A manipulação neonatal é um modelo experimental utilizado para avaliar o modo pelo qual interferências precoces na vida do animal podem alterar funções neuroendócrinas e comportamentos na vida adulta. O procedimento de manipulação neonatal, além de alterar a atividade do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (eixo HPA) em ratos machos e fêmeas, pode causar profundas mudanças na função reprodutiva de ratas adultas. De fato, há evidências de que a manipulação neonatal diminui a atividade do eixo HPA através da redução da síntese e secreção de hormônios que são liberados quando os animais são expostos ao estresse na vida adulta e, além disso, induz à presença de ciclos anovulatórios e diminui a receptividade sexual de ratas. Considerando essas alterações induzidas pela manipulação neonatal que são relacionadas à função reprodutiva de ratas, essa tese teve por objetivo estudar as possíveis causas da alteração no comportamento sexual e ovulação induzidas pela manipulação neonatal. Para isto, além de estudar o perfil hormonal desses animais, o que incluiu os esteróides gonadais, as gonadotrofinas e a prolactina (PRL) em diferentes fases e horários do ciclo estral, o conteúdo do hormônio liberador de gonadotrofinas (LHRH) em algumas regiões do sistema nervoso central (SNC) e na eminência mediana (EM); foi avaliada a possível participação do sistema angiotensinérgico central, através da análise da densidade dos receptores de angiotensina II (Ang II) pela técnica de auto-radiografia, na mediação dos efeitos da manipulação neonatal sobre a função do eixo hipotálamo-hipófise-gônada (eixo HPG) e do eixo HPA. O presente estudo confirmou dados obtidos em nosso laboratório sobre a redução do comportamento sexual e da ovulação em ratas manipuladas no período neonatal. Na tarde do proestro, período no qual ocorrem os eventos necessários para a ovulação na próxima fase do ciclo estral, os resultados mostram que os animais do grupo manipulado têm redução significativa da concentração plasmática de estradiol, de gonadotrofinas e de PRL, assim como um aumento no conteúdo de LHRH na área pré-óptica medial (APOM). A manipulação neonatal também reduziu a concentração plasmática de progesterona analisada após o coito que pode ser decorrente da reduzida estimulação vaginocervical recebida por essas ratas, já que houve uma redução significativa da freqüência de intromissão realizada pelo macho sobre as ratas do grupo manipulado. A densidade de receptores de Ang II na APOM e no núcleo paraventricular do hipotálamo (PVN) também foi alterada pela manipulação neonatal, pois houve redução significativa na densidade desses receptores nessas duas regiões. Em conclusão, a manipulação neonatal reduz profundamente a atividade do eixo HPG e essa alteração é causada por modificações nas concentrações de estradiol no plasma que, por sua vez, pode alterar a secreção de LHRH, de gonadotrofinas e de PRL, comprometendo dessa maneira a ovulação e a receptividade sexual. Contribuindo para os efeitos deletérios da manipulação neonatal sobre a função reprodutiva em ratas, este procedimento pode alterar a implantação do blastocisto devido à redução da secreção de progesterona observada após o coito no grupo manipulado. Alguns dos efeitos da manipulação neonatal parecem ser mediados pelo sistema angiotensinérgico central, como o aumento do conteúdo de LHRH na APOM e a diminuída resposta do eixo HPA observada em animais manipulados submetidos a situações estressantes na vida adulta.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-31Bitstream added on 2014-06-13T18:55:50Z : No. of bitstreams: 1 lopes_wdz_me_jabo.pdf: 1609666 bytes, checksum: ef67fda0becfef41fe6aebcf7cfdad39 (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Oito reprodutores ovinos, isentos de Toxoplasma gondii e quaisquer outras doenças reprodutivas, foram distribuídos em três grupos para infecção com o respectivo protozoário: GI - três ovinos (2,0 x 105 oocistos da cepa P), GII - três ovinos (1,0 x 106 taquizoítos da cepa RH) e GIII - dois ovinos (controle). Parâmetros clínicos foram mensurados. Avaliações parasitêmicas e sorológicas (IFI) foram efetuadas. Qualidade espermática foi avaliada e a presença do parasito no sêmen foi investigada por meio das técnicas da bioprova e da PCR. Parasitismo tissular foi pesquisado pela bioprova, PCR e imunohistoquímica. Foi possível registrar alterações hipertermia e apatia nos ovinos infectados com oocistos de Toxoplasma gondii Parasitemia foi detectada em cinco ovinos. Todos os ovinos inoculados responderam ao estímulo antigênico, produzindo anticorpos contra T. gondii a partir do 5º dia pós-inoculação. Nos animais dos grupos I e II, os títulos observados foram de 1:4096 e 1:8192, respectivamente. Nos mesmos grupos, foram ainda, pela bioprova e PCR, constatada a presença do parasito no sêmen. Pela PCR detectou-se o DNA de T. gondii no sêmen dos animais 02 e 09 (do GI oocistos) e 07, 48 e 52 (do GII taquizoítos). Parasitismo tissular por T. gondii (bioprova e PCR) foi diagnosticada nos