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Régulation transcriptionnelle de la biosynthèse des lignanes du lin (Linum usitatissimum et Linum flavum) et amélioration de l'extraction des lignanes / Transcriptional regulation of lignans biosynthesis in flax (Linum usitatissimum and Linum flavum) and improvement of lignans extraction

Renouard, Sullivan 29 September 2011 (has links)
Les lignanes sont des métabolites secondaires végétaux, dont la fonction biologique reste aujourd’hui inconnue in planta, mais qui présentent un intérêt en santé humaine. Cette étude vise à progresser dans la connaissance de la fonction des lignanes dans la plante en étudiant la régulation de la biosynthèse de ces molécules. Cette étude a été menée chez des lins : Linum usitatissimum (espèce cultivée) et Linum flavum (espèce sauvage). Chez Linum usitatissimum, la régulation spatio-temporelle de la biosynthèse des lignanes a été établie et il a été démontré que l’acide abscissique régulait la biosynthèse des lignanes dans la graine. Chez Linum flavum, un gène clé dans la production de lignanes a été isolé et la régulation spatiotemporelle de la biosynthèse des lignanes a été établie. Un protocole amélioré d’extraction de sécoisolaricirésinol utilisant une cellulase a été mis au point à partir de téguments de graines de Linum usitatissimum. Enfin de nouvelles sources de lignanes cytotoxiques parmi les Juniperus et Callitris ont été identifiées, et l’extraction de ces composés à partir de feuilles a été optimisée. / Lignans are plant secondary metabolites whose in planta biological function is still unknown but are of interest for human health. This work aims at understanding the function of plant lignans through the study of the lignans biosynthesis regulation. This study was conducted in flax: Linum usitatissimum (cultivated species) and Linum flavum (wild species). In Linum usitatissimum, spatial and temporal regulation of lignans biosynthesis has been established and it has been shown that abscisic acid regulates the lignan biosynthesis in seed coats. In Linum flavum, a key gene of lignans production has been isolated, spatial and temporal regulation of lignans biosynthesis has been established. An improved protocol for secoisolariciresinol extraction from Linum usitatissimum seed teguments involving the use of a cellulase was developed. Finally new sources of cytotoxic lignans were identified among Juniperus and Callitris species and extraction from leaves was optimized.
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Etude de la régulation transcriptionnelle de la synthèse des lignanes du lin (Linum usitatissimum L.) / Transcriptional regulation of lignan biosynthesis in flax (Linum usitatissimum L.)

Corbin, Cyrielle 24 September 2015 (has links)
Plante de grande culture aux multiples applications, le lin accumule dans ses graines des métabolites spécialisés appelés lignanes aux propriétés phytooestrogène et antioxydante, bénéfiques en santé humaine et, dans ses feuilles, des lignanes de nature toxique. Pour l’utilisation et l’étude de ces composés phénoliques issus de la voie des monolignols, une technique d’éco-extraction assistée par les ultrasons a été développée et appliquée à un criblage de différentes variétés pour leur contenu en lignanes conférant une haute valeur ajoutée aux extraits et produits. Les potentiels verrous métaboliques de la voie de biosynthèse de ces composés ont fait l’objet d’investigations au niveau de la régulation transcriptionnelle des gènes responsables de la formation des énantiomères opposés de sécoisolaricirésinol dans la graine et les parties aériennes. La famille multigénique des protéines dirigeantes (DIR) du lin, premiers acteurs de cette voie, a été criblée au niveau génomique et transcriptionnel afin de déterminer des candidates pour fonctionner avec les pinorésinol laricirésinol réductases (PLR), enzymes bifonctionnelles catalysant la formation du sécoisolaricirésinol. L’étude de la régulation fine de l’expression des deux isoformes des gènes PLR a mis en évidence des profils d’inductibilité très contrastés et a conduit à l’identification d’éléments cis-régulateurs ainsi que de facteurs de transcription impliqués dans ces voies de régulation. L’ensemble des résultats convergent vers un rôle de défense des lignanes in planta et a permis de construire une vue d’ensemble des mécanismes complexes de régulation de leur biosynthèse et enfin de proposer des pistes pour l’amélioration de la production de ces molécules naturelles par une stimulation de leur accumulation et l’augmentation des rendements d’extraction par chimie verte. / As a crop with multiple purposes, flax accumulates lignans, specialized metabolites with health benefits, known for their phytoestrogenic and antioxidant properties in its seed, and toxic lignans in its leaves. In order to use and study these phenolic compounds derived from monolignols, an eco-friendly method based on ultrasound-assisted extraction was developed and applied to the screening of cultivars for their lignan content which confers high value to extracts and flaxseed by-product. Regulation of the lignan biosynthetic pathway was investigated at the transcriptional level for the genes responsible for the formation of secoisolariciresinol in seeds and aerial parts. The multigene family of dirigent proteins (DIR), first actors of this pathway, was explored by genomic and transcriptional approaches in order to select candidates to operate with pinoresinol lariciresinol reductases (PLR), bifunctional enzymes catalyzing secoisolariciresinol biosynthesis. The study of the transcriptional regulation of PLR genes evidenced very contrasting expression profiles and led to the identification of transcription factors acting as master regulators of this biosynthesis and their cis-regulatory target elements. Results allowed first to reinforce the hypothesis of the lignans defensive role in planta, second to afford an overall view of complex mechanisms occurring in the regulation of lignan natural production and finally to suggest leads to improve lignan yield by a stimulation of natural production and an enhancement of extraction yield using green chemistry methods.

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