A Esquistossomose é uma das mais importantes doenças endêmicas do mundo, com mais de 200 milhões de pessoas infectadas em 76 países. É estimado que mais de 600 milhões de pessoas estejam em áreas endêmicas. Em 2003 dados do transcriptoma do Schistosoma mansoni foram disponibilizados. As informações de proteínas codificadas permitiram a análise de suas funções, e auxiliaram na procura de novos candidatos vacinais. A análise do transcriptoma permitiu a identificação de três famílias de proteínas homólogas à dineína de cadeia leve (DLC) de mamíferos. Uma delas é a família L8, com ao menos 18 membros, com proteínas em torno de 10 kDa. Essas proteínas são expressas em diferentes estágios do ciclo de vida do Schistosoma mansoni. Duas DLCs foram reconhecidas no tegumento de S. japonicum, sugerindo que elas são expostas ao sistema imune do hospedeiro. Salmonelas atenuadas como vacinas vivas têm sido descritas como bons veículos para apresentação de antígenos heterólogos. No nosso laboratório uma importante ferramenta tem sido desenvolvida para auxiliar o uso de salmonelas como vacinas vivas recombinantes, foi desenvolvido um vetor plasmididal baseado no regulon soxRS para controlar a expressão de genes heterólogos in vivo. Este sistema de expressão promove a expressão de proteínas recombinantes sob condições de estresse oxidativo, como aquele imposto ao microorganismo dentro do macrófago. Para investigar o potencial vacinal das DLCs, três genes foram selecionados para serem clonados e expressos em E. coli e em salmonelas atenuadas. A antigenicidade e imunogenicidade desses parálogos foram testadas em camundongos depois de serem imunizados com proteínas purificadas ou com salmonelas recombinantes. As DLCs mostraram ser bastante imunogênicas, aumentando os título de IgG. A proteína DLC1 também aumentou os níveis de IgE no soro dos animais, fato que poderia estar relacionado com reações alérgicas observadas em populações infetadas. Altos níveis de IgE também podem ser relacionados com uma marca de resistência existente em pessoas que vivem em áreas endêmicas. Depois de imunizados os animais foram desafiados com cercárias para investigar possível proteção. Foi observado que a imunização com proteínas purificadas resultou em aproximadamente 40% de diminuição da carga parasitária. A análise dos granulomas hepáticos com 45 dias depois da infecção indicou uma significativa redução, maior que 70% das áreas dos granulomas, sgerindo que a imunização com as DLCs promove uma importante interferência na formação dos granulomas hepáticos. Por outro lado, nossos estudos com salmonelas atenuadas recombinantes, carregando as DLCs, mostraram que foram ineficientes na apresentação dos antígenos ao sistema imune. Relacionando os resultados de diminuição de carga parasitária e das áreas dos granulomas depois da imunização com as DLCs purificadas sugere-se que essas proteínas podem ser consideradas como interessantes candidatos vacinais, uma vez que elas afetam as mais importantes causas da patologia da esquistossomose. / Schistosomiasis is one of the most important endemic diseases in the world, with more than 200 million people infected in 76 countries. It is estimated that more than 600 million people live in endemic areas. In 2003 extensive data from the transcriptome of Schsitosoma mansoni was made available. The information on the encoded proteins allowed the analysis of protein function and improved the search for vaccine candidates. The analysis of the transcriptome allowed the identification of three families of proteins homologs to the mammalian dynein light chain (DLC). One of these was the L8 family, with at least 18 members, all proteins with around 10 kDa. These proteins were found to be expressed in the different stages of the S. mansoni life cycle. Two DLCs were recognized in the tegument of S. japonicum, suggesting that they are exposed to the host immune system. Attenuated salmonellas, as live vaccines, have been described as good vehicles for presentation of heterologous antigens. At our laboratory an important tool has been developed to improve the use of salmonellas as live recombinant vaccines, a plasmidial vector based on the soxRS regulon to control the expression of heterologous genes in vivo. This expression system promotes the expression of recombinant proteins under conditions of oxidative stress, such as that imposed to the microorganism in the macrophage environment. To investigate the vaccine potential of DLCs, three genes were selected to be cloned and expressed in E. coli and in attenuated salmonellas. Antigenicity and immunogenicity of these paralogous were tested in mice after immunization with purified proteins or with the recombinant salmonellas. The DLCs were proven to be very immunogenic, increasing the IgG titers. DLC1 also increased the IgE levels in the sera of animals, what could be related to allergenic reactions observed in infected population. High level of IgE can also be related to the resistance mark of people living in endemic areas. After immunization, the animals were challenged with cercarias to investigate the protective profile. It was observed that immunization with purified proteins resulted in approximately 40% decreasing in the worm burden. The analysis of the hepatic granulomas 45 days after infection indicated a significant, up to 70 %, reduction of the granuloma areas, suggesting that immunization with DLCs promotes important interference in the hepatic granuloma formation. On the other hand, our studies with the attenuated recombinant salmonellas, carrying DLCs, showed no effective antigen presentation to the mice immune system. Taking together, the results of decreasing the worm burden and the granuloma size after immunization with purified DLCs suggest that these proteins could be considered as interesting vaccine candidates, affecting the main causes of the pathology of schistosomiasis.