ovinos 09, 16 (oocistos) e 07 (taquizoítos). Vesícula seminal e próstata foram os tecidos de eleição da infecção por T. gondii (imunohistoquímica) no sistema reprodutor dos ovinos experimentalmente infectados. Em síntese, estes resultados sugerem a viabilidade da transmissão venérea deste coccídio. / Eight sheep reproducers exempt of Toxoplasma gondii and any other reproductive illnesses, were distributed in three groups for infection with the respective protozoan: GI - three sheep (2.0 x 105 oocysts from P lineage), GII - three sheep (1.0 x 106 taquizoites from RH lineage) and GIII - two sheep (control). Clinical parameters were measured. Parasitemics and sorologicals evaluations (IFA) were effected. Spermetic quality was evaluated and the presence of the parasite in the semen was searched through techniques of bioassay and PCR. Tissue parasitism was researched through bioassay, PCR and immuneistochemistry. It was possible to registered hyperthermia and apathy alterations in sheep infected with oocysts from Toxoplasma gondii. Parasitemia was detected in five sheep. All inoculated sheep responded to antigenic stimulation, producing antibodies against T. gondii upon the 5th day post-inoculation. In animals from groups I and II, the titles observed were 1:4096 and 1:8192, respectively. The animals of group III (control), did not present antibodies against T. gondii during all experimental period. In the same groups, it still has been evidenced, through bioassay and PCR, the presence of the parasite in the semen. Through PCR, T. gondii DNA was detected in the semen of animals 02, 09 of GI (oocysts) and 07, 48 and 52 of GII (taquizoites). Tissue parasitism by T. gondii (biotest and PCR) was diagnosed in sheep 09, 16 (oocysts) and 07 (taquizoites). Seminal vesicle and prostate were the tissues elected for infection with T. gondii (immuneistochemistry) in the experimentally infected sheep reproductive system. In summery, these results suggests the viability of the venereal transmission for this coccidium.

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:27:17Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2007-01-30Bitstream added on 2014-06-13T20:35:34Z : No. of bitstreams: 1 santana_lf_me_jabo.pdf: 793308 bytes, checksum: 144da7774a5d1aadcadce3f1534456c3 (MD5) / Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) / Seis caprinos machos em idade reprodutiva foram selecionados e distribuídos em três grupos: GI dois caprinos mantidos como controle (placebo), GII dois caprinos inoculados com 1 x 106 taquizoítos de T. gondii (cepa RH) e GIII dois caprinos inoculados com 2 x 105 oocistos de T. gondii (cepa P). Periodicamente foram aferidos parâmetros clínicos, hematológicos e sorológicos, assim como avaliações parasitêmicas, além de exames andrológicos. A presença do parasito no sêmen e, também, nos tecidos do sistema reprodutor foi pesquisada por meio das técnicas de bioprova, PCR e imunohistoquímica. Surtos parasitêmicos foram detectados em todos os animais inoculados com taquizoítos ou com oocistos. A recíproca dos títulos sorológicos (RIFI) alcançou valores máximos de 4096 nos dois grupos de animais que receberam o Toxoplasma gondii. Pela técnica da bioprova foi possível revelar precocemente a presença do coccídio nas amostras seminais dos animais inoculados como taquizoítos (5°, 7°, 28°, 49°, 63° e 70° DPI) e um pouco mais tardiamente nas amostras seminais daqueles inoculados com oocistos (56° e 70° DPI). Pela PCR foi possível identificar, no sêmen, material genético de T. gondii, em cinco e em duas datas experimentais pós-inoculanção dos animais pertencentes aos grupos GII e GIII, respectivamente. Por esta mesma técnica foi possível, ainda, isolar material genético deste protozoário também em amostras teciduais (pool de próstata, testículo, vesícula seminal e epidídimo) dos caprinos 11 e 36 inoculados com taquizoítos e oocistos, respectivamente. Pela imunohistoquímica foi diagnosticado o T. gondii no epidídimo de todos os caprinos que receberam o protozoário. O isolamento de T. gondii, no sistema reprodutor de caprinos (sêmen e tecidos), sugere a possibilidade da transmissão sexual constituir uma importante via na disseminação desta zoonose tão difundida na caprinocultura mundial. / Six goat males in reproductive age had been selected and distributed in three groups: GI - two goat noninoculated (control), GII - two goat inoculated with 1 x 106 tachyzoites of T. gondii (RH strain) and GIII - two goat inoculated with 2 x 105 oocysts of T. gondii (P strain). Periodically had been measured clinical parameters, hematologics and sorologics evaluations, as well as parasitemics, beyond andrologics examinations. The presence of the parasite in the semen, and also in tissues of the reproductive system was searched by means of the techniques of bioassay, PCR and immunehistochemistry (only for tissues). Parasitemia was detected in the two animals inoculated with tachyzoites and in the inoculated others two with oocysts. The reciprocal one of the sorologicys titles (RIFI) reached maximal level of 4096 in the two groups of animals inoculated with the Toxoplasma gondii. Using biossay technique was possible precociously to disclose to the presence of the coccidy in the seminal samples of animals inoculated with tachyzoites (5°, 7°, 28°, 4 9°, 63° e 70° DPI) and a little more delayed in the seminal samples of it inoculated with oocysts (56° e 70° DPI). For the PCR it was possible to identify to the genetic material of the T. gondii, in the semen in five and two experimental dates after-inoculanção of the pertaining animals to groups GII and GIII respectively. For this same technique was possible still to isolate material genetic of this protozoario also in tissues samples (pool of prostate, testícule, vesicula seminal and epididim) of goat 11 and 36 inoculated with tachyzoites and oocysts, respectively. By the immunehistochemistry was diagnosised T. gondii in epididim of all goats ones that had received the protozoario. The isolation of T. gondii, in the reproductive system of goat (semen and tissues), suggests the possibility of the sexual transmission to constitute... (Complete abstract, click electronic access below)

Made available in DSpace on 2014-06-11T19:22:56Z (GMT). No. of bitstreams: 0 Previous issue date: 2008-12-18Bitstream added on 2014-06-13T18:50:00Z : No. of bitstreams: 1 massura_tym_me_sjrp.pdf: 1008547 bytes, checksum: b980a61f93ce006e59aec73089934f7c (MD5) / Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) / Atualmente são conhecidos três grupos de anfíbios: as salamandras (Caudata), as cobras-cegas (Gymnophiona) e os anuros (Anura). O Brasil é o país com a maior diversidade de anfíbios do planeta, com mais de 850 espécies de anuros, das quais 65% são endêmicas. Para anuros há muitos trabalhos que relatam o comportamento reprodutivo, mas poucos foram desenvolvidos para descrever a biologia reprodutiva com ênfase em análise morfológica testicular. Neste estudo, o objetivo geral foi descrever a morfologia testicular de Dendropsophus minutus e Dendropsophus nanus e, relacionar dados da análise biométrica das gônadas às condições climáticas do ano, verificando assim se há variação destas estruturas. Os animais foram coletados mensalmente entre maio de 2006 e abril de 2007, por meio de excursões noturnas no Município de Palestina–SP, Brasil. Dados de natureza biométrica, como comprimento (cm) e peso (g) total do indivíduo, comprimento (mm) e peso (g) total das gônadas; peso (g) do fígado, estômago e intestino, foram obtidos e correlacionados entre si e com as variáveis climáticas (temperatura do ar, pluviosidade, umidade relativa do ar e fotoperíodo). Os testículos foram fixados em solução de Bouin e posteriormente incluídos em historesina de acordo com protocolo de técnicas histológicas. Testes estatísticos foram empregados para análise e interpretação dos resultados. Os testículos das espécies em estudo são pequenos, esbranquiçados, de forma ovalada e se encontram na cavidade abdominal, localizados na região cranial dos rins. Estatisticamente não houve variação intra-individual no comprimento e peso dos animais como também não ocorreram variações na biometria testicular, corpos adiposos, fígado, estômago 8 e intestino. Todos estes parâmetros apresentaram-se correlacionados aos fatores ambientais. Em relação às células... / Currently three groups of amphibians are known: the salamanders, the chargeblind and the anurans. Brazil is the country with the biggest diversity of amphibians of the planet, with more than 850 species of anurans, of which 65% are endemic. There are many studies related to anurans reproductive behavior, but few of them had been developed to describe reproductive biology with emphasis in morphologic analysis of the testis. In this study the general objective was to describe the testicular morphology of Dendropsophus minutus and Dendropsophus nanus and to relate given of the biometric analysis of the gonads ones to the climatic conditions of the year, thus verifying has some variation of these structures. The animals had been collected monthly between May 2006 and April 2007, by means of nocturnal excursions in the City of Palestine-SP, Brazil. Data of biometric nature, as length (cm) and total weight (g) of the individual, length (mm) and total weight (g) of the gonads ones; weight (g) of the liver, stomach and intestine, had been gotten and correlated between itself and with the climatic variable (temperature of air, rainfall, relative humidity of air and photoperiod). The testicles had been fixed in solution of Bouin and later enclosed in historesin in accordance with protocol of histology techniques. Statistical tests had been used for analysis and interpretation of the results. The testicles of the species in study are small, whitish, of oval form and if they find in the abdominal socket, located in the cranial region of the kidneys. Statistical it did not have individual variation in the length and weight of the animals had as well as not occurred variations in the biometric to testicular, fatty bodies, liver, stomach and intestine... (Complete abstract click electronic access below)

