Made available in DSpace on 2014-10-09T12:24:09Z (GMT). No. of bitstreams: 0 / Made available in DSpace on 2014-10-09T14:07:44Z (GMT). No. of bitstreams: 1 01129.pdf: 2217397 bytes, checksum: 74a2a86612755243659a9f2dfa811fde (MD5) / Dissertacao (Mestrado) / IEA/D / Faculdade de Filosofia Letras e Ciencias Humanas, Universidade de Sao Paulo - FFLCH/USP

Made available in DSpace on 2012-05-07T14:44:00Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license.txt: 1748 bytes, checksum: 8a4605be74aa9ea9d79846c1fba20a33 (MD5) 000052.pdf: 4412784 bytes, checksum: 6ae1a0dc733bed92d1998f870c0d8838 (MD5) Previous issue date: 2008 / Uma alternativa para identificar a base de processos críticos necessários ao estabelecimento do parasito no hospedeiro é enfocar o estágio responsável pela invasão primária, ou seja, a estrutura infectante. O principal objetivo do trabalho foi realizar uma caracterização ultra-estrutural da cercária de Schistosoma mansoni, através de técnicas citoquímicas. Para a identificação de lipídios saturados e insaturados foi utilizado, respectivamente, as técnicas de Filipina e do Tampão Imidazol, para localização de proteínas básicas foram empregadas as técnicas do Ácido Fosfotúngstico (PTA) e da Prata Amoniacal. Para localizar sítios de cálcio utilizamos a técnica descrita por Hepler (1980) e para evidenciar grupamentos aniônicos empregamos ferritina cationizada além do tratamento enzimático com tripsina, condroitinase e neuraminidase de Vibrio cholerae. Foi observada a presença de lipídios insaturados de formato globular em toda a região externa da larva infectante, tegumento, glândula da cabeça, glândula pré-acetabular e corpos de inclusão. Utilizando a técnica de filipina, identificamos a presença de colesterol delimitando vários compartimentos da larva e também no tegumento, músculo e membranas de células subtegumentares. Através da técnica de PTA foi identificada a presença de proteínas básicas no tegumento, núcleo e nucléolo de células subtegumentares, corpos de inclusão e glândulas pré-acetabulares. Já na prata amoniacal, identificamos forte marcação em toda larva infectante além de marcações no núcleo das células musculares, tecido muscular circular e glândulas pré-acetabulares. A localização de sítios de cálcio mostrou-se bastante uniforme, demarcando os espaços internos da larva, principalmente, o tecido muscular da larva. As amostras tratadas com ferritina cationizada apresentaram uma forte marcação em nível cuticular. O tratamento das amostras com a neuraminidase não alterou o padrão de marcação dessas partículas na superfície do trematóide. Porém, o tratamento com tripsina ou condroitinase resultou numa ausência de marcação na superfície da larva. O esclarecimento da composição bioquímica da larva infectante de S. mansoni fornece dados para um melhor entendimento a respeito da biologia do parasito bem como a intrigante relação parasitohospedeiro, além de contribuir para um possível controle químico.