A Esquistossomose é uma das mais importantes doenças endêmicas do mundo, com mais de 200 milhões de pessoas infectadas em 76 países. É estimado que mais de 600 milhões de pessoas estejam em áreas endêmicas. Em 2003 dados do transcriptoma do Schistosoma mansoni foram disponibilizados. As informações de proteínas codificadas permitiram a análise de suas funções, e auxiliaram na procura de novos candidatos vacinais. A análise do transcriptoma permitiu a identificação de três famílias de proteínas homólogas à dineína de cadeia leve (DLC) de mamíferos. Uma delas é a família L8, com ao menos 18 membros, com proteínas em torno de 10 kDa. Essas proteínas são expressas em diferentes estágios do ciclo de vida do Schistosoma mansoni. Duas DLCs foram reconhecidas no tegumento de S. japonicum, sugerindo que elas são expostas ao sistema imune do hospedeiro. Salmonelas atenuadas como vacinas vivas têm sido descritas como bons veículos para apresentação de antígenos heterólogos. No nosso laboratório uma importante ferramenta tem sido desenvolvida para auxiliar o uso de salmonelas como vacinas vivas recombinantes, foi desenvolvido um vetor plasmididal baseado no regulon soxRS para controlar a expressão de genes heterólogos in vivo. Este sistema de expressão promove a expressão de proteínas recombinantes sob condições de estresse oxidativo, como aquele imposto ao microorganismo dentro do macrófago. Para investigar o potencial vacinal das DLCs, três genes foram selecionados para serem clonados e expressos em E. coli e em salmonelas atenuadas. A antigenicidade e imunogenicidade desses parálogos foram testadas em camundongos depois de serem imunizados com proteínas purificadas ou com salmonelas recombinantes. As DLCs mostraram ser bastante imunogênicas, aumentando os título de IgG. A proteína DLC1 também aumentou os níveis de IgE no soro dos animais, fato que poderia estar relacionado com reações alérgicas observadas em populações infetadas. Altos níveis de IgE também podem ser relacionados com uma marca de resistência existente em pessoas que vivem em áreas endêmicas. Depois de imunizados os animais foram desafiados com cercárias para investigar possível proteção. Foi observado que a imunização com proteínas purificadas resultou em aproximadamente 40% de diminuição da carga parasitária. A análise dos granulomas hepáticos com 45 dias depois da infecção indicou uma significativa redução, maior que 70% das áreas dos granulomas, sgerindo que a imunização com as DLCs promove uma importante interferência na formação dos granulomas hepáticos. Por outro lado, nossos estudos com salmonelas atenuadas recombinantes, carregando as DLCs, mostraram que foram ineficientes na apresentação dos antígenos ao sistema imune. Relacionando os resultados de diminuição de carga parasitária e das áreas dos granulomas depois da imunização com as DLCs purificadas sugere-se que essas proteínas podem ser consideradas como interessantes candidatos vacinais, uma vez que elas afetam as mais importantes causas da patologia da esquistossomose. / Schistosomiasis is one of the most important endemic diseases in the world, with more than 200 million people infected in 76 countries. It is estimated that more than 600 million people live in endemic areas. In 2003 extensive data from the transcriptome of Schsitosoma mansoni was made available. The information on the encoded proteins allowed the analysis of protein function and improved the search for vaccine candidates. The analysis of the transcriptome allowed the identification of three families of proteins homologs to the mammalian dynein light chain (DLC). One of these was the L8 family, with at least 18 members, all proteins with around 10 kDa. These proteins were found to be expressed in the different stages of the S. mansoni life cycle. Two DLCs were recognized in the tegument of S. japonicum, suggesting that they are exposed to the host immune system. Attenuated salmonellas, as live vaccines, have been described as good vehicles for presentation of heterologous antigens. At our laboratory an important tool has been developed to improve the use of salmonellas as live recombinant vaccines, a plasmidial vector based on the soxRS regulon to control the expression of heterologous genes in vivo. This expression system promotes the expression of recombinant