Os hormônios da tireóide (HT) têm sido descritos agindo em sítios nucleares e extranucleares, induzindo respostas celulares através de diversos mecanismos. Também tem sido reportado que as proteínas do citoesqueleto são alvos para os HT durante o desenvolvimento do testículo e do sistema nervoso. Os efeitos dos HT durante o desenvolvimento são mediados principalmente por receptores nucleares modulando a expressão gênica. Entretanto, há diversas evidências de mecanismos não genômicos dos HT associados a vias de sinalização ativadas por Ca2+ e proteínas quinases. Nesse contexto, nosso estudo investigou as ações genômicas e não genômicas dos HT em células testiculares e neurais durante o desenvolvimento. Nós inicialmente demonstramos o envolvimento de mecanismos mediados por Ca2+ na fosforilação da vimentina induzida por T3 em testículos de ratos imaturos através de mecanismos independentes da síntese de proteínas. Também observamos um acúmulo de vimentina fosforilada em testículos de ratos hipertireoideos, podendo ser conseqüência da ativação da ERK regulando o citoesqueleto. Nós ainda demonstramos um aumento no metabolismo basal através da medida do consumo de O2 e dos níveis de TBARS. Além disso, as defesas antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas modificaram-se aparentemente de acordo com o aumento no consumo de O2. E Esses resultados corroboram com a idéia de que um aumento na geração de ROS induz estresse oxidativo e pode ser responsável pelas alterações bioquímicas envolvidas no aumento da capacidade metabólica em testículos de ratos hipertireoideos. Além disso, o hipotireoidismo inibiu a atividade das NTPDases em culturas de células de Sertoli sem alterar a expressão das NTPDases 1, 2 e 3. Os HT modificaram a atividade NTPDásica, provavelmente através de mecanismos não genômicos e, consequentemente, podem influenciar a função reprodutiva durante o desenvolvimento. Considerando-se os efeitos dos HT em células neurais, nós primeiramente demonstramos que T3 e T4 estimularam a fosforilação dos filamentos intermediários (FI) através de mecanismos GABAérgicos via PKA e PKCaMII em córtex cerebral de ratos de 10 dias de idade. A dependência de PKA, PKC e canais de Ca2+ tipo-L e -T também foi evidenciada no efeito dos HT sobre a captação de 45Ca2+. Surpreendentemente, em córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade, apenas o T4 estimulou a fosforilação dos FIs. Os mecanismos envolvidos na ação do T4 sobre o citoesqueleto dependem da ativação de um receptor acoplado a proteínas Gi, além da participação da PLC, PKC, MAPK, PKCaMII e níveis intracelulares de Ca2+. Estes dados demonstram que o T4 tem importantes funções fisiológicas modulando o citoesqueleto de células neurais durante o desenvolvimento. Nós também demonstramos a reorganização e a fosforilação do citoesqueleto induzidas por HT em células de glioma C6 e astrócitos, e a participação da via de sinalização da RhoA mediando a ação hormonal. Concluindo, nossos resultados evidenciaram ações genômicas e não genômicas dos HT promovendo a fosforilação dos FI, reorganização do citoesqueleto, influxo de Ca2+ e modulação da atividade das NTPDases via mecanismos mediados por Ca2+ e proteínas quinases. Estes resultados podem contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos envolvidos nas desordens observadas no hipo e hipertireoidismo durante o desenvolvimento e maturação do cérebro e do testículo. / Thyroid hormones (TH) have been shown to act at nuclear and extra nuclear sites, inducing cell responses by several mechanisms. It has also been reported that cytoskeletal proteins are a target for TH during hormone-induced differentiation and development of nervous system and testicular cells. The developmental effects of TH are mainly mediated by nuclear receptors regulating gene expression. However, there are increasing evidences of nongenomic mechanisms of TH associated with kinase- and Ca2+-activated signaling pathways. In this context, our study investigated the genomic and nongenomic actions of TH on testicular and neural cells from developing rats. We first described the involvement of Ca2+-mediated mechanisms on vimentin phosphorylation induced by T3 in immature rat testis. This effect was demonstrated to be independent of protein synthesis. Furthermore, we observed an accumulation of phosphorylated vimentin in hyperthyroid rat testes, which could be a consequence of the extracellular-regulated kinase (ERK) activation regulating the cytoskeleton. We also demonstrate increased basal metabolic rate, measured by tissue oxygen consumption, as well as, increased TBARS levels. Moreover, the enzymatic and non-enzymatic antioxidant defences were modified apparently to respond according to the augmented oxygen consumption. These results support the idea that an increase in mitochondrial ROS generation, underlying cellular oxidative damage, is a side effect of hyperthyroid-induced