Elementos transponíveis são elementos genéticos capazes de transpor para diferentes locais em um genoma hospedeiro. Na sua descoberta, considerou-se que tais elementos não apresentavam funções celulares úteis, classificando-os como genes parasitas. Atualmente, além do carácter deletério, reconhece-se que eles contribuam para a evolução dos genomas e, em alguns casos, podem realizar algumas funções celulares. Utilizando recursos de bioinformática, realizamos estudos para verificar a influência de duas famílias de retrotransposons non-LTR (Perere-3 e SR2) no genoma do Schistosoma mansoni. Estudos preliminares indicam que após a divergência entre S. japonicum e S. mansoni, esses elementos tiveram uma grande expansão em seu número de cópias em S. mansoni, sem paralelo em S. japonicum. Análises das regiões intrônicas que contêm inserções de qualquer uma destas duas famílias de retrotransposon em S. mansoni, mostrou que houve aproximadamente 30% de aumento no tamanho dos íntrons e aumento do conteúdo GC, quando comparado com os íntrons ortólogos de S. japonicum. As inserções foram diferencialmente representadas ao longo das estruturas dos genes com a acumulação preferencial nos íntrons localizados nas regiões terminais dos genes. As inserções dos dois elementos de transposição tendem a orientar-se na direção oposta da transcrição dos genes. As inserções de trechos do elemento SR2 enriquecidos em motivos CpG foram observados com maior frequência do que o esperado, sugerindo que estas inserções podem contribuir nas funções de genes. Nas regiões intergênicas, foi possível prever sítios para ligação de fatores de transcrição ao longo das sequências de ambos os retrotransposons. Também foi observado que elementos SR2 tendem a se fixar em regiões que flanqueiam genes codificando proteínas transmembranares, as quais podem estar envolvidas na relação hospedeiro-parasita. Usando dados de transcrição de S. mansoni disponíveis publicamente, foram detectados 94 casos possíveis de exonização de inserções dos retrotransposons, produzindo mudanças do produto proteico. Estes resultados sugerem que os elementos Perere-3 e SR2 podem promover mudanças funcionais e estruturais relevantes nos genes de S. mansoni e pode ter contribuído significativamente para a diferenciação entre S. mansoni e S. japonicum. / Transposable elements are genetic elements capable of transpose to different locations at a host genome. At their discovery, it was considered that such elements had no useful cellular functions, leading to their classification as parasitic genes. Currently, in addition to the deleterious character, it is recognized that they contribute to the evolution of genomes and, in some cases, may perform some cellular functions. Using bioinformatics resources, we have conducted studies to verify the influence of two families of non-LTR retrotransposons (Perere-3 and SR2) in the Schistosoma mansoni genome. Preliminary studies indicate that after the divergence between S. japonicum and S. mansoni, these elements had a great expansion in their copy number in S. mansoni, without parallel expansion in S. japonicum. The analysis of the intron regions containing insertions from either of these two families of transposons in S. mansoni, showed that there was approximately 30% of increase in the intron size and GC content when compared to orthologous introns from S. japonicum. Insertions were differentially represented along the gene structures with preferential accumulation in introns located at the terminal regions of the genes. Insertions of both transpositon elements tended to orientate themselves in the opposite direction of gene transcription. The insertions of SR2 transposon regions enriched in CpG motifs were observed in higher frequency than expected, suggesting that these regions might contributing in the gene functions. In the intergenic regions, it