro para três ou duas horas, aumentou significativamente as taxas de clivagem (42.1% para 71.6 e 73.3%), de desenvolvimento embrionário (14% para 34.7 e 38.9%) e de eclosão (25% para 66.7 e 65.7%). Tanto o aumento da concentração espermática, como o aumento período de incubação alteraram significativamente a maioria dos parâmetros relacionados a fecundação, prejudicando substancialmente a produção de embriões monospérmicos. O número de espermatozoides com acrossoma reagido aumentou significativamente com o pronlongamento da fecundação. No segundo estudo, investigou-se a indução da eclosão assistida de embriões suínos PIV através da incisão da zona pelúcida ou pelo tratamento com pronase. Os oócitos foram maturados e fecundados in vitro com uma concentração de 62.5 x 103 espermatozóides/mL por três horas. Os zigotos foram cultivados durante sete dias, então, avaliados quanto ao desenvolvimento embrionário e a incidência de eclosão. Determinamos também a densidade celular e os índices de apoptose celular dos embriões eclodidos. Tanto a incisão da zona como a digestão com pronase foram efetivos na fragilização da ZP dos embriões com alta densidade celular. Todavia, constatou-se uma redução da sobrevivência e aumento do índice de apoptose celular dos embriões eclodidos pelo tratamento com pronase. Com base nos dados obtidos concluímos que a redução da concentração de espermatozóides e do período de incubação diminuem a incidência de polispermia e melhoram o desenvolvimento embrionário. Isto é provavelmente devido a redução da disponibilidade de espermatozóides capacitados/reagidos para a fecundação. Da mesma forma, a fragilização da zona pelúcida através da incisão, melhora significativamente o número e a qualidade dos embriões eclodidos ao final do cultivo embrionário