biochemical changes by which rat testis increase their metabolic capacity. In addition, hypothyroidism inhibited NTPDase activity in Sertoli cell cultures from young rats without alter the expression of NTPDase 1, 2 and 3. Our findings also demonstrate that TH modifies the NTPDase activities, probably via non-genomic mechanisms and consequently may influence the reproductive function throughout development. Concerning the effect of TH on neural cells, we first demonstrate that T3 and T4 stimulate the intermediate filament (IF) phosphorylation through PKA, PKCaMII and GABAergic mechanisms in cerebral cortex of 10 day-old rats. The dependence of PKA, PKC, L- and T-type Ca2+ channels were also evidenced on the effect of TH on 45Ca2+ uptake. Surprisingly, in cerebral cortex of 15 day-old rats, only T4 stimulate IF phosphorylation. The mechanisms underlying the action of T4 involve the activation of a Gi-protein coupled receptor. Moreover, we showed the participation of PLC, PKC, MAPK, PKCaMII and intracellular Ca2+ levels mediating the effects of T4 on the cytoskeleton. These findings demonstrate that T4 have important physiological roles modulating the cytoskeleton of neural cells during development. We further demonstrate that TH induce cytoskeleton reorganization and phosphorylation in C6 glioma cells and astrocytes and the participation of RhoA signaling pathway mediating this action. In conclusion, our results evidence genomic and nongenomic actions of TH promoting IF phosphorylation, cytoskeletal reorganization, Ca2+ influx and modulation of NTPDase activity by Ca2+- and kinase-mediated mechanisms. These results may contribute to a better knowledge of the mechanisms involved in the disorders observed in hyper and hypothyroidism during brain and testis maturation and development.

Atualmente muitos são os estudos com animais silvestres, no entanto, pouco se sabe sobre os aspectos biológicos dos machos. Os Histricomorpha são uma subordem da ordem Rodentia, que representa 43% das 4629 espécies reconhecidas encontradas na classe Mammalia. Os roedores são animais que oferecem uma extraordinária variedade de adaptações ecológicas, suportando os mais diversos tipos de climas e altitudes, podendo com isso apresentar grande diversidade funcional, a viscacha é um roedor pertencente a esta subordem, e de grande importância para o ambiente em que habitam, pois, representam a base da cadeia alimentar. Por esta razão, esta pesquisa ter por objetivo descrever morfologicamente o aparelho reprodutor do macho de viscacha. Foram utilizados seis macho adultos de viscacha, realizou-se análise macro e de microscópia de luz, eletrônica e imunohistoquímicas do sistema reprodutor masculino, bem como a espermatogênese deste animal. Através das análises realizadas, a viscacha apresenta o aparelho reprodutor composto por um par de testículos, epidídimo e ducto deferente e as seguintes glândulas genitais acessórias: próstata, vesícula seminal e glândula bulbouretral. Estas estruturas são semelhantes às de outros roedores já descritos, como a Chinchila e Cutia. A análise espermatogênica demonstrou que esta exibe alterações significativas de seus parâmetros, em sincronia com o ambiente externo e o ciclo reprodutivo. Conclui-se, com os animais estudados, que a morfologia do aparelho reprodutor do L.maximus viscacha é semelhante aos demais roedores pertencentes à subordem dos Histricomorfos. / Many groups are focused their studies on wild animal reproductive biology. However little is still known about the male biology. The Histricomorpha is a suborder of the Rodentia order, which represents 43% of 4,629 recognized species found in the class of Mammalia. Rodents are animals that offer an extraordinary variety of ecological adaptations, supporting all kinds of climates and altitudes, and this may have vast functional diversity. The viscacha is a rodent animal that belongs to this suborder, and it has a great importance to the environment it inhabits, since they represent the base of the food chain. For this reason, this research aims to describe the morphology of the reproductive system of male viscacha. Six adult viscacha males were used for gross anatomy analysis, for light and electron microscopic analysis, and immunhistochemical analysis to describe the normal histology and spermatogenesis of the reproductive tract of adult male viscacha. The reproductive system of the male viscacha consists in a pair of testicles, epididymis and vas deferens and accessory genital glands following: prostate, seminal vesicles and bulbourethral gland. These structures are similar to those already described for other rodents such as Chinchilla and Agouti. The analysis of spermatogenesis suggested that the male viscacha is able to synchronize its spermatogenesis according to the environment, which the animal is inserted in, and its reproductive cycle. This study showed that the reproductive system of the viscacha (L.maximus) is morphologically similar to other rodents belonging to the suborder histricomorphas.