proteins under conditions of oxidative stress, such as that imposed to the microorganism in the macrophage environment. To investigate the vaccine potential of DLCs, three genes were selected to be cloned and expressed in E. coli and in attenuated salmonellas. Antigenicity and immunogenicity of these paralogous were tested in mice after immunization with purified proteins or with the recombinant salmonellas. The DLCs were proven to be very immunogenic, increasing the IgG titers. DLC1 also increased the IgE levels in the sera of animals, what could be related to allergenic reactions observed in infected population. High level of IgE can also be related to the resistance mark of people living in endemic areas. After immunization, the animals were challenged with cercarias to investigate the protective profile. It was observed that immunization with purified proteins resulted in approximately 40% decreasing in the worm burden. The analysis of the hepatic granulomas 45 days after infection indicated a significant, up to 70 %, reduction of the granuloma areas, suggesting that immunization with DLCs promotes important interference in the hepatic granuloma formation. On the other hand, our studies with the attenuated recombinant salmonellas, carrying DLCs, showed no effective antigen presentation to the mice immune system. Taking together, the results of decreasing the worm burden and the granuloma size after immunization with purified DLCs suggest that these proteins could be considered as interesting vaccine candidates, affecting the main causes of the pathology of schistosomiasis.

De um total de 402 propriedades rurais do Município de Botucatu, S.P. que tinham entre suas atividades a exploração pecuária, foram sorteadas 60 (15 por cento ) pelo processo de amostragem probabilística simples. Nestas 60 propriedades localizou-se 113 bebedouros que eram os mais utilizados pelos animais para sua dessedentação. Foram colhidas amostras de água destes bebedouros visando a pesquisa de bactérias do gênero SaLmonella, a determinação do Número Mais Provável (NMP) de bactérias coliformes fecais e a verificação do pH. Antes da coleta das amostras procedia-se a medida da temperatura da água. Obteve-se isolamento positivo para salmonelas nas amostras de água de 15 (13,27 por cento ) bebedouros correspondentes a 12 (20 por cento ) das 60 propriedades visitadas, identificando-se os seguintes sorotipos: S. dublin, S. newport, S. madelia, S. IV 43:g,z57:-, S. sphra, S. glostrup, S IV ochsenzool e S. I 9,12:i:-. Das 113 amostras de água analisadas, 14(12,39 por cento ) apresentaram-se com NMP/100 ml de coliformes fecais acima de 4000. Não foi constatada associação entre o isolamento positivo de salmonelas e NMP/100 ml de coliformes fecais acima de 4000. A positividade maior parao isolamento de salmonelas e o NMP/100 ml de coliformes fecais acima de 4000 deu-se em temperaturas superiores a 18°C. Quanto ao pH, em ambas as situações a positividade maior ocorreu entre 6,0 e 7,0. / Sixty small farms from the Municipality of Botucatu*, that are dedicated to cattle breeding were studied. These farms represent 15 per cent of the 402 farms that exist in the Municipality. The sample was drawn by simple probabilistic technique. On the farms one hundred and thirteen drinking p1aces were localized. Samples of water were taken from these drinking places and examined for bacteria of the genus Salmonella, for the determination of Most Probable Number (MPN) of fetal coliform bacteria as well as determination of the water\'s pH. Temperature of water was measured before collection. Samples of 15 drinking places (13.27 per cent ) were positive for Salmonella. The drinking places belonged to 12 of the sixty farms studied (20 per cent ). The following serotypes were identified: S. dublin, S. newpoPt, S. madeZia, S. IV 43: g,z57:-, S .saphra, S. glostrup, S. IV ochsenzool e S.I9,12:i:-. Of the 113 samples studied 14 (12.39 per cent ) presented MPN/100 ml of fecal coliforms above 4000. There was no relatiotiship between MPN/100 ml of fecal coliforms above 4000 and positivity for Salmonella. Highest positivity for Salmonella and MPN/lOOml of fecal coliforms over 4000 both occured at temperatures that were higher than 18ºC. Regarding pH, both situation occured at pH between 6.0 and 7.0. * São Paulo, Brazil.