was possible to predict transcription factors binding sites along the sequences of both retrotransposons and also observed that SR2 elements were preferentially fixed at regions flanking genes coding for transmembrane proteins, which may be involved in parasite-host relationship. Using publicly available transcript data from S. mansoni, we detected 94 possible cases of exonization of transposon insertion, producing changes of the protein product. These results suggest that Perere-3 and SR2 insertions may promote relevant functional and structural changes in the S. mansoni genes and may have significantly contributed to the differentiation between S. mansoni and S. japonicum.

Li Chi Ho. / Thesis (M.Phil.)--Chinese University of Hong Kong, 2004. / Includes bibliographical references (leaves 137-162). / Abstracts in English and Chinese. / Statement --- p.iii / Acknowledgments --- p.iv / Abstract --- p.vi / Abstract (Chinese version) --- p.viii / Abbreviations --- p.x / Table of contents --- p.xii / List of Figure --- p.xviii / List of Table --- p.xx / Chapter Chapter One --- Literature Review / Chapter 1.1 --- The Genus Schistosoma --- p.1 / Chapter 1.2 --- Biology of Schistosoma japonicum --- p.3 / Chapter 1.2.1 --- The History of discovery of Schitosoma japonicum --- p.3 / Chapter 1.2.2 --- Life cycle of Schistosoma japonicum --- p.3 / Chapter 1.2.2.1 --- Egg --- p.6 / Chapter 1.2.2.2 --- Miracidia --- p.6 / Chapter 1.2.2.3 --- Sporocysts --- p.7 / Chapter 1.2.2.4 --- Cercaria --- p.9 / Chapter 1.2.2.5 --- Schislosomula --- p.10 / Chapter 1.2.2.6 --- Adult worms --- p.10 / Chapter 1.2.3 --- Genetics of Schistosoma japonicum --- p.11 / Chapter 1.2.3.1 --- Genome analysis --- p.12 / Chapter 1.2.3.2 --- Schistosome genome --- p.13 / Chapter 1.2.4 --- Tegumental membrane of Schistosomes --- p.14 / Chapter 1.3 --- Pathology of Schistosomiasis --- p.15 / Chapter 1.3.1 --- Acute Schistosomiasis --- p.15 / Chapter 1.3.2 --- Intestinal Disease --- p.16 / Chapter 1.3.3 --- Hepatosplenic Disease --- p.16 / Chapter 1.3.4 --- Cerebral Schistosomiasis --- p.16 / Chapter 1.4 --- Treatment of Schistosomiasis --- p.17 / Chapter 1.4.1 --- Chemotherapy --- p.17 / Chapter 1.4.2 --- Schistosoma Vaccine --- p.17 / Chapter 1.5 --- GPI anchor --- p.19 / Chapter 1.5.1 --- Function of GPI anchored proteins --- p.19 / Chapter 1.5.2 --- Synthesis of GPI anchor --- p.21 / Chapter 1.5.3 --- "Phosphatidylinositol Glycan, Class N (PIG-N)" --- p.26 / Chapter 1.6 --- The role of GPI anchor proteins in Schistosome --- p.26 / Chapter 1.7 --- Aim of study --- p.29 / Chapter Chapter two --- Materials and Methods / Chapter 2.1 --- Materials --- p.31 / Chapter 2.1.1 --- Cell lines and Bacterial Strains --- p.31 / Chapter 2.1.2 --- Chemicals --- p.32 / Chapter 2.1.3 --- Kits and Reagents --- p.34 / Chapter 2.1.4 --- Nucleic acids --- p.34 / Chapter 2.1.5 --- Reagents for Cell culture --- p.34 / Chapter 2.1.6 --- Solutions --- p.35 / Chapter 2.1.7 --- Enzymes --- p.37 / Chapter 2.1.8 --- Primer List --- p.37 / Chapter 2.1.9 --- Antibodies --- p.39 / Chapter 2.2 --- Methods / Chapter 2.2.1 --- Screening of the S. japonicum cercaria stage cDNA library --- p.40 / Chapter 2.2.1.1 --- λ phage plating --- p.40 / Chapter 2.2.1.2 --- Single plaque isolation --- p.40 / Chapter 2.2.1.3 --- Conversion of Lambda TriplEx to pTriplEx --- p.41 / Chapter 2.2.1.4 --- preparation of plasmid DNA --- p.41 / Chapter 2.2.1.5 --- cycle DNA sequencing --- p.42 / Chapter 2.2.2. --- RT-PCR --- p.44 / Chapter 2.2.2.1 --- Isolation of Total RNA by Guandidium Thiocyanate - Cesium Chloride ultracentrifugation --- p.44 / Chapter 2.2.2.2 --- Synthesis of Fist Strand cDNA by reverse transcriptation reaction --- p.45 / Chapter 2.2.2.3 --- PGR amplification of RT product --- p.46 / Chapter 2.2.3 --- Rapid Amplification of cDNA Ends (RACE) --- p.46 / Chapter 2.2.3.1 --- Synthesis of first