O presente estudo investiga a função reprodutiva de ratos machos com hipertensão induzida pelo modelo dois-rins, um-clipe (2R/1C), e de ratos 2R/1C normotensos devido ao tratamento com o bloqueador de canais de Ca2+ nifedipina. O aumento da AngII periférica/central é característico do modelo 2R/1C. Parâmetros de comportamento sexual (latência e freqüência de monta com intromissão, latência de ejaculação e duração do intervalo pós-ejaculatório) e de espermatogênese (quociente espermático e trânsito epidimário), e hormônios plasmáticos (LH, FSH, PRL e testosterona) foram utilizados para a avaliação da função reprodutiva dos animais. Noventa e nove ratos Wistar foram utilizados neste estudo, divididos em seis grupos: 2R/1C- ratos com hipertensão induzida pelo modelo 2R/1C; FICT- ratos com cirurgia fictícia; 2R/1C+V- ratos 2R/1C que usaram veículo; 2R/1C+N- ratos 2R/1C que foram tratados com nifedipina; FICT+V- ratos FICT que usaram veículo; FICT+N- ratos FICT que foram tratados com nifedipina. Os animais permaneceram “clipados” na artéria renal durante vinte e oito dias. O tratamento oral com nifedipina (10mg/kg/rato) foi iniciado no primeiro dia após o “clipamento” da artéria renal. O comportamento sexual foi registrado por vídeo e a pressão arterial média (PAM) foi aferida por cateter inserido na artéria femoral. Após o registro de PAM, os animais foram mortos para coleta de sangue e retirada das gônadas. Os resultados mostraram que o grupo 2R/1C exibe elevada PAM, aumento da latência de monta com intromissão e de ejaculação, aumento da duração do intervalo pós-ejaculatório, redução do número de animais que ejaculam e que apresentam período pós-ejaculatório, aumento da PRL com redução da testosterona plasmática, e redução do quociente espermático com aumento do trânsito epidimário, quando comparado ao grupo FICT. Entretanto, animais 2R/1C+N apresentaram valores de comportamento sexual e dos hormônios plasmáticos semelhantes aos animais FICT+V ou FICT+N, diferindo significativamente apenas dos ratos 2R/1C+V. Animais 2R/1C+V e 2R/1C+N mantiveram o prejuízo da espermatogênese. Os dados sugerem uma associação entre hipertensão induzida pelo modelo 2R/1C e redução da função reprodutiva; no entanto, o comportamento sexual e a PRL plasmática, ambos normais, foram coincidentes com uma PAM normal. Os efeitos da nifedipina sobre o impedimento em diminuir o comportamento sexual e em aumentar a PRL plasmática, e sobre a manutenção do prejuízo na espermatogênese acontece somente em animais “clipados” na artéria renal. A AngII elevada, característica do modelo 2R/1C, parece ter ação decisiva sobre o prejuízo na espermatogênese, o mesmo não acontecendo quanto à redução do comportamento sexual e ao aumento da PRL plasmática.