Made available in DSpace on 2015-04-22T22:06:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Andreia Santa Rita Machado.pdf: 2387947 bytes, checksum: d35cf07d159853de28eceb1bc4ec7852 (MD5) Previous issue date: 2013-12-28 / CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior / Salmonella sp. lives in the intestinal tract of many warm and cold blooded animals. Salmonella can cause mild gastroenteritis and severe invasive diseases. Those are responsible for 216 thousands deaths /year, and are most commonly linked with areas of low socioeconomic status and sanitation. The aim of this study was to describe the genotypic and phenotypic characteristics of Salmonella isolated from countryside and urban areas of Manaus / AM. Samples were collected from children 0-10 years old with and without diarrhea in the urban area and in the countryside samples were collected from stools of adults, children, animals, and the water. These strains were isolated in liquid sodium Tetrationado, then, sown on solid media selective for Salmonella, reproduced in predetermined conditions for Salmonella. Colonies were then selected with morphological characteristics for Salmonella and sown in biochemical tests for phenotypic characterization and identification. We performed the amplification and sequencing of 16S rRNA and analyzed genetic similarity using the Pulsed Field technique for genotypic characterization and identification of these strains. In total, 22 Salmonella samples were characterized, 3 of (13.6%) S. Paratyphi B, 3 of (13.6%) S. Javiana, 3 of (13.6%) S. enterica subsp. arizonae, 3 of (13.6%) Salmonella enterica, 3 of (13.6%) Salmonella sp., 2 of (9%) S. Bareilly, 2 of (9%) S. Typhimurium, 1of (4.5%) S. Agona, 1 of (4.5%) S. Stanley and 1 of (4.5%) S. Enteritidis. Among the 22 isolates, 100% were sensitive to Ciprofloxacin, 10 (46%) were resistant to Nitrofurantoin and 8 (36, 3%) were resistant to Sulfametaxazol + trimethropim. These strains have the ability to cause infections. All of them presented virulence factors with invasion, adhesion and survival capacity into the cell. The genetic similarity analysis generated different profiles among clinical isolates and wild isolates. We must call attention to this type of research and continue focusing on improving the diagnosis and decreasing resistance to antibiotics and ultimately the creation of programs for control and prevention of that disease. / As salmonelas fazem parte da microbiota intestinal de muitos animais de sangue quente e frio. Podem causar gastroenterite leve ou até mesmo doenças invasivas graves, causadoras de 216 mil mortes/ano, e geralmente está associada a regiões de baixos níveis socioeconômicos e de saneamento básico. O objetivo deste estudo foi descrever as características genotípicas e fenotípicas de Salmonella isolada de área rural e urbana de Manaus/AM. Foram utilizadas amostras diarreicas coletadas de crianças de 0 a 10 anos de idade e amostras não diarreicas, coletadas de adultos, crianças, animais, além de amostras da água. Estas amostras foram isoladas em meio líquido Tetrationato de sódio, semeadas em meios sólidos seletivos para Salmonella. Em seguida foram selecionadas colônias com as características morfológicas para Salmonella e semeadas em provas bioquímicas para a caracterização fenotípica e identificação. Foi realizada a amplificação e o sequenciamento do gene 16S rRNA e análise da similaridade genética pela técnica de Pulsed Field para caracterização genotípica e identificação destas cepas. No total foram caracterizadas 22 salmonelas, sendo 3 (13,6%) S. Paratyphi B, 