strand cDNA for RACE reaction --- p.46 / Chapter 2.2.3.2 --- 5 ´ةRACE for Sj-PIG-N gene --- p.47 / Chapter 2.2.3.3 --- 3´ة RACE for Sj-PIG-N gene --- p.48 / Chapter 2.2.3.4 --- Purification of DNA fragment from agarose gel --- p.48 / Chapter 2.2.3.5 --- Ligation of purified PCR fragments and pBluescriptII KS(+) T-vector --- p.49 / Chapter 2.2.3.6 --- Preparation of DH5a competent cells --- p.49 / Chapter 2.2.3.7 --- Transformation of recombinant plasmid --- p.50 / Chapter 2.2.4 --- Mammalian cell transfection --- p.50 / Chapter 2.2.4.1 --- Stable transfection --- p.50 / Chapter 2.2.4.2 --- Transient transfection --- p.51 / Chapter 2.2.5 --- Biological function studies of Sj-PIG-N gene --- p.52 / Chapter 2.2.5.1 --- Flow Cytometry (FCM) analysis --- p.52 / Chapter 2.2.5.2 --- In Vitro Mannose Labeling of Microsomes and Characterization of Glycolipids --- p.53 / Chapter 2.2.6 --- Intracellular localization assay --- p.54 / Chapter Chapter Three --- Results / Chapter 3.1 --- Random sequence analysis of cercaria EST from S. japonicum Cercaria stage cDNA library --- p.55 / Chapter 3.1.1 --- Sequencing results --- p.57 / Chapter 3.1.2 --- BlastX Search results --- p.61 / Chapter 3.2 --- The expression of Sj-PIG-N gene in both adult worms and cercaria --- p.68 / Chapter 3.2.1 --- Spectrophotometric analysis of total RNA --- p.68 / Chapter 3.2.2 --- Detection of Sj-PIG-N gene expression in both adult worm and cercaria stages --- p.70 / Chapter 3.3 --- Cloning of the full length of Sj-PIG-N gene --- p.72 / Chapter 3.3.1 --- Amplification of the full length of Sj-PIG-N gene --- p.72 / Chapter 3.3.2 --- Obtaining the full length sequence of Sj-PIG-N gene --- p.74 / Chapter 3.4 --- Sequence analysis of Ml length Sj-PIG-N cDNA --- p.80 / Chapter 3.5 --- Analysis of Sj-PIG-N protein structure by computer programs --- p.91 / Chapter 3.6 --- Construction of Sj-PIG-N gene into mammalian cell expression vector pEGFP-Nl and pEGFP-Hyg --- p.97 / Chapter 3.6.1 --- Construction of pBluescriptII KS(+)-Sj-PIG-N-B --- p.97 / Chapter 3.6.2 --- Construction of pBluescriptll KS(+)-Sj-PIG-N-E --- p.101 / Chapter 3.6.3 --- Construction of pTRE2-Sj-PIG-N --- p.106 / Chapter 3.6.4 --- Construction of pEGFP-Hyg-Sj-PIG-N --- p.109 / Chapter 3.6.4.1 --- Construction of pEGFP-Hyg --- p.109 / Chapter 3.6.4.2 --- Construction of pEGFP-Hyg-Sj-PIG-N --- p.114 / Chapter 3.7 --- Molecular analysis of Sj-PIG-N gene --- p.117 / Chapter 3.7.1 --- Functional analysis of Sj-PIG-N --- p.117 / Chapter 3.7.1.1 --- FACS analysis of surface expression of GPI-anchored protein - Thyl --- p.117 / Chapter 3.7.1.2 --- FACS analysis of surface expression of GPI-anchor protein - CD24 --- p.119 / Chapter 3.7.1.3 --- In Vitro Mannose Labeling of Microsomes and Characterization of Glycolipids --- p.121 / Chapter 3.7.2 --- Localization of Sj-PIG-N with immunofluorescent staining --- p.123 / Chapter Chapter Four --- Discussion / Chapter 4.1 --- S. japonicum cercaria EST analysis --- p.125 / Chapter 4.2 --- Structure analysis of Sj-Pig-N gene --- p.128 / Chapter 4.3 --- Molecular analysis of Sj-PIG-N --- p.131 / Chapter 4.4 --- Further study --- p.134 / Chapter 4.5 --- Conclusion --- p.136 / References --- p.137

Elementos transponíveis são elementos genéticos capazes de transpor para diferentes locais em um genoma hospedeiro. Na sua descoberta, considerou-se que tais elementos não apresentavam funções celulares úteis, classificando-os como genes parasitas. Atualmente, além do carácter deletério, reconhece-se que eles contribuam para a evolução dos genomas e, em alguns casos, podem realizar algumas funções celulares. Utilizando recursos de bioinformática, realizamos estudos para verificar a influência de duas famílias de retrotransposons non-LTR (Perere-3 e SR2) no genoma do Schistosoma mansoni. Estudos preliminares indicam que após a divergência entre S. japonicum e S. mansoni, esses