A manipulação neonatal é um modelo experimental utilizado para avaliar o modo pelo qual interferências precoces na vida do animal podem alterar funções neuroendócrinas e comportamentos na vida adulta. O procedimento de manipulação neonatal, além de alterar a atividade do eixo hipotálamo-hipófise-adrenal (eixo HPA) em ratos machos e fêmeas, pode causar profundas mudanças na função reprodutiva de ratas adultas. De fato, há evidências de que a manipulação neonatal diminui a atividade do eixo HPA através da redução da síntese e secreção de hormônios que são liberados quando os animais são expostos ao estresse na vida adulta e, além disso, induz à presença de ciclos anovulatórios e diminui a receptividade sexual de ratas. Considerando essas alterações induzidas pela manipulação neonatal que são relacionadas à função reprodutiva de ratas, essa tese teve por objetivo estudar as possíveis causas da alteração no comportamento sexual e ovulação induzidas pela manipulação neonatal. Para isto, além de estudar o perfil hormonal desses animais, o que incluiu os esteróides gonadais, as gonadotrofinas e a prolactina (PRL) em diferentes fases e horários do ciclo estral, o conteúdo do hormônio liberador de gonadotrofinas (LHRH) em algumas regiões do sistema nervoso central (SNC) e na eminência mediana (EM); foi avaliada a possível participação do sistema angiotensinérgico central, através da análise da densidade dos receptores de angiotensina II (Ang II) pela técnica de auto-radiografia, na mediação dos efeitos da manipulação neonatal sobre a função do eixo hipotálamo-hipófise-gônada (eixo HPG) e do eixo HPA. O presente estudo confirmou dados obtidos em nosso laboratório sobre a redução do comportamento sexual e da ovulação em ratas manipuladas no período neonatal. Na tarde do proestro, período no qual ocorrem os eventos necessários para a ovulação na próxima fase do ciclo estral, os resultados mostram que os animais do grupo manipulado têm redução significativa da concentração plasmática de estradiol, de gonadotrofinas e de PRL, assim como um aumento no conteúdo de LHRH na área pré-óptica medial (APOM). A manipulação neonatal também reduziu a concentração plasmática de progesterona analisada após o coito que pode ser decorrente da reduzida estimulação vaginocervical recebida por essas ratas, já que houve uma redução significativa da freqüência de intromissão realizada pelo macho sobre as ratas do grupo manipulado. A densidade de receptores de Ang II na APOM e no núcleo paraventricular do hipotálamo (PVN) também foi alterada pela manipulação neonatal, pois houve redução significativa na densidade desses receptores nessas duas regiões. Em conclusão, a manipulação neonatal reduz profundamente a atividade do eixo HPG e essa alteração é causada por modificações nas concentrações de estradiol no plasma que, por sua vez, pode alterar a secreção de LHRH, de gonadotrofinas e de PRL, comprometendo dessa maneira a ovulação e a receptividade sexual. Contribuindo para os efeitos deletérios da manipulação neonatal sobre a função reprodutiva em ratas, este procedimento pode alterar a implantação do blastocisto devido à redução da secreção de progesterona observada após o coito no grupo manipulado. Alguns dos efeitos da manipulação neonatal parecem ser mediados pelo sistema angiotensinérgico central, como o aumento do conteúdo de LHRH na APOM e a diminuída resposta do eixo HPA observada em animais manipulados submetidos a situações estressantes na vida adulta.

Os hormônios da tireóide (HT) têm sido descritos agindo em sítios nucleares e extranucleares, induzindo respostas celulares através de diversos mecanismos. Também tem sido reportado que as proteínas do citoesqueleto são alvos para os HT durante o desenvolvimento do testículo e do sistema nervoso. Os efeitos dos HT durante o desenvolvimento são mediados principalmente por receptores nucleares modulando a expressão gênica. Entretanto, há diversas evidências de mecanismos não genômicos dos HT associados a vias de sinalização ativadas por Ca2+ e proteínas quinases. Nesse contexto, nosso estudo investigou as ações genômicas e não genômicas dos HT em células testiculares e neurais durante o desenvolvimento. Nós inicialmente demonstramos o envolvimento de mecanismos mediados por Ca2+ na fosforilação da vimentina induzida por T3 em testículos de ratos imaturos através de mecanismos independentes da síntese de proteínas. Também observamos um acúmulo de vimentina fosforilada em testículos de ratos hipertireoideos, podendo ser conseqüência da ativação da ERK regulando o citoesqueleto. Nós ainda demonstramos um aumento no metabolismo basal através da medida do consumo de O2 e dos níveis de TBARS. Além disso, as defesas antioxidantes enzimáticas e não enzimáticas modificaram-se aparentemente de acordo com o aumento no consumo de O2. E Esses resultados corroboram com a idéia de que um aumento na geração de ROS induz estresse oxidativo e pode ser responsável pelas alterações bioquímicas envolvidas no aumento da capacidade metabólica em testículos de ratos hipertireoideos. Além disso, o hipotireoidismo inibiu a atividade das NTPDases