3 (13,6%) S. Javiana, 3 (13,6%) S. enterica subsp. arizonae, 3 (13,6%) Salmonella enterica, 3 (13,6%) Salmonella sp., 2 (9%) S. Bareilly, 2 (9%) S. Typhimurium, 1 (4,5%) S. Agona, 1 (4,5%) S. Stanley e 1 (4,5%) S. Enteritidis. Entre os 22 isolados, 100% foram sensíveis a ciprofloxacina e, 10 (46%) resistentes a Nitrofurantoína e 8 (36, 3%) a Sulfametaxazol + trimetropima. Estas cepas têm a capacidade para causar infecções invasivas, pois todas apresentaram fatores de virulência com capacidade de invasão, aderência e sobrevivência no interior da célula. A análise de similaridade genética formou perfis diferentes entre os isolados clínicos e isolados selvagens. Chama-se a atenção para realização contínua desse tipo de pesquisa, visando a melhoria no diagnóstico e diminuição da resistência aos antibióticos, além da criação de programas de controle e prevenção da doença.

De um total de 402 propriedades rurais do Município de Botucatu, S.P. que tinham entre suas atividades a exploração pecuária, foram sorteadas 60 (15 por cento ) pelo processo de amostragem probabilística simples. Nestas 60 propriedades localizou-se 113 bebedouros que eram os mais utilizados pelos animais para sua dessedentação. Foram colhidas amostras de água destes bebedouros visando a pesquisa de bactérias do gênero SaLmonella, a determinação do Número Mais Provável (NMP) de bactérias coliformes fecais e a verificação do pH. Antes da coleta das amostras procedia-se a medida da temperatura da água. Obteve-se isolamento positivo para salmonelas nas amostras de água de 15 (13,27 por cento ) bebedouros correspondentes a 12 (20 por cento ) das 60 propriedades visitadas, identificando-se os seguintes sorotipos: S. dublin, S. newport, S. madelia, S. IV 43:g,z57:-, S. sphra, S. glostrup, S IV ochsenzool e S. I 9,12:i:-. Das 113 amostras de água analisadas, 14(12,39 por cento ) apresentaram-se com NMP/100 ml de coliformes fecais acima de 4000. Não foi constatada associação entre o isolamento positivo de salmonelas e NMP/100 ml de coliformes fecais acima de 4000. A positividade maior parao isolamento de salmonelas e o NMP/100 ml de coliformes fecais acima de 4000 deu-se em temperaturas superiores a 18°C. Quanto ao pH, em ambas as situações a positividade maior ocorreu entre 6,0 e 7,0. / Sixty small farms from the Municipality of Botucatu*, that are dedicated to cattle breeding were studied. These farms represent 15 per cent of the 402 farms that exist in the Municipality. The sample was drawn by simple probabilistic technique. On the farms one hundred and thirteen drinking p1aces were localized. Samples of water were taken from these drinking places and examined for bacteria of the genus Salmonella, for the determination of Most Probable Number (MPN) of fetal coliform bacteria as well as determination of the water\'s pH. Temperature of water was measured before collection. Samples of 15 drinking places (13.27 per cent ) were positive for Salmonella. The drinking places belonged to 12 of the sixty farms studied (20 per cent ). The following serotypes were identified: S. dublin, S. newpoPt, S. madeZia, S. IV 43: g,z57:-, S .saphra, S. glostrup, S. IV ochsenzool e S.I9,12:i:-. Of the 113 samples studied 14 (12.39 per cent ) presented MPN/100 ml of fecal coliforms above 4000. There was no relatiotiship between MPN/100 ml of fecal coliforms above 4000 and positivity for Salmonella. Highest positivity for Salmonella and MPN/lOOml of fecal coliforms over 4000 both occured at temperatures that were higher than 18ºC. Regarding pH, both situation occured at pH between 6.0 and 7.0. * São Paulo, Brazil.