elementos tiveram uma grande expansão em seu número de cópias em S. mansoni, sem paralelo em S. japonicum. Análises das regiões intrônicas que contêm inserções de qualquer uma destas duas famílias de retrotransposon em S. mansoni, mostrou que houve aproximadamente 30% de aumento no tamanho dos íntrons e aumento do conteúdo GC, quando comparado com os íntrons ortólogos de S. japonicum. As inserções foram diferencialmente representadas ao longo das estruturas dos genes com a acumulação preferencial nos íntrons localizados nas regiões terminais dos genes. As inserções dos dois elementos de transposição tendem a orientar-se na direção oposta da transcrição dos genes. As inserções de trechos do elemento SR2 enriquecidos em motivos CpG foram observados com maior frequência do que o esperado, sugerindo que estas inserções podem contribuir nas funções de genes. Nas regiões intergênicas, foi possível prever sítios para ligação de fatores de transcrição ao longo das sequências de ambos os retrotransposons. Também foi observado que elementos SR2 tendem a se fixar em regiões que flanqueiam genes codificando proteínas transmembranares, as quais podem estar envolvidas na relação hospedeiro-parasita. Usando dados de transcrição de S. mansoni disponíveis publicamente, foram detectados 94 casos possíveis de exonização de inserções dos retrotransposons, produzindo mudanças do produto proteico. Estes resultados sugerem que os elementos Perere-3 e SR2 podem promover mudanças funcionais e estruturais relevantes nos genes de S. mansoni e pode ter contribuído significativamente para a diferenciação entre S. mansoni e S. japonicum. / Transposable elements are genetic elements capable of transpose to different locations at a host genome. At their discovery, it was considered that such elements had no useful cellular functions, leading to their classification as parasitic genes. Currently, in addition to the deleterious character, it is recognized that they contribute to the evolution of genomes and, in some cases, may perform some cellular functions. Using bioinformatics resources, we have conducted studies to verify the influence of two families of non-LTR retrotransposons (Perere-3 and SR2) in the Schistosoma mansoni genome. Preliminary studies indicate that after the divergence between S. japonicum and S. mansoni, these elements had a great expansion in their copy number in S. mansoni, without parallel expansion in S. japonicum. The analysis of the intron regions containing insertions from either of these two families of transposons in S. mansoni, showed that there was approximately 30% of increase in the intron size and GC content when compared to orthologous introns from S. japonicum. Insertions were differentially represented along the gene structures with preferential accumulation in introns located at the terminal regions of the genes. Insertions of both transpositon elements tended to orientate themselves in the opposite direction of gene transcription. The insertions of SR2 transposon regions enriched in CpG motifs were observed in higher frequency than expected, suggesting that these regions might contributing in the gene functions. In the intergenic regions, it was possible to predict transcription factors binding sites along the sequences of both retrotransposons and also observed that SR2 elements were preferentially fixed at regions flanking genes coding for transmembrane proteins, which may be involved in parasite-host relationship. Using publicly available transcript data from S. mansoni, we detected 94 possible cases of exonization of transposon insertion, producing changes of the protein product. These results suggest that Perere-3 and SR2 insertions may promote relevant functional and structural changes in the S. mansoni genes and may have significantly contributed to the differentiation between S. mansoni and S. japonicum.