em culturas de células de Sertoli sem alterar a expressão das NTPDases 1, 2 e 3. Os HT modificaram a atividade NTPDásica, provavelmente através de mecanismos não genômicos e, consequentemente, podem influenciar a função reprodutiva durante o desenvolvimento. Considerando-se os efeitos dos HT em células neurais, nós primeiramente demonstramos que T3 e T4 estimularam a fosforilação dos filamentos intermediários (FI) através de mecanismos GABAérgicos via PKA e PKCaMII em córtex cerebral de ratos de 10 dias de idade. A dependência de PKA, PKC e canais de Ca2+ tipo-L e -T também foi evidenciada no efeito dos HT sobre a captação de 45Ca2+. Surpreendentemente, em córtex cerebral de ratos de 15 dias de idade, apenas o T4 estimulou a fosforilação dos FIs. Os mecanismos envolvidos na ação do T4 sobre o citoesqueleto dependem da ativação de um receptor acoplado a proteínas Gi, além da participação da PLC, PKC, MAPK, PKCaMII e níveis intracelulares de Ca2+. Estes dados demonstram que o T4 tem importantes funções fisiológicas modulando o citoesqueleto de células neurais durante o desenvolvimento. Nós também demonstramos a reorganização e a fosforilação do citoesqueleto induzidas por HT em células de glioma C6 e astrócitos, e a participação da via de sinalização da RhoA mediando a ação hormonal. Concluindo, nossos resultados evidenciaram ações genômicas e não genômicas dos HT promovendo a fosforilação dos FI, reorganização do citoesqueleto, influxo de Ca2+ e modulação da atividade das NTPDases via mecanismos mediados por Ca2+ e proteínas quinases. Estes resultados podem contribuir para o melhor entendimento dos mecanismos envolvidos nas desordens observadas no hipo e hipertireoidismo durante o desenvolvimento e maturação do cérebro e do testículo. / Thyroid hormones (TH) have been shown to act at nuclear and extra nuclear sites, inducing cell responses by several mechanisms. It has also been reported that cytoskeletal proteins are a target for TH during hormone-induced differentiation and development of nervous system and testicular cells. The developmental effects of TH are mainly mediated by nuclear receptors regulating gene expression. However, there are increasing evidences of nongenomic mechanisms of TH associated with kinase- and Ca2+-activated signaling pathways. In this context, our study investigated the genomic and nongenomic actions of TH on testicular and neural cells from developing rats. We first described the involvement of Ca2+-mediated mechanisms on vimentin phosphorylation induced by T3 in immature rat testis. This effect was demonstrated to be independent of protein synthesis. Furthermore, we observed an accumulation of phosphorylated vimentin in hyperthyroid rat testes, which could be a consequence of the extracellular-regulated kinase (ERK) activation regulating the cytoskeleton. We also demonstrate increased basal metabolic rate, measured by tissue oxygen consumption, as well as, increased TBARS levels. Moreover, the enzymatic and non-enzymatic antioxidant defences were modified apparently to respond according to the augmented oxygen consumption. These results support the idea that an increase in mitochondrial ROS generation, underlying cellular oxidative damage, is a side effect of hyperthyroid-induced biochemical changes by which rat testis increase their metabolic capacity. In addition, hypothyroidism inhibited NTPDase activity in Sertoli cell cultures from young rats without alter the expression of NTPDase 1, 2 and 3. Our findings also demonstrate that TH modifies the NTPDase activities, probably via non-genomic mechanisms and consequently may influence the reproductive function throughout development. Concerning the effect of TH on neural cells, we first demonstrate that T3 and T4 stimulate the intermediate filament (IF) phosphorylation through PKA, PKCaMII and GABAergic mechanisms in cerebral cortex of 10 day-old rats. The dependence of PKA, PKC, L- and T-type Ca2+ channels were also evidenced on the effect of TH on 45Ca2+ uptake. Surprisingly, in cerebral cortex of 15 day-old rats, only T4 stimulate IF phosphorylation. The mechanisms underlying the action of T4 involve the activation of a Gi-protein coupled receptor. Moreover, we showed the participation of PLC, PKC, MAPK, PKCaMII and intracellular Ca2+ levels mediating the effects of T4 on the cytoskeleton. These findings demonstrate that T4 have important physiological roles modulating the cytoskeleton of neural cells during development. We further demonstrate that TH induce cytoskeleton reorganization and phosphorylation in C6 glioma cells and astrocytes and the participation of RhoA signaling pathway mediating this action. In conclusion, our results evidence genomic and nongenomic actions of TH promoting IF phosphorylation, cytoskeletal reorganization, Ca2+ influx and modulation of NTPDase activity by Ca2+- and kinase-mediated mechanisms. These results may contribute to a better knowledge of the mechanisms involved in the disorders observed in hyper and hypothyroidism during brain and testis maturation and development.

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