Submitted by Irene Nascimento (irene.kessia@ufpe.br) on 2017-03-24T17:31:10Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - HIANNA SILVA, 2016.pdf: 6380348 bytes, checksum: ae05ad6fcbbd20876322b50236e96c44 (MD5) / Made available in DSpace on 2017-03-24T17:31:10Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 1232 bytes, checksum: 66e71c371cc565284e70f40736c94386 (MD5) DISSERTAÇÃO - HIANNA SILVA, 2016.pdf: 6380348 bytes, checksum: ae05ad6fcbbd20876322b50236e96c44 (MD5) Previous issue date: 2016-01-25 / CNPQ / A esquistossomose, doença infecciosa parasitária, é causada por vermes do gênero Schistosoma, sendo o S. mansoni a espécie comumente encontrada na África, Caribe e América do Sul. Possuem como hospedeiros intermediários planorbídeos do gênero Biomphalaria, que liberam cercárias que podem infectar os mamíferos, causando a esquistossomose. A Organização Mundial de Saúde (OMS) estima que 261 milhões de pessoas estejam infectadas. Um dos métodos para o combate desta patologia é o controle populacional de caramujos utilizando moluscicidas. A niclosamida, moluscicida sintético, é recomendada pela OMS, porém sua utilização tem originado problemas devido à baixa seletividade, elevada toxicidade, alto custo e resistência dos caramujos. Por esta razão, estudos que visam o estabelecimento de moluscicidas de origem natural tem sido incentivada. Líquens, organismos simbióticos, produzem diversos metabólitos secundários fenólicos, dentre estes está o ácido divaricático (DIV), para-depsídeo com potencial biológico ainda pouco estudado. No presente estudo, o DIV, isolado de Ramalina aspera, foi testado sobre Biomphalaria glabrata, vetor da esquistossomose, em sua fase embrionária e adulta, assim como sobre cercárias de S. mansoni. Concomitantemente, foi avaliada sua toxicidade ambiental, utilizando o microcrustáceo Artemia salina. Para a obtenção do DIV, foi realizada a extração etérea de líquens da espécie R. aspera. Do extrato etéreo obtido, foi feita a purificação do DIV, sendo a pureza deste confirmada através de cromatografia de camada delgada, cromatografia líquida de alta eficiência, infravermelho e ressonância magnética nuclear de prótons. Para a verificação da atividade moluscicida do DIV foram utilizados caramujos adultos pigmentados da espécie B. glabrata e embriões em fase de blástula. Os animais adultos foram expostos às concentrações de 2.5, 3.5, 4.5 e 5.5 μg/mL por 24 horas e os embriões às concentrações de 7,5; 8; 8,5; 9,5; 10; 10,5; 11; 11,5; 12; 15 e 20 μg/mL nos tempos de 6, 12, 18 e 24 horas. A análise da atividade cercaricida foi realizada por meio da exposição de cercárias (cepa Belo Horizonte) ao DIV nas concentrações de 0.5, 1, 5, 10 e 100 μg/mL, sendo estas avaliadas nos tempos de 15, 30, 60 e 120 minutos. A toxicidade ambiental sobre A. salina foi verificada por exposição dos náuplios às concentrações de 25, 50, 100, 200 e 400 μg/mL por 24 horas. Ao final das análises, pôde-se observar que o DIV purificado mostrou-se eficiente na eliminação dos caramujos adultos e embriões de B. glabrata, apresentando 100% de letalidade em 5.5 μg/mL e 15 μg/mL em 24 horas, respectivamente. Já para a atividade cercaricida, a concentração necessária para 100% de eficácia foi 10 μg/mL. De acordo com os resultados de toxicidade ambiental, a utilização do DIV é segura até a concentração de 200 μg/mL, não mostrando valores de mortalidade significativos estatisticamente. Os resultados deste estudo se mostraram eficientes para o controle da esquistossomose, já que o DIV apresentou-se como uma ferramenta de elevado potencial biológico no combate ao vetor da parasitose, dentro das faixas preconizadas pela OMS, tanto em sua fase embrionária quanto em fase adulta. Também mostrando eficácia sobre a forma cercariana do parasito, sendo atóxica ambientalmente. / Schistosomiasis, parasitic infectious disease, is caused by worms of the genus Schistosoma, and the S. mansoni species is commonly found in Africa, Caribbean and South America. They have as intermediate host snails of the genus Biomphalaria, which release cercariae that can infect mammals causing schistosomiasis. The World Health Organization (WHO) estimates that 261 million people are infected. One method for combating this disease is the control of snails population using molluscicides. Niclosamide, synthetic molluscicide, is recommended by the WHO, but its use has caused problems because of the low selectivity, high toxicity, high cost and resistance of snails. For this reason, studies regarding the establishment of natural molluscicides has been encouraged. Lichens, symbiotic organisms produce various phenolic secondary metabolites, among them is the divaricatic acid (DIV), para-depside with biological potential yet little studied. In this study, the DIV, isolated from Ramalina aspera, has been tested on Biomphalaria glabrata, schistosomiasis vector in its embryonic and adult stage and on cercariae of S. mansoni. Concomitantly, its environmental toxicity was evaluated using the microcrustacean Artemia salina. From the ether extract of R. aspera performed, the DIV purification was done, and its purity confirmed by thin layer chromatography, high-performance liquid chromatography, infrared and nuclear magnetic resonance of protons. The molluscicidal activity of DIV was verified throught of pigmented adult snails of the species B. glabrata and embryos in the blastula stage. Adult snails were exposed to concentrations of 2.5, 3.5, 4.5 and 5.5 μg/mL for 24 hours and the embryos at concentrations of 7.5, 8, 8.5, 9.5, 10, 10.5, 11, 11.5, 12, 15 and 20 μg/mL at times of 6, 12, 18 and 24 hours. The analysis of cercaricide activity was performed by exposing the cercariae (Belo Horizonte strain) to the DIV at concentrations of 0.5, 1, 5, 10 and 100 μg/mL, which are evaluated at times of 15, 30, 60 and 120 minutes . The environmental toxicity in A. salina was verified by exposing the nauplii at concentrations of 25, 50, 100, 200 and 400 μg/mL for 24 hours. At the end of the analyzes, it was observed that the DIV purified was efficient in the elimination of adult snails and embryos of B. glabrata, with 100% mortality at 5.5 μg/mL and 15 μg/mL in 24 hours, respectively. As for the cercaricide activity, the concentration required for 100% efficacy was 10 μg/mL. According to the results of environmental toxicity, the use of the DIV is safe even the concentration of 200 μg/mL, showing no statistically significant mortality values. The results of this study proved effective in the control of schistosomiasis as the DIV proved to be a high potential biological tool in combating vector parasitosis, within the ranges recommended by the WHO, both in its embryonic stage and in adulthood. Also showing effectiveness on cercariae form of the parasite, non-toxic environmentally.

Orientador: Luiz Augusto Magalhães / Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia / Made available in DSpace on 2018-08-23T14:43:10Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Oliveira_DanteFerreirade_M.pdf: 4679239 bytes, checksum: 8289c39d5ca804477229fe8194c1d9c1 (MD5) Previous issue date: 2013 / Resumo: Estima-se que a esquistossomose, infecte cerca de 200 milhões de pessoas em 75 países em desenvolvimento no mundo. A larga dispersão dos moluscos transmissores e a relevância da migração interna como fator de instalação da esquistossomose mansônica tem sido um importante fator para se delinear estratégias de prevenção e controle. Do ponto de vista epidemiológico, é importante conhecer quais são as espécies de planorbídeos presentes em determinada região e seu potencial para instalação da doença. O objetivo desse estudo foi avaliar o panorama de distribuição de criadouros de moluscos planorbídeos no município de Monte Mor, SP, através de um levantamento malacológico em coleções de água doce, sua positividade para o Schistosoma mansoni, testar a suscetibilidade dos moluscos encontrados frente a linhagens distintas do trematódeo e como pesquisa complementar análise de fezes de indivíduos oriundos de áreas endêmicas de todo o país, que trabalham na agricultura local. O estudo de campo foi realizado com coletas de mosluscos pelo período de 4 meses em coleções de água doce, através de coletas exaustivas em coleções acessíveis. O material coletado foi analisado e identificado no Laboratório de Helmintologia da Unicamp. Através deste estudo foi possível concluir que existe uma vasta distribuição de moluscos no município de Monte Mor composta pelas espécies: Biomphalaria tenagophila, B. straminea, B. intermedia, B. occidentalis, B. peregrina; além de exemplares dos gêneros: Physa, Lymnaea, Melanoides, Drepanotrema, Pomacea e Achatina. Entre os exemplares coletados de moluscos todos se apresentaram negativos ao S. mansoni e outras larvas de trematódeos. Descendentes dos moluscos planorbídeos do gênero Biomphalaria coletados foram submetidos à exposição individual por 10 miracídios de Schistosoma mansoni das cepas BH, SJ, Pernambuco, Sergipe e Bahia. Neste experimento, espécies de B. tenagophila e B. straminea se infectaram com S. mansoni de Pernambuco. Outras espécies de moluscos se mostraram negativas para a infecção pelo Schistosoma mansoni. As análises complementares de fezes dos trabalhadores locais não apresentaram resultados parasitológicos positivos, o que não descarta sua relevância na transmissão da doença frente ao fluxo anual de diferentes trabalhadores para o trabalho na agricultura local / Abstract: It is estimated that schistosomiasis, infects about 200 million people in 75 countries in the developing world. The wide dispersal of snails transmitters and relevance of internal migration as a factor installation schistosomiasis has been an important factor in order to outline strategies for prevention and control. From the epidemiological point of view, it is important to know what are the snails species present in a given region and its potential for desease onset. The aim of this study was to find a picture of the situation of the distribution of breeding of freshwater snails in the municipality of Monte Mor, SP, throughout a malacological in collections of freshwater, its positivity Schistosoma mansoni, test the susceptibility clam found against distinct strains of S. mansoni and how complementary research scat analysis of individuals from endemic areas throughout the country, working in local agriculture. The field study was conducted with snails collections for a period of four months in collections of freshwater through exhaustive collections of collections accessible. The collected material was analyzed and identified in the laboratory of Helminthology UNICAMP. Through this study it was concluded that there is a wide distribution of snails in the municipality of Monte Mor composed by species: Biomphalaria tenagophila, B. straminea, B. intermedia, B. peregrina e B. occidentalis, besides copies of genres: Physa, Lymnaea, Melanoides, Drepanotrema, Pomacea e Achatina. Among the species collected shellfish all were negative to S. mansoni and other trematode larvae. Descendants of freshwater snails of the genus Biomphalaria collected underwent solo exhibition by 10 miracidia of S. mansoni strains Belo Horizonte, São José dos Campos, Pernambuco, Sergipe e Bahia, where they were checked positivity rates of 13.33% from the line of Pernambuco for species B. tenagophila and 3.33% strain Pernambuco for the species B. straminea. Other species of snails were negative for infection with S. mansoni. The complementary analyzes of feces of local workers did not show positive results parasitological, which does not rule out its relevance in disease transmition across the annual flow of different workers to work in local agriculture / Mestrado / Parasitologia / Mestre em Parasitologia

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The 26S proteasome is the principal degradation structure of intracellular proteins in eukaryotes. The proteasome is composed of two 19S regulatory particles and a 20S catalytic core. The lid region of the 19S proteasome comprises at least 8 subunits that recognizes proteasomal substrates, including misfolded, truncated, or erroneously posttranslated proteins, as well as other tightly controlled and short-lived proteins. Such substrates are typically tagged with a small peptide called ubiquitin to facilitate their rapid and efficient recognition and translocation to the proteasome. The objective of this study was to characterize the Schistosoma mansoni and human homologues of proteasomal lid subunit POH1/RPN11. Earlier reports had suggested that overexpression of the fission yeast padl homologue can influence the activity of an AP1-like transcription factor. We showed that SmPOH, the Schistosoma mansoni homologue, stabilizes AP1 transcription factor c-Jun both in vitro and in cultured mammalian cells. We also demonstrated a dose-dependent SmPOH-induced stabilization of c-Jun in vitro. In contrast, SmPOH did not stabilize another well-known proteasomal substrate, p53, in vitro. Others later demonstrated that yeast POH1/RPN11 is a divalent cation-dependent metalloprotease deubiquitinase and outlined a conserved catalytic motif termed JAMM/MPN+ responsible for this activity. To better understand the structure-function relationship of POH1/RPN11 with regard to c-Jun stabilization, we showed that the Cys-120 residue of human POH1 (hPOH1), embedded in the JAMM/MPN+ motif, is required for the stabilizing effect on c-Jun. Furthermore, we established that hPOH1 influences c-Jun stability by altering its state of ubiquitination and intracellular localization. Parallel experiments were conducted to test the effect of hPOH1 on another proteasomal substrate, p27Kip, but no changes could be seen either in its stability or its localization. RNAi experiments targeting SmPOH transcripts in cultured schistosomula resulted in a lethal phenotype, thus illustrating the critical role of SmPOH expression in the parasite. Expression levels of SmPOH were reduced by ∼ 90% following a 9-day incubation with siRNAs targeting the SmPOH sequence. We further performed a survey to examine the expression levels of multiple proteasome subunits in cercaria, schistosomula, and adult stages of Schistosoma mansoni. Our results suggest a pivotal role for the proteasome in the development of the parasite. A better understanding of the function of the proteasome in S. mansoni may lead to the identification of novel drug targets and newer approaches for chemotherapy.

Thèse--Paris. / "Bibliographie": p. [52]-55.